2025年粵教新版選擇性必修3生物下冊階段測試試卷

…………○…………內(nèi)…………○…………裝…………○…………內(nèi)…………○…………裝…………○…………訂…………○…………線…………○…………※※請※※不※※要※※在※※裝※※訂※※線※※內(nèi)※※答※※題※※…………○…………外…………○…………裝…………○…………訂…………○…………線…………○…………第=page22頁，總=sectionpages22頁第=page11頁，總=sectionpages11頁2025年粵教新版選擇性必修3生物下冊階段測試試卷582考試試卷考試范圍：全部知識點；考試時間：120分鐘學(xué)校：______姓名：______班級：______考號：______總分欄題號一二三四五六總分得分評卷人得分一、選擇題(共7題，共14分)1、下列表示抗凝血酶乳腺生物反應(yīng)器的制備過珵；下列說法正確的是（）

A.①表示受精卵B.②表示性別為雄性的胚胎C.常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將基因?qū)胧荏w細胞D.該轉(zhuǎn)基因牛中的抗凝血酶基因只存在于乳腺紐胞中2、下列與動物細胞培養(yǎng)有關(guān)的敘述，不正確的是（）A.細胞體外培養(yǎng)需要糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽等營養(yǎng)物質(zhì)B.當貼壁細胞分裂生長到表面相互抑制時，細胞就會停止分裂增殖C.需將細胞置于含有95%O2和5%CO2的混合氣體的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)D.培養(yǎng)的動物細胞可用于檢測有毒物質(zhì)，判斷某種物質(zhì)的毒性3、甘薯由于能增強免疫功能、防癌抗癌、抗衰老、防止動脈硬化等越來越被人們喜愛。但甘薯屬無性繁殖作物，同時又是同源六倍體，具有自交不育和雜交不親和性，這使甘薯生產(chǎn)和育種存在諸多常規(guī)方法難于解決的問題。下列相關(guān)操作不合理的是（）A.利用組織培養(yǎng)形成的胚狀體制作人工種子，解決種苗用量大、成本高的問題B.利用莖尖分生組織培養(yǎng)脫毒苗，使植株具備抗病毒的能力，產(chǎn)品質(zhì)量得到提高C.利用原生質(zhì)體融合實現(xiàn)體細胞雜交，可以克服雜交不親和，充分利用遺傳資源D.利用培養(yǎng)的愈傷組織進行誘變育種，可以顯著提高變異頻率，大大縮短育種年限4、某研究者利用細胞工程制備抗A的單克隆抗體。先用抗原(A)分別免疫3只同種小白兔(X、Y和Z)，每只小白兔免疫5次，每次免疫一周后測定各小白兔血清抗體的效價(能檢測出抗原抗體反應(yīng)的血清最大稀釋倍數(shù))，制備B淋巴細胞時，免疫小白兔的血清抗體效價需達到16000以上，結(jié)果如圖所示。下列有關(guān)敘述錯誤的是（）

A.將抗原A注入小白兔體內(nèi)的目的是為了獲得免疫產(chǎn)生的抗A抗體B.最適合用于制備B淋巴細胞的小白兔YC.骨髓瘤細胞與B淋巴細胞的融合可以使用滅活的病毒進行促融D.融合細胞需經(jīng)多次篩選獲得足夠數(shù)量的能分泌抗A抗體的雜交瘤細胞5、研究人員從土壤中篩選得到酵母菌纖維素酶高產(chǎn)菌株；并對其降解纖維素的條件進行了研究。據(jù)圖分析正確的是（）

A.篩選該高產(chǎn)菌株需要在纖維素為唯一碳源的培養(yǎng)基中培養(yǎng)B.探究最適溫度時應(yīng)盡可能將發(fā)酵液的pH控制在12左右C.該酵母菌高產(chǎn)菌株產(chǎn)生纖維素酶的最適溫度是35℃D.利用該高產(chǎn)菌株降解纖維素時需嚴格保持厭氧環(huán)境6、假設(shè)世界上最后一頭野驢剛死亡，以下使它“復(fù)生”方案中可行的是（）A.將野驢的基因?qū)爰殷H的受精卵中，培育出新個體B.將野驢的體細胞核移植到家驢的去核卵細胞中，培育出新個體C.將野驢的體細胞兩兩融合，再經(jīng)組織培養(yǎng)培育出新個體D.將野驢的體細胞取出，利用組織培養(yǎng)培育出新個體7、科學(xué)家將相關(guān)基因?qū)塍w細胞，使其成為誘導(dǎo)多能干細胞（iPSC）。將iPSC與心肌細胞融合，獲得雜交細胞（Hybridcell）。一定條件下分別誘導(dǎo)iPSC和雜交細胞向心肌細胞分化，統(tǒng)計其分化率，結(jié)果如圖。相關(guān)說法不正確的是（）

A.向心肌細胞分化是基因選擇性表達的結(jié)果B.誘導(dǎo)多能干細胞和雜交細胞都具有分化能力C.誘導(dǎo)20d后iPSC和雜交細胞都不再分化D.臨床使用前需評估兩種細胞致癌的風(fēng)險評卷人得分二、多選題(共5題，共10分)8、下列說法錯誤的是（）A.因為土壤中各類微生物的數(shù)量不同，所以為獲得不同類型的微生物，要按不同的稀釋倍數(shù)進行分離B.測定土壤中細菌的總量和測定土壤中能分解尿素的細菌的數(shù)量，選用的稀釋范圍相同C.只有得到了3個或3個以上菌落數(shù)目在30～300的平板，才說明稀釋操作比較成功，并能夠進行菌落的計數(shù)D.牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的菌落數(shù)明顯大于選擇培養(yǎng)基的數(shù)目，說明選擇培養(yǎng)基已篩選出一些細菌菌落9、驅(qū)蚊草含有香茅醛，能散發(fā)出一種特殊的檸檬型香氣，從而達到驅(qū)蚊且對人體無害的效果。驅(qū)蚊草是把天竺葵的原生質(zhì)體和香茅草的原生質(zhì)體進行誘導(dǎo)融合培育而成的。下列關(guān)于驅(qū)蚊草培育的敘述，錯誤的是（）A.驅(qū)蚊草的培育屬于細胞工程育種，優(yōu)點是克服了遠緣雜交不親和的障礙B.驅(qū)蚊草培育過程要用到纖維素酶、果膠酶、PEG等試劑或電刺激等方法C.驅(qū)蚊草培育過程不同于植物組織培養(yǎng)，無細胞脫分化和再分化的過程D.驅(qū)蚊草培育利用了植物體細胞雜交技術(shù)，育種原理是基因突變10、圖甲為培育轉(zhuǎn)基因生物時選用的載體，圖乙是含有目的基因的一段DNA序列，圖中標注了相關(guān)限制酶的酶切位點。下列敘述錯誤的是（）

