抗生素效價的微生物檢定法MicrobiologicalAssayofAntibioticPoten

抗生素效價的微生物檢定法

MicrobiologicalAssayofAntibioticPotency重慶醫(yī)藥高等?？茖W校

ChongqingMedicalandPharmaceutialCollege目錄Contents第一節(jié)概述

SectionIOverview第二節(jié)管碟法

SectionIICap-plateMethod學習目標

Learningobjective知識目標

KnowledgeObjectives能力目標

Abilityobjective1、掌握抗生素的效價測定方法——管蝶法。

1.Masterthemethodofpotencyassayofantibiotics--cap-platemethod.2、熟悉抗生素效價單位的含義及表示方法、標準品和供試品的概念。

2.Familiarizewiththemeaningandexpressionofantibioticpotencyunit,andtheconceptofstandardandtestproducts.3、了解其他測定抗生素效價測定方法。

3.Understandothermethodsofdeterminingthepotencyofantibiotics.能正確應用管碟法對抗生素的效價進行檢測。

Beabletocorrectlyapplythecap-platemethodtotestthepotencyofantibiotics.素質目標

Qualityobjective嚴謹的實驗態(tài)度和實事求是的工作作風。

Rigorousexperimentalattitudeandrealisticworkstyle.重點難點

Keypointanddifficulty重點抗生素的效價測定方法——管蝶法。KeyPointThemethodofpotencyassayofantibiotics--cap-platemethod.難點檢測原理。Difficulty

Detectionprinciple.概述

Overview第一節(jié)

Section

I一、抗生素的定義

I.Definitionofantibiotics抗生素是指一類由生物(包括微生物、動物和植物在內)在其生命活動過程中所產生的，能在低微濃度下有選擇地抑制或殺滅其它生物的化學物質，主要是細菌、放線菌和真菌等微生物的代謝產物，可用微生物發(fā)酵法或化學合成與半合成法進行生產。Antibioticsreferstoaclassofchemicalsubstancesproducedbyorganisms(includingmicroorganisms,animalsandplants)inthecourseoftheirlifeactivities,whichcanselectivelyinhibitorkillotherorganismsatlowmicroconcentrations,mainlythemetabolitesofmicroorganismssuchasbacteria,actinomycetesandfungi,andcanbeproducedbymicrobiologicalfermentationorchemicalsynthesisandsemi-syntheticmethods.根據作用特點和化學結構進行分類：

Classifiedbyfeaturesofactionandchemicalstructure:AminoglycosidesAnti-tumorAnti-fungalBeta-lactamAnti-parasiticAntibacterial二、抗生素的效價、單位及表示方法

II.Potency,unitandexpressionofantibiotics（一）抗生素的效價

(I)Potencyofantibiotics

抗菌活性是指抗菌藥物抑制或殺死病原微生物的能力?？股氐目咕钚酝ǔＳ眯r單位來表示，即抗菌效價指抗生素藥物的作用強度。在臨床應用中，抗生素的效價可準確地反映抗生素的醫(yī)療價值，以“單位（U/IU）”表示。

Antibacterialactivityistheabilityofanantimicrobialdrugtoinhibitorkillpathogenicmicroorganisms.Theantibacterialactivityofanantibioticisusuallyexpressedintermsofpotencyunits,i.e.,antibacterialpotencyreferstothestrengthofactionoftheantibioticdrug.Inclinicalapplication,thepotencyofanantibioticaccuratelyreflectsthemedicalvalueoftheantibioticandisexpressedin"units(U/IU)".硫酸鏈霉素

798單位/毫克

Streptomycinsulfate798units/mg青霉素G鈉1670單位/毫克

SodiumpenicillinG1,670units/mg桿菌肽

74單位/毫克

Bacitracin74units/mg（二）抗生素效價單位及表示方法

(II)Potency,unitandexpressionofantibiotics抗生素效價的標示量，原則上應按所含特定的抗菌活性部分的重量來計算。

Thelabelledamountofantibioticpotencyshouldinprinciplebecalculatedonthebasisoftheweightofthespecificantibacterialactivepartcontained.

