DB50T 1366-2023 水質(zhì) 喹諾酮類抗生素的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法　

ICS13.060.01DB50重慶市市場監(jiān)督管理局發(fā)布IDB50/T1366—2023 12規(guī)范性引用文件 13術(shù)語和定義 14方法原理 15干擾與消除 16試劑和材料 17儀器和設(shè)備 28樣品 29分析步驟 310結(jié)果計算與表示 611精密度和正確度 712質(zhì)量保證和質(zhì)量控制 813廢棄物的處理 8附錄A（規(guī)范性）方法的檢出限和測定下限 9附錄B（資料性）方法的精密度和正確度 DB50/T1366—2023本本文件按照GB/T1.1－2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔識別專利的責任。本文件由重慶市生態(tài)環(huán)境監(jiān)測中心提出。本文件由重慶市生態(tài)環(huán)境局歸口并組織實施。本文件主要起草單位：重慶市生態(tài)環(huán)境監(jiān)測中心。本文件主要起草人：張曉嶺、鄭璇、張文斌、李新宇、李莉、田雋、劉敏、李曉、蹇川、朱明吉、鄒敏、鄒素蘭、張君、熊強、郭志順。1DB50/T1366—2023水質(zhì)喹諾酮類抗生素的測定液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法本文件規(guī)定了液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜對水中13種喹諾酮類抗生素進行測定的方法。本文件適用于地表水、地下水、生活污水和工業(yè)廢水中依諾沙星、麻保沙星、諾氟沙星、氧氟沙星、培氟沙星、環(huán)丙沙星、氟羅沙星、丹諾沙星、洛美沙星、恩諾沙星、沙拉沙星、雙氟沙星、氟甲喹等13種喹諾酮類抗生素的測定。若通過驗證，本文件也可適用于其他喹諾酮類抗生素。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。HJ91.1污水監(jiān)測技術(shù)規(guī)范HJ91.2地表水環(huán)境質(zhì)量監(jiān)測技術(shù)規(guī)范HJ164地下水環(huán)境監(jiān)測技術(shù)規(guī)范3術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。4方法原理水中的喹諾酮類抗生素經(jīng)固相萃取柱富集，用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分離檢測。根據(jù)保留時間和特征離子峰定性，內(nèi)標法定量。5干擾與消除金屬離子與目標化合物能形成絡合物，使固相萃取效率降低，可向水樣中加入乙二胺四乙酸二鈉抑制絡合物的形成。6試劑和材料警告：本方法所使用的有機溶劑對人體健康有害，試劑配制和樣品前處理過程應在通風櫥內(nèi)進行，操作時應按規(guī)定要求佩帶防護器具，避免接觸皮膚和衣服。6.1除非另有說明，分析時均使用符合國家標準的分析純試劑，實驗用水為新制備的超純水。6.2氫氧化鈉（NaOH）：分析純。6.3鹽酸（HCl）：1mol/L，分析純。2DB50/T1366—20236.4甲醇（CH3OH）：農(nóng)殘級或等同規(guī)格。6.5甲酸（HCOOH）：色譜純。6.6乙腈（CH3CN）：農(nóng)殘級或等同規(guī)格。6.7甲酸溶液（0.05%）：取50μl甲酸（6.5）溶于100ml實驗用水中。6.8甲酸/乙腈溶液：取90ml甲酸溶液（6.7）和10ml乙腈（6.6）混合，搖勻。6.9乙二胺四乙酸二鈉（Na2EDTA）：分析純。6.10標準貯備液：ρ=1.00g/L可直接購買有證標準溶液，也可用標準物質(zhì)配制，標準物質(zhì)純度大于99.0%。用甲醇（6.4）溶解，貯備液在-10℃以下冷凍、避光保存不超過6個月或參照制造商的產(chǎn)品說明。6.11混合標準中間液：ρ=100μg/ml移取適量13種喹諾酮類抗生素標準貯備液（6.10）按需要用甲醇（6.4）稀釋，中間液于-10℃以下冷凍、避光保存不超過3個月。6.12混合標準使用液：ρ=1.00μg/ml（參考濃度）將喹諾酮類抗生素標準中間液（6.11）按需要用甲醇（6.4）稀釋，-10℃以下冷凍，避光保存不超過7天。6.13內(nèi)標貯備液：ρ=1.00g/L貯備液在-10℃以下冷凍、避光保存不超過6個月或參照制造商的產(chǎn)品說明。6.14內(nèi)標中間液：ρ=100μg/ml移取適量內(nèi)標貯備液（6.13）按需要用甲醇（6.4）稀釋，內(nèi)標混合中間液在-10℃以下冷凍、避光保存不超過3個月或參照制造商的產(chǎn)品說明。6.15內(nèi)標使用液：ρ=10.0μg/ml（參考濃度）將內(nèi)標混合中間液（6.14）按需要用甲醇（6.4）稀釋，-10℃以下冷凍，避光保存不超過7天。6.16固相萃取柱：填料為二乙烯苯和N-乙烯基吡咯烷酮共聚物（HLB）或同等柱效的萃取柱，規(guī)格為6ml/150mg。6.17濾膜：0.22μ和0.45μm玻璃纖維聚膜或其他材質(zhì)等效濾膜。6.18氮氣：純度≥99.99%。