2025年高考生物答題技巧與模板構(gòu)建 題型05 生物技術(shù)與功能類3大模板（解析版）

題型05生物技術(shù)與功能類模板01利用PCR技術(shù)獲取目的基因模板02利用PCR技術(shù)鑒定目的基因的連接方式模板01利用PCR技術(shù)獲取目的基因模板02利用PCR技術(shù)鑒定目的基因的連接方式模板03利用PCR技術(shù)引導基因定點突變識·命題特點明命題特點、窺命題預測明·答題模板答題要點+答題技巧+模板運用練·高分突破模板綜合演練，快速技巧突破本節(jié)導航命題點真題在線常見設問/關(guān)鍵詞微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)2023·全國乙·T372022·天津·T32021·天津·T1設問關(guān)鍵詞：常規(guī)PCR、重疊延伸PCR、熒光定量PCR發(fā)酵工程的原理及應用2023·山東·T202022·湖北·T132022·山東·T20基因工程的基本工具2023·新課標·T62021·全國乙·T382021·湖北·T7基因工程的應用2022·河北·T242022·廣東·T222022·全國乙·T382021·河北·T24動物細胞融合和單克隆抗體的制備2023·北京·T12023·湖北·T222022·山東·T152022·福建·T132021·山東·T152021·江蘇·T112020·全國Ⅰ·T38植物細胞工程的應用2023·山東·T14幾種不同PCR的應用2023·江蘇·T222023·山東·T252022·江蘇·T242022·山東·T252021·全國甲·T382021·山東·T252020·北京·T122020·江蘇·T33命題預測PCR技術(shù)是近年高考熱點，常涉及對PCR基本過程、引物的選擇、多種PCR的應用關(guān)鍵技巧掌握PCR過程的基本原理模板01利用PCR技術(shù)獲取目的基因獲取目的基因是基因工程操作的第一步。獲取目的基因的方法有多種，現(xiàn)在常用PCR特異性地快速擴增目的基因。PCR是聚合酶鏈式反應的縮寫。它是一項根據(jù)DNA半保留復制的原理，在體外提供參與DNA復制的各種組分與反應條件，對目的基因的核苷酸序列進行大量復制的技術(shù)。該技術(shù)由穆里斯等人于1985年發(fā)明，為此，穆里斯于1993年獲得了諾貝爾化學獎。技巧01利用PCR技術(shù)獲取目的基因1．（2024·河南·模擬預測）數(shù)字PCR技術(shù)被稱為第三代PCR,在核酸定量檢測中具有突出優(yōu)勢。該技術(shù)通過將一個樣本稀釋分成幾十至幾萬份，并分配到不同的反應單元，每個單元包含一個或多個拷貝的目標分子(DNA模板)，在每個反應單元中分別對目標分子進行PCR擴增，擴增結(jié)束后對各個反應單元的熒光信號進行統(tǒng)計學分析，計算初始樣品中靶標分子的拷貝數(shù)。據(jù)此分析，下列說法正確的是（）A．數(shù)字PCR技術(shù)僅適用于樣本中目標分子含量較高的材料B．數(shù)字PCR技術(shù)遵循的基本原理是DNA的邊解旋邊復制C．每個單元中加入等量的4種核糖核苷酸溶液作為擴增原料D．每個單元中目標分子的兩條子鏈合成都是從5'端向3'端延伸【答案】D【思路詳解】A、數(shù)字PCR技術(shù)把檢測樣本稀釋后分配到不同的反應單元，在每個單元進行一個或多個目標分子擴增，再對每個單元的擴增結(jié)果綜合分析，計算初始樣品中靶標分子的拷貝數(shù)。該技術(shù)對高、中、低水平的目標分子含量的材料均可實現(xiàn)正確、精密的測定，A錯誤；B、數(shù)字PCR技術(shù)遵循的基本原理是DNA半保留復制，B錯誤；CD、每個反應單元中分別對目標分子進行PCR擴增，需要加入4種脫氧核苷酸的等量混合液、與目標分子特異性結(jié)合的兩種引物和TaqDNA聚合酶等，兩條子鏈合成是從兩種引物的3'端開始連接脫氧核苷酸，C錯誤、D正確。（2024·安徽蕪湖·二模）不對稱PCR是利用不等量的一對引物來產(chǎn)生大量單鏈DNA（ssDNA）的方法。加入的一對引物中含量較少的被稱為限制性引物，含量較多的被稱為非限制性引物。PCR反應最初的若干次循環(huán)中，其擴增產(chǎn)物主要是雙鏈DNA（dsDNA），但當限制性引物消耗完后，就會產(chǎn)生大量的ssDNA。不對稱PCR的簡單過程如圖所示。假設模板DNA分子初始數(shù)量為a個，6次循環(huán)后開始擴增產(chǎn)生ssDNA。下列有關(guān)敘述錯誤的是（