在應用中，抗生素類藥物有效成分的表示方法，是按照各種抗生素的特點及使用經驗，采用符合客觀實際的效價單位表示。常用的抗生素效價單位有質量單位、類似質量單位、質量折算單位、特定單位。

Inapplication,theexpressionoftheactiveingredientsofantibioticdrugsisbasedonthefeaturesofvariousantibioticsandtheexperienceofusingthem,andtheexpressionofthepotencyunitthatconformstotheobjectiverealityisused.Commonlyusedantibioticpotencyunitsincludemassunit,similarmassunit,massconvertingunit,andspecificunit.（二）抗生素效價單位及表示方法

(II)Potency,unitandexpressionofantibiotics質量單位以抗生素中所含特定的抗菌活性部分（純游離堿或游離酸）的質量1μg作為1單位，即1mg=1000單位。

Themassunittakes1μgofthemassofthespecificantibacterialactivepart(purefreealkaliorfreeacid)containedintheantibioticas1unit,i.e.,1mg=1,000units.案例

Case

硫酸鏈霉素抗菌活性是以鏈霉素效價單位表示的，其鏈霉素的效價單位是以具活性成分鏈霉素的“活性”質量表示的，即1鏈霉素效價單位＝1微克鏈霉素，這里是“活性微克”而不是“質量微克”。

Theantibacterialactivityofstreptomycinsulfateisexpressedinstreptomycinpotencyunits,anditsstreptomycinpotencyunitsareexpressedinthe"active"massoftheactiveingredientofstreptomycin,i.e.,1streptomycinpotencyunit=1microgramofstreptomycin,andhereitis"microgramsofactivity"insteadof"microgramsofmass".分析

Analysis

在抗生素的生產、研究和應用等方面，均以抗生素活性成分的“活性”質量計量抗生素的效價單位，采用活性成分的“活性”質量1μg＝1效價單位的方法表示。

Intheproduction,researchandapplicationofantibiotics,the"active"massoftheactiveingredientoftheantibioticisusedtomeasurethepotencyunitoftheantibiotic,whichisexpressedbythemethodthatthe"active"massoftheactiveingredient,1μg,isequivalentto1potencyunit.案例分析

Analysisofcase質量單位Massunit（二）抗生素效價單位及表示方法

(II)Potency,unitandexpressionofantibiotics類似質量單位

Similarmassunit類似質量單位以特定的純抗生素制品鹽的質量1μg作為一個單位，即1mg＝1000單位，其中包括了無抗菌活性的酸根在內。這種類似質量單位，雖然并不合理，但在國際上已經習慣沿用。

Thesimilarmassunittakes1μgofthemassofaspecificpureantibioticproductsaltasaunit,i.e.1mg=1,000units,includingtheacidradicalsthathavenoantibacterialactivity.Thissimilarunitofmass,althoughnotreasonable,hasbeencustomarilyusedinternationally.（二）抗生素效價單位及表示方法

(II)Potency,unitandexpressionofantibiotics質量折算單位

Massconvertingunit質量折算單位是以特定的純抗生素制品的某一質量為1單位而加以折算。

Massconvertingunitsarethosethatareconvertedbytakingamassofaspecificpureantibioticproductas1unit.如：青霉素國際標準品

Forexample:penicillininternationalstandardproducts第一批青霉素國際標準品，青霉素G鈉0.6微克為1單位，即1667單位/毫克。

Thefirstbatchofpenicillininternationalstandardproducts,0.6microgramsofsodiumpenicillinGfor1unit,thatis,1,667units/mg.第二批青霉素國際標準品，青霉素G鈉0.5988微克為1單位，即1670單位/毫克。

Thesecondbatchofpenicillininternationalstandardproducts,0.5988microgramsofsodiumpenicillinGfor1unit,thatis,1,670units/mg.（二）抗生素效價單位及表示方法

(II)Potency,unitandexpressionofantibiotics特定單位

Specificunit特定單位是指對于不易得到純品，組成成分較復雜的抗生素，在開始生產及臨床使用時，只能以一特定量的標準品（或對照品）作為1單位。

Specificunitmeansthatforantibioticsthatarenoteasytogetpureproductsandhavecomplexcomposition,onlyaspecificamountofstandardproducts(orcontrolproducts)canbeusedas1unitwhenstartingproductionandclinicaluse.如：桿菌肽國際標準品

Forexample:bacitracininternationalstandardproducts第一批桿菌肽A國際標準品為55單位/毫克；

ThefirstbatchofbacitracinAinternationalstandardproductis55units/mg;第二批桿菌肽A國際標準品為74單位/毫克。

