DB32T 4972.10-2024 傳染病突發(fā)公共衛(wèi)生事件應(yīng)急處置技術(shù)規(guī)范 第10部分：病毒類應(yīng)急檢測技術(shù)

ICS13.100CCSC50江蘇省地方標(biāo)準(zhǔn)DB32/T4972.10—2024傳染病突發(fā)公共衛(wèi)生事件應(yīng)急處技術(shù)規(guī)范 第10部分病毒類應(yīng)急檢測技術(shù)Technicalspecificationforemergencyresponseofpublichealthemergenteventcausedbyinfectiousdisease—Part10Emergencydetectionmethodofpathogenicinviralinfectiousdisease2024-12-27發(fā)布 2025-01-27實(shí)施江蘇省市場監(jiān)督管理局 發(fā) 布中國標(biāo)準(zhǔn)出版社 出 版DB32/T4972.10—2024目 次前言 Ⅲ引言 Ⅳ范圍 1規(guī)范性引用文件 1術(shù)語和定義 1生物安全要求 1準(zhǔn)備工作和質(zhì)量控制 1分子生物學(xué)應(yīng)急檢測技術(shù) 2免疫學(xué)應(yīng)急檢測技術(shù) 3參考文獻(xiàn) 4ⅠDB32/T4972.10—2024前 言本文件按照GB/T1.1—202標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 第1部分標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)的規(guī)定起草。本文件是DB32/T4972《傳染病突發(fā)公共衛(wèi)生事件應(yīng)急處置技術(shù)規(guī)范》的第10部分。DB32/T4972已經(jīng)發(fā)布了以下部分：——第1部分：監(jiān)測預(yù)警；——第2部分：事件報(bào)告和管理；——第3部分：風(fēng)險(xiǎn)評估；——第4部分：現(xiàn)場流行病學(xué)調(diào)查；——第5部分：恢復(fù)評估；——第6部分：應(yīng)急消毒處置及應(yīng)急人員個(gè)人防護(hù)；——第7部分：媒介生物應(yīng)急監(jiān)測、評估與控制；——第8部分：標(biāo)本的采集、保存和運(yùn)輸；——第9部分：應(yīng)急檢測流程；——第10部分：病毒類應(yīng)急檢測技術(shù)；——第11部分：細(xì)菌類應(yīng)急檢測技術(shù)。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由江蘇省衛(wèi)生健康委員會(huì)提出并組織實(shí)施。本文件由江蘇省衛(wèi)生健康標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口。田華、祁賢、彭杰夫、崔侖標(biāo)。ⅢDB32/T4972.10—2024引 言傳染病突發(fā)公共衛(wèi)生事件是江蘇省公共衛(wèi)生安全的主要威脅，對社會(huì)、經(jīng)濟(jì)和人群健康造成巨大影響。本文件為貫徹落實(shí)《中華人民共和國傳染病防治法生事件應(yīng)急條例》等法律法規(guī)對傳染病突發(fā)公共衛(wèi)生事件的應(yīng)急處置要求，提升江蘇省傳染病突發(fā)公共衛(wèi)生事件的應(yīng)急處置能力，保障人民群眾的生命安全和社會(huì)穩(wěn)定的目標(biāo)而制定。DB32/T497《傳染病突發(fā)公共衛(wèi)生事件應(yīng)急處置技術(shù)規(guī)范》由以下11個(gè)部分構(gòu)成：——第1部分：監(jiān)測預(yù)警；——第2部分：事件報(bào)告和管理；——第3部分：風(fēng)險(xiǎn)評估；——第4部分：現(xiàn)場流行病學(xué)調(diào)查；——第5部分：恢復(fù)評估；——第6部分：應(yīng)急消毒處置及應(yīng)急人員個(gè)人防護(hù)；——第7部分：媒介生物應(yīng)急監(jiān)測、評估與控制；——第8部分：標(biāo)本的采集、保存和運(yùn)輸；——第9部分：應(yīng)急檢測流程；——第10部分：病毒類應(yīng)急檢測技術(shù)；——第11部分：細(xì)菌類應(yīng)急檢測技術(shù)。DB32/T4972的制定是對傳染病突發(fā)公共衛(wèi)生事件處置工作相關(guān)國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的有力補(bǔ)充，為開展傳染病突發(fā)公共衛(wèi)生事件的監(jiān)測預(yù)警消毒處置和個(gè)人防護(hù)、媒介生物的應(yīng)急監(jiān)測評估與控制、標(biāo)本的采集和檢測等應(yīng)急處置工作提供有力的科學(xué)依據(jù)和技術(shù)支撐，對保障公眾健康和公共衛(wèi)生安全具有重要意義。ⅣDB32/T4972.10—2024傳染病突發(fā)公共衛(wèi)生事件應(yīng)急處技術(shù)規(guī)范 第10部分病毒類應(yīng)急檢測技術(shù)范圍本文件規(guī)定了傳染病突發(fā)公共衛(wèi)生事件應(yīng)急處置中病毒類應(yīng)急檢測的生物安全要求、準(zhǔn)備工作和質(zhì)量控制、分子生物學(xué)應(yīng)急檢測技術(shù)和免疫學(xué)應(yīng)急檢測技術(shù)等。本文件適用于傳染病突發(fā)公共衛(wèi)生事件應(yīng)急處置中病毒類傳染病病原體的應(yīng)急檢測。規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文包括所有的修改單適用于本文件。