A.若通過PCR技術(shù)提取該目的基因，應(yīng)該選用引物a和引物cB.構(gòu)建表達載體時應(yīng)選用BamHⅠ和HindⅡ這兩種限制酶C.圖乙中一個DNA分子在PCR儀中經(jīng)過四輪復(fù)制得到所需目的基因的分子數(shù)為8個D.只利用含四環(huán)素的培養(yǎng)基就可以直接篩選出成功導(dǎo)入表達載體的受體細胞11、常見的輔助生殖技術(shù)有兩種：一種叫做人工授精，即通過人工的方法，把精液或者精子送到雌性的生殖道，達到增加懷孕幾率的目的；第二種輔助生殖技術(shù)就是試管動物，主要涉及體外受精、胚胎體外培養(yǎng)和胚胎移植等技術(shù)。下列敘述正確的是（）A.人工授精后形成的早期胚胎立即與母體子宮建立聯(lián)系B.輔助生殖技術(shù)不一定會用到胚胎移植C.與克隆動物不同，試管動物的培育屬于有性生殖D.人工授精和試管動物技術(shù)都要注意受體的生殖周期12、生活垃圾分類就是通過回收有用物質(zhì)減少生活垃圾的處置量，提高可回收物質(zhì)的純度增加其資源化利用價值，減少對環(huán)境的污染。目前，各地陸續(xù)頒布實施《生活垃圾管理條例》，生活垃圾分類已成為市民的日常生活方式。處理垃圾的有效方法之一是用微生物對其進行降解。下圖表示篩選高效降解淀粉菌種的過程。下列敘述正確的是（）

A.剩余飯菜、玻璃碎片、果皮果殼屬于濕垃圾B.菌落①②透明圈大小不同是兩個菌群對碘液分解能力不同C.若垃圾分類不當混入過期的抗生素或電池等會抑制微生物生長D.圖中將菌液接種到培養(yǎng)基的方法是釋涂布平板法評卷人得分三、填空題(共8題，共16分)13、生化武器散布途徑：將病原體_____或者通過_____、_____等散布到敵方，會對軍隊和平民造成大規(guī)模殺傷后果。14、酶是細胞合成的生物催化劑。隨著生物科學(xué)技術(shù)的發(fā)展；酶已經(jīng)走出實驗室，走進人們的生產(chǎn)和生活。請回答下面有關(guān)酶的問題：

（1）在腐乳制作的過程中；利用毛霉等微生物產(chǎn)生的蛋白酶將豆腐中的蛋白質(zhì)分解成________，____________將脂肪水解為甘油和脂肪酸。加酶洗衣粉里添加的酶制劑中，應(yīng)用最廣泛；效果最明顯的是____________。

（2）果膠酶包括_____________________________；生產(chǎn)中如果要固定果膠酶；最好采用______________________________________法固定化。

（3）酶提取和分離原理：需要用__________法去除相對分子質(zhì)量大的雜質(zhì)蛋白，以純化酶；利用_________________________法對酶進行純度鑒定。15、功能：能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定的核苷酸序列，并且使每一條鏈中______部位的兩個核苷酸之間的______斷開，因此具有______。16、醋酸菌的最適生長溫度為____________________℃。17、獲取目的基因的方法______、______、______18、生物數(shù)據(jù)庫的知識與正在迅猛發(fā)展的生物信息學(xué)有關(guān)。什么是生物信息學(xué)________？19、科學(xué)家采用定點誘變的方法構(gòu)建T4溶菌酶的新蛋白質(zhì)，發(fā)現(xiàn)其中一種新蛋白質(zhì)的第9和第164位氨基酸殘基被轉(zhuǎn)換為半胱氨酸殘基，并形成一個二硫鍵。這種新蛋白質(zhì)的熱穩(wěn)定性會有什么變化？這項技術(shù)的要點是什么？_________20、動物細胞培養(yǎng)的條件：_____、_____、_____、_____等。評卷人得分四、判斷題(共1題，共8分)21、目前動物細胞核移植技術(shù)中普遍使用的去核方法是顯微操作法。（選擇性必修3P54）()A.正確B.錯誤評卷人得分五、實驗題(共4題，共12分)22、番茄果實在成熟的過程中；多聚半乳糖醛酸酶（PG）合成顯著增加，以降解果膠使細胞壁破損，從而使果實變紅變軟，但不利于保鮮?？茖W(xué)家利用基因工程得到轉(zhuǎn)基因番茄，大大延長果實保質(zhì)期。操作流程如下，回答下列問題：

（1）利用RT—PCR技術(shù)即逆轉(zhuǎn)錄—多聚酶鏈式反應(yīng)制備PG基因，最好從番茄的_____細胞中提取mRNA，此技術(shù)所需要的酶主要有_____。

（2）據(jù)圖可知，轉(zhuǎn)基因番茄主要通過抑制PG基因的_____過程；使PG合成量減少，從而延長果實保質(zhì)期。

（3）圖中的農(nóng)桿菌。能夠在含_____的培養(yǎng)基中生存，而在含_____的培養(yǎng)基中不能生存的即為已轉(zhuǎn)化的所需農(nóng)桿菌。

（4）圖中將反向連接PC基因?qū)敕鸭毎姆椒ǚQ為_____。要檢測感染農(nóng)桿菌后的番茄細胞染色體DNA上是否插入了反向連接PC基因，_____（填“能”或“不能”）用標記的PG基因的單鏈作為探針進行檢測，理由是_____。

（5）在將轉(zhuǎn)化的番茄細胞通過植物組織培養(yǎng)技術(shù)形成番茄幼苗過程中，培養(yǎng)基_____（填“要”或“不要”）添加有機營養(yǎng)物質(zhì)，原因是_____。23、鼠傷寒沙門氏菌的野生型菌株（his+）可在基本培養(yǎng)基（含微量組氨酸）上生長形成菌落，而突變型的組氨酸營養(yǎng)缺陷型菌株（his-）不能合成組氨酸；無法在基本培養(yǎng)基上形成菌落。利用his菌株可檢測環(huán)境或食品中是否存在化學(xué)致癌劑（誘發(fā)his-菌株突變）?；卮鹣铝袉栴}：

(1).基本培養(yǎng)基的成分主要包括_____。制備基本固體培養(yǎng)基的操作：計算→稱量→溶化→滅菌→倒平板。倒平板時應(yīng)注意：_____。

(2).檢測是否存在化學(xué)致癌劑時，用_____法將his-菌株接種于基本培養(yǎng)基上，使其密集均勻分布在平板上，將浸泡過待測化合物的濾紙片貼于平板中央。若培養(yǎng)基滅菌合格，則可能影響該檢測結(jié)果的兩個重要因素是_____。若圖A為對照組，B為實驗組，則A組濾紙片的處理方法是_____。經(jīng)正確檢驗后，結(jié)果如B所示，則實驗結(jié)果和結(jié)論為_____。

(3).使用過的培養(yǎng)基在丟棄之前應(yīng)做的處理及目的是_____。24、研究者改造與腸道共生的大腸桿菌；口服該工程菌后激活機體特異性免疫，實現(xiàn)腫瘤的預(yù)防和治療。

(1)部分腸道細菌能夠分泌外膜囊泡（OMV）；如圖1．OMV能穿越腸道上皮屏障活化腸黏膜內(nèi)豐富的免疫細胞。細菌溶素A（ClyA）是外膜囊泡上含量較高的特異蛋白。

研究者利用含圖2所示元件的表達載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌制備工程菌，ClyA基因的作用是_____；Fc表達產(chǎn)物能夠與樹突狀細胞表面的特異性受體結(jié)合，提高樹突狀細胞_____OMV的能力。