ThesecondbatchofbacitracinAinternationalstandardproductis74units/mg.這類抗生素的效價單位的精確定義很難確定，折算效價也難以計算，只能以國際標準品的效價單位，作為比較的基準。

Theprecisedefinitionofthepotencyunitofthistypeofantibioticsisdifficulttodetermine,andtheconvertedpotencyisalsodifficulttocalculate.Comparisonscanonlybemadeintermsofpotencyunitsofinternationalstandardproducts.效價測定

Potencyassay

效價的測定即指抗生素的含量測定，其方法主要有微生素檢定法和理化方法。

Potencyassayreferstotheassayofantibioticcontent,andthemethodsmainlyincludemicrobiologicalassayandphysicochemicalmethods.微生物檢定法

是以抗生素對微生物的殺傷或抑制程度為指標來衡量抗生素效價，是抗生素效價測定的最基本方法。MicrobiologicalassayItisthemostbasicmethodforthepotencyassayofantibioticsbytakingthedegreeofkillingorinhibitingofmicroorganismsbyantibioticsasanindicatortomeasurethepotencyofantibiotics.理化方法

是指根據抗生素的分子結構，利用其特有的化學或理化性質及反應進行的。PhysicochemicalmethodItreferstotheuseofuniquechemicalorphysicochemicalpropertiesandreactionsofantibioticsaccordingtotheirmolecularstructure.抗生素微生物檢定法是國際上通用的、經典的抗生素效價測定方法。隨著HPLC等化學分析技術的發(fā)展，一些抗生素效價的測定已被化學方法所替代，但由于以下原因，抗生素微生物檢定法，目前在各國藥典中仍占有重要地位。

Themicrobiologicalassayofantibioticsisaninternationallyrecognizedandclassicalmethodfortheassayofantibioticpotency.WiththedevelopmentofchemicalanalyticaltechniquessuchasHPLC,theassayofthepotencyofsomeantibioticshasbeenreplacedbychemicalmethods.However,themicrobiologicalassayofantibiotics,forthefollowingreasons,stilloccupiesanimportantplaceinthepharmacopoeiasofvariouscountries.01微生物檢定法可直觀、特異的反應出抗生素藥品的抗菌活性，顯示臨床的特點。

Microbiologicalassaysprovideavisualandspecificresponsetotheantibacterialactivityofantibioticdrugs,showingclinicalcharacteristics.02多組分抗生素由于不同組分生物活性的差異，化學測定結果難以準確表征組分、組成、含量和活性的關系。

Multicomponentantibioticsaredifficulttoaccuratelycharacterizetherelationshipbetweencomponents,composition,contentandactivityinchemicalassaysduetodifferencesinthebiologicalactivityofdifferentcomponents.03許多抗生素品種由于各種原因目前沒有適當的化學分析方法表征其活性。

Manyantibioticspeciesdonotcurrentlyhaveappropriatechemicalanalyticalmethodstocharacterizetheiractivityforavarietyofreasons.04同時微生物法所需的儀器設備簡單，成本低。

Atthesametime,themicrobiologicalmethodrequiressimpleinstrumentationandlowcost.三、抗生素的標準品與供試品

III.Antibioticstandardandtestproducts（一）抗生素微生物檢定用標準品

(I)Standardproductsformicrobiologicalassayofantibiotics標準品是指用于生物檢定或效價測定的標準物質，其特性量值一般按效價單位（或μg）計物質。Standardproductsarestandardsubstancesusedforbioassatorpotencyassay,andtheircharacteristicvaluesaregenerallymeasuredintermsofpotencyunits(orμg)tocalculatethesubstance.抗生素的國際標準品由世界衛(wèi)生組織邀請有條件的國家檢測機構或藥廠協(xié)作標定后，由生物檢定專家委員會最后通過決定。

TheinternationalstandardproductsofantibioticsarecalibratedbytheWorldHealthOrganizationbyinvitingnationaltestinginstitutionsorpharmaceuticalcompanieswiththenecessaryconditionstocollaborateinthecalibration,andthenfinallyadoptedbytheBioassayExpertCommittee.國家標準品是各國指定的機構選定一批性質完全相同的藥品與國際標準品進行比較，定出它的效價，統(tǒng)一向全國的檢定、科研、教育、生產單位分發(fā)，作為檢定產品效價時使用

