種公豬鮮精生產(chǎn)技術(shù)規(guī)范-規(guī)范性審查稿

ICSFORMTEXT65.020.30FORMTEXTB43FORMTEXTDBFORMTEXT37DBFORMTEXT37/TFORMTEXTXXXXX—FORMTEXTXXXXFORMTEXTFORMTEXT種公豬鮮精生產(chǎn)技術(shù)規(guī)范FORMTEXTBoarsfreshspermproductiontechnicalspecificationFORMTEXTXXXX-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX發(fā)布FORMTEXTXXXX-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX實(shí)施FORMTEXT山東省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布前言本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1—2009給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由山東省畜牧獸醫(yī)局提出。本標(biāo)準(zhǔn)由山東省畜牧業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：山東省畜牧總站、山東省種公豬站、濟(jì)南市畜牧技術(shù)推廣站。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：牛志河、閆先峰、柴士名、李淑花、趙桂省、周希春、尹雪、王丹丹、邱淑霞。種公豬鮮精生產(chǎn)技術(shù)規(guī)范范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了種公豬鮮精生產(chǎn)的精液采集、檢查、稀釋、分裝、保存和方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于種公豬鮮精生產(chǎn)與保存。規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB23238—2009種豬常溫精液GB/T25172—2010豬常溫精液生產(chǎn)與保存技術(shù)規(guī)范術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。種公豬breedingboar生產(chǎn)性能和體型外貌特征符合種用要求的用于配種或采精的公豬。臺(tái)豬teaser引誘公豬產(chǎn)生性欲、以供其爬跨的同種動(dòng)物或模型。采精semencollection用人工的方法體外獲取種公豬精液的過(guò)程。采精頻率frequencyofsemencollection種公豬每周采精的次數(shù)。每劑量中直線前進(jìn)運(yùn)動(dòng)精子數(shù)prineachdose每劑精液中呈直線前進(jìn)運(yùn)動(dòng)精子的總數(shù)。器械清洗與消毒新購(gòu)置或使用后的玻璃器皿，用自來(lái)水浸泡。洗滌時(shí)，先在加有洗滌劑的溫水中進(jìn)行刷拭，然后用水沖洗干凈，最后用蒸餾水沖洗，直至器皿光亮、無(wú)水滴附著為止。將洗凈的玻璃器皿送入干燥箱，加熱至160℃后再恒溫60min，自然冷卻后待用。器械應(yīng)進(jìn)行消毒。塑料量杯、塑料量筒、瓷漏斗、金屬鑷子、藥匙、吸管滴頭等用75%酒精棉球擦拭消毒，待酒精揮發(fā)盡后方能使用。載玻片和蓋玻片，用后立即浸泡予水中，洗凈后用柔軟的布擦拭干凈備用。包裝用的塑料瓶、塑料袋用紫外線消毒30min后方可使用。稀釋液配制天平稱(chēng)取藥品時(shí)，盤(pán)內(nèi)墊以稱(chēng)量紙，校零后方可稱(chēng)重?；瘜W(xué)藥品取用后，應(yīng)立即將瓶口蓋嚴(yán)，并妥善保存。所用試劑均為分析純，用雙重蒸餾水溶解。配方參見(jiàn)附錄A（常見(jiàn)幾種公豬精液稀釋液配方）。商品稀釋劑按說(shuō)明書(shū)使用。不得使用過(guò)期或吸潮變色的稀釋劑。自配稀釋液配制后應(yīng)及時(shí)加入抗生素，稀釋液的PH值為6.4～7.2。使用前1h配制，配置后應(yīng)及時(shí)貼上標(biāo)簽，標(biāo)明品名、配置日期和時(shí)間、經(jīng)手人。剩余稀釋液應(yīng)密封后置于冰箱中冷藏，時(shí)間不超過(guò)24h。采精公豬應(yīng)來(lái)源于國(guó)家或省級(jí)種豬場(chǎng)，體型外貌和生產(chǎn)性能符合種用要求，三代系譜資料齊全，體質(zhì)健康的種豬。