《有機(jī)污染場地土壤生物修復(fù)技術(shù)規(guī)范 微生物菌劑使用》

ICS13.020.40

CCSZ70

團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)

T/CSESXXXX—XXXX

有機(jī)污染場地土壤生物修復(fù)技術(shù)規(guī)范微生物

菌劑使用

Technicalspecificationsforsoilbioremediationatorganiccontaminatedsites-Applicationof

microbialagents

征求意見稿

DraftforSolicitingComments

在提交反饋意見時(shí)，請(qǐng)將您知道的相關(guān)專利連同支持性文件一并附上。

20XX-XX-XX發(fā)布20XX-XX-XX實(shí)施

中國環(huán)境科學(xué)學(xué)會(huì)發(fā)布

T/CSESXXXX—XXXX

目次

前言............................................................................II

1范圍.................................................................................1

2規(guī)范性引用文件.......................................................................1

3術(shù)語和定義...........................................................................1

4總體要求.............................................................................2

5微生物菌劑應(yīng)用流程...................................................................2

6微生物菌劑篩選.......................................................................4

7微生物菌劑應(yīng)用設(shè)計(jì)...................................................................5

8微生物菌劑工程施用...................................................................6

9監(jiān)測與評(píng)估...........................................................................7

附錄A（資料性）微生物菌劑應(yīng)用設(shè)計(jì)與過程監(jiān)測環(huán)境參數(shù)..............................9

I

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有機(jī)污染場地土壤生物修復(fù)技術(shù)規(guī)范微生物菌劑使用

1范圍

本文件規(guī)定了有機(jī)污染場地土壤生物修復(fù)微生物菌劑使用的總體要求、應(yīng)用流程、微生物菌劑篩選、

應(yīng)用設(shè)計(jì)、工程施用、監(jiān)測與過程控制等技術(shù)要求。

本文件適用于芳烴類污染和多環(huán)芳烴、石油烴復(fù)合污染等有機(jī)污染場地土壤生物修復(fù)中的微生物

菌劑使用。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文

件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用

于本文件。

GB18597危險(xiǎn)廢物貯存污染控制標(biāo)準(zhǔn)

GB36600土壤環(huán)境質(zhì)量建設(shè)用地土壤污染風(fēng)險(xiǎn)管控標(biāo)準(zhǔn)（試行）

HJ25.1建設(shè)用地土壤污染狀況調(diào)查技術(shù)導(dǎo)則

HJ25.2建設(shè)用地土壤污染風(fēng)險(xiǎn)管控和修復(fù)監(jiān)測技術(shù)導(dǎo)則

HJ25.3建設(shè)用地土壤污染風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估技術(shù)導(dǎo)則

HJ25.4建設(shè)用地土壤修復(fù)技術(shù)導(dǎo)則

HJ25.5污染地塊風(fēng)險(xiǎn)管控與土壤修復(fù)效果評(píng)估技術(shù)導(dǎo)則

HJ/T415環(huán)保用微生物菌劑環(huán)境安全評(píng)價(jià)導(dǎo)則

HJ805土壤和沉積物多環(huán)芳烴的測定氣相色譜-質(zhì)譜法

HJ1283污染土壤修復(fù)工程技術(shù)規(guī)范生物堆

HJ2035固體廢物處理處置工程技術(shù)導(dǎo)則

ISO16703土壤中石油烴（C10～C40）含量的測定氣相色譜法

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件。

總石油烴totalpetroleumhydrocarbon，TPH

在原油中發(fā)現(xiàn)的含有碳?xì)浠衔锝M成的混合物，由是多種烴類(正烷烴、支鏈烷烴、環(huán)烷烴、芳烴)

和少量其他有機(jī)物，如硫化物、氮化物、環(huán)烷酸類等組成的混合物。

芳烴aromatichydrocarbon

1

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芳烴（具有芳香性的烴，一般指分子中含有苯環(huán)的化合物）包括苯系物和多環(huán)芳烴，其中苯，甲苯，