Thenationalstandardproductisagroupofdrugsofidenticalnatureselectedbythedesignatedorganizationofeachcountryforcomparisonwiththeinternationalstandardproducttodetermineitspotency,anduniformlydistributedtothenationaltesting,scientificresearch,education,andproductionunitsforuseinthedeterminationofproductpotency.（二）供試品

(II)Testproducts供試品是供檢定其效價的樣品，它的活性組分應與標準品基本相同。Thetestproductisasampleforthepotencyassay,anditsactivecomponentsshouldbeessentiallythesameasthestandardproducts.抗生素的標準品與供試品有什么關系？

Whatistherelationshipbetweenthestandardproductsandthetestproductsofantibiotics?課堂活動

ClassroomActivity四、抗生素微生物檢定法的種類

IV.Typesofmicrobiologicalassayofantibiotics抗生素微生物檢定法是利用抗生素在低微濃度下有選擇地抑制或殺死微生物的特點，以抗生素的抗菌活性為指標，來衡量抗生素中的有效成分效力的方法。

Microbiologicalassayofantibioticsisamethodtomeasurethepotencyofeffectiveingredientsinantibioticsbyutilizingthecharacteristicsofantibioticsthatselectivelyinhibitorkillmicroorganismsatlowmicro-concentrations,andtakingtheantibacterialactivityofantibioticsasanindicator.抗生素微生物檢定法可分為：

Microbiologicalassaysforantibioticscanbecategorizedas:管碟法

Cap-platemethod濁度法

Turbidimetricmethod稀釋法

Dilutionmethod目前各國藥典通常采用后兩種方法測定抗生素的效價。

Thelattertwomethodsarecommonlyusedinpharmacopoeiasofvariouscountriestodeterminethepotencyofantibiotics.（一）管碟法

(I)Cap-platemethod通過測定由不同濃度的抗生素溶液在含有試驗菌固體培養(yǎng)基中的擴散，而在其表面所產生的抑菌圈的大小，衡量抗生素抑菌效力的方法。

Itisamethodtomeasuretheantibiotic'santibacterialpotencybydeterminingthesizeoftheinhibitionzoneproducedonthesurfaceofthesolidculturemediumcontainingthetestorganismsbydiffusionofantibioticsolutionsofdifferentconcentrations.多用于抗生素藥物的含量（效價）測定。

Itismostlyusedforthedeterminationofthecontent(potency)ofantibioticdrugs.（二）濁度法

(II)Turbidimetricmethod通過監(jiān)測等量的試驗菌菌液在不同濃度的抗生素液體培養(yǎng)基中的生長情況，利用分光光度法測定含不同濃度的抗生素的液體培養(yǎng)基的濁度，從而衡量抗生素抑菌效力的方法。

Itisamethodtomeasuretheantibiotic'santibacterialpotencybymonitoringthegrowthofequalamountsoftestbacteriainliquidmediawithdifferentconcentrationsofantibiotics,anddeterminingtheturbidityofliquidculturemediumcontainingdifferentconcentrationsofantibioticsusingspectrophotometry.可用于抗生素藥物的含量（效價）測定。

Itcanbeusedforthedeterminationofthecontent(potency)ofantibioticdrugs.（三）稀釋法

(III)Dilutionmethod通過監(jiān)測等量的試驗菌菌液在不同濃度的抗生素液體培養(yǎng)基中的生長情況，觀察含不同濃度抗生素的液體培養(yǎng)基中有無細菌生長，從而測定抗生素最低抑菌濃度（MIC）的方法。

Itisamethodtodeterminetheminimuminhibitoryconcentration(MIC)ofantibioticsbymonitoringthegrowthofequalamountoftestbacteriainliquidculturemediumwithdifferentconcentrationsofantibiotics,andobservingwhetherthereisanybacterialgrowthinliquidculturemediumcontainingdifferentconcentrationsofantibiotics.常用于新藥的研制及藥敏試驗等方面。

Itiscommonlyusedinthedevelopmentofnewdrugsanddrugsensitivetest.ConcentrationofantibacterialagentsincreasedLowestinhibitoryconcentrationoftheantibiotic.Control濃度設置ug/ml

