乙肝五項(xiàng)操作規(guī)程

乙肝五項(xiàng)操作規(guī)程乙型肝炎表面抗原（HBsAg）操作步驟：配液：配制工作濃度洗滌液（以純化水做25倍稀釋）編號(hào)：將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)（共預(yù)留陰性對(duì)照孔3孔、陽性對(duì)照1孔、建議預(yù)留空白對(duì)照1孔）加樣：加入75微升待測(cè)樣本和陰、陽性對(duì)照與反應(yīng)孔中。溫育：用封片紙覆蓋反應(yīng)板后，置37oc溫育60分鐘。加酶標(biāo)抗體：取出反應(yīng)板，撕去封片，在已加入待測(cè)樣本和陰性、陽性對(duì)照孔中加入50微升酶結(jié)合物。微孔振蕩器或手工輕輕振蕩10秒鐘。溫育：用封片紙覆蓋反應(yīng)板后，置37oc溫育30分鐘。洗滌：手工：扣去孔內(nèi)液體，用洗滌液注滿各孔，靜置20秒，扣去洗滌液，重復(fù)5次在吸水紙上拍干。洗板機(jī)：將孔內(nèi)液體甩干。選擇5次洗滌程序，洗板后在吸水紙上拍干。顯色：每孔加入顯色劑A，B液各1滴（50微升），輕輕振蕩勻，用封板紙覆蓋反應(yīng)板后，將反應(yīng)板放置37oc孵化30分鐘。終止：每孔加終止液1滴（50微升），混勻。測(cè)定：用酶標(biāo)儀讀數(shù)，波長450nm。（建議使用雙波長的酶標(biāo)儀比色，參考波長630nm或630相近的波長）若需扣除顯色劑空白，則先用顯色劑空白對(duì)照孔校零，然后讀取各孔OD值。結(jié)果判斷目測(cè)：在白色背景下觀察各孔顯色情況，有明顯黃色者為乙型肝炎表面抗原（HBsAg）陽性；無色者為乙型肝炎表面抗原（HBsAg）陰性。酶標(biāo)儀檢測(cè)：臨界值（CUT/OFF）計(jì)算：COV:Cut-offValue參考值PC：陽性對(duì)照OD值NCx：陰性對(duì)照平均OD值。NCx=(NC1+NC2+NC3)÷3檢測(cè)有效性：NCx≤0.1、PC≥1.0，則檢測(cè)結(jié)果有效。COV=NCx+0.100S：待測(cè)樣品的OD值，S/COV：待測(cè)樣本和COV的比值。陽性判定：樣品OD值S/COV≥1.0者判定為HBsAg陽性。陰性判定：樣品OD值S/COV<1.0者判定為HBsAg陰性。

乙型肝炎表面抗體（抗-HBs）、操作步驟：配液：濃縮洗滌液配置前充分混勻（如有結(jié)晶析出應(yīng)充分溶解），將濃縮洗滌液（20*）用蒸餾水或去離子水按1:19稀釋后使用。編號(hào)：將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每板應(yīng)設(shè)陰陽性對(duì)照各2孔和空白對(duì)照1孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑）加樣：分別在相應(yīng)孔中加入待測(cè)樣品50微升和陰，陽對(duì)照50微升及質(zhì)控血清。加酶標(biāo)抗體：空白對(duì)照孔不加酶標(biāo)試劑，每孔加入酶結(jié)合物50微升，輕輕振蕩混勻。溫育：置37oc溫育30分鐘。洗滌：手工：扣去孔內(nèi)液體，用洗滌液注滿各孔，靜置5秒，扣去洗滌液，重復(fù)5次在吸水紙上拍干。洗板機(jī)：將孔內(nèi)液體甩干。選擇4次洗滌程序，洗板后在吸水紙上拍干。顯色：每孔加入顯色劑A，B液各1滴（50微升），輕輕振勻，37oc避光顯色15分鐘。終止：每孔加終止液1滴（50微升），混勻。測(cè)定：用酶標(biāo)儀讀數(shù)，取波長450nm（建議使用雙波長的酶標(biāo)儀比色，參考波長630nm）測(cè)定各孔OD值先用空白孔校零，然后讀取各孔OD值。結(jié)果判斷目測(cè)：在白色背景下觀察核孔顯色情況，有明顯黃色者為乙型肝炎表面抗體（抗－HBs）陽性；無色者為乙型肝炎表面抗體（抗－HBs）陰性。酶標(biāo)儀檢測(cè)：臨界值（CUT/OFF）計(jì)算：COV=陰性對(duì)照平均OD值×2.1。（陰性對(duì)照孔OD值低于0.05者按0.05計(jì)算，高于0.05按實(shí)際OD值計(jì)算。陽性判定：樣品的OD值大于或等于COV值時(shí)，說明HBsAg陽性。陰性判定：樣品OD值小于COV值時(shí)，說明為HBsAg陰性。