）A．限制性引物和非限制性引物均可與模板DNA單鏈結(jié)合B．不對稱PCR循環(huán)6次需要消耗（26-1）a個限制性引物C．最后獲得的ssDNA中不含非限制性引物D．子鏈的延伸都是從兩種引物的3'端開始的【答案】C【詳解】A、據(jù)圖可知，限制性引物和非限制性引物均可與模板DNA單鏈結(jié)合，A正確；B、PCR擴增時引物是新子鏈的一部分，假設模板DNA分子初始數(shù)量為a個，6次循環(huán)后產(chǎn)生26個DNA分子，因此該不對稱PCR過程中需要（26-1）·a個限制性引物，B正確；C、據(jù)圖可知，除模板鏈外，最終獲得的ssDNA都是以乙鏈為模板合成的，因此，除模板鏈外，最終獲得的ssDNA中都有非限制性引物，C錯誤；D、PCR技術(shù)的原理是DNA的半保留復制，DNA復制過程中，子鏈的延伸都是從引物的3'端開始的，D正確。模板02利用PCR技術(shù)鑒定目的基因的連接方式檢測目的基因在受體細胞內(nèi)是否穩(wěn)定存在是基因工程操作的重要步驟，可以借助載體上的標記基因、PCR技術(shù)和核酸分子雜交技術(shù)等方法鑒定受體細胞中是否轉(zhuǎn)入了目的基因。在實際操作中，PCR技術(shù)不僅可以精準地鑒定受體細胞是否轉(zhuǎn)入目的基因，還可以通過引物的巧妙設計鑒定目的基因的連接方式。【補充】利用PCR技術(shù)快速檢測病原體病原體檢測是診斷和控制傳染病的重要手段，為迅速而準確地確定病原體的存在和種類，發(fā)展了許多快速檢測方法。PCR技術(shù)是一種基于DNA擴增原理的快速病原體檢測方法，它能夠在幾小時內(nèi)擴增和檢測極小量的病原體DNA，并且具備高度的特異性和敏感性。技巧02利用PCR技術(shù)鑒定目的基因的連接方式（2024·廣西·模擬預測）現(xiàn)將XplA和XplB兩種能降解彈藥使用后殘留的危險污染物的基因轉(zhuǎn)入實彈射擊場的柳枝稷草中。若要通過PCR檢測所獲轉(zhuǎn)基因柳枝稷草中是否含有正確插入的XplA和XplB基因，應選擇的引物組合是（