乙苯以及二甲苯等統(tǒng)稱為苯系物，由兩個(gè)或兩個(gè)以上苯環(huán)以兩個(gè)鄰位碳原子(即一邊)相連形成的化合物

統(tǒng)稱為多環(huán)芳烴。

微生物菌劑microbialagents

目標(biāo)微生物(有效功能菌)經(jīng)過篩選擴(kuò)培制備后制成的活菌制劑。這種菌劑在適宜環(huán)境條件下通過自

身生長代謝活動(dòng)以及其它輔助菌種或載體協(xié)同作用下，使場地環(huán)境中有機(jī)污染物降解成為低分子化合

物或完全分解為二氧化碳和水。

3.3.1

外源微生物菌劑exogenousmicrobialagent

由一種或多種從非本土污染環(huán)境，通過人工選育所獲得的微生物菌種（株），經(jīng)過加工制成活菌制

劑，可直接應(yīng)用于適當(dāng)環(huán)境條件下的土壤生物修復(fù)。

3.3.2

土著微生物菌劑indigenousmicrobialagent

由一種或多種從受污染土壤本土環(huán)境中原位分離純化，通過人工選育所獲得的微生物菌種(株)，經(jīng)

過加工制成活菌制品菌劑，能在適宜環(huán)境條件下通過自身生長代謝活動(dòng)以及其它輔助菌種或載體協(xié)同

作用下使場地環(huán)境中有機(jī)污染物降解成為低分子化合物或完全分解為二氧化碳和水。

菌劑有效性評(píng)價(jià)effectivenessevaluationofagents

對(duì)微生物菌劑進(jìn)行分析、測定和評(píng)估其去除土壤污染物的能力、環(huán)境適應(yīng)能力、環(huán)境安全性、穩(wěn)定

性，包括菌劑產(chǎn)品應(yīng)用后對(duì)土壤目標(biāo)污染物降解的功效，在土壤中的繁殖能力、恢復(fù)土壤性狀等。

輔助藥劑adjuvant

滿足土壤降解菌的需要，提高土壤微生物代謝活性，進(jìn)而提高修復(fù)效率的藥劑。包括提高污染物溶

解度的助溶劑，提高微生物活性的營養(yǎng)物、電子受體以及共代謝基質(zhì)等，利于微生物附著生長的載體物

質(zhì)以及調(diào)節(jié)土壤性質(zhì)的調(diào)理劑等。

4總體要求

微生物菌劑的應(yīng)用應(yīng)按照國家相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范進(jìn)行，遵循綠色低碳、因地制宜與系統(tǒng)治理原則和綠

色可持續(xù)修復(fù)理念，具備可行性、有效性和工程適用性，實(shí)現(xiàn)減污降碳協(xié)同增效。

微生物菌劑的選擇、制備和應(yīng)用方式應(yīng)根據(jù)場地污染特征、修復(fù)目標(biāo)值、生物地球化學(xué)條件、水

文地質(zhì)條件、現(xiàn)場試驗(yàn)結(jié)果等因素確定。

應(yīng)對(duì)微生物菌劑應(yīng)用過程中所產(chǎn)生的廢氣、廢水、固體廢物及其他污染物進(jìn)行治理，并達(dá)到國家、

地方和相關(guān)行業(yè)排放標(biāo)準(zhǔn)要求。

微生物菌劑環(huán)境安全評(píng)價(jià)應(yīng)符合HJ/T415的規(guī)定。

應(yīng)在微生物菌劑投加部位就近建立獨(dú)立的菌劑存儲(chǔ)區(qū)，在區(qū)域內(nèi)明顯的位置張貼警示標(biāo)志、微生

物菌劑用途和注意事項(xiàng)等說明，并設(shè)置專人管理。

5微生物菌劑應(yīng)用流程

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應(yīng)用構(gòu)成

5.1.1微生物菌劑的應(yīng)用過程包括：微生物菌劑篩選、應(yīng)用設(shè)計(jì)和工程施用。

5.1.2微生物菌劑篩選包括外源微生物菌劑篩選和土著微生物菌劑的篩選、菌劑的鑒定、菌劑的安全

性評(píng)價(jià)。菌劑的篩選、評(píng)價(jià)應(yīng)通過小試和中試實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證菌劑施用可行性和污染物降解有效性。

5.1.3應(yīng)用設(shè)計(jì)包括微生物菌劑的擴(kuò)大培養(yǎng)、輔助藥劑選擇和工程參數(shù)設(shè)計(jì)。

5.1.4微生物菌劑可通過原位注入、淺層攪拌、生物堆、生物泥漿反應(yīng)、生物耕作等原位或異位修復(fù)