(2)為研究上述工程菌在人為可控條件下引發(fā)特異性免疫反應(yīng)的效果，研究者用健康小鼠進行如下實驗：。組別第0、3、8天口服工程菌每次服用工程菌12小時后，飲用含阿拉伯糖的水結(jié)果檢測第1組空載體+第12天，每組隨機取5只小鼠等量的脾臟細胞與黑色素瘤細胞共培養(yǎng)，檢測殺傷率，結(jié)果如圖3．第2組ClyA-Fc+第3組ClyA-OVA+第4組第5組

注：“+”；“-”代表是否飲用；

口服工程菌12小時后其在腸道內(nèi)存在數(shù)量較多。

①第4、5組的操作是_____。圖3結(jié)果說明工程菌在人為可控條件下引發(fā)特異性免疫反應(yīng)，理由是_____。

②為進一步驗證上述結(jié)論，研究者進行如下實驗：先加入_____（填選項前字母）保溫后漂洗，再加入_____（填選項前字母）保溫后漂洗，檢測熒光細胞的數(shù)目，若第5組_____為最大值；則上述結(jié)論成立。

A．帶有紅色熒光標記的OVA抗原肽復(fù)合物。

B．帶有綠色熒光標記的細胞毒性T細胞特異性抗體。

C．第1-5組小鼠脾臟細胞。

③腫瘤患者術(shù)后極易復(fù)發(fā)，研究者重復(fù)上表實驗，并在第3次口服工程菌后第50天給小鼠注射黑色素瘤細胞。目的是_____。

(3)該工程菌的研發(fā)為不同腫瘤的精準治療和預(yù)防提供了可能。依據(jù)本研究，設(shè)計針對肺癌治療的工程菌表達載體元件：_____。25、三氯生是一種抑菌物質(zhì)，具有優(yōu)異的貯存穩(wěn)定性，可以替代抗生素用于基因工程中篩選含目的基因的受體細胞。已知fabV（從霍亂弧菌中發(fā)現(xiàn)的烯脂酰ACP還原酶）基因可以使大腸桿菌抵抗三氯生。

(1)通過PCR方法擴增fabV基因時，先要根據(jù)_____設(shè)計兩種特異性引物序列，以確保Taq酶從引物的3′端延伸DNA鏈，至少需要經(jīng)過_____次擴增才能獲得8個雙鏈等長的目的基因。

(2)基因工程的核心步驟是_____；某科研團隊將可以受溫度調(diào)控的基因插入上述選出的重組質(zhì)粒中，構(gòu)建了溫度調(diào)控表達質(zhì)粒（如圖2）。其中C基因在低溫下會抑制P2，R基因在高溫下會抑制P1，如果將lacZ基因和GFP（綠色熒蛋白）基因插入圖2質(zhì)粒中，使得最后表現(xiàn)為低溫下只表達GFP蛋白，而高溫下只表達lacZ蛋白。則lacZ基因插在_____之間，GFP基因的插入位置及注意點是_____。

(3)若以大腸桿菌為受體細胞，篩選上述插入了GFP基因的受體細胞的依據(jù)是：大腸桿菌能在含_____的培養(yǎng)基上生長，且_____。評卷人得分六、綜合題(共3題，共9分)26、研究人員將從種植煙草的土里分離得到的尼古?。–10H14N2）降解菌株SC接種到含尼古丁的培養(yǎng)基中；置于搖床恒溫（30℃）培養(yǎng)并定時取樣，測定并計算發(fā)酵液中的尼古丁濃度和菌體濃度，得到的結(jié)果如圖所示?；卮鹣铝袉栴}：

(1)發(fā)酵液中的尼古丁為菌株SC提供的營養(yǎng)物質(zhì)有_____，此外培養(yǎng)基中還需要加入_____等物質(zhì)。

(2)分離菌株SC時可用的接種方法是稀釋涂布平板法或___。當培養(yǎng)最少___h時；菌株SC的數(shù)量即可達到該種群的環(huán)境容納量。

(3)三位同學(xué)用稀釋涂布平板法測定某一時間段內(nèi)菌株SC的數(shù)量，在對應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的稀釋液中各取0.1mL涂平板；得到以下統(tǒng)計結(jié)果:

甲同學(xué)涂布了兩個平板；統(tǒng)計的菌落數(shù)是236和260，取平均值248；

乙同學(xué)涂布了三個平板；統(tǒng)計的菌落數(shù)是209；240和250，取平均值233；丙同學(xué)涂布了三個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)是21、212和256，取平均值163。

在三位同學(xué)的統(tǒng)計中，___同學(xué)的統(tǒng)計是正確的。據(jù)此計算，每克土壤樣品中含該細菌____個。稀釋涂布平板法統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌的實際數(shù)目低，原因是______。27、玉米具有一定抗鹽堿能力和抗低溫能力；這與其抗逆性基因M有關(guān)。為研究基因M轉(zhuǎn)入水稻后在逆境脅迫應(yīng)答中的重要作用，科學(xué)家做了如下實驗：首先將基因M和綠色熒光蛋白基因重組得到目的基因，該基因的兩端同時擁有HindⅢ和BamHⅠ切點，隨后將目的基因?qū)胨静y定了基因M在水稻中的表達水平。

(1)當用圖1所示質(zhì)粒與目的基因構(gòu)建重組質(zhì)粒時，最合適的限制酶是___________。

(2)根據(jù)圖2，宜選擇玉米的__________（填器官名稱）提取mRNA，然后在體外通過___________的方式獲得玉米抗逆性基因M，再用____________技術(shù)擴增，該技術(shù)的簡要步驟是__________。

(3)將重組質(zhì)粒導(dǎo)入水稻幼胚，加入含有___________的培養(yǎng)基篩選，提取培養(yǎng)后的水稻幼胚DNA，設(shè)計引物對目的基因進行電泳鑒定，通過圖3結(jié)果可知號水稻材料已成功插入目的基因。研究人員又用顯微鏡觀察轉(zhuǎn)基因水稻細胞，發(fā)出綠色熒光的相應(yīng)植株為目的植株，依據(jù)圖4結(jié)果，后續(xù)還需進行的實驗步驟為__________。28、閱讀以下資料；回答（1）-（5）題。

資料一：S蛋白是新冠病毒（SARS-CoV-2）感染機體的關(guān)鍵組分，也是研制新冠疫苗的關(guān)鍵起點。2021年2月25日，由中國工程院院士陳薇領(lǐng)銜研發(fā)的以腺病毒為載體的疫苗獲準上市注冊申請，為我國乃至世界預(yù)防新冠疫情又增加了一件利器。下圖為陳薇團隊以缺失E1等基因的人復(fù)制缺陷腺病毒（E1基因是腺病毒基因組復(fù)制的關(guān)鍵基因）為載體的新冠疫苗研制流程示意圖。

（1）HEK細胞是一種特殊的人胚胎腎源細胞，在該細胞中，質(zhì)粒I和質(zhì)粒II可在相關(guān)酶的作用下進行同源重組，形成含S蛋白基因的復(fù)制缺陷重組腺病毒。為保證上述重組腺病毒能夠大量復(fù)制，HEK細胞應(yīng)含有______基因及其表達產(chǎn)物。對獲得的重組腺病毒除用PCR檢測s蛋白基因外，還需用__________的方法檢測S蛋白。