）A．引物1+引物3 B．引物1+引物2C．引物2+引物3 D．引物3+引物4【答案】A【思路詳解】根據(jù)啟動子的位置，若正確插入，模板鏈應為題甲圖中下鏈，則引物1應與下鏈的3'端結(jié)合，引物3可以結(jié)合題甲圖上鏈的3'端，若XplA和XplB基因正確插入，則使用引物1+引物3可通過PCR擴增出XplA和XplB基因融合片段，若Xp1A和XplB基因其中一個基因反接或者兩個都基因反接，通過PCR均無法擴增出Xp1A和XplB基因融合片段，因此，使用引物1+引物3通過PCR可檢測所獲轉(zhuǎn)基因柳枝稷草中是否含有正確插入的Xp1A和XplB基因，A正確；BCD錯誤。（2024·浙江紹興·一模）免疫PCR是對微量抗原的一種檢測方法。下圖是利用該技術(shù)檢測牛乳中微量抗生素的流程圖：首先將抗體1固定在微板上，沖洗后加入待檢的牛乳，再加入DNA標記的抗體2，進行PCR擴增，最后進行電泳檢測。下列相關(guān)敘述錯誤的是（）A．PCR擴增中延伸時間取決于引物的長度B．引物濃度大小會影響PCR擴增獲得產(chǎn)物的數(shù)量C．圖示過程中三次沖洗的目的均不同D．圖示抗原檢測過程發(fā)生兩次抗原與抗體的結(jié)合【答案】A【詳解】A、PCR延伸時間取決于引物與模板結(jié)合的溫度，A錯誤；B、復制需要引物與模板結(jié)合，每條DNA鏈復制都需要消耗一個引物，故引物濃度大小會影響PCR擴增獲得產(chǎn)物的數(shù)量，B正確；C、圖示過程，第一次沖洗是為了去除未結(jié)合的抗體1，第二次沖洗是為了去除未結(jié)合的抗生素和牛奶成分，第三次沖洗是為了去除未結(jié)合的抗體2，三次沖洗的目的均不同，C正確；D、據(jù)圖可知，圖示抗原檢測過程分別與抗體1和抗體2結(jié)合了一次，共發(fā)生兩次抗原與抗體的結(jié)合，D對。模板03利用PCR技術(shù)引導基因定點突變重疊延伸PCR技術(shù)是指在PCR技術(shù)的基礎上，采用具有互補末端的引物，使PCR產(chǎn)物形成了重疊鏈，通過重疊鏈的延伸，將不同來源的片段重疊拼接起來的一項新技術(shù)。該技術(shù)在基因的定點突變、長片段基因的合成、基因敲除以及目的基因的擴增等方面有著獨特的應用?！狙a充】利用PCR技術(shù)擴增未知基因序列利用PCR技術(shù)進行基因擴增時，為了便于設計引物，要求目的基因兩側(cè)的序列是已知的。當DNA的某些序列已知，而需要擴增已知序列兩端的未知序列時，可采用反向PCR技術(shù)。技巧03利用PCR技術(shù)引導基因定點突變反向PCR是一種通過已知序列設計引物對未知序列進行擴增的技術(shù)，其過程如下圖所示。下列敘述正確的有（

）

A．應選擇引物1和引物4進行PCR擴增B．設計的引物中GC堿基含量越高，退火溫度越低C．PCR產(chǎn)物是包含所有已知序列和未知序列的環(huán)狀DNA分子D．在環(huán)化階段，可選E.coliDNA連接酶而不能選T4DNA連接酶【答案】A【思路詳解】A、DNA子鏈合成的方向為5'端到3'端，因此要通過已知序列設計引物對未知序列進行擴增應選擇引物1和引物4進行PCR擴增，A正確；B、GC堿基含量越高，堿基對間氫鍵的含量越多，退火的溫度越高，B錯誤；C、PCR產(chǎn)物是包含所有已知序列和未知序列的鏈狀DNA分子，C錯誤；D、在環(huán)化階段，因為圖示的末端為黏性末端，因此，既可選E.coliDNA連接酶也可選T4DNA連接酶，D錯。（2024·廣西·模擬預測）基因定點突變的目的是通過定向地改變基因內(nèi)一個或少數(shù)幾個堿基來改變多肽鏈上一個或幾個氨基酸。該技術(shù)是蛋白質(zhì)工程的重要技術(shù)，圖示為利用PCR技術(shù)進行定點突變的流程，相關(guān)敘述錯誤的是（

）

注：引物1和引物3的突起處代表與模板不能互補的突變位點，而這兩條引物有部分堿基(包括突變位點)是可以互補的。A．酶①應為耐高溫DNA聚合酶，引物X和Y為引物2和4B．將四種引物置于同一個反應系統(tǒng)中同時進行第一個階段的反應C．第一階段PCR過程中需要進行兩次循環(huán)才能得到兩種所需的DNA片段D．通過該技術(shù)獲得的突變基因可以表達出原來自然界不存在的蛋白質(zhì)【答案】B【詳解】A、酶①要在高溫條件下延伸DNA，所以酶①為耐高溫的DNA聚合酶，由圖可知，要得到兩條鏈一樣長的DNA單鏈，應選擇引物2和引物4，所以引物X和Y應該為引物2和4，A正確；B、引物3和引物1是完全互補的，不能放入同一個體系，B錯誤；C、第一階段要獲得的DNA是目的DNA的一段，且不是中間的一段，故需要兩次循環(huán)可以獲得，C正確；D、通過該技術(shù)可獲得突變的基因，該基因的產(chǎn)物可能是自然界原來不存在的，D正確。1．發(fā)酵工程在食品、醫(yī)藥、農(nóng)牧業(yè)等方面有著廣泛地應用，下列有關(guān)說法正確的是（