技術(shù)，進(jìn)行工程施用。

應(yīng)用流程

有機(jī)污染場地土壤微生物菌劑應(yīng)用修復(fù)流程如圖1所示。根據(jù)污染場地特征進(jìn)行微生物菌劑篩選，

并完成安全性評(píng)價(jià)。篩選出的微生物菌劑進(jìn)行擴(kuò)培，并選擇相匹配的輔助藥劑，通過現(xiàn)場模擬小試和中

試試驗(yàn)完成工程參數(shù)設(shè)計(jì)，隨后進(jìn)行工程施用。若污染物修復(fù)達(dá)到設(shè)計(jì)目標(biāo)，則達(dá)到要求并停機(jī)，若修

復(fù)不合格，則繼續(xù)進(jìn)行工程施用，繼續(xù)修復(fù)直至合格。

圖1微生物菌劑應(yīng)用流程圖

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6微生物菌劑篩選

外源微生物菌劑篩選

6.1.1選擇市售外源微生物菌劑應(yīng)符合產(chǎn)品出廠指標(biāo)，且應(yīng)具備相關(guān)完整資料，應(yīng)明確菌劑中所有微

生物的屬及種的學(xué)名、形態(tài)、生理化特征和安全性評(píng)價(jià)等完整資料。

6.1.2外源微生物菌劑應(yīng)能具有將土壤中目標(biāo)污染物有效降解能力，并不產(chǎn)生對(duì)土壤生態(tài)有毒害作用

的中間代謝產(chǎn)物。

6.1.3外源微生物菌劑的篩選需通過實(shí)驗(yàn)室液體培養(yǎng)基降解實(shí)驗(yàn)或模擬土壤試驗(yàn)評(píng)估其降解目標(biāo)污染

物能力，明確污染物降解速率或達(dá)到修復(fù)目標(biāo)所需要的時(shí)間、菌劑最適宜添加量、營養(yǎng)物添加范圍等修

復(fù)參數(shù)。

土著微生物菌劑篩選

6.2.1可采用助溶劑輔助配置疏水性污染物溶液用于篩選和馴化優(yōu)勢菌，避免芳烴類污染物在水中的

溶解度低和對(duì)微生物細(xì)胞有毒性的影響。

6.2.2對(duì)于單一降解菌篩選，可從受有機(jī)污染的場地中采集土壤樣品，好氧降解菌從表層土壤中篩選，

兼性或厭氧降解菌從深層土壤中篩選，以目標(biāo)污染物為唯一碳源，在接近場地實(shí)際環(huán)境條件下進(jìn)行培養(yǎng)、

分離和純化。

6.2.3對(duì)于混合降解菌篩選，可采用多個(gè)單一降解菌經(jīng)復(fù)配實(shí)驗(yàn)，獲得最優(yōu)菌群組成和菌株配比?？?/p>

參照6.2.2的方法從受有機(jī)污染的場地土壤中通過富集獲得。

微生物菌劑鑒定及保藏

6.3.1微生物菌劑宜通過形態(tài)學(xué)（包括菌落形態(tài)、菌絲形態(tài)、芽胞形態(tài)等特征）、生理生化（包括糖

發(fā)酵試驗(yàn)、氧化發(fā)酵試驗(yàn)、酶活性測定等）以及分子生物學(xué)（包括包括16SrRNA基因測序以及DNA

指紋圖譜分析等）等測定方法來確定其分類。

6.3.2微生物菌劑的保藏應(yīng)根據(jù)菌劑特性選擇適當(dāng)?shù)谋２胤椒ê蜅l件，如低溫，干燥以及缺氧等。

微生物菌劑產(chǎn)品要求

降解微生物菌劑產(chǎn)品宜符合表1的要求。

表1產(chǎn)品要求

菌劑類型

項(xiàng)目

液體固體

有效活菌數(shù)（cells）/(億

≥1.0≥1.0

/g或億/L)

霉菌雜菌數(shù)/（個(gè)/g或個(gè)

≤3.0×106≤3.0×106

/mL）

雜菌率/（%）≤10≤30

水分/（%）—≤20.0

細(xì)度/（%）—≥80

生長pH5.0～8.05.0～8.0

活菌的有效期/月≥3≥6

芳烴、石油烴去除率實(shí)驗(yàn)室評(píng)估條件下，1個(gè)月內(nèi)對(duì)目標(biāo)污染物降解率達(dá)到50%以上降解速

