CN2015107528183A 復(fù)方牛黃貼及其制備方法配方技術(shù)專利

(19)中華人民共和國(guó)國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局(71)申請(qǐng)人華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院地址430030湖北省武漢市解放大道1095號(hào)同濟(jì)醫(yī)院(72)發(fā)明人劉東徐艷嬌張程亮李為任秀華賀雯茜(74)專利代理機(jī)構(gòu)武漢開元知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司42104代理人胡鎮(zhèn)西馮超A61K47/32(2006.01)A61K31/4164(2006.01)A61KA61KA61KA61K(54)發(fā)明名稱復(fù)方牛黃貼及其制備方法(57)摘要本發(fā)明公開了一種復(fù)方牛黃貼，所述復(fù)方牛黃貼的有效成分由1份的體外培育牛黃、1～4份的奧硝唑、2～30份成膜材料和8～20份的甘油組成。本發(fā)明的復(fù)方牛黃貼使用中藥牛黃與奧硝唑、殼聚糖、羥丙甲纖維素、聚乙烯醇共同使用制作成貼膜，解決了口腔用藥的難題；經(jīng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明，復(fù)方牛黃貼中體外培育牛黃和奧硝唑治療口腔潰瘍具有良好的治療效果。將其制備成復(fù)方牛黃貼，具有使用方便，延長(zhǎng)藥物在局部潰瘍面的免受細(xì)菌感染等優(yōu)點(diǎn)。其膜成分材料遇到唾液迅21.一種復(fù)方牛黃貼，其特征在于：所述復(fù)方牛黃貼的有效成分由1份的體外培育牛黃、1～4份的奧硝唑、2～30份成膜材料和8～20份的甘油組成。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的復(fù)方牛黃貼，其特征在于：所述成膜材料由1～12份的殼聚糖、1～14份的羥丙甲纖維素和1～8份的聚乙烯醇組成。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的復(fù)方牛黃貼，其特征在于：所述復(fù)方牛黃貼由1份的體外培育牛黃、1～3份的奧硝唑、1～5份的殼聚糖、1～5份的羥丙甲纖維素、2～6份的聚乙烯醇和12～18份的甘油等輔料組成。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的復(fù)方牛黃貼，其特征在于：所述復(fù)方牛黃貼由1份的體外培的甘油輔料組成。5.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3或4所述的復(fù)方牛黃貼，其特征在于：所述復(fù)方牛黃貼的厚度為300～500μm,復(fù)方牛黃貼的大小為1～2cm2。6.一種復(fù)方牛黃貼的制備方法，其特征在于：包括以下步驟：1)按重量份數(shù)比稱取1份的體外培育牛黃、1～4份的奧硝唑、1～12份的殼聚糖、1~14份的羥丙甲纖維素、1～8份的聚乙烯醇和8～20份的甘油；2)將殼聚糖置于質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1～3%的10ml冰醋酸中溶脹8～16h,同時(shí)將羥丙甲纖維素和聚乙烯醇分別置于10ml去離子水中溶脹8～16h,3)將上述三種溶液混合，低速攪拌均勻，并依次加入甘油、體外培育牛黃和奧硝唑，混方牛黃貼。3復(fù)方牛黃貼及其制備方法技術(shù)領(lǐng)域[0001]本發(fā)明涉及治療口腔潰瘍的藥物，具體地指一種復(fù)方牛黃貼及其制備方法。