）A．發(fā)酵工程的中心環(huán)節(jié)是滅菌，防止雜菌污染B．pH能影響發(fā)酵產(chǎn)物，谷氨酸的發(fā)酵生產(chǎn)過程中，堿性條件下易產(chǎn)生谷氨酰胺C．啤酒生產(chǎn)中的焙烤、蒸煮環(huán)節(jié)既可以殺菌，又可以使所有酶失活D．微生物飼料中的單細胞蛋白除蛋白質(zhì)外還含有糖類、脂質(zhì)、維生素等【答案】D【詳解】A、發(fā)酵工程的中心環(huán)節(jié)主發(fā)酵，獲取發(fā)酵產(chǎn)物，A錯誤；B、pH能影響發(fā)酵產(chǎn)物，利用液體深層培養(yǎng)進行谷氨酸發(fā)酵生產(chǎn)應在中性或弱堿性條件下進行，在酸性條件下則容易形成谷氨酰胺和N-乙酰谷氨酰胺，B錯誤；C、焙烤是為了去除大麥種子中的水分，可以殺死大麥種子胚，但沒有起到滅菌作用，也不能使淀粉酶失活，C錯誤；D、以淀粉或纖維素的水解液、制糖工業(yè)的廢液等為原料，通過發(fā)醛能獲得單細胞蛋白，單細胞蛋白含有豐富的蛋白質(zhì)、糖類、脂質(zhì)和維生素等物質(zhì)，可以用作食品添加劑，D正確。2．“細菌喜葷，霉菌喜素”，一般來說，在培養(yǎng)細菌時，需添加動物性營養(yǎng)物質(zhì)，如蛋白胨等；而在培養(yǎng)霉菌時，一般需要添加植物性營養(yǎng)成分，如豆芽汁。下列相關(guān)敘述不正確的是（