采精室應(yīng)建在精液處理室附近，應(yīng)設(shè)置采精區(qū)和安全區(qū)。采精區(qū)設(shè)置臺(tái)豬，地面防滑，并保持清潔、安靜。采精前準(zhǔn)備采精員應(yīng)著潔凈工作衣、帽，帶一次性無(wú)毒塑料手套、穿長(zhǎng)膠鞋。采精杯內(nèi)應(yīng)置無(wú)毒塑料袋并覆蓋四層紗布或一層精液過(guò)濾紙。顯微鏡載物臺(tái)恒溫板、精液處理器皿和稀釋液應(yīng)預(yù)熱至36℃～38℃。精子密度儀應(yīng)提前1h預(yù)熱。采精步驟剪去包皮部長(zhǎng)毛，清潔體表，擦干水漬。擠凈包皮積液，先用0.1%高錳酸鉀溶液清洗腹部和包皮，再用溫水清洗后擦干。手握法采精時(shí)，應(yīng)一只手戴雙層一次性無(wú)毒塑料手套，按摩公豬包皮部，待公豬爬跨臺(tái)豬并伸出陰莖，脫去外層手套，握緊龜頭，使其不能旋轉(zhuǎn)，順勢(shì)將陰莖的“S”狀彎曲延直。另一只手持采精杯，棄去最初射出的少量精液（約5mL），收集精液至射精完畢。假陰道法采精時(shí)，應(yīng)向假陰道內(nèi)注入45℃～50℃的溫水，使其采精時(shí)保持在38℃～42℃。再用潤(rùn)滑劑將內(nèi)胎由內(nèi)到外涂均勻，后用雙聯(lián)球充氣加壓使內(nèi)胎具備母豬陰道壁的功能，一端為入口，另一端裝膠管漏斗與集精杯。采精時(shí)右手持假陰道，左手將陰莖導(dǎo)入入口端使其射精，收集精液至射精完畢。采精頻率成年公豬：2～3次/周，青年公豬：1～2次/周。精液檢查精液處理室精液處理室應(yīng)設(shè)精液檢查、稀釋和分裝3個(gè)區(qū)域，室溫宜在20℃～25℃，避免陽(yáng)光直射或紫外燈照射。配置儀器和用品參見(jiàn)附錄B（精液處理室配置儀器和用品）。原精液品質(zhì)原精液品質(zhì)應(yīng)符合附錄C1(原精液品質(zhì))的規(guī)定。檢測(cè)方法外觀、氣味目測(cè)、鼻嗅。采精量采用電子天平稱(chēng)量法計(jì)算采精量（1g相當(dāng)于1mL）。精子活力取中層精液約25μL于載玻片上，加蓋蓋玻片后在37℃條件下用200倍～400倍顯微鏡檢查，活力用百分率標(biāo)示。每份精液取樣兩次，每個(gè)樣觀察三個(gè)視野，并觀察不同液層內(nèi)的精子運(yùn)行狀態(tài)，進(jìn)行全面評(píng)定，計(jì)算平均值。精子密度按精子密度儀或可見(jiàn)光分光光度計(jì)的操作規(guī)程準(zhǔn)確進(jìn)行精液的密度測(cè)定。應(yīng)定期用血細(xì)胞計(jì)數(shù)法校正。精子畸形率采用吉姆薩染色檢測(cè)法，在400倍～600倍顯微鏡下觀察左、右兩個(gè)區(qū)觀察不少于200個(gè)精子。也可采用相差顯微鏡直接觀察。每月抽檢一次。鮮精精液品質(zhì)檢測(cè)方法參見(jiàn)GB23238—2009種豬常溫精液，精液產(chǎn)品質(zhì)量見(jiàn)附錄C2（鮮精精液產(chǎn)品質(zhì)量）。記錄填寫(xiě)公豬鮮精精液品質(zhì)檢測(cè)登記表，登記表見(jiàn)附錄D（公豬鮮精精液品質(zhì)檢測(cè)登記表）。精液稀釋精液采集后應(yīng)盡快稀釋?zhuān)胖脮r(shí)間不宜超過(guò)15min。采用等溫稀釋。精液與稀釋液溫差不得超過(guò)±1℃（在33℃～37℃范圍內(nèi)），根據(jù)精液溫度調(diào)節(jié)稀釋液溫度，不得反向操作。將稀釋液沿杯壁緩慢加入到精液中，輕輕搖動(dòng)或沿一個(gè)方向慢慢攪拌，混合均勻。高倍稀釋時(shí)，應(yīng)先2倍稀釋?zhuān)?0s后再加入余下的稀釋液。精液稀釋后應(yīng)靜置5min再作精子活力檢測(cè)，活力不低于70%進(jìn)行分裝。稀釋后精液要求。每劑劑量地方豬種40mL～50mL，瘦肉型豬種80mL～100mL，精子活力≥70%以上，每劑含總精子數(shù)地方豬種≥15億個(gè)，瘦肉型豬種≥35億個(gè)。稀釋液總量以體積V計(jì)，數(shù)值以mL表示，按式（1）計(jì)算： (SEQ標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)公式\*ARABIC1)式中：V1——采精量mL；c——精子密度億個(gè)/mL；m——精子活力%；s——每劑含總精子數(shù)，單位為億個(gè)；V2——每劑精液量mL。精液分裝采用袋裝和瓶裝。裝精液用的袋、瓶應(yīng)選用對(duì)精子無(wú)毒害作用且滅菌的一次性塑料制品。按不同品種的劑量要求，將精液分裝至精液袋、瓶中，排出空氣后密封。