[0002]口腔黏膜潰瘍是臨床上常見的口腔黏膜疾病，具有易反復(fù)發(fā)作及灼痛感等特點(diǎn)，關(guān)，病因錯(cuò)綜復(fù)雜，此外口腔微環(huán)境潮濕且具有豐富的病原微生物，導(dǎo)致潰瘍創(chuàng)面易受到感[0003]口腔微環(huán)境是一個(gè)潮濕且易受到細(xì)菌感染的環(huán)境，同時(shí)伴隨著唾液的連續(xù)分泌，常用于局部治療口腔潰瘍的口腔粘膜給藥系統(tǒng)(粘附片、噴霧劑、凝膠劑、糊劑等)易受到[0004]目前臨床上治療口腔潰瘍常使用皮質(zhì)類固醇(地塞米松、氫化可的松)、四環(huán)素類(四環(huán)素金霉素)、四環(huán)素類配伍煙酰胺、止痛藥(利多卡因、苯海拉明等)、抗菌漱口水等進(jìn)行局部治療以及全身應(yīng)用免疫抑制劑。而市面上用于治療口腔潰瘍的中藥制劑有西瓜霜[0005]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題就是提供一種復(fù)方牛黃貼及其制備方法；該復(fù)方牛黃貼能夠直接作用于口腔潰瘍病變部位、藥物滯留時(shí)間長(zhǎng)、治療效果好。[0006]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供的一種復(fù)方牛黃貼，所述復(fù)方牛黃貼的有效成分由1份的體外培育牛黃、1～4份的奧硝唑、2～30份成膜材料和8～20份的甘油組成。[0007]進(jìn)一步地，所述成膜材料由1～12份的殼聚糖、1～14份的羥丙甲纖維素和1~8份的聚乙烯醇組成。[0008]再進(jìn)一步地，所述復(fù)方牛黃貼由1份的體外培育牛黃、1～3份的奧硝唑、1～5份的殼聚糖、1～5份的羥丙甲纖維素、2～6份的聚乙烯醇和12～18份的甘油等輔料組成。[0009]再進(jìn)一步地，所述復(fù)方牛黃貼由1份的體外培育牛黃、1.2份的奧硝唑、2.4份的殼聚糖、2.4份的羥丙甲纖維素，3份的聚乙烯醇、15.75份的甘油輔料組成。[0010]再進(jìn)一步地，所述復(fù)方牛黃貼的厚度為300～500μm,復(fù)方牛黃貼的大小為1~[0011]本發(fā)明還提供了一種復(fù)方牛黃貼的制備方法，包括以下步驟：[0012]1)按重量份數(shù)比稱取1份的體外培育牛黃、1～4份的奧硝唑、4～8份的殼聚糖、5～10份的羥丙甲纖維素、4～6份的聚乙烯醇和8～20份的甘油；[0013]2)將殼聚糖置于質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1～3%的冰醋酸中溶脹8～16h,同時(shí)將羥丙甲纖維素和聚乙烯醇分別置于去離子水中溶脹8～16h,[0014]3)將上述三種溶液混合，低速攪拌均勻，并依次加入甘油、體外培育牛黃和奧硝4到復(fù)方牛黃貼。[0017]奧硝唑是新一代的廣譜抗厭氧菌的硝基咪唑類抗菌藥，具有抗菌活性高、組織滲透性好、半衰期長(zhǎng)等特點(diǎn)，是治療口腔潰瘍的常用抗菌藥物且療效較好?，F(xiàn)代研究表明以牛黃為主要處方治療口腔潰瘍具有顯著的療效。以牛黃為主要，輔以?shī)W硝唑及其他輔料制成口腔貼膜用于口腔潰瘍的治療。[0018]殼聚糖，是由自然界廣泛存在的幾丁促進(jìn)傷口愈合的功效。聚乙烯醇是由聚醋酸乙烯酯經(jīng)堿催化醇解而得得，易溶于水具有良好的成膜性。羥丙甲纖維素將精制棉纖維素用堿液處理，壓榨，將纖維素粉碎，老化得到一定聚合度范圍的聚合物，經(jīng)過(guò)水化溶脹后具有良好的粘附性。后形成藥膜成品。[0020]本發(fā)明的有益效果在于：同使用制作成貼膜，解決了口腔用藥的難題；經(jīng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明，復(fù)方牛黃貼中體外培育牛黃和奧硝唑治療口腔潰瘍具有良好的治療效果。