）A．蛋白胨為細菌提供碳源、氮源和特殊營養(yǎng)物質(zhì)B．細菌和霉菌體內(nèi)的酶存在差異，導致二者偏好的營養(yǎng)成分不同C．分別培養(yǎng)細菌和霉菌時，需將培養(yǎng)基調(diào)節(jié)至相同的pHD．若需要比較細菌和霉菌形成的菌落差異，培養(yǎng)基中還需添加瓊脂【答案】C【詳解】A、蛋白胨富含營養(yǎng)物質(zhì)，為細菌提供碳源、氮源和特殊營養(yǎng)物質(zhì)，A正確；B、酶具有專一性，細菌和霉菌體內(nèi)的酶存在差異，導致二者偏好的營養(yǎng)成分不同，B正確；C、培養(yǎng)細菌時需將培養(yǎng)基的pH調(diào)至中性或弱堿性，培養(yǎng)霉菌時需將培養(yǎng)基的pH調(diào)至酸性，C錯誤；D、在固體培養(yǎng)基上能形成菌落，若需要比較細菌和霉菌形成的菌落差異，培養(yǎng)基中還需添加瓊脂，D正確。3．如圖是老陳醋的生產(chǎn)流程，下列相關(guān)敘述正確的是（）A．蒸熟的高粱米應先加入大曲再冷卻B．“糖化”是將高粱中的淀粉等大分子氧化分解為小分子，為酒精發(fā)酵提供原料C．“醋醅”中含有的醋酸菌，是一種異養(yǎng)的單細胞真核生物D．“醋酸發(fā)酵”步驟中每天翻料兩次，可為醋酸菌提供更多氧氣【答案】D【詳解】A、高粱蒸熟后溫度較高，不冷卻直接投入發(fā)酵菌種會造成菌種大量死亡，影響發(fā)酵效率，應先冷卻再加入大曲，A錯誤；B、糖化是將淀粉等大分子物質(zhì)通過水解酶的作用轉(zhuǎn)化為可發(fā)酵的小分子糖（如葡萄糖），而不是氧化分解，B錯誤；C、醋酸菌是細菌，是一種異養(yǎng)的單細胞原核生物，C錯誤；D、醋酸發(fā)酵需要氧氣，所以每天翻料兩次，可為醋酸菌提供更多氧氣，D正確。4．下列關(guān)于細胞工程的說法正確的是（）A．體外培養(yǎng)的動物細胞形態(tài)相比體內(nèi)正常細胞可能會發(fā)生改變B．作物脫毒苗培養(yǎng)時先誘導愈傷組織生根，再誘導生芽C．iPS細胞都是通過將外源基因?qū)塍w細胞獲得的D．離心法收集細胞只能用于傳代培養(yǎng)細胞的收集【答案】A【詳解】A、體外培養(yǎng)的動物細胞由于缺少體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的生理和生化條件，可能形態(tài)、功能發(fā)生改變，如變扁平或失去特異性等，比體內(nèi)正常細胞可能會發(fā)生改變，A正確；B、作物脫毒苗培養(yǎng)過程中，通常是先誘導愈傷組織形成芽，然后再誘導生根。這是因為在植物組織培養(yǎng)過程中，愈傷組織的再分化通常是先進行芽的誘導，再進行生根的誘導，兩者的順序不能顛倒。因此，題干中的說法是錯誤的，B錯誤；C、iPS細胞（誘導多能干細胞）并不一定都需要通過外源基因?qū)塍w細胞獲得。除了通過引入特定外源基因來誘導體細胞去分化外，還有一些非基因?qū)氲姆椒?，如使用小分子化合物或通過蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)染等手段，同樣可以將體細胞誘導為多能干細胞，C錯誤；D、在傳代培養(yǎng)時可用胰蛋白酶使細胞從瓶壁上脫離，懸浮培養(yǎng)的細胞也可直接用離心法收集，離心法收集細胞不是只能用于傳代培養(yǎng)細胞的收集，也可用于收集藥物處理過的細胞等，D錯誤；5．肝細胞中的延胡索酰乙酰乙酸水解酶基因突變會導致酪氨酸血癥。下圖是研究人員利用基因編輯技術(shù)糾正病人來源肝細胞，成功治療酪氨酸血癥小鼠的過程，為治療人類酪氨酸血癥奠定理論基礎。相關(guān)敘述準確的是（）A．酪氨酸血癥的發(fā)生說明基因能通過控制蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)控制生物性狀B．過程②需在培養(yǎng)液中添加瓊脂、葡萄糖、干擾素動物血清等物質(zhì)C．過程③需敲入正常的延胡索酰乙酰乙酸水解酶基因，并敲除相關(guān)抗原基因D．基因編輯后的人源肝細胞植入小鼠分化為完整肝臟，是治療小鼠酪氨酸血癥的關(guān)鍵【答案】C【詳解】A、酪氨酸血癥是由于肝細胞中的延胡索酰乙酰乙酸水解酶基因突變，導致酶不能正常合成，進而影響代謝過程，這說明基因能通過控制酶的合成來控制代謝，進而控制生物性狀，而不是控制蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)，A錯誤；B、動物細胞培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)液中需要添加葡萄糖、動物血清等物質(zhì)，但不需要添加瓊脂，瓊脂是用于植物組織培養(yǎng)的凝固劑，B錯誤；C、過程③基因編輯是為了糾正病人來源肝細胞，所以需要敲入正常的延胡索酰乙酰乙酸水解酶基因，同時敲除相關(guān)抗原基因，以避免免疫排斥反應，C正確；D、基因編輯后的人源肝細胞植入小鼠后，是通過肝細胞發(fā)揮正常功能來治療小鼠酪氨酸血癥，而不是分化為完整肝臟，D錯誤。6．堿性磷酸酶是抗腫瘤藥物多柔比星前體的專一性活化酶，將堿性磷酸酶與單克隆抗體制成“生物導彈”，使多柔比星前體在腫瘤細胞處被活化，對其DNA造成損傷，抑制以DNA為模板進行的生理活動，達到治療腫瘤的目的。下列敘述正確的是（

）A．給小鼠注射多柔比星前體后，可從脾臟中得到能產(chǎn)生腫瘤抗體的B細胞B．制備單克隆抗體的過程中需用特定的選擇培養(yǎng)基和抗體檢測進行篩選C．“生物導彈”利用了堿性磷酸酶的定向制導作用和單克隆抗體的特異性殺傷能力D．多柔比星前體活化后可直接抑制腫瘤細胞的DNA復制和翻譯，而抑制其無限增殖【答案】B【詳解】A、給小鼠注射多柔比星前體后，可從脾臟中得到能產(chǎn)生抗多柔比星前體抗體的B細胞，A錯誤；B、制備單克隆抗體過程中需用特定的選擇培養(yǎng)基（獲取B-瘤雜交瘤細胞）和抗體檢測進行篩選，B對；

