TNAIA 0357-2025 谷物籽粒霉菌毒素檢測技術(shù)規(guī)程

ICS65.020CCSA011

T/NAIA團(tuán) 體 標(biāo) 準(zhǔn)T/NAIA0357-2025谷物籽粒霉菌毒素檢測技術(shù)規(guī)程DetectionproceduresformycotoxininGrains2025-01-14發(fā)布 2025-01-31實(shí)施寧夏化學(xué)分析測試協(xié)會(huì) 發(fā)布T/NAIA0357-2025T/NAIA0357-2025II前 言本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由由寧夏化學(xué)分析測試協(xié)會(huì)提出并歸口。所、寧夏回族自治區(qū)食品檢測研究院。本文件主要起草人：李彩虹、張維軍、李謙、趙子丹、葛謙、王彩艷、劉霞、開建榮、楊靜、王永宏、趙如浪、張文杰、何進(jìn)尚、王曉菁。T/NAIA0357-2025T/NAIA0357-2025PAGEPAGE1谷物籽粒霉菌毒素檢測技術(shù)規(guī)程范圍本文件規(guī)定了谷物籽粒中伏馬毒素（FB1、FB2、FB3）、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇及其乙?；苌铮―ON、3-ADON、15-ADON）、玉米赤霉烯酮（ZEN）、赭曲霉毒素A（OTA）、T-2毒素（T-2）、黃曲霉毒素（AFTB1、AFTB2）的超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（UPLC-MS/MS）測定的樣品制備、方法步驟和技術(shù)要點(diǎn)。菌毒素的檢測。規(guī)范性引用文件（有的修改單）適用于本文件。GB2761 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中真菌毒素限量GB5009.22食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中黃曲霉毒素B族和G族的測定GB5009.240食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中伏馬毒素的測定GB/T5009.1 食品衛(wèi)生檢驗(yàn)方法理化部分總GB/T5491 糧食、油料檢驗(yàn)扦樣、分樣法GB/T6682 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB/T17480 飼料中黃曲霉毒素B1的測定酶聯(lián)免疫吸附法GB/T28716 飼料中玉米赤霉烯酮的測定免疫親和柱凈化-高效液相色譜法GB/T28718 飼料中T-2毒素的測定免疫親和柱凈化-高效液相色譜法術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。原理AT-2-乙腈-水溶液定容，經(jīng)超高效液相色譜分離，串聯(lián)質(zhì)譜法測定，外標(biāo)法定量。檢測方法樣品的采集ppbGB/T5491方法執(zhí)行。樣品的保存采集的樣品應(yīng)具有代表性。采集的樣品及時(shí)檢測，對不能及時(shí)檢測的，應(yīng)置于0-4℃冷藏短期保存或-20℃保存。試劑與材料除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T6682中規(guī)定的一級(jí)水。試劑乙腈（CH3CN）：色譜純。甲醇（CH3OH）：色譜純。甲酸（CH2O2）：色譜純。乙酸銨（CH3COONH4）：色譜純。1.5g3.5g1.0g。試劑配制6.2.1 80%乙腈溶液（8+2，體積比）：20mL80mL乙腈（6.1.1）中，混勻。6.2.2 50%乙腈溶液（5+5，體積比）：50mL50mL乙腈（6.1.1）中，混勻。6.2.3 乙酸銨-甲酸水溶液（2mmol/L）：稱取0.1542g乙酸銨（6.1.4），用0.1%1000mL，搖勻。6.2.4 0.1%甲酸甲醇溶液（體積分?jǐn)?shù)）：1mL甲酸（6.1.3）用甲醇（6.1.2）mL。標(biāo)準(zhǔn)品6.3.1 FB1標(biāo)準(zhǔn)品（C34H59NO15，CAS：116355-83-0）：純度≥98%，或有證標(biāo)準(zhǔn)溶液。6.3.2 FB2標(biāo)準(zhǔn)品（C34H59NO14，CAS：116355-84-1）：純度≥97.9%，或有證標(biāo)準(zhǔn)溶液。6.3.3 FB3標(biāo)準(zhǔn)品（C34H59NO14，CAS：136379-59-4）：純度≥98.5%，或有證標(biāo)準(zhǔn)溶液。6.3.4 DON標(biāo)準(zhǔn)品（C15H20O6，CAS：51481-10-8）：純度≥99.38%，或有證標(biāo)準(zhǔn)溶液。6.3.5 3-ADON標(biāo)準(zhǔn)品（C17H22O6，CAS：50722-38-8）：純度≥99.0%，或有證標(biāo)準(zhǔn)溶液。6.3.6 15-ADON標(biāo)準(zhǔn)品（C17H22O7，CAS：88337-96-6）：純度≥99.8%，或有證標(biāo)準(zhǔn)溶液。6.3.7 ZEN標(biāo)準(zhǔn)品（C18H22O5，CAS：17924-92-4）：純度≥99.7%，或有證標(biāo)準(zhǔn)溶液。6.3.8 OTA標(biāo)準(zhǔn)品（C20H18ClNO6，CAS：303-47-9）：純度≥99.0%，或有證標(biāo)準(zhǔn)溶液。6.3.9 T-2標(biāo)準(zhǔn)品（C24H34O9，CAS：21259-20-1）：純度≥96.55%，或有證標(biāo)準(zhǔn)溶液。6.3.10 AFTB1標(biāo)準(zhǔn)品（C17H12O6，CAS：1162-65-8）：純度≥98.0%，或有證標(biāo)準(zhǔn)溶液。6.3.11 AFTB2標(biāo)準(zhǔn)品（C17H14O6，CAS：7220-81-7）：純度≥98.0%，或有證標(biāo)準(zhǔn)溶液。注：標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)可以使用滿足要求的商品化標(biāo)準(zhǔn)溶液。