將其制備成復(fù)方牛黃貼，具有使用方便，延長(zhǎng)藥物在局部潰瘍面的滯留時(shí)間，維持藥物的局部有效濃度，保護(hù)潰瘍面免受細(xì)菌感染等優(yōu)點(diǎn)。其膜成分材料遇到唾液迅速水化溶脹粘附于潰瘍表面，解決了口腔用藥易被唾液侵蝕，滯留時(shí)間短的難題。附圖說(shuō)明[0022]圖1為藥物不用配比治療口腔潰瘍兔子潰瘍面最大直徑變化圖；[0023]圖2為體外粘附力測(cè)定裝置圖；[0025]圖3為體外藥物累積釋放曲線圖；[0026]圖4為體外藥物累計(jì)滲透率曲線圖；[0027]圖5為奧硝唑在唾液中的釋放效果圖；[0028]圖6A為兔子口腔潰瘍面積圖；[0029]圖6B兔子口腔潰瘍的直徑圖；[0030]圖7監(jiān)測(cè)期兔子口腔潰瘍效果圖；[0031]圖8兔子口腔潰瘍愈合過(guò)程圖。具體實(shí)施方式[0032]為了更好地解釋本發(fā)明，以下結(jié)合具體實(shí)施例進(jìn)一步闡明本發(fā)明的主要內(nèi)容，但本發(fā)明的內(nèi)容不僅僅局限于以下實(shí)施例。5[0033]一種復(fù)方牛黃貼，所述復(fù)方牛黃貼的有效成分由1份的體外培育牛黃、1～4份的奧硝唑、2～30份成膜材料和8～20份的甘油組成。[0034]進(jìn)一步地，所述成膜材料由1～12份的殼聚糖、1～14份的羥丙甲纖維素和1~8份的聚乙烯醇組成。[0035]再進(jìn)一步地，所述復(fù)方牛黃貼由1份的體外培育牛黃、1～4份的奧硝唑、3～10份的殼聚糖、4～12份的羥丙甲纖維素、3～7份的聚乙烯醇和8～20份的甘油等輔料組[0036]再進(jìn)一步地，所述復(fù)方牛黃貼由1份的體外培育牛黃、1～4份的奧硝唑、4～8份的殼聚糖、5～10份的羥丙甲纖維素，4～6份的聚乙烯醇、12～18份的甘油輔料組成。所述復(fù)方牛黃貼的厚度為300～500μm,復(fù)方牛黃貼的大小為1～2cm2。[0038]1)按重量份數(shù)比稱取1份的體外培育牛黃、1～4份的奧硝唑、1～12份的殼聚糖、1～14份的羥丙甲纖維素、1～8份的聚乙烯醇和8～20份的甘油；[0039]2)將殼聚糖置于質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1～3%的10ml冰醋酸中溶脹8～16h,同時(shí)將羥丙甲纖維素和聚乙烯醇分別置于去離子水中溶脹8～16h,[0040]3)將上述三種溶液混合，低速攪拌均勻，并依次加入甘油、體外培育牛黃和奧硝到復(fù)方牛黃貼。[0043]體外培育牛黃、奧硝唑；羥丙甲纖維素(HPMC15KM)、殼聚糖(CS)、聚乙烯醇[0044]2)儀器干燥機(jī)；加1%冰醋酸溶液10ml溶脹12h,攪拌溶解后加入0.2g體外培育牛黃、0.24g奧硝唑和2ml甘油，加去離子水至40ml,混[0049]發(fā)現(xiàn)殼聚糖在1%～1.5%濃度范圍成膜均一性良好，但粘附力一般。[0051]分別稱取羥丙甲纖維素0.2g、0.6g、1g、1.2g、1.4g、1.6g,加去離子水10ml溶脹12h,攪拌溶解后加入0.2g體外培育牛黃、0.24g奧硝唑和2ml甘油，加蒸餾水至40ml,混合[0052]發(fā)現(xiàn)羥丙甲纖維素在0.5%～2%濃度范圍成膜性良好，粘附力良好。(人主觀判斷的，其他兩個(gè)一樣)6[0054]分別稱取聚乙烯醇0.4g、0.6g、0.8g、1.2g、1.6g、2g,加去離子水10ml溶脹12h,攪拌溶解后加入0.2g體外培育牛黃、0.24g奧硝唑和2ml甘油，加蒸餾水至40ml,混合均勻，[0055]發(fā)現(xiàn)聚乙烯醇在1%～1.5%濃度范圍成膜性良好且柔韌性良好。