（%）率可接受；修復(fù)周期內(nèi)場地污染土壤修復(fù)達(dá)標(biāo)。

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7微生物菌劑應(yīng)用設(shè)計(jì)

微生物菌劑擴(kuò)培與制備

7.1.1菌劑接種量應(yīng)根據(jù)菌種特性確定，擴(kuò)培過程中每次放大比例宜為已有菌液量的10倍～20倍，

擴(kuò)培倍數(shù)過低，不能滿足生產(chǎn)需求，擴(kuò)培倍數(shù)過高，可能導(dǎo)致菌株老化，影響產(chǎn)品質(zhì)量。若修復(fù)過程需

要菌劑量較大，可進(jìn)行多次放大培養(yǎng)。

7.1.2菌劑的放大培養(yǎng)所需培養(yǎng)基應(yīng)根據(jù)菌劑的生理特性，選擇適宜的營養(yǎng)成分和配方（包括碳源，

氮源以及維生素等），同時(shí)需保證培養(yǎng)基營養(yǎng)豐富和均衡、物理性質(zhì)穩(wěn)定。

7.1.3菌劑擴(kuò)培所需溫度、濕度、pH值、溶氧量等環(huán)境因素可通過小試實(shí)驗(yàn)確定，菌劑擴(kuò)培過程中應(yīng)

通過實(shí)時(shí)監(jiān)測和調(diào)控，保持適宜的培養(yǎng)條件，促進(jìn)菌株的生長。

7.1.4菌劑的制備過程中可采用溶解性弱酸、弱堿調(diào)節(jié)pH，控制pH值穩(wěn)定在6～9范圍內(nèi)，同時(shí)需

根據(jù)修復(fù)要求和菌種特性，選擇適宜的制備方法和工藝流程。

7.1.5菌劑擴(kuò)培后微生物濃度應(yīng)達(dá)到109CFU/L以上，生長周期控制在5～10天，同時(shí)應(yīng)保證修復(fù)菌

種為優(yōu)勢菌，同時(shí)根據(jù)需要添加適量的添加劑和保護(hù)劑，提高菌劑的性能和使用效果。

7.1.6液體微生物菌劑也可通過負(fù)載到固體載體上制備成固體菌劑。載體應(yīng)選擇具有良好物理化學(xué)穩(wěn)

定性、孔隙率高、比表面積大、生物相容性好且價(jià)格低廉的載體。常用的載體材料包括生物炭、花生殼、

玉米芯、海藻酸鈉、卡拉膠、殼聚糖等。

7.1.7將液體微生物菌劑固定在載體上時(shí)，菌劑接種量、培養(yǎng)條件、營養(yǎng)條件可參照7.1.3的方法確

定，固體菌劑上微生物負(fù)載量應(yīng)不低于109CFU/kg。

輔助藥劑選擇與投加

7.2.1營養(yǎng)物藥劑選擇與投加

7.2.1.1應(yīng)根據(jù)污染土壤中成分組成，選擇添加營養(yǎng)物藥劑，營養(yǎng)物藥劑包括氮、磷和其他細(xì)胞生長

所必需的營養(yǎng)物質(zhì)，宜將修復(fù)土壤的C:N:P摩爾比控制在100:10:1～100:5:1范圍內(nèi)。

7.2.1.2營養(yǎng)物藥劑可在修復(fù)開始時(shí)和修復(fù)過程中根據(jù)需要適時(shí)添加。

7.2.1.3添加方式可采用直接添加法（修復(fù)開始時(shí)直接添加營養(yǎng)藥劑）、循環(huán)添加法（修復(fù)周期內(nèi)周

期性的添加一定量的營養(yǎng)藥劑）以及控制釋放法（通過控制營養(yǎng)藥劑的釋放速率，使其在一定時(shí)間內(nèi)緩

慢釋放）等。

7.2.1.4營養(yǎng)物藥劑投加所采用的設(shè)備包括注射泵，管道輸送系統(tǒng)，噴霧器或噴霧裝置以及滴灌系統(tǒng)