精液包裝應(yīng)標(biāo)明產(chǎn)品名稱(chēng)、劑量、生產(chǎn)單位、生產(chǎn)日期、批號(hào)、品種或類(lèi)型、耳號(hào)、有效期和貯存溫度。精液保存分裝后的精液應(yīng)放置1h～2h溫度緩慢降至17℃左右時(shí)，平放入16℃～18℃恒溫箱內(nèi)避光保存；也可用12～15層紗布（或干毛巾）包嚴(yán)直接放入16℃～18℃恒溫箱內(nèi)。保存的精液應(yīng)每隔4h～8h搖動(dòng)1次并記錄，搖動(dòng)時(shí)應(yīng)輕緩均勻。稀釋后的精液應(yīng)在3d內(nèi)用完，超過(guò)保質(zhì)期的精液不應(yīng)使用。每批精液應(yīng)留樣備查。同批號(hào)的精液在保質(zhì)期內(nèi)應(yīng)抽樣檢查并記錄，公豬常溫精液保存登記表見(jiàn)附錄E（公豬常溫精液保存登記表）。附錄A：常見(jiàn)幾種公豬精液稀釋液配方單位：g/L成分配方一配方二配方三配方四保存時(shí)間/d3355D-葡萄糖37.1560.0011.5011.50檸檬酸三鈉6.003.7011.6511.65EDTA鈉鹽1.253.702.352.35碳酸氫鈉1.251.201.751.75氯化鉀0.75——0.75青霉素鈉0.600.500.60—硫酸鏈霉素1.000.501.000.50聚乙烯醇(PVP，TypeII)——1.001.00三羧甲基氨基甲烷(Tris)——5.505.50檸檬酸——4.104.10半胱氨酸——0.070.07海藻糖——1.00林肯霉素——1.00附錄B:精液處理室配置儀器和用品名稱(chēng)規(guī)格（技術(shù)參數(shù)）用途17℃生化培養(yǎng)箱50L～200L保存種豬常溫精液（任選）電子臺(tái)稱(chēng)3000g/1g，6000g/2g稱(chēng)量精液、稀釋液電子天平200g/0.01g稱(chēng)量化學(xué)試劑（選用）顯微鏡40X～1600X檢查活力、精子數(shù)和畸形率電加熱板室溫至50℃（可調(diào)），工作面溫差：≤0.5℃載玻片、蓋玻片恒溫預(yù)熱精子密度儀50mill/mL～1400mill/mL測(cè)定精子密度（任選）可見(jiàn)光分光光度計(jì)波長(zhǎng)范圍350nm～820nm，帶寬＜±5nm測(cè)定精子密度（任選）酸度計(jì)測(cè)量范圍0.0～14.0，精度±0.1測(cè)定精液、稀釋液的pH精液保存箱17℃±1℃保存精液干燥箱室溫＋5℃～250℃，波動(dòng)度＜±2℃預(yù)熱器皿和消毒器械恒溫水浴鍋雙孔或四孔稀釋液保溫恒溫磁力攪拌器0℃～99℃，容量＜500mL稀釋液攪拌、加熱雙重蒸餾水器2000mL～2500mL制作雙重蒸餾水血球計(jì)數(shù)板25X16測(cè)定精子密度計(jì)數(shù)器0～999精子計(jì)數(shù)微量移液器100μL～200μL精液取樣或稀釋微量移液器100μL～1000μL精液取樣或稀釋量筒（或量杯）500mL～2000mL量取液體（選用）三角瓶1000mL配制稀釋液放水瓶5L盛放雙重蒸餾水燒杯1000mL、2000mL精液稀釋溫度計(jì)100℃測(cè)量精液、稀釋液溫度自動(dòng)分裝機(jī)分裝精液（選用）熱封口機(jī)袋裝精液封口分裝架分裝精液載玻片精子活力的測(cè)定蓋玻片精子活力的測(cè)定精液袋、瓶分裝及保存精液稀釋粉配制精液稀釋液擦鏡紙擦拭顯微鏡鏡頭玻璃棒稀釋液配制或精液稀釋移液槍吸嘴精液取樣過(guò)濾紙過(guò)濾精液附錄B：精液處理室配置儀器和用品（續(xù)）名稱(chēng)規(guī)格（技術(shù)參數(shù)）用途潤(rùn)滑劑用于采精采精袋（杯）盛放原精一次性無(wú)毒塑料手套用于采精標(biāo)簽紙精液、稀釋液標(biāo)簽附錄C1：原精液品質(zhì)檢查項(xiàng)目指標(biāo)外觀乳白色或淺灰色，無(wú)膿性分泌物，無(wú)皮毛等異物氣味略帶腥味，無(wú)異味采精量（mL）≥100精子活力（%）≥75精子密度（億個(gè)/mL）≥1精子畸形率（%）≤15附錄C2：鮮精精液產(chǎn)品質(zhì)量檢查項(xiàng)目指標(biāo)外觀乳白色，無(wú)雜質(zhì)，包裝封口嚴(yán)密。劑量（mL/劑）地方豬種40～50，瘦肉型豬種80～100精子活力（%）≥60每劑量中直線前進(jìn)運(yùn)動(dòng)精子數(shù)（億個(gè)/劑）地方豬種≥10，瘦肉型豬種≥25精子畸形率（%）≤18有效期≥72h附錄D：公豬鮮精精液品質(zhì)檢測(cè)登記表品種采精日期公豬號(hào)采精員采精量（mL）色澤氣味PH值精子活力（%）精子密度(億/ml)每劑量中