Concentrationsettingug/ml12864321684210.50.25陰性對照

Negativecontrol陽性對照

Positivecontrol四、抗生素微生物檢定法的種類

IV.Typesofmicrobiologicalassayofantibiotics抗生素微生物檢定方法比較

Comparisonofmicrobiologicalassaymethodsforantibiotics管碟法

Cap-platemethod第二節(jié)

SectionII一、檢定原理

I.Principleofassay

管碟法，又稱杯碟法，是通過將不銹鋼小管（俗稱為牛津杯）放置在含敏感試驗菌的瓊脂培養(yǎng)基上，將抗生素溶液注入小鋼管中，抗生素分子隨溶劑向培養(yǎng)基內呈球面狀放射狀擴散。同時將培養(yǎng)基置入適宜試驗菌生長的培養(yǎng)箱內，使試驗菌開始生長。

Cap-platemethod,alsoknownascylinderplatemethod,isamethodinwhichasmallstainlesssteeltube(commonlyknownasOxfordcup)isplacedontheagarculturemediumcontainingthesensitivetestorganisms,andtheantibioticsolutionisinjectedintothesmallsteeltube,wheretheantibioticmoleculesdiffusewiththesolventintotheculturemediuminasphericalradialpattern.Atthesametime,theculturemediumisplacedintheincubatorsuitableforthegrowthofthetestorganisms,sothatthetestorganismsbegintogrow.一、檢定原理

I.Principleofassay抗生素分子在瓊脂培養(yǎng)基中的濃度隨與小鋼管間距離的增大而降低，離小鋼管越遠，培養(yǎng)基中的抗生素分子越少，相應的抗生素濃度越低。當抗生素分子擴散達到一定時間，可在小鋼管周圍形成一個抑菌圈。Theconcentrationofantibioticmoleculesintheagarculturemediumdecreaseswiththeincreaseofthedistancefromthesmallsteeltube,thefartherawayfromthesmallsteeltube,thefewerantibioticmoleculesintheculturemedium,andthelowerthecorrespondingantibioticconcentration.

Whentheantibioticmoleculesdiffuseforacertainperiodoftime,aninhibitionzonecanbeformedaroundthesmallsteeltube.在抑菌圈中因抗生素濃度高于抑菌濃度，試驗菌生長受到抑制，此處瓊脂培養(yǎng)基成透明狀；在抑菌圈邊緣抗生素濃度恰好等于抗生素最低抑菌濃度。Becausetheantibioticconcentrationishigherthantheinhibitoryconcentrationintheinhibitionzone,thegrowthofthetestorganismsisinhibited,andtheagarculturemediumherebecomestransparent;attheedgeoftheinhibitionzone,theantibioticconcentrationisexactlyequaltothelowestinhibitoryconcentrationoftheantibiotic.圖12-1抑菌圈形成示意圖

Figure12-1SchematicdiagramoftheformationoftheinhibitionzoneBacterialayerBottomlayerSphericalspreadingInhibitionzoneBacteriazone一、檢定原理

I.Principleofassay量反應平行線原理：當抗生素濃度的對數劑量和反應呈直線關系，且供試品和標準品的作用性質相同時，供試品和標準品的兩條量-反應關系曲線相互平行。

Principleofgradedresponseparallellines:Whenthelogarithmicdoseandresponseofantibioticconcentrationareinastraightlinerelationship,andthetestandstandardproductshavethesamenatureofaction,thetwogradeddose-responsecurvesofthetestandstandardproducts

areparalleltoeachother.二、檢定的影響因素

II.Affectingfactorsofassay自學

Self-learning1抑菌圈的質量控制

Qualitycontroloftheinhibitionzone抑菌圈的形狀

Shapeoftheinhibitionzone抑菌圈的大小

Sizeoftheinhibitionzone抑菌圈邊緣清晰度

Clearnessoftheedgeoftheinhibitionzone2標準品與供試品的同質性

Homogeneityofstandardandtestproducts3斜率的控制

Slopecontrol三、檢定方法

III.Assaymethods試驗用菌液、緩沖液、培養(yǎng)基的配制

Preparationoftestbacteriasolution,bufferandculturemedium標準品與供試品溶液的制備

Preparationofstandardandtestproductssolutions雙碟的制備

Preparationofdoubleplates滴加藥液到小鋼管內

Dripmedicineliquidintosmallsteeltubes培養(yǎng)