[0057]將1份體外培育牛黃分別和0.5、1、2、4份的奧硝唑配伍制備口腔貼膜劑。45只新西蘭兔被分為5組：分別為1:0.5組、1:1組、1:1.2組、1:2組和1:4組，每組12只。每一只新西蘭兔用50%冰醋酸誘導(dǎo)口腔潰瘍模型，造模第一天分別強(qiáng)制給予復(fù)方牛黃貼干預(yù)，連續(xù)給藥12天，測(cè)量兔子口腔潰瘍面的最大直徑用來(lái)評(píng)價(jià)藥物不同配比所制備的復(fù)方牛黃貼的療效差異。[0058]如圖1,體外培育牛黃與奧硝唑質(zhì)量比在1:1、1:1.2、1:2時(shí)效果比較好，其中，質(zhì)量比為1:1.2時(shí)其治療效果較好。[0060]根據(jù)上述方法制備復(fù)方牛黃貼，其配方如下表1所示：甘油奧硝唑[0062]制備得到成膜液體中各組分的含量如表2所示：[0063]復(fù)方牛黃貼使用殼聚糖、羥丙甲纖維素、聚乙烯醇為成膜材料，以體外培育牛黃和奧硝唑入藥，采用溶劑澆鑄法制備成膜。不同濃度的高分子材料按不同的比例混合見表1.殼聚糖、羥丙甲纖維、聚乙烯醇分別使用1%冰醋酸10ml、去離子水10ml和去離子水10ml預(yù)先溶脹12h,然后羥丙甲纖維素在告訴攪拌條件下加熱，至完全溶解，放置冷卻。將殼聚糖、聚乙烯醇的溶液與前羥丙甲纖維素溶液混合，低速攪拌，同時(shí)加入處方量的甘油、體外培育牛黃和奧硝唑，攪拌2h,混合均勻后，靜置消泡。然后將此溶液倒入直徑為10cm的將其剪切成1cm2大小的膜片，將樣品在室溫下儲(chǔ)存于玻璃瓶中。[0064]表2.成膜液體中各組分的含量722[0066]然后將上述成膜溶液倒入直徑為10cm的petri培養(yǎng)皿中，于-80℃預(yù)凍，然后凍干樣品牛黃貼在室溫下儲(chǔ)存于玻璃瓶中。[0068]1)質(zhì)量均勻性和厚度的測(cè)定[0069]將上述F1～F6樣品牛黃貼分別進(jìn)行稱重，五個(gè)膜重的平均值記錄為膜重。膜厚度使用數(shù)顯測(cè)厚規(guī)在膜的五個(gè)不同位置測(cè)定，五個(gè)測(cè)量的膜厚的平均值記錄為膜厚。[0070]2)藥品含量測(cè)定[0071]體外培育牛黃的含量是用復(fù)方牛黃貼中膽紅素的含量來(lái)評(píng)價(jià)。膽紅素和奧硝唑含量測(cè)定方法如下：[0072]F1～F6樣品牛黃貼分別溶解在適量三氯甲烷中，超聲15分鐘。將所得的溶液通過(guò)0.45μm微孔濾膜過(guò)濾，適當(dāng)稀釋之后，膽紅素和奧硝唑通過(guò)高效液相色譜儀在315nm和[0073]3)表面pH值測(cè)定[0074]復(fù)方牛黃貼的表面pH值測(cè)定是為了評(píng)價(jià)貼膜對(duì)口腔粘膜可能產(chǎn)生的刺激效果。首先將F1～F6樣品牛黃貼分別與1mlpH為6.8的磷酸鹽緩沖液在室溫下接觸2h,然后將pH的電極與膜的表面接觸，平衡一分鐘，記錄數(shù)值，平行測(cè)定3次取平均值。[0075]表3.樣品牛黃貼的物理性能8均一性(mg)[0078]將每個(gè)膜稱重并將其初始重量記作W1。然后膜置于含有4ml磷酸緩沖液(pH6.8)的培養(yǎng)皿。在1～2h小時(shí)的時(shí)間間隔時(shí)，小心地將膜從培養(yǎng)皿中移除，并且將過(guò)量的溶劑用濾紙吸干。然后測(cè)定溶脹膜的重量，并表示為W?。溶脹指數(shù)的計(jì)算公式如下：[0079]溶脹指數(shù)=(W?-W?)/W?×100,(W?=初始的薄膜重量，W?=溶脹膜的重量)[0080]將F1～F6樣品牛黃貼預(yù)先稱重后，浸入4ml的水中。