（2）與復(fù)制型腺病毒相比，利用復(fù)制缺陷腺病毒為載體制備成的疫苗的優(yōu)點是___________。

資料二：疫苗從研制走向臨床使用；需經(jīng)動物實驗和臨床實驗等多重檢測，以保證其安全性和有效性。陳薇團隊對上述復(fù)制缺陷重組腺病毒疫苗的特異性免疫反應(yīng)及其保護效果進行評價。圖1；2表示不同的接種劑量和接種方式對小鼠免疫的影響，圖3表示接種不同劑量疫苗，14天后接種新冠病毒，72小時后檢測小鼠肺組織的病毒含量。

（3）IFNy是一種能增強效應(yīng)T細胞活力的淋巴因子，在免疫系統(tǒng)組成中，它與抗體均屬于_____。由圖1、圖2結(jié)果可知，該疫苗可誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生明顯的___________免疫。

（4）圖3實驗中對照組的處理為_________，結(jié)果顯示疫苗對感染小鼠有明顯的保護作用。為了達到最大的保護效果，該疫苗最適合的接種方式和劑量為_________________。

（5）有人認為，最近出現(xiàn)的變異新冠病毒有可能使該疫苗失去保護作用。你是否贊同他的觀點？請說明理由。__________________________________參考答案一、選擇題(共7題，共14分)1、A【分析】【分析】

題圖分析：圖示為抗凝血酶乳腺生物反應(yīng)器的制備過程；其中①為受體細胞，應(yīng)該是受精卵；②表示早期胚胎（性別為雌性）。

【詳解】

A；培育轉(zhuǎn)基因動物時應(yīng)該以受精卵為受體細胞；因此①表示受精卵，A正確；

B；由于只有母牛能產(chǎn)奶；因此②表示性別為雌性的胚胎，B錯誤；

C；常用顯微注射法將基因?qū)胧荏w細胞；C錯誤；

D；該轉(zhuǎn)基因牛中的抗凝血酶基因只在于乳腺細胞中表達；但該基因應(yīng)該存在于轉(zhuǎn)基因牛的所有體細胞中，D錯誤。

故選A。

【點睛】2、C【分析】【分析】

動物細胞培養(yǎng)的培養(yǎng)條件：（1）無菌無毒環(huán)境；（2）營養(yǎng)：所需營養(yǎng)物質(zhì)與體內(nèi)基本相同；例如需要有糖；氨基酸、促生長因子、無機鹽、微量元素等，還需加入血清、血漿等天然成分；（3）溫度和pH值：哺乳動物多以36.5±0.5℃為宜，多數(shù)細胞生存的適宜pH為7.2～7.4；（4）氣體環(huán)境：通常采用培養(yǎng)皿或松蓋培養(yǎng)瓶，將其置于含95%空氣加5%CO2的混合氣體的培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

【詳解】

A；動物細胞培養(yǎng)液的成分通常含有葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素等此外還含有動物血清、血漿等；A正確；

B；在進行動物細胞培養(yǎng)過程中；經(jīng)常表現(xiàn)為接觸抑制的特征，即當貼壁細胞分裂生長到表面相互抑制時，細胞就會停止分裂增殖，B正確；

C、動物細胞培養(yǎng)時應(yīng)將其置于含95%空氣加5%CO2的混合氣體的培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)；C錯誤；

D；檢測有毒物質(zhì)；判斷某種物質(zhì)的毒性，屬于動物細胞工程的應(yīng)用，D正確。

故選C。3、B【分析】【分析】

植物的體細胞雜交是將不同種的植物體細胞通過細胞融合技術(shù)形成雜種細胞；進而利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)將雜種細胞培育成多倍體的雜種植株。植物體細胞雜交依據(jù)的原理是細胞膜的流動性和植物細胞的全能性。

【詳解】

A；植物細胞工程應(yīng)用之一是利用胚狀體包囊人工胚乳和人工種皮制成人工種子；實現(xiàn)大規(guī)模生產(chǎn)，從而降低成本，A正確；

B；莖尖等分裂旺盛部位病毒極少或無病毒感染；所以利用莖尖分生組織培養(yǎng)出無病毒且保持優(yōu)良性狀的幼苗，脫毒苗不等于抗毒苗，通過基因工程將抗病毒基因轉(zhuǎn)移至受體細胞從而培育出抗病毒的轉(zhuǎn)基因植物，B錯誤；

C；通過植物體細胞雜交技術(shù)可以實現(xiàn)兩個植物物種間的體細胞雜交；得到同時具有兩種遺傳物質(zhì)的植物，可以實現(xiàn)種間的雜交，克服了遠緣雜交不親和的障礙，C正確；

D；愈傷組織具有分裂旺盛的優(yōu)點；適于誘變育種的取材，能提高突變頻率，D正確。

故選B。4、A【分析】【分析】

分析柱形圖：用抗原（A）分別免疫3只同種小白兔（X；Y和Z）；每只小白兔免疫5次，每次免疫一周后測定各小白兔血清抗體的效價，由圖可知，隨著免疫次數(shù)的增加，血清抗體效價逐漸升高。在第四次沒有過程中出現(xiàn)了Y血清抗體均達到16000以上；在第五次中，Y的效價最大，最適合用于制備B淋巴細胞；B細胞與骨髓瘤細胞形成的雜交細胞有三種：B淋巴細胞自身融合的細胞，骨髓瘤細胞自身融合的細胞和雜交瘤細胞。

【詳解】

A；將抗原A注入小白兔體內(nèi)的目的是為了刺激小白兔發(fā)生體液免疫；從而獲得已免疫的B淋巴細胞，A錯誤；

B；在第五次中；Y的效價最大，所以最適合用于制備B淋巴細胞的是第五次免疫后的Y小白兔，B正確；

C；骨髓瘤細胞與B淋巴細胞的融合常使用滅活的病毒進行促融；也可用物理或化學(xué)的方法進行促融，C正確；

D；雜交細胞需經(jīng)多次篩選才可獲得只分泌抗A抗體的雜交瘤細胞；第一次篩選可獲得雜交瘤細胞，第二次篩選可獲得只分泌抗A抗體的雜交瘤細胞，D正確。

故選A。

【點睛】5、A【分析】【分析】

分析圖1：隨著pH的升高；纖維素酶活性逐漸增高，pH=9為其最適pH，超過9，其活性下降；分析圖2：隨著溫度的升高，纖維素酶活性逐漸增高，但圖中不能看出其最適溫度。

【詳解】

A；要篩酵母菌纖維素酶高產(chǎn)菌株應(yīng)在纖維素為唯一碳源的培養(yǎng)基培養(yǎng)；A正確；

B；探究該酶的最適溫度時；pH為無關(guān)變量，應(yīng)控制在最適pH，即將發(fā)酵液的pH控制在9左右，B錯誤；

C；由于圖中隨著溫度的升高；纖維素酶活性逐漸增高，還沒有到達頂點，故35℃不一定是其最適溫度，C錯誤；

D；酵母菌屬于兼性厭氧型生物；既能進行有氧呼吸，也能進行無氧呼吸，故利用該高產(chǎn)菌株降解纖維素時不需嚴格保持厭氧環(huán)境，D錯誤。

故選A。6、B【分析】【分析】

用體細胞進行動物克??；目前只能通過體細胞核移植技術(shù)實現(xiàn)，該技術(shù)需要將待克隆動物體細胞的細胞核移植到去核的卵母細胞中，形成重構(gòu)胚，再經(jīng)過動物細胞培養(yǎng)和胚胎移植，最終培育出新個體。