Culture抑菌圈測量

Measurementoftheinhibitionzone計算結果

Calculationresults雙碟：裝有培養(yǎng)基和試驗菌的玻璃器皿叫雙碟Doubleplates:glasswarecontainingculturemediumandtestorganismsarecalleddoubleplates.（一）培養(yǎng)基的適用性檢查

(I)Suitabilitytestforculturemedium三、檢定方法

III.Assaymethods（一）培養(yǎng)基的適用性檢查

(I)Suitabilitytestforculturemedium圖12-3抗生素效價檢定操作流程圖

Figure12-3FlowchartofantibioticpotencyassayoperationWeighingofstandardproductsDilutionofstandardproductsSolutionofstandardproductsWeighingoftestproductsDilutionoftestproductsSolutionoftestproductsEquipmentforbuffersInjectingintosmallsteeltubesPlatePreparationAddroundedcoverofclaytileAftersolidificationAftersolidificationPreparationofculturemediumBottomlayer20mlBacterialayer5mlAddsmallsteeltubesAddbacteriasolutionPreparationofbacteriasolutionAddroundedcoverofclaytileCultureMeasuretheinhibitionzoneReliabilitycalibration,potencycalculation（二）管碟法的分類

(II)Classificationofcap-platemethod管碟法根據試驗設計不同，可分為：

Accordingtotheexperimentaldesign,Thecap-platemethodcanbecategorizedas:一劑量法(標準曲線法)

1-dosagemethod(standardcurvemethod)常用于原料生產的過程監(jiān)控、中間體或半成品檢驗

Commonlyusedforprocessmonitoringofrawmaterialproduction,testingofintermediatesorsemi-finishedproducts.二劑量法

2-dosagemethod是抗生素質量檢驗的常規(guī)方法。用標準品、供試品各高低兩個劑量，采用量反應平行線原理，在相同實驗條件下比較供試品和標準品抑菌圈的大小。

Itisaroutinemethodforantibioticqualitytesting.Comparethesizeoftheinhibitionzoneofthetestandstandardproductsunderthesameexperimentalconditionsbyusingtwodosesofeachofthestandardandtestproductsrespectively,andbyusingtheprincipleofgradedresponseparallellines.三劑量法

3-dosagemethod主要用于標準品的標定

Itismainlyusedforcalibrationofstandardproducts日常使用多采用二劑量法，對于有爭議結果，必須使用三劑量法測定的結果仲裁。

The2-dosemethodismostlyusedfordailyuse.Forcontroversialresults,theresultsdeterminedbythe3-dosemethodmustbeusedforarbitration.（三）操作注意事項

(III)Notesforoperation管碟法根據試驗設計不同，可分為：

Accordingtotheexperimentaldesign,Thecap-platemethodcanbecategorizedas:試驗環(huán)境：半無菌間

Testenvironment:semi-sterileroom儀器用具：雙碟、鋼管、滅菌

Instruments:doubleplates,steeltubes,sterilized試驗菌：對抗生素敏感，新鮮

Testorganisms:sensitivetoantibiotics,fresh操作次序上的誤差：滴加迅速

Errorsintheorderofoperation:rapidadditionofdrops抑菌圈的測量

Measurementoftheinhibitionzone四、二劑量法

IV.2-dosagemethod（一）操作方法

(I)operationmethod標準品溶液的制備：

Preparationofstandardproductsolutions:標準品的使用與保存，應遵循標準品使用說明書的規(guī)定。

Theuseandpreservationofstandardproductsshouldfollowtheprovisionsoftheinstructionsforuseofstandardproducts.供試品溶液的制備

Preparationoftestproductssolution例子

Example01檢驗用溶液的制備

Preparationofsolutionfortest（一）操作方法

(I)operationmethod

供試品溶液的制備：按估計效價先用稀釋液制成1000U/ml的濃溶液，再根據要求用緩沖液制成滴蝶用最終高、低濃度的溶液

Preparationoftestproductssolution:Prepareaconcentratedsolutionof1,000U/mlwithdiluentfirstaccordingtotheestimatedpotency,andthenpreparethefinalhighandlowconcentrationsforplatedroppingwithbufferasrequired.抗生素類別Categoryofantibiotics試驗菌Testbacteria培養(yǎng)基Culturemedium滅菌緩沖液pH值pHvalueofsterilizingbuffer抗生素濃度范圍單位/mlAntibioticconcentrationrangeunit/ml培養(yǎng)條件Cultureconditions編號SerialnumberpH值pHvalue溫度/℃Temperature時間/小時Time/hour慶大霉素Gentamicin短小芽孢桿菌Bacilluspumilus17.8~8.07.82.0~12.035~3714~16（一）操作方法