等。

7.2.2表面活性劑選擇與投加

7.2.2.1表面活性劑選擇可通過小試和中試實(shí)驗(yàn)，確定最優(yōu)使用的表面活性劑的類型

7.2.2.2在同等促進(jìn)效果條件下，應(yīng)優(yōu)先選擇生物合成表面活性劑，添加量推薦為0.1%-1%。

7.2.2.3投加方式可選用7.2.1的直接添加法和循環(huán)添加法，投加設(shè)備與7.2.1相同。

7.2.3電子受體和共代謝藥劑選擇

7.2.3.1對(duì)于淺層土壤的污染物降解，可通過平整，翻刨以及犁作等方式促進(jìn)生物修復(fù)；對(duì)于深層土

壤的污染物降解，當(dāng)其缺乏電子受體時(shí)，可通過添加氧氣或硝酸鹽等促進(jìn)生物修復(fù)，其中氧氣可通過自

然通風(fēng)（適用于土壤孔隙度較高、滲透性較好的情況），人工鉆井的方式向土壤注入空氣。

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7.2.3.2對(duì)石油烴/芳烴污染土壤進(jìn)行生物修復(fù)，當(dāng)石油烴/芳烴濃度過高且降解菌含量較低導(dǎo)致降解

速率緩慢時(shí)，可加入表2中相應(yīng)的小分子酸、小分子醇、小分子糖以及特定氨基酸等作為共代謝基質(zhì)，

共代謝基質(zhì)加入的量根據(jù)土壤的污染狀況可通過小試和中試實(shí)驗(yàn)確定。

表2土壤原位生物修復(fù)工程中常用的添加劑

生物降解類型典型污染物典型的添加劑

空氣，氧氣，雙氧水，二氧化鎂(氧化劑)，麥秸以及啤酒廠殘?jiān)?/p>

好氧氧化石油烴；芳烴

有機(jī)營養(yǎng)，磷酸鹽，銨鹽以及鉀鹽等

硝酸鹽，碳酸鹽，麥秸以及啤酒廠殘?jiān)扔袡C(jī)營養(yǎng)，磷酸鹽，銨

厭氧氧化石油烴；芳烴

鹽以及鉀鹽等

乙酸鹽，丙酸鹽，檸檬酸鹽，蘋果酸鹽，葡萄糖，木糖，甘露醇，

共代謝氧化石油烴；芳烴甲醇，谷氨酸，異亮氨酸，甲硫氨酸，色氨酸，苯甲酸鹽，香芹

酮，二戊烯以及甲基異丙苯等

微生物菌劑應(yīng)用工程參數(shù)設(shè)計(jì)

7.3.1微生物菌劑應(yīng)用應(yīng)收集土壤孔隙度、濕度、滲透系數(shù)、有機(jī)質(zhì)含量、電子受體/供體含量和土著

微生物群落組成等相關(guān)信息和資料，需要收集的設(shè)計(jì)資料參見附錄A.1。

7.3.2工程施用前可參照HJ25.4選擇原位或異位修復(fù)模式。在使用微生物菌劑進(jìn)行原位修復(fù)時(shí)，建議

場地土壤條件滿足滲透系數(shù)>6.0×10-4cm/s、石油烴濃度<5%；石油烴濃度>5%時(shí)建議采用異位修復(fù)。

對(duì)應(yīng)原位或異位修復(fù)菌劑可有效降解目標(biāo)污染物時(shí)的營養(yǎng)條件和環(huán)境理化條件即為工程施用時(shí)應(yīng)滿足

的基本參數(shù)。

7.3.3現(xiàn)場進(jìn)行小試模擬或中試試驗(yàn)，在加入菌劑后，可考慮補(bǔ)充生物菌劑投加和營養(yǎng)物投加，定期

對(duì)主要目標(biāo)污染物的降解效率進(jìn)行監(jiān)測，取降解效率最好的實(shí)驗(yàn)組菌劑及輔助藥劑配置，作為工程施用

時(shí)的目標(biāo)參數(shù)。

7.3.4菌劑原位應(yīng)用可通過設(shè)定不同梯度值或不同種類進(jìn)行單因素試驗(yàn)，取污染物有效降解的實(shí)驗(yàn)組

確定土壤修復(fù)區(qū)域應(yīng)滿足的溫度、pH、鹽度、氮源、磷源等參數(shù)。

7.3.5菌劑異位應(yīng)用可通過正交或單因素試驗(yàn)確定修復(fù)裝置應(yīng)滿足的溫度、菌劑濃度、含水率、有機(jī)