【詳解】

A；將野驢的基因?qū)爰殷H的受精卵中；只能培育出轉(zhuǎn)基因驢，不能讓野驢“復(fù)生”，A錯誤；

B；將野驢的體細胞核移植到家驢的去核卵細胞中；可以克隆形成野驢，B正確；

C；由于動物細胞的全能性受到限制；目前動物細胞融合技術(shù)還不能產(chǎn)生生物體，C錯誤；

D；由于動物細胞的全能性受到限制；目前動物細胞還不能培養(yǎng)成動物個體，D錯誤。

故選B。7、C【分析】【分析】

1；基因工程又稱基因拼接技術(shù)和DNA重組技術(shù)；是以分子遺傳學(xué)為理論基礎(chǔ)，以分子生物學(xué)和微生物學(xué)的現(xiàn)代方法為手段，將不同來源的基因按預(yù)先設(shè)計的藍圖，在體外構(gòu)建雜種DNA分子，然后導(dǎo)入活細胞，以改變生物原有的遺傳特性、獲得新品種、生產(chǎn)新產(chǎn)品。2、細胞分化是指同一起源的細胞逐漸產(chǎn)生具有不同形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能特征細胞群的過程。細胞分化的實質(zhì)是基因組在時間和空間上的選擇性表達，通過開啟或關(guān)閉不同基因的表達，產(chǎn)生最終的特征蛋白。

【詳解】

A；多能干細胞（iPSC）向心肌細胞分化是基因選擇性表達的結(jié)果；遺傳物質(zhì)不變，基因進行選擇性表達，從而使細胞的結(jié)構(gòu)、功能、形態(tài)發(fā)生變化，A正確；

B、結(jié)合圖示iPSC和Hybridcells的分化率可知；誘導(dǎo)多能干細胞和雜交細胞都具有分化能力，且iPSC的分化率較高，B正確；

C；誘導(dǎo)20d后iPSC和雜交細胞都具有較高的分化率；還可以再分化，C錯誤；

D；iPSC是將相關(guān)基因?qū)塍w細胞而獲得；雜交細胞是iPSC與心肌細胞的融合細胞，引入機體都具有一定的風(fēng)險，臨床使用前需評估兩種細胞致癌的風(fēng)險，D正確。

故選C。二、多選題(共5題，共10分)8、B:C【分析】【分析】

1；從土壤中篩選目的微生物的流程一般為：土壤取樣→樣品的稀釋→將稀釋液涂布到以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基上→挑選能生長的菌落→鑒定。當樣品的稀釋庋足夠高時；培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌。通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)來推測樣品中大約含有的活菌數(shù)。

2、統(tǒng)計菌落數(shù)目的方法：（1）顯微鏡直接計數(shù)法：①原理：利用特定細菌計數(shù)板或血細胞計數(shù)板，在顯微鏡下計算一定容積的樣品中微生物數(shù)量；②方法：用計數(shù)板計數(shù)；③缺點：不能區(qū)分死菌與活菌。（2）間接計數(shù)法（活菌計數(shù)法）：①原理：當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌．通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。②操作：a、設(shè)置重復(fù)組，增強實驗的說服力與準確性；b；為了保證結(jié)果準確；一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進行計數(shù)。③計算公式：每克樣品中的菌株數(shù)=（c÷V）×M，其中c代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積（mL），M代表稀釋倍數(shù)。

【詳解】

AB；樣品的稀釋度直接影響平板上生長的菌落數(shù)目；土壤中各類微生物數(shù)量不同，所以為獲得不同類型的微生物，要按不同的稀釋倍數(shù)進行分離，A正確；B錯誤；

C；在同一稀釋度下只要得到兩個或兩個以上的菌落數(shù)目在30～300的平板；就說明稀釋操作比較成功，并能夠進行菌落的計數(shù)，C錯誤；

D；驗證選擇培養(yǎng)基是否具有選擇作用；需設(shè)立牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基作為對照，若后者的菌落數(shù)明顯大于前者，說明前者具有篩選作用，D正確。

故選BC。

【點睛】9、C:D【分析】【分析】

植物的體細胞雜交是將不同植物的細胞通過細胞融合技術(shù)形成雜種細胞；進而利用植物的組織培養(yǎng)將雜種細胞培育成多倍體的雜種植株。在進行植物體細胞雜交時需要使用纖維素酶和果膠酶去掉植物細胞的細胞壁，使用化學(xué)方法（聚乙二醇）或物理方法誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合，不能用滅活的病毒誘導(dǎo)。可根據(jù)植物細胞的質(zhì)壁分離和復(fù)原鑒定雜種細胞是否再生細胞壁，從而確定原生質(zhì)體融合是否完成。植物體細胞雜交的意義：在克服遠源雜交不親和的障礙；培育作物新品種方面所取得的重大突破。

【詳解】

A；驅(qū)蚊草是把天竺葵的原生質(zhì)體和香茅草的原生質(zhì)體進行誘導(dǎo)融合培育而成的；采用了植物體細胞雜交技術(shù)，屬于細胞工程育種，其優(yōu)點是能克服遠緣雜交不親和的障礙，A正確；

B；要獲得天竺葵的原生質(zhì)體和香茅草的原生質(zhì)體；需要采用酶解法（纖維素酶、果膠酶），誘導(dǎo)天竺葵的原生質(zhì)體和香茅草的原生質(zhì)體的融合可采用化學(xué)法（PEG等試劑）或物理法（電刺激等），B正確；

C；驅(qū)蚊草培育過程不同于植物組織培養(yǎng)；但需要采用植物組織培養(yǎng)技術(shù)，因此有細胞脫分化和再分化的過程，C錯誤；

D；驅(qū)蚊草培育利用了植物體細胞雜交技術(shù)；育種原理是染色體數(shù)目變異，D錯誤。

故選CD。10、B:D【分析】【分析】

分析題圖：構(gòu)建表達載體時；不能選用限制酶BamHⅠ，否則會導(dǎo)致兩種抗性基因都被破壞，因此應(yīng)該選擇Bc1I和HindⅢ這兩種限制酶，根據(jù)引物的延伸方向，所用的引物為圖乙中引物a和引物c。

【詳解】

A；PCR技術(shù)要求兩種引物分別和目的基因的兩條單鏈結(jié)合；根據(jù)引物的延伸方向，所用的引物為圖乙中引物a和引物c，A正確；

B；根據(jù)圖甲可知；BamHⅠ會導(dǎo)致兩種抗性基因都被破壞，同時為防止目的基因自身環(huán)化，因此只能選BclI和HindⅢ兩種限制酶切割，B錯誤；

C；圖乙中一個DNA分子在PCR儀中經(jīng)過四輪復(fù)制可得到16個DNA片段；其中所需目的基因的分子數(shù)為8個，C正確；

D；由于選擇BclI和HindⅢ這兩種限制酶；破壞了氨芐青霉素抗性基因，但沒有破壞四環(huán)素抗性基因，因此應(yīng)該先用含四環(huán)素的培養(yǎng)基篩選出含有基因表達載體和普通質(zhì)粒的大腸桿菌，再用含氨芐青霉素的培養(yǎng)基篩選含重組質(zhì)粒的大腸桿菌，培養(yǎng)基加氨芐青霉素含普通質(zhì)粒的大腸桿菌能生存，而含重組質(zhì)粒的不能生存，從而篩選出成功導(dǎo)入表達載體的受體細胞，D錯誤。