乙型肝炎核心抗體（抗-HBc）操作步驟：配液：濃縮洗滌液配置前充分混勻（如有結(jié)晶析出應(yīng)充分溶解），將濃縮洗滌液（25*）用蒸餾水或去離子水按1:19稀釋后使用。編號(hào)：將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每板應(yīng)設(shè)陰陽性對(duì)照各2孔和空白對(duì)照1孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑）加樣：將待測(cè)樣本用生理鹽水1:30稀釋。（稀釋樣本檢測(cè)結(jié)果為臨床意義；樣本原液加樣，檢測(cè)結(jié)果為流行病學(xué)意義。用戶可根據(jù)實(shí)際情況選擇。）分別在相應(yīng)孔中加入稀釋樣本50微升和陰，陽對(duì)照50微升及質(zhì)控血清。加酶標(biāo)抗體：空白對(duì)照孔不加酶標(biāo)試劑，每孔加入酶結(jié)合物50微升，輕輕振蕩混勻。溫育：置37oc溫育30分鐘。洗滌：手工：扣去孔內(nèi)液體，用洗滌液注滿各孔，靜置20秒，扣去洗滌液，重復(fù)5次在吸水紙上拍干。洗板機(jī)：將孔內(nèi)液體甩干。選擇4次洗滌程序，洗板后在吸水紙上拍干。顯色：每孔加入顯色劑A，B液各1滴（50微升），輕輕振勻，37oc避光顯色15分鐘。終止：每孔加終止液1滴（50微升），混勻。測(cè)定：用于酶標(biāo)儀讀數(shù)，取波長450nm（建議使用雙波長的酶標(biāo)儀比色，參考波長630nm）測(cè)定各孔OD值先用空白孔校零，然后讀取各孔OD值。結(jié)果判斷目測(cè)：在白色背景下觀察核孔顯色情況，有明顯黃色者為乙型肝炎表面抗體（HBcAb）陽性；無色者為乙型肝炎表面抗體（HBcAb）陰性。酶標(biāo)儀檢測(cè)：臨界值（CUT/OFF）計(jì)算：未稀釋樣品CUT/OFF=陰性對(duì)照孔OD均值N×0.3。1:30稀釋樣品CUT/OFF=陰性對(duì)照孔OD均值N×0.5。陽性判定：樣品OD值小于COV，說明該樣品HBcAb陽性。陰性判定：樣品OD值大于或等于COV，說明該樣品HBcAb陰性。

乙型肝炎e抗原（HBeAg）操作步驟：配液：濃縮洗滌液配置前充分混勻（如有結(jié)晶析出應(yīng)充分溶解），將濃縮洗滌液（25*）用蒸餾水或去離子水按1:19稀釋后使用。編號(hào)：將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每板應(yīng)設(shè)陰陽性對(duì)照各2孔和空白對(duì)照1孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑）加樣：分別在相應(yīng)孔中加入待測(cè)樣品50微升和陰，陽對(duì)照50微升及質(zhì)控血清。加酶標(biāo)抗體：空白對(duì)照孔不加酶標(biāo)試劑，每孔加入酶結(jié)合物50微升，輕輕振蕩混勻。溫育：置37oc溫育30分鐘。洗滌：手工：扣去孔內(nèi)液體，用洗滌液注滿各孔，靜置浸泡30～60秒，扣去洗滌液，重復(fù)5次在吸水紙上拍干。洗板機(jī)：將孔內(nèi)液體甩干。選擇4次洗滌程序，洗板后在吸水紙上拍干。顯色：每孔加入顯色劑A，B液各1滴（50微升），輕輕振勻，37oc避光顯色15分鐘。終止：每孔加終止液1滴（50微升），混勻。測(cè)定：用于酶標(biāo)儀讀數(shù)，取波長450nm（建議使用雙波長的酶標(biāo)儀比色，參考波長630nm）測(cè)定各孔OD值先用空白孔校零，然后讀取各孔OD值。結(jié)果判斷目測(cè)：在白色背景下觀察各孔顯色情況，有明顯黃色者為乙型肝炎e抗原（HBeAg）陽性；無色者為乙型肝炎e抗原（HBeAg）陰性。酶標(biāo)儀檢測(cè)：臨界值（CUT/OFF）計(jì)算：CUT/OFF=陰性對(duì)照孔OD均值N×2.1。（陰性對(duì)照孔OD值低于0.05者按0.05計(jì)算，高于0.05按實(shí)際OD值計(jì)算）陽性判定：樣品OD值大于或等于COV值時(shí)，說明該樣品HBeAg陽性。陰性判定：樣品OD值小于COV值時(shí)，說明該樣品HBeAg陰性。

乙型肝炎e抗體（抗-HBe）操作步驟：配液：濃縮洗滌液配置前充分混勻（如有結(jié)晶析出應(yīng)充分溶解），將濃縮洗滌液（25*）用蒸餾水或去離子水按1:19稀釋后使用。編號(hào)：將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每板應(yīng)設(shè)陰陽性對(duì)照各2孔和空白對(duì)照1孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑）加樣：分別在相應(yīng)孔中加入待測(cè)樣品50微升和陰，陽對(duì)照50微升及質(zhì)控血清。加酶標(biāo)抗體：空白對(duì)照孔不加酶標(biāo)試劑，每孔加入酶結(jié)合物50微升，輕輕振蕩混勻。溫育：置37oc溫育30分鐘。洗滌：手工：扣去孔內(nèi)液體，用洗滌液注滿各孔，靜置20秒，扣去洗滌液，重復(fù)5次在吸水紙上拍干。洗板機(jī)：將孔內(nèi)液體甩干。選擇4次洗滌程序，洗板后在吸水紙上拍干。顯色：每孔加入顯色劑A，B液各1滴（50微升），輕輕振勻，37oc避光顯色15分鐘。終止：每孔加終止液1滴（50微升），混勻。測(cè)定：用于酶標(biāo)儀讀數(shù)，取波長450nm（建議使用雙波長的酶標(biāo)儀比色，參考波長630nm）測(cè)定各孔OD值先用空白孔校零，然后讀取各孔OD值。結(jié)果判斷目