C、“生物導彈”利用了堿性磷酸酶的特異性殺傷能力和單克隆抗體的定向制導作用，C錯誤；D、依據(jù)題干信息，多柔比星前體在腫瘤細胞處被活化，對其DNA造成損傷，抑制以DNA為模板進行的生理活動，達到治療腫瘤的目的，所以多柔比星前體活化后可直接抑制腫瘤細胞的DNA復制和轉(zhuǎn)錄，間接抑制翻譯過程，進而抑制其無限增殖，D錯誤。7．下列關(guān)于動物細胞融合和單克隆抗體制備的敘述，錯誤的是（）A．滅活的病毒可與細胞質(zhì)膜發(fā)生作用，從而誘導細胞融合B．用特定抗原免疫小鼠后；可從其骨髓中分離出漿細胞，用于細胞融合C．產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細胞可在小鼠體內(nèi)培養(yǎng)，從腹水中提取抗體D．單克隆抗體可高度特異性地識別抗原，從而輔助腫瘤診斷【答案】B【詳解】A、某些滅活病毒表面的糖蛋白和一些酶與細胞膜上的糖蛋白發(fā)生作用，使細胞相互凝聚，細胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細胞膜打開，細胞發(fā)生融合，A正確；B、用特定抗原免疫小鼠后；可從其脾臟中分離出B細胞，用于細胞融合，B錯誤；C、產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細胞可在小鼠體內(nèi)培養(yǎng)，在小鼠的腹水中獲取單克隆抗體，C正確；D、根據(jù)抗原抗體特異性結(jié)合的原理，單克隆抗體可高度特異性地識別抗原，從而輔助腫瘤診斷，D正確。8．黑曲霉多不耐高溫，發(fā)酵獲得檸檬酸的過程需大量冷卻水控制溫度，生產(chǎn)成本高?，F(xiàn)利用原生質(zhì)體融合技術(shù)獲得耐高溫高產(chǎn)黑曲霉，過程如圖所示。下列敘述正確的是（

）

A．處理①培養(yǎng)基中黃色圈大的菌落不一定為高產(chǎn)菌株B．處理②、③用纖維素酶和果膠酶去除細胞壁C．處理④升高溫度即可篩選出耐高溫高產(chǎn)黑曲霉D．發(fā)酵結(jié)束后通過適當?shù)倪^濾、沉淀等方法獲得檸檬酸【答案】A【詳解】A、誘變的原理是基因突變，而基因突變具有不定向性，故處理①培養(yǎng)基中黃色圈大的菌落不一定為高產(chǎn)菌株，A正確；B、黑曲霉的細胞壁成分不是纖維素和果膠，故處理②、③不可以用纖維素酶和果膠酶去除細胞壁，B錯；C、處理④升高溫度后海需要進一步驗證才能篩選出耐高溫高產(chǎn)黑曲霉，C錯誤；D、發(fā)酵工程生產(chǎn)的產(chǎn)品有兩類：一類是代謝產(chǎn)物，另一類是菌體本身。如果產(chǎn)品是菌體，可采用過濾，沉淀等方法將菌體從培養(yǎng)液中分離出來；如果產(chǎn)品是代謝產(chǎn)物，可用萃取、蒸餾、離子交換等方法進行提取，可見題圖發(fā)酵結(jié)束后不能通過適當?shù)倪^濾、沉淀等方法獲得檸檬酸，D錯誤。9．抗體一藥物偶聯(lián)物，也就是ADC，又被稱為“生物導彈”，由單克隆抗體、細胞毒性藥物以及兩者之間的連接物共3個部分組成。下列敘述正確的是（）A．該抗體一藥物偶聯(lián)物能識別腫瘤細胞上的各種膜蛋白性.B．經(jīng)步驟①篩選得到的雜交瘤細胞具有的特點是能準確識別抗原的細微差異并能大量制備C．ADC起作用時會被細胞吞噬，并在溶酶體內(nèi)被分解后釋放藥物D．誘導骨髓瘤細胞與脾臟中的細胞融合，可用的誘導因素只有滅活的病毒【答案】C【詳解】A、抗體具有特異性，即只能識別并結(jié)合特定的抗原。因此，該抗體-藥物偶聯(lián)物（ADC）只能識別腫瘤細胞上特定的膜蛋白抗原，而不是各種膜蛋白，A錯誤；B、經(jīng)步驟①篩選得到的雜交瘤細胞不一定能準確識別抗原的細微差異，B錯誤；C、抗體一藥物偶聯(lián)物(ADC)通常由負責選擇性識別癌細胞表面抗原的抗體，負責殺死癌細胞的藥物有效載荷，以及連接抗體和有效載荷的連接子三個部分組成，ADC起作用時會被細胞吞噬，并在溶酶體內(nèi)被分解后釋放藥物，C正確；D、在誘導骨髓瘤細胞與脾臟中的細胞融合時，可用的誘導因素有PEG融合法、電融合法、滅活病毒誘導法，D錯誤。10．如圖是我國科學家培育克隆猴“中中”“華華”的過程，Kdm4d為組蛋白去甲基化酶基因、TSA為組蛋白脫乙酰酶抑制劑。下列說法錯誤的是（）A．各種動物胚胎移植的最佳時期不盡相同，一般是在原腸胚期前B．滅活的仙臺病毒可誘導體細胞和去核卵母細胞融合C．Kdm4d的mRNA和TSA的作用是對組蛋白進行表觀遺傳修飾來調(diào)控相關(guān)基因表達D．克隆猴和核供體所具有的微小差異來自基因突變或者染色體變異【答案】D【詳解】A、不同的動物胚胎移植的時間不同，例如，牛、羊一般要培養(yǎng)到16細胞階段（桑葚胚）或囊胚階段才能進行移植，小鼠和家兔等實驗動物可在更早的階段移植，人的體外受精胚胎即試管胚胎，可在4細胞階段移植；可見各種動物胚胎移植的最佳時期不盡相同，一般是在原腸胚期前，A正確；B、滅活的仙臺病毒可以誘導動物細胞融合，因此，將胎猴的體細胞注入去核的卵母細胞前，可以用滅活的仙臺病毒處理的目的是誘導細胞融合，B正確；C、組蛋白去甲基化酶Kdm4d的mRNA可以表達組蛋白去甲基化酶，該酶能降低組蛋白的甲基化水平，組蛋白脫乙酰酶抑制劑TSA可以抑制組蛋白脫乙酰酶的作用，提高組蛋白的乙?；剑瑑煞N物質(zhì)都可以通過改變組蛋白的表觀遺傳修飾來調(diào)控基因表達，C正確；D、克隆猴與核供體所具有的微小差異最可能來自卵母細胞的細胞質(zhì)差異或是表觀遺傳，D錯誤。11．某小組通過PCR（假設引物長度為8個堿基，短于實際長度）獲得了含有目的基因的DNA片段，并用限制酶進行酶切（如圖），再用所得片段與質(zhì)粒連接成功構(gòu)建了基因表達載體。下列敘述正確的是（