GB19489 實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求WS233 病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全通用準(zhǔn)則術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。高通量測序 high?throughputsequencing區(qū)別于傳統(tǒng)雙脫氧法測序，能夠一次并行對大量核酸分子進(jìn)行平行序列測定的技術(shù)，通常一次測序反應(yīng)能產(chǎn)出不低于100兆的測序數(shù)據(jù)。注：又稱下一代測序技術(shù)（Next?generationsequencing，NGS）或大規(guī)模平行測序（Massivelyparallelsequencing，MPS）。生物安全要求實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)根據(jù)GB19489和風(fēng)險(xiǎn)評估的要求，配備不同類型傳染病感染的個(gè)人防護(hù)裝備，包括但4h更換一次。在發(fā)生意外暴露時(shí)，根據(jù)應(yīng)急處置預(yù)案采取必要措施。實(shí)驗(yàn)人員、實(shí)驗(yàn)場所、感染性標(biāo)本處置及消毒滅菌等應(yīng)符合WS233中的實(shí)驗(yàn)室生物安全管理要求。準(zhǔn)備工作和質(zhì)量控制準(zhǔn)備工作1DB32/T4972.10—2024標(biāo)本震蕩后瞬時(shí)離心取上清用于病毒類核酸提取及抗原檢測。按照病毒RNA/DNA核酸提取試劑盒說明書，取適量標(biāo)本進(jìn)行核酸提取，提取完成后應(yīng)立即封蓋并馬上進(jìn)行分子生物學(xué)檢測。剩余的標(biāo)本和核酸應(yīng)于-80℃條件下凍存。質(zhì)量控制每一批次反應(yīng)過程中應(yīng)至少設(shè)置一個(gè)陰性和陽性對照，必要時(shí)增加空白對照。測序過程中數(shù)據(jù)用于衡量高通量測序中堿基準(zhǔn)確度的指標(biāo)測序數(shù)據(jù)中堿基識(shí)別質(zhì)量值為30表示其堿基識(shí)別準(zhǔn)確率為99.9應(yīng)≥80 。宏基因組測序提取的核酸中DNA的A260/A280值應(yīng)>1.8，RNA的A260/A280值應(yīng)≥2.0。背景核酸模型應(yīng)每個(gè)月更新1次。分子生物學(xué)應(yīng)急檢測技術(shù)實(shí)時(shí)熒光PCR（Real?timePCR）反應(yīng)體系配制（PCR及反應(yīng)程序設(shè)置反應(yīng)溫度、循環(huán)數(shù)及熒光通應(yīng)參照相應(yīng)病毒核酸檢測試劑盒說明書。如有結(jié)果成立時(shí)，進(jìn)行結(jié)果判斷。陰性顯示無CtS形擴(kuò)增曲Ct值小于或等于病毒核酸檢測試劑盒說明書規(guī)定值S形擴(kuò)增曲線。等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)將核酸模板（RNA病毒先進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄合成第一條cDNADNA質(zhì)等共同置于商品化試劑盒指定溫度下，經(jīng)一個(gè)步驟即可完成。濁度檢測：肉眼觀察反應(yīng)管內(nèi)出現(xiàn)白色渾濁判定為陽性，未渾濁判為陰性；數(shù)字PCR技術(shù)根據(jù)PCR儀器和試劑的要求制備反應(yīng)體系，將體系分配到微小分區(qū)或微滴中并封蓋，進(jìn)行PCR反應(yīng)。使用熒光染料或探針監(jiān)測目標(biāo)核酸的擴(kuò)增，配套軟件統(tǒng)計(jì)分析各反應(yīng)中的陽性液滴數(shù)。如有標(biāo)本中每個(gè)熒光通道的濃度高通量測序技術(shù)單一病原體及靶向測序按照試劑盒說明進(jìn)行目的基因的擴(kuò)增富集純化，純化后產(chǎn)物進(jìn)行文庫構(gòu)具體反應(yīng)體系及反應(yīng)程序參照相應(yīng)測序平臺(tái)及試劑盒說明書，根據(jù)應(yīng)急檢測實(shí)際選擇是否執(zhí)行去宿主操作。單一病原體及靶向測序完成后位點(diǎn)分析。宏基因組測序完成后微生物的序列特征及物種檢出情況，最后結(jié)合臨床資料綜合分析判定。2DB32/T4972.10—2024免疫學(xué)應(yīng)急檢測技術(shù)免疫膠體金技術(shù)檢測標(biāo)本的類型、上樣體積及操作步驟參照相應(yīng)的試劑盒說明書。實(shí)驗(yàn)完成后按照試劑盒的要求的時(shí)間對結(jié)果進(jìn)行觀察，當(dāng)檢測線和質(zhì)控線均為陽性結(jié)果時(shí)，判定對應(yīng)的檢測項(xiàng)目陽性酶聯(lián)免疫吸附測定技術(shù)（ELISA）參照試劑盒說明書依次加入抗原包被如需要體流程參照相應(yīng)病毒ELISA檢測試劑盒說明書。以空白對照調(diào)零，讀取酶標(biāo)儀器上各孔450nmnm等波長的OD值，參照說明書要求設(shè)置參比波長并計(jì)算陽性值化學(xué)發(fā)光技術(shù)參照試劑盒說明依次加入磁性顆?？乖恍粤姿崦复呋孜镆喊l(fā)光，具體流程參照相應(yīng)病毒化學(xué)發(fā)光檢測試劑盒說明書。根據(jù)化學(xué)發(fā)光試劑盒的生物參考區(qū)間判定實(shí)驗(yàn)結(jié)果。每一批次化學(xué)發(fā)光實(shí)驗(yàn)過程中應(yīng)做質(zhì)控品，質(zhì)控品結(jié)果成立時(shí)，進(jìn)