故選BD。11、B:C:D【分析】【分析】

胚胎工程技術(shù)包含的內(nèi)容很豐富；目前在醫(yī)學(xué)和生產(chǎn)上應(yīng)用較多的是體外受精；胚胎移植和胚胎分割等，借助這些技術(shù)，可以進一步挖掘動物的繁殖潛力。哺乳動物的體外受精技術(shù)主要包括卵母細胞的采集、精子的獲取和受精等步驟。采集到的卵母細胞和精子，要分別在體外進行成熟培養(yǎng)和獲能處理，然后才能用于體外受精。

【詳解】

A；人工授精后形成的早期胚胎在一定時間內(nèi)并未與母體子宮建立組織上的聯(lián)系；A錯誤；

B；如果是人工授精的方式進行輔助生殖技術(shù)；就不需要胚胎移植，B正確；

C；克隆技術(shù)屬于無性繁殖；試管動物的培育涉及精卵結(jié)合，屬于有性生殖，C正確；

D；受體的生殖周期將影響人工授精和試管動物技術(shù)的成功率；故人工授精和試管動物技術(shù)都要注意受體的生殖周期，D正確。

故選BCD。12、C:D【分析】【分析】

1；根據(jù)《上海市生活垃圾管理條例》第四條本市生活垃圾按照以下標準分類規(guī)定：濕垃圾；即易腐垃圾，是指食材廢料、剩菜剩飯、過期食品、瓜皮果核、花卉綠植、中藥藥渣等易腐的生物質(zhì)生活廢棄物；干垃圾，即其它垃圾，是指除可回收物、有害垃圾、濕垃圾以外的其它生活廢棄物。

2；由題圖信息分析可知；該實驗的目的是為了篩選獲得高效降解淀粉的菌種，在微生物學(xué)中，將允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基，屬于選擇培養(yǎng)基，接種方法是稀釋涂布平板法。

【詳解】

A；剩余飯菜、果皮果殼屬于濕垃圾；玻璃碎片屬于干垃圾，A錯誤；

B；菌落①②透明圈大小不同是兩個菌群對淀粉的分解能力不同；透明圈大的分解能力強，B錯誤；

C；抗生素或電池等會抑制微生物生長；不利于微生物的分解，C正確；

D；圖中出現(xiàn)透明圈；因此將菌液接種到培養(yǎng)基的方法是釋涂布平板法，D正確。

故選CD。三、填空題(共8題，共16分)13、略

【分析】【詳解】

生物武器種類：包括致病菌、病毒、生化毒劑，以及經(jīng)過基因重組的致病菌等。把這些病原體直接或者通過食物、生活必需品等散布到敵方，可以對軍隊和平民造成大規(guī)模殺傷后果?！窘馕觥竣?直接②.食物③.生活必需品14、略

【分析】【分析】

1；腐乳制作過程中多種微生物參與了發(fā)酵；其中起主要作用的是毛霉，毛霉等微生物產(chǎn)生蛋白酶能將豆腐中的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)化成小分子肽和氨基酸，脂肪酶將脂肪轉(zhuǎn)化成甘油和脂肪酸。

2；果膠酶能夠分解果膠；瓦解植物的細胞壁及胞間層，使榨取果汁變得容易，而果膠分解成可溶性的半乳糖醛酸，也使得渾濁的果汁變得澄清。果膠酶并不特指某一種酶，而是分解果膠的一類酶的總稱，包括多聚半乳糖醛酸酶、果膠分解酶和果膠酯酶。

【詳解】

（1）在腐乳制作的過程中；利用毛霉等微生物產(chǎn)生的蛋白酶將豆腐中的蛋白質(zhì)分解成小分子肽和氨基酸，脂肪酶將脂肪水解為甘油和脂肪酸；加酶洗衣粉里添加的酶制劑中，應(yīng)用最廣泛；效果最明顯的是堿性蛋白酶和堿性脂肪酶。

（2）果膠酶并不特指某一種酶；而是分解果膠的一類酶的總稱，包括多聚半乳糖醛酸酶；果膠分解酶和果膠酯酶；在果汁生產(chǎn)過程中如果要固定果膠酶，最好采用化學(xué)結(jié)合和物理吸附法固定化，這是因為酶分子小，體積小的酶容易從包埋材料中漏出。

（3）酶提取和分離原理：需要用凝膠色譜法去除相對分子質(zhì)量大的雜質(zhì)蛋白；以純化酶；利用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法對酶進行純度鑒定。

【點睛】

本題考查腐乳制作和酶提取等知識，對于此類試題，需要考生注意的細節(jié)較多，如實驗的原理、實驗步驟、實驗采用的試劑及試劑的作用等，需要考生在平時的學(xué)習(xí)過程中注意積累。【解析】小分子肽和氨基酸脂肪酶堿性蛋白酶和堿性脂肪酶半乳糖醛酸酶、果膠分解酶、果膠酯酶化學(xué)結(jié)合法和物理吸附凝膠色譜（分配色譜）聚丙烯酰胺凝膠電泳15、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】特定磷酸二酯鍵特異性16、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】30～3517、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】基因文庫人工合成PCR技術(shù)18、略

【分析】【詳解】

生物信息學(xué)是研究生物信息的采集、處理、存儲、傳播,分析和解釋等各方面的學(xué)科，也是隨著生命科學(xué)和計算機科學(xué)的迅猛發(fā)展，生命科學(xué)和計算機科學(xué)相結(jié)合形成的一門新學(xué)科，生物信息學(xué)主要是核酸和蛋白質(zhì)序列數(shù)據(jù)的計算機處理和分析。【解析】生物信息學(xué)是研究生物信息的采集、處理、存儲、傳播,分析和解釋等各方面的學(xué)科，也是隨著生命科學(xué)和計算機科學(xué)的迅猛發(fā)展，生命科學(xué)和計算機科學(xué)相結(jié)合形成的一門新學(xué)科19、略

【分析】【詳解】

蛋白質(zhì)形成二硫鍵，使蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)更加穩(wěn)定，因此T4溶菌酶的熱穩(wěn)定性會提高。這項技術(shù)屬于蛋白質(zhì)工程技術(shù)，其步驟為從預(yù)期的蛋白質(zhì)功能出發(fā)→設(shè)計預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)→推測應(yīng)有的氨基酸序列→找到并改變相對應(yīng)的脫氧核苷酸序列（基因）或合成新的基因→獲得所需的蛋白質(zhì)?！窘馕觥繒岣逿4溶菌酶的耐熱性。這項技術(shù)屬于蛋白質(zhì)工程技術(shù)，該技術(shù)的要點是從預(yù)期的蛋白質(zhì)功能出發(fā)→設(shè)計預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)→推測應(yīng)有的氨基酸序列→找到并改變相對應(yīng)的脫氧核苷酸序列（基因）或合成新的基因→獲得所需的蛋白質(zhì)。20、略