這些膜在時(shí)間點(diǎn)0.5,1和2h時(shí)被小心的取出來(lái)，過(guò)量的溶劑用濾紙吸干，并快速準(zhǔn)確稱重，所有膜的平均溶脹指數(shù)見表4。[0081]表4.不同時(shí)間間隔復(fù)方牛黃貼的溶脹指數(shù)時(shí)間溶脹指數(shù)(%)12[0084]1)體外粘附力測(cè)定[0085]體外粘附力測(cè)定裝置如圖1剪取約3cm長(zhǎng)的2段黏膜展開，并分別固定于兩個(gè)小玻璃瓶上，往塑料杯中加人一定量的水，使左右兩端平衡，此時(shí)稱得塑料杯的總重量為W?,將待測(cè)的膜劑用生理鹽水潤(rùn)濕黏貼于固定小玻璃瓶B上，迅速將黏有黏膜的小玻璃瓶A覆蓋于其上，并施50g祛碼的外力，持續(xù)5min,使藥膜與兩側(cè)的黏膜充分黏合，之后撤去祛碼，以2滴/s的速度往C中滴水，直到藥膜與黏膜膜完全分離，稱定C的總重量W?。測(cè)得黏附力=W?-W?,每個(gè)處方測(cè)定3次取平均值。[0086]每張?zhí)幏竭M(jìn)行了測(cè)試三次，并采取了平均水平。粘膜粘附力進(jìn)行了計(jì)算使用以下公式：粘附力=W?-W9[0087]2)體外粘附時(shí)間測(cè)定[0088]進(jìn)體外粘膜粘附時(shí)間測(cè)定(n=3)使用新切開豬頰黏膜。使用502膠水將豬頰粘膜組織固定在燒杯的內(nèi)側(cè)，然后將復(fù)方牛黃貼剪成4cm2的部分并切割，每個(gè)膜的一側(cè)被潤(rùn)濕用50ml的人工唾液親潤(rùn)，然后容手指施加一個(gè)小的力將其粘附于豬頰粘膜組織表面，按壓20秒。將燒杯裝滿用800ml的人工唾液并保持在37℃,2min后，在人工唾液環(huán)境下以150rpm速率攪拌，監(jiān)測(cè)4h內(nèi)的粘附時(shí)間。[0089]表5.體外粘附力和粘附時(shí)間處方體外粘附力(g)體外粘附時(shí)間(h)[0091]4.體外釋藥[0092]體外滲透性試驗(yàn)使用改性Franz擴(kuò)散池，將醋酸纖維素膜放固定在釋放池和接收池交界處，將貼膜固定在醋酸纖維素膜上方，并固定于Franz擴(kuò)散池上，以黏膜恰好與液面接觸為好，排凈氣泡，取與接受池有效接觸面積相同的牛黃甲硝唑貼于黏膜上，使之與黏膜密切接觸。磁力恒速攪拌接受液(300r·min),恒溫水浴(37士0.1)℃,分別于不同時(shí)間間隔點(diǎn)定時(shí)取樣，并及時(shí)補(bǔ)充等體積接受液。樣品的膽紅素和OD含量分別通過(guò)HPLC在450nm和315nm處測(cè)定，并報(bào)告為平均三次測(cè)定。[0093]處方中OD的體外釋放曲線如圖2,膽紅素由于其溶解性極差，在接受液中的濃度未能達(dá)到檢測(cè)線，未檢測(cè)到。[0094]5.體外滲透性實(shí)驗(yàn)[0095]復(fù)方牛黃貼的體外滲透也進(jìn)行使用改性Franz擴(kuò)散細(xì)胞的化合物，采用5ml等滲磷酸鹽緩沖液(pH6.8)在37.0±0.1℃下作為接受也。豬食管粘膜，將其從本地屠宰場(chǎng)中獲得，用作滲透膜。豬食管管被打開縱向，并用pH7.4的等滲磷酸緩沖液漂洗，粘膜被從底層肌肉層除去，并浸入60的等滲鹽水1min。然后剝離從結(jié)締組織剝離上表皮，然后冷凍在-20℃儲(chǔ)存待用。使用時(shí)，將冷凍的粘膜浸入等滲的pH6.8磷酸鹽緩沖液在室溫通下放置15min。將膜放置在供體和接受液隔室之間，使結(jié)締組織表面朝下。20μ1的pH6磷酸緩沖液涂在粘膜表面模擬黏膜表面唾液層。將復(fù)方牛黃貼放置與豬黏膜的水化層，隨后將接受池用夾子緊緊固定。根據(jù)在釋放研究中使用的相同的方法進(jìn)行膽紅素和奧硝唑的分析取樣。[0096]處方中OD的體外滲透曲線如圖3.膽紅素由于其溶解性極差，在接受液中的濃度未能達(dá)到檢測(cè)線，未檢測(cè)到。