(I)operationmethod02菌懸液的制備自學

PreparationofbacteriumsuspensionSelf-learning03雙碟的制備在半無菌室內或超凈工作臺上進行，應注意微生物及抗生素的污染，放雙碟的臺面應用水平儀調水平。

PreparationofdoubleplatesItshouldbecarriedoutinasemi-sterileroomoronancleanbench.Attentionshouldbepaidtothecontaminationofmicroorganismsandantibiotics.Thecountertopfordoubleplatesshouldbeleveledwithagradienter.玻璃/塑料平皿(d=90mmh=16-17mm)

Glass/plasticPlate(d=90mmh=16-17mm)菌層

5ml含菌培養(yǎng)基

Bacterialayer5mlBacteria-containingculturemedium底層

20ml滅菌培養(yǎng)基

Bottomlayer

20mlSterilizedculturemedium課堂活動

ClassroomActivity雙碟制備的注意事項

Notesforthepreparationofdoubleplates播放雙碟的制備視頻

Showthevideoofthepreparationofdoubleplates知識鏈接

KnowledgeLink雙碟制備注意事項Notesforthepreparationofdoubleplates1.玻璃雙碟一定要干燥，不能有冷凝水。1.Theglassdoubleplatesmustbedry,nocondensationwater.2.刻度吸管要用砂輪將尖嘴割掉一點，變成大口后用，否則易發(fā)生堵塞。2.Graduatedpipettesshouldbeusedaftercuttingoffalittleofthepointedtipwithagrindingwheelandturningitintoalargemouth,otherwisetheyarepronetoclogging.3.冬季室溫較低，倒好底層的雙碟，待凝固后，可先放人37℃恒溫箱內溫熱，這樣倒菌層時，培養(yǎng)基易于攤布水平。3.Inwinter,withthelowroomtemperature,pourthebottomofthedoubleplate,aftersolidification,putitintothe37℃thermostattowarmup,sothatwhenpouringthebacteriallayer,theculturemediumiseasytospreadthelevel.4.搖勻菌層培養(yǎng)基時，一定注意不能搖出氣泡。4.Whenshakingtheculturemediumwell,besurenottoshakeouttheairbubbles.5.無論是倒底層還是倒菌層動作都要快，尤其是倒菌層時要更快。5.Whetheritispouringthebottomlayerorpouringthebacteriallayer,theactionshouldbefast,especiallywhenpouringthebacteriallayershouldbefaster.（一）操作方法

(I)operationmethod04放置小鋼管

Placesmallsteeltubes（一）操作方法

(I)operationmethod05滴碟、培養(yǎng)

Dripplate,culture毛細滴管（或滴管）滴碟

Capillaryburette(orburette)dripplateSH→TH→SL→TL（二）操作方法

(II)Operationmethod06測量抑菌圈雙碟透明度好，無破損和不透明現象；抑菌圈應圓滿，無破圈或圈不完整現象，否則應棄去該雙碟。

MeasurementoftheinhibitionzoneThetransparencyofthedoubleplatesisgood,withnobreakageoropacity;theinhibitionzoneshouldbecomplete,withnobrokenorincompletezone,otherwisethedoubleplatesshouldbediscarded.（三）記錄與計算

(III)Recordandcalculation01記錄試驗記錄應包括抗生素的品種、劑型、規(guī)格、標示量、生產廠商、批號、檢驗目的、檢驗依據、檢驗日期、溫度、濕度、標準品與供試品的稱量、稀釋步驟與核對人、抑菌圈測量結果。RecordThetestrecordshouldincludethetype,dosageform,specification,labeledamount,manufacturer,andbatchNo.oftheantibiotics,aswellasthetestpurpose,testbasis,testdate,temperature,humidity,weighingofstandardproductsandtestproducts,dilutionstepandchecker,andthe