）A．其中一個引物序列為3'-TGCGCAGT-5'B．步驟①所用的酶是SpeI和CfoIC．用步驟①的酶對質(zhì)粒進行酶切，至少獲得2個片段D．構(gòu)建基因表達載體時需要使用限制酶和DNA聚合酶【答案】C【詳解】A、由于引物只能引導子鏈從5＇到3＇，根據(jù)堿基互補配對原則，其中一個引物序列為5＇TGCGCAGT-3＇，A錯誤；B、根據(jù)三種酶的酶切位點，左側(cè)的黏性末端是使用NheI切割形成的，右邊的黏性末端是用CfoI切割形成的，B錯誤；C、用步驟①的酶對載體進行酶切，使用了NheI和CfoI進行切割，根據(jù)其識別位點以及原本DNA的序列，切割之后至少獲得了2個片段，C正確；D、構(gòu)建基因表達載體時需要使用限制酶和DNA連接酶，D錯誤。12．紫外線引發(fā)的DNA損傷，可通過“核苷酸切除修復（NER）”方式修復，機制如圖所示。著色性干皮癥（XP）患者的NER酶系統(tǒng)存在缺陷，受陽光照射后，皮膚易出現(xiàn)炎癥，進而發(fā)展成皮膚癌。下列敘述錯誤的是（）