[0097]上述方法制備得到的F1～F6樣品復(fù)方牛黃貼均呈棕褐色并且柔韌性良好，根據(jù)其溶脹性、粘附性、體外釋藥性和體外滲透性，處方F5被認(rèn)為是最優(yōu)的處方。選用處方F5進(jìn)行藥效學(xué)考察，并測(cè)定其體內(nèi)唾液中濃度[0099]3名健康受試者在測(cè)定粘附時(shí)間的過(guò)程中分別于0min、15min、30min、45min、采用棉簽收集唾液。取樣后立即留。取棉簽頭放入1.5mlEP管，精密稱重(W1),取樣時(shí)將濾紙放在舌下30s后(或采用EP管直接接取，至1.5ml左右),取出放入原EP管中再次精密稱重(W2)計(jì)算唾液樣本量(W2-W1),然後加入200μlPBS液，靜置提洗1h后，置于-20℃保存，3天內(nèi)測(cè)試。[0100]如圖5所示：3名健康志愿者在2.5h內(nèi)不同時(shí)間點(diǎn)唾液中的濃度。樣品牛黃貼處方在75min的時(shí)候達(dá)峰，而處方F1、F2、F3和F4隨之在90min下降很快，而F5、F6降低較為緩和，能較長(zhǎng)時(shí)間的維持局部藥物濃度水平。此外，在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，這些處方未引起志愿者臉頰粘膜刺激或者疼痛，具有良好的舒適性和耐受性。[0102]所有36只新西蘭兔用戊巴比妥鈉麻醉后，在兔唇處強(qiáng)制給予50%冰醋酸腐蝕60秒，建立口腔潰瘍動(dòng)物模型并分成四組，第一組(對(duì)照組)不進(jìn)行給藥干預(yù)；第二組(復(fù)方牛黃貼)每天一次強(qiáng)制給予復(fù)方牛黃貼干預(yù)0.5h;第三組(牛黃)每天一次強(qiáng)制給予只含體外培育牛黃的貼膜干預(yù)0.5h;第四組(奧硝唑)每天一次強(qiáng)制給予只含奧硝唑的貼膜干預(yù)0.5h的奧硝唑。[0103]每只兔子口腔潰瘍臨床療效是通過(guò)比較最近每個(gè)觀察間隔擦亮的最大直徑與初始潰瘍的測(cè)量最大直徑進(jìn)行評(píng)價(jià)。初始測(cè)量和觀察日之間的差越大，其臨床療效越好：因[0104]在各組中，每3只動(dòng)物分別于4,8和12天用巴比妥鈉麻醉后處死，取潰瘍區(qū)域組織用于組織學(xué)評(píng)價(jià)。36只均(36只兔子代表每組中9只動(dòng)物的3個(gè)觀察期)。潰瘍模型成功后24小時(shí)開始給藥干預(yù)治療。體外培育牛黃和奧硝唑的劑量分別是0.875mg/片和[0105]該潰瘍臨床照片記錄用數(shù)碼相機(jī)。同時(shí)采用邊長(zhǎng)為3mm的透明格薄膜測(cè)量潰瘍面積，不足半格的不計(jì)算，超過(guò)半格的按一格算，由于潰瘍面積的形狀是橢圓形，而且該潰瘍面積測(cè)量方法只能反映大致的趨勢(shì)，所以使用游標(biāo)卡尺測(cè)定潰瘍面的最大直徑，所有測(cè)量均用相同的研究者在同一天進(jìn)行三次測(cè)量，并計(jì)算平均潰瘍面積。[0106]如圖6所示：兔子口腔潰瘍給藥干預(yù)過(guò)程中4,8和12天的口腔潰瘍面積以及最大直徑。在整個(gè)觀察期間前，口腔潰瘍最大直徑和最大面出現(xiàn)在第4天，最大的減少發(fā)生在第9天，直至第12天口腔潰瘍面積和最大直徑降至最小，各組間的變化顯著(p<0.05)。[0107]如圖7所示：兔子4,8和12天的口腔潰瘍愈合過(guò)程的圖像。從整個(gè)治愈過(guò)程可以看出，復(fù)方牛黃貼組的潰瘍愈合過(guò)程比其他三組顯著更快，且復(fù)方牛黃貼組幾乎完全愈合。[0108]如圖8所示：兔子4,8和12天的口腔