《黃精及其提取物中薯蕷皂苷含量的測定 高效液相色譜法》（征求意見稿）

1T/GDFCA081—2025黃精及其提取物中薯蕷皂苷含量的測定高效液相色譜法本文件描述了用高效液相色譜測定黃精和黃精提取物中薯蕷皂苷含量的方法，包括方法的原理、試劑和材料、儀器和設備、試樣的制備、分析步驟、結果計算、精密度等要求。本文件適用于黃精及其提取物中薯蕷皂苷含量的測定，其他植物性食品及中藥材可參照執(zhí)行。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規(guī)范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法3術語和定義本文件沒有需要界定的術語和定義。4原理試樣經(jīng)表面活性劑浸泡一定時間后超聲輔助提取，再經(jīng)正丁醇液-液萃取，濃縮、復溶，經(jīng)微孔濾膜過濾，采用液相色譜分離，紫外檢測器檢測，外標法定量。5試劑和材料除另有說明外，所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的一級水。5.1十二烷基硫酸鈉（C12H25SO4Na，CAS號：151-21-3）。5.2正丁醇（CH3(CH2)3OH，CAS號：71-36-3)：色譜純。5.3乙腈（C2H3N，CAS號：75-05-8）：色譜純。5.4甲醇（CH3OH，CAS號：67-56-1）：色譜純。5.5氯化鈉（NaCl，CAS號：7647-14-5）。5.6高氯酸（HClO4OH，CAS號：7601-90-3）。5.7十二烷基硫酸鈉溶液（0.024mol/L稱取6.9g十二烷基硫酸鈉（5.1）及5.85g氯化鈉（5.5用水溶解并定容至1000mL。5.8薯蕷皂苷對照品（C45H72O16，CAS號：19057-60-4），純度≥98%。5.9對照品溶液（500mg/L）：準確稱取5.0mg（精確至0.1mg）薯蕷皂苷標準品（5.8），用甲醇（5.4）溶解，定容至10mL，混勻，4℃冰箱可保存5天。6儀器和設備6.1高效液相色譜儀：配紫外檢測器（或二極管陣列檢測器）。6.2分析天平：感量0.01mg和0.001g。6.3水浴鍋。6.4高速粉碎機。6.5超聲波清洗器。2T/GDFCA081—20256.6離心機：轉速不低于5000r/min。6.7旋轉蒸發(fā)儀。6.8微孔濾膜：0.22μm，有機相型。6.9其它實驗室常用器皿：如離心管、雞心瓶等。7測定步驟7.1試樣制備取固體樣品50g，粉碎后使其全部可通過80目標準網(wǎng)篩，放入聚乙烯瓶或袋中，密封，并標明標記，于常溫下保存。7.2前處理7.2.1準確稱取試樣1g（精確至0.001g）于50mL離心管中，加入25mL十二烷基硫酸鈉溶液（5.7）浸泡8h后，在30℃條件下超聲輔助提取40min。7.2.2超聲提取完成的黃精粉末試樣溶液若不足25mL，則加入十二烷基硫酸鈉溶液（5.7）補足至25mL，經(jīng)5000r/min離心3min，轉移上清液至另一50mL離心管中，分別加入20mL正丁醇萃取兩次，合并兩次上層萃取液至100mL平底燒瓶中。7.2.3將萃取液于40℃水浴旋轉蒸發(fā)至近干，加入20mL甲醇（5.4）溶解殘渣，溶液過0.22μm有機相濾膜，用于測定。7.3液相色譜參考條件7.3.1色譜柱：C18色譜柱（250mm×4.6mm，5μm），或性能相當者。7.3.2柱溫：30℃。7.3.3檢測波長：203nm。7.3.4進樣量：10μL。7.3.5流動相及梯度洗脫條件見表1。表1流動相及梯度洗脫條件07.4標準曲線的制作分別準確移取經(jīng)超聲、渦旋溶解的薯蕷皂苷對照品溶液40μL、100μL、200μL、400μL、1000μL、2000μL至10mL容量瓶中，用初始流動相定容至刻度，薯蕷皂苷的濃度為2μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、50μg/mL、100μg/mL。依次由低到高濃度進樣檢測。以待測物標準溶液峰面積為縱坐標，相應的標準溶液濃度為橫坐標，繪制標準曲線。計算回歸方程和相關系數(shù)。7.5試樣溶液的測定將試樣溶液注入高效液相色譜儀，根據(jù)保留時間和吸收光譜圖定性，外標法峰面積定量。待測樣液中的響應值應在標準曲線線性范圍內，超過線性范圍的則應稀釋后重新進樣分析。7.6空白試驗不稱取試樣，按7.2-7.5的步驟做空白實驗，確認不含有干擾待測組分的物質。8結果計算3T/GDFCA081—2025試樣中薯蕷皂苷的含量按式（1）計算，計算結果需扣除空白值：式中：?——試樣中薯蕷皂苷含量，單位為毫克每千克（mg/kg）；?——由標準曲線得到的試樣溶液中薯蕷皂苷的質量濃度，單位為微克每毫升(μg/mL?——試樣溶液定容體積，單位為毫升（mL）；?——試樣的取樣量，單位為克（g）。計算結果保留三位有效數(shù)字。9精密度在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算數(shù)平均值的10%。10其他本方法薯蕷皂苷濃度在2μg/mL~100μg/mL范圍內，其回收率要求為80%~120%，稱取試樣1.0g，定容體積為