KTB2360-CN-酸性磷酸酶（ACP）活性檢測試劑盒（微量法）

酸性磷酸酶（ACP）活性檢測試劑盒（微量法）原理ACP（AcidPhosphatase）在酸性條件下催化磷酸單酯水解成無機(jī)磷酸，常見于巨噬細(xì)胞的溶酶體內(nèi)。ACP常用于前列腺癌的輔助診斷。CheKine?酸性磷酸酶（ACP）活性檢測試劑盒（微量法）提供了一種簡單、方便、快速的ACP活性檢測方法，適用于動植物組織、血清、血漿等樣本。其原理是在酸性環(huán)境中，ACP催化磷酸苯二鈉水解生成苯酚，苯酚與4-氨基安替比林和鐵氰化鉀反應(yīng)生成紅色亞醌衍生物，在510nm有特征光吸收；通過測定510nm吸光度增加速率，來計算ACP活性。包裝清單試劑盒組分規(guī)格儲存條件48T96TExtractionBuffer60mL120mL4℃ReagentI3mL6mL4℃，避光保存ReagentII3mL6mL4℃，避光保存ReagentIII9mL18mL4℃，避光保存Standard0.5mL0.5mL4℃，避光保存注意：正式檢測前，建議選擇2-3個預(yù)期差異較大的樣本進(jìn)行預(yù)實驗。自備耗材·酶標(biāo)儀或可見光分光光度計（能測510nm處的吸光度）·恒溫箱、制冰機(jī)、低溫離心機(jī)·96孔板或微量玻璃比色皿·可調(diào)節(jié)式移液槍及槍頭·去離子水·勻漿器（如果是組織樣本）試劑準(zhǔn)備ExtractionBuffer：即用型；使用前，平衡到室溫；4℃保存。ReagentI：即用型；使用前，平衡到室溫；4℃避光保存。ReagentII：即用型；使用前，平衡到室溫；4℃避光保存。ReagentIII：即用型；使用前，平衡到室溫；4℃避光保存。Standard：即用型；使用前，平衡到室溫；4℃避光保存。注意：ReagentIII有毒，ExtractionBuffer和Standard有刺激性氣味，建議在通風(fēng)櫥進(jìn)行實驗。樣本制備注意：推薦使用新鮮樣本，如果不立即進(jìn)行實驗，樣本可在-80℃保存1個月。測定時，應(yīng)控制解凍的溫度和時間。室溫環(huán)境下解凍時，需在4h內(nèi)完成樣品解凍。動植物組織：稱取約0.1g樣本，加入1mLExtractionBuffer，冰浴勻漿，10,000rpm，4℃離心10min，取上清液，置冰上待測。血清（漿）：血漿和血清可以直接用于測定。血漿制備時不能用EDTA和檸檬酸鹽，可用其它抗凝劑。注意：如需測定蛋白濃度，推薦使用Abbkine貨號：KTD3001的蛋白質(zhì)定量試劑盒（BCA法）進(jìn)行樣本蛋白質(zhì)濃度測定。實驗步驟酶標(biāo)儀或可見光分光光度計預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長到510nm?？梢姽夥止夤舛扔嬘萌ルx子水調(diào)零。ReagentI置于37℃水浴中預(yù)熱30min以上。操作表（下述操作在96孔板中進(jìn)行）：試劑測定孔（μL）對照孔（μL）空白孔（μL）標(biāo)準(zhǔn)孔（μL）去離子水00200Standard00020樣本20000ReagentⅠ40404040ReagentII40404040混勻后置于37℃中保溫15minReagentIII120120120120樣本02000混勻后于510nm處測定吸光度，其中標(biāo)準(zhǔn)和空白只需做一個，每個樣本均需設(shè)置對照，各孔的吸光度分別記為A測定、A對照、A空白、A標(biāo)準(zhǔn)。計算ΔA測定=A測定-A對照，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白。注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本的ΔA測定小于0.1，可適當(dāng)增大樣本量，如果樣本的ΔA測定大于1.5，樣本可用ExtractionBuffer進(jìn)一步稀釋，再進(jìn)行實驗，乘以最終的稀釋倍數(shù)。結(jié)果計算注意：我們?yōu)槟峁┑挠嬎愎?，包括推?dǎo)過程計算公式和簡潔計算公式。兩者完全相等。建議以加粗的簡潔計算公式為最終計算公式。按蛋白濃度計算活性單位定義：37℃中每毫克蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1μmol酚為一個酶活力單位。ACP(U/mgprot)=(C標(biāo)準(zhǔn)×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×V樣)÷(Cpr×V樣)÷T=ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷15÷Cpr按樣本鮮重計算活性單位定義：37℃中每克組織每分鐘催化產(chǎn)生1μmol酚為一個酶活力單位。ACP(U/g鮮重)=(C標(biāo)準(zhǔn)×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×V樣)÷(W÷V提取×V樣)÷T=ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷15÷W按液體體積計算活性單位定義：37℃中每毫升血清或血漿每分鐘催化產(chǎn)生1μmol酚為一個酶活力單位。ACP(U/mL)=(C標(biāo)準(zhǔn)×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×V樣)÷V樣÷T=ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷15C標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)品的濃度，2μmol/mL；V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積，0.02mL；T：反應(yīng)時間，15min；V提?。杭尤隕xtractionBuffer體積，mL；W：樣本鮮重，g；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度，mg/mL。注意事項ReagentⅠ、ReagentII和ReagentIII均需避光保存。ReagentIII變藍(lán)綠色后不能再使用。加入ReagentIII后必須立即混勻，否則顯色不完全。ACP不穩(wěn)定，尤其在37℃和pH大于7的條件下活力喪失快，因此ACP樣本一般需當(dāng)天準(zhǔn)備；血清樣本中，每毫升血清中加入10mg檸檬酸氫二鈉或者5mg硫酸氫鈉，使pH降至6.5以下，或5mL血清加入30%醋酸溶液2～3滴，置于4℃可保存1周。結(jié)果展示Figure1.本試劑盒測定綠蘿和兔腎臟中ACP的活性相關(guān)產(chǎn)品CatalogNo.ProductNameKTB