腦膜炎細(xì)菌課件

流行性腦脊髓膜炎及細(xì)菌性腦脊髓膜炎實(shí)驗(yàn)室病原學(xué)檢測(cè)方法2/24/2025病理學(xué)基礎(chǔ)腦脊髓膜：由三層膜組成，保護(hù)腦和脊髓軟腦膜蛛網(wǎng)膜硬腦膜腦（脊髓）膜炎:

軟腦膜和蛛網(wǎng)膜炎癥，腦脊液呈化膿性改變（腦膜）腦炎：腦組織炎癥，多為病毒引起。2/24/2025山東省立醫(yī)院形態(tài)學(xué)觀察生物化學(xué)特征和鑒定血清分型及免疫學(xué)分類分子生物學(xué)相關(guān)檢測(cè)技術(shù)細(xì)菌檢測(cè)技術(shù)2/24/2025山東省立醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室常用方法細(xì)菌形態(tài)鏡下觀察菌落形態(tài)觀察乳膠凝集試驗(yàn)CSF沉淀物的革蘭染色和乳膠凝集試驗(yàn)可以作為腦膜炎奈瑟菌、流感嗜血桿菌和肺炎鏈球菌（三種病原體）引起的細(xì)菌性腦膜炎的初步診斷。2/24/2025山東省立醫(yī)院乳膠試劑盒在待檢標(biāo)本上滴加乳膠懸液混勻輕搖反應(yīng)觀察結(jié)果2/24/2025山東省立醫(yī)院革蘭氏染色革蘭氏染液結(jié)晶紫沖洗碘液酒精脫色復(fù)染濾紙吸水100倍油鏡2/24/2025山東省立醫(yī)院腦膜炎奈瑟菌鏡下觀察

腦脊液沉淀物或純菌落通過革蘭染色在顯微鏡下觀察細(xì)菌形態(tài):腦膜炎奈瑟菌鏡下是革蘭陰性雙球菌，成卵圓形和腎形，0.8μm×0.6μm常成對(duì)排列。2/24/2025山東省立醫(yī)院菌落形態(tài)觀察腦膜炎奈瑟菌在培養(yǎng)18～24小時(shí)后菌落直徑約1～3mm、圓形、表面突起、光滑、濕潤(rùn)、邊緣整齊、半透明、不溶血、無色素、有莢膜黏液樣。在血瓊脂上是灰白色比在巧克力瓊脂培養(yǎng)基上更不透明。2/24/2025山東省立醫(yī)院生化實(shí)驗(yàn)糖類產(chǎn)酸奈瑟球菌屬和嗜血菌屬鑒定拭條（APINH）2/24/2025山東省立醫(yī)院糖類產(chǎn)酸

奈瑟菌屬細(xì)菌產(chǎn)酸是通過氧化碳水化合物：選用四種單糖糖管（葡萄糖、麥芽糖、半乳糖、蔗糖）腦膜炎奈瑟菌產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，氧化葡萄糖、麥芽糖，不氧化蔗糖、半乳糖。2/24/2025山東省立醫(yī)院奈瑟菌屬部分菌種生化特征

產(chǎn)酸來源菌種葡萄糖麥芽糖半乳糖蔗糖腦膜炎奈瑟菌++--淋球菌+---干燥奈瑟氏菌++-+乳糖奈瑟氏菌+++-摩拉克氏菌----2/24/2025山東省立醫(yī)院奈瑟球菌屬和嗜血菌屬鑒定拭條