【分析】略【解析】營養(yǎng)無菌、無毒的環(huán)境適宜的溫度、pH和滲透壓氣體環(huán)境四、判斷題(共1題，共8分)21、A【分析】【詳解】

目前動物細胞核移植技術(shù)中普遍使用的去核方法是顯微操作法。也有人采用梯度離心、紫外線短時間照射和化學(xué)物質(zhì)處理等方法。這些方法是在沒有穿透卵母細胞透明帶的情況下去核或使其中的DNA變性，故正確。五、實驗題(共4題，共12分)22、略

【分析】【分析】

基因工程技術(shù)的基本步驟：

（1）目的基因的獲?。悍椒ㄓ袕幕蛭膸熘蝎@取；利用PCR技術(shù)擴增和人工合成。

（2）基因表達載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟；基因表達載體包括目的基因；啟動子、終止子和標記基因等。

（3）將目的基因?qū)胧荏w細胞：根據(jù)受體細胞不同；導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)胫参锛毎姆椒ㄓ修r(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法；基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)雱游锛毎钣行У姆椒ㄊ秋@微注射法；將目的基因?qū)胛⑸锛毎姆椒ㄊ歉惺軕B(tài)細胞法。

（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因??DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA??分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)。個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定；抗病鑒定、活性鑒定等。

【詳解】

（1）利用RT—PCR技術(shù)即逆轉(zhuǎn)錄—多聚酶鏈式反應(yīng)制備PG基因；由于多聚半乳糖醛酸酶（PG）可降解果膠使細胞壁破損，從而使果實變紅變軟，說明PG基因在果肉中表達量較高，所以最好從番茄的果肉細胞中提取mRNA，此技術(shù)所需要的酶主要有逆轉(zhuǎn)錄酶和Taq酶（或熱穩(wěn)定DNA聚合酶）；

（2）據(jù)圖可知；轉(zhuǎn)基因番茄PG基因與反向連接PG基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物mRNA1和mRNA2相結(jié)合形成雙鏈，從而抑制PG基因的翻譯過程，使PG合成量減少，從而延長果實保質(zhì)期；

（3）分析表達載體的構(gòu)建過程圖可知；目的基因插入到圖中農(nóng)桿菌的四環(huán)素抗性基因上，導(dǎo)致農(nóng)桿菌失去了四環(huán)素的抗性，所以圖中農(nóng)桿菌能夠在含卡那霉素的培養(yǎng)基中生存，而在含四環(huán)素的培養(yǎng)基中不能生存的即為已轉(zhuǎn)化的所需農(nóng)桿菌；

（4）圖中是利用農(nóng)桿菌將反向連接PC基因?qū)敕鸭毎模淮朔椒ǚQ為農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法。不能用標記的PG基因的單鏈作為探針進行檢測番茄細胞染色體DNA上是否插入了反向連接PC基因，理由是番茄細胞內(nèi)原有的天然PG基因和插入的反向連接PG基因，均會與該探針形成雜交帶；

（5）將轉(zhuǎn)化的番茄細胞通過植物組織培養(yǎng)技術(shù)形成番茄幼苗過程中；需要在培養(yǎng)基中添加有機營養(yǎng)物質(zhì)，原因是該培養(yǎng)過程中植物細胞不能進行光合作用（或光合作用很弱）。

【點睛】

本題結(jié)合圖解，考查基因工程和植物組織培養(yǎng)的相關(guān)知識，要求考生識記基因工程的原理及操作步驟；識記植物組織培養(yǎng)的過程及應(yīng)用，能結(jié)合圖中信息準確答題。【解析】果肉逆轉(zhuǎn)錄酶和Taq酶（或熱穩(wěn)定DNA聚合酶）翻譯卡那霉素四環(huán)素農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法不能番茄細胞內(nèi)原有的天然PG基因和插入的反向連接PG基因，均會與該探針形成雜交帶要該培養(yǎng)過程中植物細胞不能進行光合作用（或光合作用很弱）23、略

【分析】【分析】

培養(yǎng)基的制作流程一般為：計算→稱量→溶化（包括瓊脂）→調(diào)節(jié)pH→分裝→滅菌→倒平板→（冷卻后）倒置平板。微生物接種是微生物學(xué)研究中最常用的基本操作；主要用于微生物的分離純化。具體來說，就是在無菌條件下，用接種環(huán)或接種針等專用工具，從一個培養(yǎng)皿（上面可能存在各種雜菌落）挑取所需的微生物，轉(zhuǎn)接到另一個培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)的方法?！拘?】

培養(yǎng)基的組成成分包括碳源；氮源、水、無機鹽、生長因子等。倒平板時；應(yīng)待培養(yǎng)基冷卻到50℃左右倒平板，平板冷凝后要將平板倒置，倒平板過程中應(yīng)在酒精燈火焰附近進行，以防止雜菌污染?！拘?】

題干中表明菌體密集均勻分布在平板上；所以是稀釋涂布平板法接種。培養(yǎng)基滅菌合格，影響因素應(yīng)為除培養(yǎng)基滅菌以外可能的影響因素，因此，可能操作過程中是否無菌操作，以及使用的濾紙條是否滅菌合格等。A為對照組，應(yīng)除自變量以外，其他條件都相同，因此，處理方法為浸泡在無菌水中處理后貼于平板中央；實驗中能觀察到出現(xiàn)野生型菌株菌落，說明環(huán)境中存在化學(xué)致癌劑導(dǎo)致突變型菌株突變成野生型菌株?！拘?】

使用過的培養(yǎng)基應(yīng)滅菌后再丟棄；以防止培養(yǎng)基中的有害物質(zhì)污染環(huán)境或感染實驗操作者。

【點睛】

本題考查培養(yǎng)基的成分、制備過程以及微生物的接種方法等相關(guān)知識，意在考查考生對所學(xué)知識的識記和理解能力?！窘馕觥俊拘☆}1】①.碳源；氮源、水和無機鹽②.待培養(yǎng)基冷卻至50℃左右時；在酒精燈火焰旁附近倒平板。

【小題2】①.稀釋涂布平板②.濾紙片是否滅菌徹底和待測化合物是否含有雜菌③.（濾紙片）用無菌水浸泡④.his-菌株在培養(yǎng)基上突變?yōu)閔is+菌株；說明待測化合物中存在致癌劑（或待測化合物中存在化學(xué)誘變劑，這些化學(xué)物質(zhì)具有致癌性，敘述合理即可）

【小題3】滅菌，避免對環(huán)境造成污染24、略

【分析】【分析】

樹突狀細胞為抗原呈遞細胞；可識別；攝取和傳遞抗原信息。

【詳解】

（1）細菌溶素A（ClyA）是外膜囊泡上含量較高的特異蛋白；而OMV能穿越腸道上皮屏障活化腸黏膜內(nèi)豐富的免疫細胞。所以，ClyA基因的作用為表達出細菌溶素A（ClyA），使OVA和Fc定位至OMV表面，進而融合基因可以被免疫細胞識別。Fc表達產(chǎn)物能夠與樹突狀細胞表面的特異性受體結(jié)合，進而提高樹突狀細胞識別；攝取和傳遞抗原信息的能力。