質(zhì)含量、通風(fēng)頻率等參數(shù)。

7.3.6由多種降解菌或以結(jié)合其它本土功能菌株（土壤改良菌、產(chǎn)表面活性劑菌）的形式應(yīng)用于污染

土壤，根據(jù)配伍菌群的污染物降解率調(diào)整營養(yǎng)物投加配比和環(huán)境條件參數(shù)。

8微生物菌劑工程施用

一般規(guī)定

8.1.1在適宜微生物生長和有效降解污染物的工程參數(shù)條件下，菌劑培養(yǎng)液與水按照質(zhì)量比1：50配

置菌劑溶液并添加輔助藥劑。

8.1.2若有機(jī)污染濃度超過一個(gè)月保持不變且未有修復(fù)效果，則需對(duì)其進(jìn)行進(jìn)一步投加營養(yǎng)物質(zhì)或外

源菌劑進(jìn)行馴化（按照碳氮磷100:10:1少量多次投加），直至生物修復(fù)終止。

8.1.3施用方式的選擇應(yīng)根據(jù)修復(fù)土壤有機(jī)污染濃度和空間分布等信息確定，可選擇淺層攪拌、原位

注入、異位修復(fù)等修復(fù)方式。

菌劑修復(fù)原位應(yīng)用

8.2.1淺層攪拌修復(fù)

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8.2.1.1淺層攪拌修復(fù)可采用表面噴淋法進(jìn)行菌劑施用投加。修復(fù)前需進(jìn)行土壤預(yù)處理，對(duì)修復(fù)區(qū)土

壤進(jìn)行人工或機(jī)械混勻，盡可能打碎其中的土塊，去除大石塊。

8.2.1.2表面噴淋法投加應(yīng)將菌劑用噴霧器均勻地接入修復(fù)區(qū)土壤中，根據(jù)原土中營養(yǎng)成分和培養(yǎng)基

成分比例，調(diào)節(jié)場地中營養(yǎng)元素?？衫脠龅氐叵滤{(diào)節(jié)土壤含水率在20%左右。單位面積的噴淋量根

據(jù)菌劑的滲入情況確定，保證土壤表面無大面積積水或菌液外流。

8.2.1.3噴灑后修復(fù)土壤中有效活菌數(shù)應(yīng)不低于107CFU/kg，此時(shí)可根據(jù)修復(fù)效果只添加外源營養(yǎng)物

質(zhì)；若有效活菌數(shù)低于107CFU/kg，應(yīng)同時(shí)添加營養(yǎng)物質(zhì)與外源降解微生物，有效活菌數(shù)的監(jiān)測頻率不

低于每周一次。

8.2.1.4修復(fù)過程中保持土壤相對(duì)濕度為40%～60%，定期對(duì)土壤進(jìn)行攪拌、噴施營養(yǎng)劑。

8.2.2原位注入修復(fù)

8.2.2.1原位注入修復(fù)可采用注入井泵送法進(jìn)行菌劑施用投加。

8.2.2.2可根據(jù)滲透系數(shù)、修復(fù)時(shí)間需求確定布設(shè)的注入井間距，同時(shí)應(yīng)計(jì)算水泵參數(shù)。

8.2.2.3應(yīng)持續(xù)施用菌劑，保持土壤中有效活菌數(shù)，保證菌劑所處環(huán)境一直處于優(yōu)勢菌，直至修復(fù)達(dá)

標(biāo)，監(jiān)測頻率不低于每周一次。

菌劑修復(fù)異位應(yīng)用

8.3.1根據(jù)場地條件、修復(fù)工期、土壤污染特征等綜合判斷確定生物堆、生物泥漿反應(yīng)或生物耕作等

修復(fù)方式。

8.3.2生物堆菌劑施用和修復(fù)過程應(yīng)參照HJ1283執(zhí)行。

8.3.3生物堆堆體可定期補(bǔ)水，堆體土壤中有效活菌數(shù)需控制不低于107CFU/kg，每月監(jiān)測1～2次

堆體降解微生物數(shù)量，確保微生物群落穩(wěn)定。

8.3.4生物泥漿反應(yīng)修復(fù)時(shí)，可直接向進(jìn)藥裝置投加微生物菌劑及輔助藥劑，在泥漿攪拌和堆置反應(yīng)