APINH是奈瑟菌屬、嗜血菌屬的標(biāo)準(zhǔn)鑒定系統(tǒng)，可進(jìn)行酶反應(yīng)和糖發(fā)酵等12個(gè)鑒定試驗(yàn)，按試劑盒的說明書操作。4麥?zhǔn)蠁挝患铀疂駶?rùn)環(huán)境刮取菌落0.85%生理鹽水放入槽內(nèi)滴加菌液石蠟油封閉蓋上蓋子2/24/2025山東省立醫(yī)院流感嗜血桿菌病原學(xué)：流感嗜血桿菌簡(jiǎn)稱流感桿菌，屬孤菌科嗜血桿菌屬。形態(tài)呈無色透明（或灰白色），圓形、光滑，邊緣整齊，露滴狀，且散出鼠穴的氣味菌落，有莢膜菌株的菌落呈輕度粘稠。有莢膜菌株形成光滑的菌落，并且該菌落比同樣過夜培養(yǎng)的無莢膜的菌落大2/24/2025山東省立醫(yī)院流感嗜血桿菌鏡下形態(tài)流感嗜血桿菌是一大群無動(dòng)力、無芽胞和鞭毛、呈球桿狀、桿狀或長(zhǎng)絲狀等多形性的革蘭陰性桿菌，兩端鈍圓，長(zhǎng)0.3μm～1.5μm，寬為0.3μm-0.4μm在無CO2環(huán)境中培養(yǎng)則菌落較小。2/24/2025山東省立醫(yī)院B-H培養(yǎng)基鑒定（X＋V因子鑒定）0.5麥?zhǔn)蠁挝粦腋∫?；腦心浸液（B-H）瓊脂平板上；V因子，X因子，X＋V因子2/24/2025山東省立醫(yī)院嗜血桿菌屬（Haemophilus）菌名生長(zhǎng)需求溶血作用V因子X因子流感嗜血桿菌++-埃及嗜血桿菌++-嗜沫嗜血桿菌-+-變形嗜血桿菌-+-副流感嗜血桿菌+--副變形嗜血桿菌+--雞嗜血桿菌+--豬嗜血桿菌+--副溶血嗜血桿菌+-+溶血嗜血桿菌+++杜克嗜血桿菌-+±革蘭陰性短小桿菌，呈多態(tài)性。無鞭毛，不形成芽孢。人工培養(yǎng)必須有新鮮血液成分（X因子和V因子)。僅寄生于人或動(dòng)物的粘膜上。2/24/2025山東省立醫(yī)院流感嗜血桿菌VX因子生長(zhǎng)狀態(tài)2/24/2025山東省立醫(yī)院流感嗜血桿菌API生化結(jié)果2/24/2025山東省立醫(yī)院鏈球菌鏈球菌分類甲型溶血性鏈球菌：稱甲型溶血或

溶血，

溶血環(huán)中的紅細(xì)胞并未完全溶解。多為條件致病菌。乙型溶血性鏈球菌：稱乙型溶血或

溶血，

溶血環(huán)中的紅細(xì)胞完全溶解，致病力強(qiáng)丙型鏈球菌：無溶血環(huán)，一般不致病2/24/2025山東省立醫(yī)院鏈球菌鏈球菌分類蘭氏分類：按多糖類抗原（C抗原）將鏈球菌分成A、B、C、D、E、F、G、H、K、L、M、N、O、P、Q、R、S和T群(其中缺I、J群)，近年又增加U、V群，共20群，每個(gè)群有1個(gè)或多個(gè)種。其中引起人類感染的90%鏈球菌屬于A群，而A群鏈球菌大部分是乙型溶血性鏈球菌。2/24/2025山東省立醫(yī)院鏈球菌鏡下特征肺炎鏈球菌呈矛頭狀，成雙排列，故又名肺炎雙球菌，革蘭染色陽性2/24/2025山東省立醫(yī)院鏈球菌鏡下特征剛分離的豬鏈球菌，典型的革蘭氏陽性鏈球菌，鏈長(zhǎng)達(dá)二十多個(gè)2/24/2025山東省立醫(yī)院奧普托欣敏感性試驗(yàn)如果一個(gè)α溶血菌株分離物暈輪大于14mm時(shí)，即為肺炎鏈球菌；分離物暈輪介于12mm與14mm之間，還應(yīng)該進(jìn)行膽汁溶解試驗(yàn)進(jìn)一步確認(rèn)。2/24/2025山東省立醫(yī)院金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌(Staphyloccocus

aureus

Rosenbach)是人類的一種重要病原菌，隸屬于葡萄球菌屬（Staphylococcus），可引起多種嚴(yán)重感染。金黃色葡萄球菌是人類化膿感染中最常見的病原菌，可引起局部化膿感染，也可引起肺炎、偽膜性腸炎、心包炎等，甚至敗血癥、膿毒癥等全身感染。金黃色葡萄球菌的致病力強(qiáng)弱主要取決于其產(chǎn)生的毒素和侵襲性酶2/24/2025山東省立醫(yī)院金黃色葡萄球菌菌落特征金黃色葡萄球菌營(yíng)養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好，需氧或兼性厭氧，最適生長(zhǎng)溫度37°C，最適生長(zhǎng)pH7.4,干燥環(huán)境下可存活數(shù)周。平板上菌落厚、有光澤、圓形凸起，直徑1mm-2mm。血平板菌落周圍形成透明的溶血環(huán)。2/24/2025山東省立醫(yī)院金黃色葡萄球菌鏡下形態(tài)典型的金黃色葡萄球菌為球型，直徑0.8μm左右，顯微鏡下排列成葡萄串狀。顯微圖像金黃色葡萄球菌無芽胞、鞭毛，大多數(shù)無莢膜，革蘭氏染色陽性。2/24/2025山東省立醫(yī)院金黃色葡萄球菌生化特征血漿凝固酶試驗(yàn)：玻片法：5min內(nèi)出現(xiàn)團(tuán)塊或顆粒狀凝塊時(shí)，而鹽水滴仍呈均勻混濁無凝固現(xiàn)象者為陽性，如兩者均無凝固現(xiàn)象則為陰性。凡玻片試驗(yàn)呈陰性反應(yīng)或鹽水滴與血漿滴均有凝固現(xiàn)象，再進(jìn)行試管凝固酶試驗(yàn)。。加3％過氧化氫數(shù)滴；或直接滴加3％過氧化氫于不含血液的細(xì)菌培養(yǎng)物中，立即觀察結(jié)果。有大量氣泡產(chǎn)生者為陽性。2/24/2025山東省立醫(yī)院大腸桿菌大腸埃希氏菌(E.coli)通常稱為大腸桿菌，是Escherich在1885年發(fā)現(xiàn)的，在相當(dāng)長(zhǎng)的一段時(shí)間內(nèi)，一直被當(dāng)作正常腸道菌群的組成部分，認(rèn)為是非致病菌。直到20世紀(jì)中葉，才認(rèn)識(shí)到一些特殊血清型的大腸桿菌對(duì)人和動(dòng)物有病原性2/24/2025山東省立醫(yī)院大腸肝菌菌落特征在血瓊脂平板上，有些菌株產(chǎn)生β型溶血。在鑒別性或選擇性培養(yǎng)基上形成有顏色、直徑2～3mm的光滑型菌落。2/24/2025山東省立醫(yī)院大腸桿菌鏡下形態(tài)革蘭氏陰性短桿菌，大小0.5×1～3微米。周身鞭毛，能運(yùn)動(dòng)，無芽孢2/24/2025山東省立醫(yī)院大腸桿菌生化學(xué)鑒定