（2）①根據(jù)表格和柱狀圖可知；服用的工程菌采用“加法原理”，逐漸增加部件，且第4組和第5組工程菌都是完整的，即第4組:ClyA-OVA-Fc第5組:ClyA-OVA-Fc，但是第4組飲用含阿拉伯糖的水，進而激活融合基因的表達；第5組不飲用含阿拉伯糖的水，不能激活融合基因的表達。所以，第3；5組含有OVA，在人為控制口服阿拉伯糖后產(chǎn)生OMV，激活特異性免疫，對腫瘤細胞的殺傷率較高；1、2組缺乏OVA，第4組無阿拉伯糖誘導(dǎo)，殺傷率均低。

②小鼠脾臟細胞具有免疫細胞；可在抗原刺激下引起特異性免疫。帶有紅色熒光標記的OVA抗原肽復(fù)合物可引起小鼠脾臟細胞發(fā)生特異性免疫，故先加入第1-5組小鼠脾臟細胞和帶有紅色熒光標記的OVA抗原肽復(fù)合物進行保溫，判斷特異性免疫的強度；

故選AC。

再加入帶有綠色熒光標記的細胞毒性T細胞特異性抗體；目的是檢測OVA抗原肽復(fù)合物是否能夠產(chǎn)生特異性細胞毒性T細胞。

故選B。

若第5組同時被紅色和綠色熒光標記的細胞數(shù)目占比越多；說明工程菌在人為可控條件下引發(fā)特異性免疫反應(yīng)，結(jié)論成立。

③腫瘤患者術(shù)后極易復(fù)發(fā)；說明特異性免疫功能減弱。所以，可多次注射黑色素瘤細胞，進而研究該口服工程菌是否能夠誘發(fā)長期免疫記憶，從而抑制腫瘤復(fù)發(fā)。

（3）本實驗中融合基因里面有OVA（黑色素瘤細胞特異性抗原），所以只需將OVA替換為肺癌細胞特異性抗原即可。即將元件中的OVA替換為肺癌細胞特異性表達的抗原基因?！窘馕觥?1)表達ClyA；使OVA和Fc定位至OMV表面識別；攝取。

(2)第4組:ClyA-OVA-Fc和-第5組:ClyA-OVA-Fc和+第3；5組含有OVA；在人為控制口服阿拉伯糖后產(chǎn)生OMV，激活特異性免疫，對腫瘤細胞的殺傷率較高;1、2組缺乏OVA，第4組無阿拉伯糖誘導(dǎo)，殺傷率均低ACB同時被紅色和綠色熒光標記的細胞數(shù)目占比研究該口服工程菌是否能夠誘發(fā)長期免疫記憶，從而抑制腫瘤復(fù)發(fā)。

(3)將元件中的OVA替換為肺癌細胞特異性表達的抗原基因25、略

【分析】【分析】

1；基因工程技術(shù)的基本步驟：

（1）目的基因的獲?。悍椒ㄓ袕幕蛭膸熘蝎@??；利用PCR技術(shù)擴增和人工合成。

（2）基因表達載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟；基因表達載體包括目的基因；啟動子、終止子和標記基因等；

（3）將目的基因?qū)胧荏w細胞：根據(jù)受體細胞不同；導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)胫参锛毎姆椒ㄓ修r(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法；基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)雱游锛毎钣行У姆椒ㄊ秋@微注射法；將目的基因?qū)胛⑸锛毎姆椒ㄊ歉惺軕B(tài)細胞法。

（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：

①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因DNA分子雜交技術(shù)；

②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA-分子雜交技術(shù)；

③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)抗原一抗體雜交技術(shù)。

④個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定；抗病鑒定、活性鑒定等。

2；圖1中①-④依次為目的基因的獲取、表達載體的構(gòu)建、目的基因?qū)胧荏w細胞、目的基因的檢測。

（1）

PCR是一項在生物體外復(fù)制特定DNA的核酸合成技術(shù)，需要Taq酶，但Taq酶不能從頭開始合成DNA，前提條件是要有一段已知目的基因的核苷酸序以便合成一對引物，因此需要根據(jù)目的基因fabV基因的兩端按堿基互補配對原則設(shè)計引物。至少需要經(jīng)過4次擴增才能獲的8個雙鏈等長的目的基因。

（2）

基因工程的核心步驟是基因表達載體的構(gòu)建，題干信息顯示C基因在低溫下會抑制P2，R基因在高溫下會抑制P1，說明P2啟動子在高溫下可以啟動轉(zhuǎn)錄；P1啟動子在低溫下可以啟動轉(zhuǎn)錄。題目顯示高溫下只表達lacz蛋白，則lacZ基因要插在“高溫下不被抑制”的啟動子的后面，即P2→T2之間；GFP基因要低溫下表達，則插入位置要在P1→T1之間；且不破壞C基因和R基因。

（3）

因為fabV（從霍亂弧菌中發(fā)現(xiàn)的烯脂酰ACP還原酶）基因可以使大腸桿菌抵抗三氯生；大腸桿菌能在含三氯生的培養(yǎng)基上生長，說明大腸桿菌插入重組質(zhì)粒，且依據(jù)是低溫下有綠色熒光高溫下無綠色熒光。

【點睛】

本題考查基因工程相關(guān)知識點，要求學(xué)生熟練掌握基因工程的原理、步驟及相關(guān)的目的，形成知識網(wǎng)絡(luò)，結(jié)合題目要求解決相關(guān)問題?！窘馕觥?1)目的基因（fabV基因）兩端堿基序列4

(2)基因表達載體的構(gòu)建P2→T2插在P1→T1之間；且不破壞C基因和R基因。

(3)三氯生低溫下有綠色熒光，高溫下無綠色熒光六、綜合題(共3題，共9分)26、略

【分析】【分析】

1；微生物常見的接種的方法：

(1)平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)血制成平板；接種劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)。在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個菌落。稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)血表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個菌落。

2；由曲線圖分析可知；隨著培養(yǎng)時間的延長，尼古丁含量減少，SC菌體數(shù)量增加。

【詳解】

（1）根據(jù)尼古?。–10H14N2）的化學(xué)式可知：發(fā)酵液中的尼古丁為菌株SC提供的營養(yǎng)物質(zhì)有碳源和氨源；此外培養(yǎng)基中還需要加入水和無機鹽，有時還需要加入一些特殊的物質(zhì)，如維生素等。

（2）分離微生物常用的方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法；故分離SC菌體時可用稀釋涂布平板法或平板劃線法，由題圖分析：當當培養(yǎng)最少36h時，菌株SC的數(shù)量趨于穩(wěn)定，達到該種群的環(huán)境容納量。

（3）為了保證結(jié)果準確，一般選擇菌落數(shù)在30～300、適于計數(shù)的平板計數(shù)，并且在同一稀釋度下，應(yīng)至少對3個平板進行重復(fù)計數(shù)，并求平均值。增強實驗的說服力與準確性，在三位同學(xué)的統(tǒng)計中，甲同學(xué)只涂布了兩個平板，偶然性太大，丙同學(xué)應(yīng)選擇菌落數(shù)在30～300、適于計數(shù)的平板計數(shù)，故只有乙同學(xué)的統(tǒng)計是正確的。據(jù)此計算，每克土壤樣品中含該細菌=（233÷0.1）×106=2.33×109個，稀釋涂布平板法統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌的實際數(shù)目低，原因是這是因為當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落。因此，統(tǒng)計結(jié)果一般用菌落數(shù)而不是用活菌數(shù)來