期間應(yīng)監(jiān)測反應(yīng)溫度、pH、含氧量、菌劑微生物密度等，確保菌劑處于有效反應(yīng)環(huán)境。

8.3.5生物耕作修復(fù)時(shí)，可通過工程機(jī)械將微生物菌劑和污染土壤拌勻，應(yīng)定期進(jìn)行翻拋。

9監(jiān)測與評(píng)估

工藝參數(shù)監(jiān)測

微生物菌劑施用過程中，應(yīng)對(duì)土壤的生物地球化學(xué)指標(biāo)、細(xì)菌總數(shù)等菌劑應(yīng)用相關(guān)工藝參數(shù)進(jìn)行監(jiān)

測，分析微生物生長和修復(fù)情況。檢測項(xiàng)目、分析方法、監(jiān)測頻率見表3。

表3監(jiān)測項(xiàng)目和分析方法

序號(hào)監(jiān)測項(xiàng)目監(jiān)測頻率分析方法引用標(biāo)準(zhǔn)

根據(jù)修復(fù)周期平均分

1異養(yǎng)菌總數(shù)平板計(jì)數(shù)法GB17378.7

5次測量

根據(jù)修復(fù)周期平均分

2功能微生物總數(shù)Q-PCR法——

5次測量

3pH≥2次/周pH計(jì)——

4溶解氧≥2次/周熒光法——

5有機(jī)碳含量≥2次/月燃燒氧化法HJ695

6全氮≥2次/月凱式法HJ717

7氨氮，亞硝氮，硝氮≥2次/月分光光度法HJ634

7

T/CSESXXXX—XXXX

序號(hào)監(jiān)測項(xiàng)目監(jiān)測頻率分析方法引用標(biāo)準(zhǔn)

8總磷≥2次/月抗分光光度法HJ632

9含水率≥2次/周烘干法GB7172

環(huán)境監(jiān)測及二次污染防治

9.2.1微生物菌劑修復(fù)過程中環(huán)境管理與二次污染防治措施應(yīng)參照HJ25.4。

9.2.2應(yīng)對(duì)修復(fù)過程中的廢水、廢氣排放口進(jìn)行布點(diǎn)監(jiān)測，監(jiān)測布點(diǎn)和監(jiān)測指標(biāo)參照HJ25.2執(zhí)行。

9.2.3在修復(fù)過程中，應(yīng)定期采用便攜式分析儀器設(shè)備監(jiān)測分析修復(fù)區(qū)及場界周邊空氣中的揮發(fā)性有

機(jī)物。

微生物菌劑效果評(píng)估

9.3.1微生物菌劑施用過程中，應(yīng)至少每周1次采集土壤樣品，分析目標(biāo)污染物濃度和次生代謝產(chǎn)物，

評(píng)估污染物降解趨勢和微生物菌劑修復(fù)效果。

9.3.2微生物菌劑施用后，應(yīng)對(duì)土壤理化性質(zhì)（包括土壤質(zhì)地、孔隙度、有機(jī)質(zhì)含量、養(yǎng)分含量等）、

土壤微生物群落的數(shù)量和多樣性進(jìn)行評(píng)估，具體參數(shù)見附錄A.2。

8

T/CSESXXXX—XXXX

A

A

附錄A

（資料性）

微生物菌劑應(yīng)用設(shè)計(jì)與過程監(jiān)測環(huán)境參數(shù)

表A.1微生物菌劑應(yīng)用設(shè)計(jì)涉及的環(huán)境參數(shù)

參數(shù)相關(guān)測量方法單位說明

土壤含水率烘干法%在飽和持水度80-90%范圍內(nèi)

菌劑微生物濃度Q-PCR法%菌劑微生物濃度達(dá)到109CFU/L以上

溫度溫度計(jì)℃

pH、pH計(jì)/

氮源分光光度法mg/L

用于菌劑工程參數(shù)設(shè)計(jì)單因素試驗(yàn)

過硫酸鉀氧化

磷源mg/L

法

溶解氧碘量法mg/L

土壤水的重量占其芳烴類降解菌劑的應(yīng)用方式（原位或異位）可根據(jù)土壤

含水層測試;

土壤滲透系數(shù)干土重的百分?jǐn)?shù)的滲透系數(shù)確定，土壤滲透系數(shù)>6.0×10-4cm/s