該菌在雙糖鐵斜面上經(jīng)培養(yǎng)后，斜面和底層均為黃色，產(chǎn)酸產(chǎn)氣；或僅產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，無動(dòng)力API20E生化鑒定系統(tǒng)2/24/2025山東省立醫(yī)院新型隱球菌新型隱球菌（Cuyitococcus

Neofonmans）又名溶組織酵母菌(Torula

Histolytica)，是土壤，鴿類，牛乳、水果等的腐生菌，也可存在人口腔中，可侵犯人和動(dòng)物，一般為外源性感染，但也可能為內(nèi)源性感染，對(duì)人類而言，它通常是條件致病菌。氟胞嘧啶新型隱球菌性腦膜炎(cryptococcalmeningitis)是由新型隱球菌感染腦膜及腦實(shí)質(zhì)所引起的亞急性或慢性腦膜炎。是真菌性腦膜炎最常見的一種。2/24/2025山東省立醫(yī)院新型隱球菌菌落特征在沙保氏瓊脂及血瓊脂培養(yǎng)基上，于25及37℃不能生長(zhǎng)，而非病原性隱球菌在37℃不能繁殖。培養(yǎng)數(shù)日后生成酵母型菌落，初呈白色，1周后轉(zhuǎn)淡黃或棕黃、濕潤(rùn)粘稠，狀似膠汁。2/24/2025山東省立醫(yī)院新型隱球菌墨汁染色本菌在組織液或培養(yǎng)物中呈較大球形，直徑可達(dá)5-20um，菌體周圍有肥厚的莢膜，折光性強(qiáng)，一般染料不易著色，用墨汁陰性顯影法鏡檢，可見到透明莢膜包裹著菌細(xì)胞，菌細(xì)胞常有出芽，但不生成假菌絲。2/24/2025山東省立醫(yī)院“腦炎腦膜炎癥候群”涉及病原菌

匯總篇2/24/2025山東省立醫(yī)院按革蘭染色分類

革蘭染色陽性球菌：肺炎鏈球菌、豬鏈球菌、金黃色葡萄球菌革蘭染色陰性桿菌：大腸桿菌、流感嗜血桿菌革蘭染色陰性球菌：腦膜炎奈瑟菌新型隱球菌？？2/24/2025山東省立醫(yī)院按血平板溶血狀況

α型溶血：肺炎鏈球菌、（豬鏈球菌、大腸桿菌）β型溶血：金黃色葡萄球菌、豬鏈球菌γ型溶血：金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、腦膜炎奈瑟菌、流感嗜血桿菌

2/24/2025山東省立醫(yī)院“腦炎腦膜炎癥候群”涉及病原菌

疑問篇2/24/2025山東省立醫(yī)院幾個(gè)質(zhì)控的問題

培養(yǎng)基的質(zhì)控：生化反應(yīng)的質(zhì)控：2/24/2025山東省立醫(yī)院幾個(gè)非典型的問題

菌落生長(zhǎng)狀況不典型：生化反應(yīng)結(jié)果不典型：2/24/2025山東省立醫(yī)院幾個(gè)細(xì)節(jié)的問題

抗生素使用前后革蘭染色OP實(shí)驗(yàn)的培養(yǎng)條件培養(yǎng)基的更細(xì)節(jié)問題2/24/2025山東省立醫(yī)院菌株標(biāo)本上送菌株：菌種保存管、牛