6.19氬氣：純度≥99.99%。7儀器和設(shè)備7.1液相色譜/串聯(lián)質(zhì)譜儀：配有電噴霧離子化源(ESI)。7.2色譜柱：C18柱或等效反相高效液相色譜柱，參考規(guī)格為100mm×2.1mm1.9μm。7.3濃縮裝置：K-D濃縮器或氮吹濃縮儀等性能相當?shù)脑O(shè)備。7.4固相萃取裝置：自動或手動，流速可調(diào)節(jié)。7.5一般實驗室常用儀器。8樣品8.1采集與保存參照HJ91.1、HJ91.2和HJ164的相關(guān)規(guī)定采集樣品于4000ml磨口棕色玻璃瓶中，水樣應充滿采樣瓶，不留液上空間。樣品采集后應盡快進行分析。如暫不能分析，應在0℃~4℃避光保存，14天內(nèi)完成萃取。3DB50/T1366—20238.2樣品制備將固相萃取柱（6.16）固定在固相萃取裝置(7.4)上，分別用10ml甲醇（6.4）和10ml實驗用水活化固相萃取柱（6.16），保證小柱柱頭浸潤。水樣經(jīng)0.45μm濾膜（6.16）過濾，取1000ml水樣，加入1gNa2EDTA（6.9），用氫氧化鈉（6.2）和鹽酸（6.3）調(diào)節(jié)pH值為至6.0，水樣以低于10ml/min（約3滴/秒～4滴/秒）的流速通過小柱，用10ml實驗用水洗滌小柱，用氮氣（6.18）吹干小柱，再用10ml甲醇（6.4）洗脫，收集洗脫液于潔凈試管中，洗脫液經(jīng)濃縮裝置（7.3）濃縮至干，加入內(nèi)標使用液（6.15）5.00μl，用甲酸/乙腈溶液（6.8）定容至1ml，經(jīng)0.22μm濾膜（6.17）過濾，置于樣品瓶中，待測。當樣品體積為1000ml，濃縮后定容體積為1.0ml，進樣體積為10μl，13種喹諾酮類抗生素的檢出限為1ng/L～2ng/L，測定下限為4ng/L～8ng/L，詳見附錄A。8.3空白樣品的制備以實驗用水代替樣品，按照樣品制備（8.2）相同操作步驟，制備樣品。9分析步驟9.1儀器參考條件9.1.1液相色譜分析條件流動相A：甲酸溶液(6.5)，流動相B：甲醇（6.4），流動相C：乙腈（6.6）。梯度洗脫程序見表1，流速：200.0μl/min；柱溫：35℃;進樣量10μl；具體參數(shù)見表1。表1液相色譜流動相梯度洗脫程序%%%00200202009.1.2質(zhì)譜分析條件正離子模式：ESI噴霧電壓(sprayvoltage)：3000V毛細管溫度：350℃鞘氣(N2)流速：45L/min輔助氣(N2)流速：15L/min碰撞氣(Ar)壓力：200mPa4DB50/T1366—2023選擇反應監(jiān)測(SRM)，具體參數(shù)見表2。表2目標化合物的選擇反應監(jiān)測條件VV12345a6a7a89aaaaa9.1.3儀器調(diào)諧按照儀器使用說明書在規(guī)定時間和頻次內(nèi)對液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀進行儀器質(zhì)量數(shù)和靈敏度校正，以確保儀器處于最佳測試狀態(tài)。在儀器使用過程中，如發(fā)現(xiàn)儀器質(zhì)量數(shù)出現(xiàn)明顯偏差或靈敏度大幅度下降時，應立即對儀器重新進行質(zhì)量數(shù)和靈敏度校正。9.2校準5DB50/T1366—20239.2.1標準曲線的繪制取一定量喹諾酮類混合標準使用液（6.12）于甲酸/乙腈混合溶液（6.8）中，制備至少5個濃度點的標準系列，13種喹諾酮類的質(zhì)量濃度分別為2.00μg/L、5.00μg/L、10.0μg/L、20.0μg/L、50.0μg/L、100.0μg/L（此為參考濃度），于每毫升標準系列中加入5.00μl內(nèi)標標準使用液（6.15），使內(nèi)標的質(zhì)量濃度為50.0μg/L，貯存在棕色進樣小瓶中，待測。由低濃度到高濃度依次對標準系列溶液進樣，以標準系列溶液中目標組分的濃度為橫坐標，以其對應的峰面積與內(nèi)標物峰面積的比值和內(nèi)標物濃度的乘積為縱坐標，建立校準曲線。如式（1）：yaxb..................................................................................(1)式中：x——目標組分濃度的數(shù)值，單位為微克每升(μg/L）；y——目標組分和內(nèi)標物的峰面積（或峰高）比值與內(nèi)標物濃度乘積的數(shù)值；a——校準曲線斜率的數(shù)值；b——校準曲線截距的數(shù)值。9.2.2標準參考譜圖在本標準推薦的儀器參考條件下，目標化合物的提取離子流色譜圖見圖1。 6DB50/T1366—2023 圖113種喹諾酮類抗生素和內(nèi)標物的提取離子流色譜圖9.3測定9.3.1樣品測定按照與繪制校準曲線相同的儀器分析條件進行測定。9.3.2空白試驗按與樣品測定相同的儀器分析條件進行空白樣品的測定。10結(jié)果計算與表示10.1定性分析每種被測組分選擇1個母離子和2個子離子進行監(jiān)測。在相同的實驗條件下，樣品中待測組分的保留時間與標準樣品中目標組分的保留時間比較，相對標準偏差的絕對值應小于2.5%；且待測樣品譜圖中，各組分定性離子的相對豐度（Ksam見式2）與濃度接近的標準溶液譜圖中對應的定性離子相對豐度（Kstd見式3）進行比較，偏差