標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制11FB1、FB2、FB30.005、0.02、0.1、0.5、1.0mg/L、3-ADON、15-ADON0.02、0.2、0.5、1.0、2.0mg/L濃度系列；AFTB1、AFTB20.001、0.005、0.01、0.05、0.1mg/L濃度系列；ZEN、T-2、OTA0.005、0.01、0.05、0.1、0.5mg/L濃度系列的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。儀器與設(shè)備高效液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀：配有電噴霧離子源（ESI）。7.2 0.01g0.0001g。高速粉碎機(jī)：10000r/min。振蕩器。離心機(jī)：4000r/min。渦旋混合器。氮吹儀。離心管：50mL，塑料。濾膜：0.22μm，有機(jī)相。pH計(jì)。分析步驟樣品的制備將谷物籽粒按四分法縮分至1kg，全部用谷物高速粉碎機(jī)（7.3）磨碎，混勻分成2份4℃中，應(yīng)防止樣品受到污染或發(fā)生殘留物含量的變化。樣品的提取與凈化準(zhǔn)確稱取樣品2g~2.5g（0.01g）50mL離心管，加入20.00mL提取液（6.2.1），40min，加入混合凈化材料（6.1.5），1min4000r/min離5min3.00mL15mL離心管中，經(jīng)氮?dú)獯蹈珊螅?.50mL定容液（6.2.2）溶解，渦旋30s，過0.22μm（7.9）濾膜后，上機(jī)測定。液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法測定液相色譜參考條件色譜柱：T3柱，100mm×2.1mm1.8μm，或性能相當(dāng)者。柱溫：40℃。進(jìn)樣量：2μL。d）1。流A：乙酸銨-甲酸水溶液（6.2.3）。流B：0.1%甲酸甲醇溶液（6.2.4）表1 流動(dòng)相、流速及梯度洗脫參考條件時(shí)間/min流速/(mL/min)流動(dòng)相A/%流動(dòng)相B/%00.490101.00.485152.00.480206.00.4406010.00.4178311.00.4901013.00.49010質(zhì)譜參考條件a）離子源：電噴霧離子源。b）掃描方式：正離子掃描和負(fù)離子模掃描。c）5500V4500Vd）離子源溫度：550℃。霧化氣、氣簾氣、碰撞氣、輔助加熱氣均為高純氮?dú)猓褂们皯?yīng)調(diào)節(jié)各氣體流量以使質(zhì)譜靈敏度達(dá)到檢測要求。23。表2 ESI+監(jiān)測模式分析參數(shù)名稱保留時(shí)間/min定性離子對/(m/z)定量離子對/(m/z)碰撞能量/eVFB18.73722.4/334.4722.4/352.4722.4/334.45450FB210.03706.4/336.51706.4/318.61706.4/336.515054FB39.46706.4/336.50706.4/318.60706.4/336.505050DON4.26297.1/249.1297.1/203.2297.1/249.116213-ADON6.42339.2/203.2339.2/231.1339.2/203.221183-ADON6.41339.3/321.2339.3/137.1339.3/321.21219AFTB17.74313.1/285.1313.1/241.1313.1/285.13350AFTB27.50315.1/287.1315.1/259.1315.1/287.13540T-2毒素9.39484.2/305.1484.2/245.1484.2/305.11919表3 ESI-監(jiān)測模式分析參數(shù)名稱保留時(shí)間/min定性離子對/m/z定量離子對/m/z碰撞能量/eVZEN10.02317.1/175.0317.1/273.0317.1/175.0-32-27OTA10.06402.2/358.2402.2/211.0402.2/358.2-28-38定性測定用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用法對樣品進(jìn)行定性判定。在相同試驗(yàn)條件下，樣品中應(yīng)4標(biāo)物質(zhì)。表4定性確證相對離子豐度的最大允許偏差相對離子豐度>50%20%至50%10%至20%≤10%允許的相對偏差±20%±25%±30%±50%空白試驗(yàn)除不稱取試樣外，均按上述操作步驟同時(shí)進(jìn)行。標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作在8.3.1、8.3.2液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀分析條件下，將混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液由低到高濃度進(jìn)樣檢測，以11種毒素色譜峰的峰面積與濃度作圖，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程，其線性相關(guān)系數(shù)應(yīng)大于0.99。試樣溶液的測定8.3.1、8.3.28.2處理得到的待測溶液進(jìn)樣，試定。結(jié)果計(jì)算和表達(dá)按式（1）計(jì)算試樣中各霉菌毒素的含量，計(jì)算結(jié)果需將空白值扣除。XACSV1V3 （1）ASmV2式中：X——試樣中霉菌毒素的含量，單位為毫克每千克（mg/kg）；A——試樣中霉菌毒素的峰面積；V1——試樣中加入的提取溶液體積，單位為毫升（mL）；V2分取溶液體積，單位為毫升（mL）；V3定容溶液體積，單位為毫升（mL）；CS——標(biāo)準(zhǔn)工作液中霉菌毒素的濃度，單位為微克每毫升（μg/mL）；AS——標(biāo)準(zhǔn)工作液中霉菌毒素的峰面積；m——試樣的質(zhì)量，單位為克（g）。注：測定結(jié)果用平行測定的算術(shù)平均值表示，保留三位有效數(shù)字。精密度15%。定量限FB1、FB2、FB3、ZEN、OTA、T-2、AFTB1、AFTB20.001mg/kg，DON、3-ADON、15-ADON