A．圖中切口的產(chǎn)生應是限制酶的作用B．填補缺口時，新鏈合成以5'到3'的方向進行C．在DNA復制時可以進行缺口修復D．XP患者年齡增長，發(fā)生皮膚癌的可能性會下降【答案】D【詳解】A、由題圖信息可知，紫外線引發(fā)的DNA損傷，使用限制酶將損傷的DNA序列切除，再通過“核苷酸切除修復（NER）”方式修復，所以圖中切口的產(chǎn)生應是限制酶的作用，A正確；B、DNA復制時新鏈合成是以5'到3'的方向進行，圖中填補缺口屬于DNA合成過程，所以新鏈合成以5'到3'的方向進行，B正確；C、DNA復制過程中可能會出現(xiàn)損傷，此時可以利用類似圖中的機制進行缺口修復，C正確；D、XP患者的NER酶系統(tǒng)存在缺陷，隨著年齡增長，受陽光照射積累的損傷增多，發(fā)生皮膚癌的可能性會增加，而不是下降，D錯誤。13．科學家常利用λ-Red同源重組酶系統(tǒng)進行基因敲除。圖為科學家運用A-Red同源重組酶系統(tǒng)到大腸桿菌（E．coli）內(nèi)進行靶基因敲除的過程，其中重組質(zhì)粒pKD46在30℃時正常復制，而37℃時自動丟失。下列說法正確的是（）A．HA1和HA2分別添加在兩種引物的5'和3'端B．過程I和Ⅱ的培養(yǎng)溫度分別是30℃、37℃C．靶基因敲除過程，只發(fā)生磷酸二酯鍵的斷裂及合成D．若過程I是使用含青霉素的培養(yǎng)基成功篩選出含質(zhì)粒pKD46的大腸桿菌，則說明該大腸桿菌自身含有青霉素抗性基因【答案】B【詳解】A、HA1和HA2分別添加在兩種引物的5'端，A錯誤；B、過程Ⅰ是pKD46導入受體菌，并在受體菌內(nèi)進行復制，因此所需溫度為30℃，過程Ⅱ需除去重組質(zhì)粒pKD46，所需溫度為37℃，B正確；C、為通過同源重組將大腸桿菌基因組DNA上的特定靶基因敲除，除發(fā)生磷酸二酯鍵的斷裂及合成，也發(fā)生氫鍵的斷裂和形成，C錯誤；D、若過程I是使用含青霉素的培養(yǎng)基成功篩選出含質(zhì)粒pKD46的大腸桿菌，導入的pKD46中含有青霉素抗性基因，并在大腸桿菌細胞中正常表達，因而能用含有青霉素的培養(yǎng)基將成功導入該質(zhì)粒的大腸桿菌篩選出來，說明該大腸桿菌自身不含有青霉素抗性基因，D錯誤。14．雙脫氧測序法（Sangtr法）是第一代DNA測序方法。在4支試管中分別加入4種dNTP和少量的1種ddNTP進行PCR，再把PCR產(chǎn)物變性，利用電泳進行分離，根據(jù)結(jié)果確定特定堿基的位置。通過該方法測定并比較某疾病患者與對照個體DNA模板鏈的一段堿基序列，結(jié)果如圖所示。下列敘述錯誤的是（

）

注：dNTP是PCR的四種原料；雙脫氧核苷三磷酸（ddNTP）有ddATP、ddCTP、ddGTP、ddTTP四種；在DNA聚合酶作用下，ddNTP與dNTP競爭核苷酸鏈延長位點，以加入ddATP的體系為例：若配對的為ddATP，延伸終止；若配對的為dATP，繼續(xù)延伸A．5'-TAGTGCCCATC-3'為對照個體的一段序列B．PCR過程中需要DNA聚合酶，不需要DNA解旋酶和DNA連接酶C．上述PCR反應體系中模板鏈需要足夠多D．患者該段序列中某位點的堿基C突變?yōu)門【答案】A【詳解】A、依據(jù)雙脫氧測序法的原理，可以確定每個泳道中的條帶（DNA片段）的3'終端的堿基，如+ddATP的泳道中出現(xiàn)的條帶（DNA片段）的3'終端堿基就是A。另外由于每個片段的起始點相同，但終止點不同，因此可以通過比較片段的長度來確定DNA序列中每個位置上的堿基；圖示電泳方向為從上→下，即對應的DNA片段為長→短，則對應的DNA測序結(jié)果為3'→5'，如對照個體的電泳結(jié)果最短的條帶為+ddCTP泳道組的條帶，則說明該DNA片段5'端第一個堿基為C；因此對照個體的測序結(jié)果為5'-CTACCCGTGAT-3'，A錯誤；B、PCR過程中需要DNA聚合酶，不需要解旋酶，高溫變性解旋，不需要DNA連接酶，兩條鏈都是連續(xù)合成，B正確；C、在進行序列時，模板量的數(shù)量需要足夠多，以確保測序的準確性和可測性。如果模板DNA量不足，可能會導致測序結(jié)果不準確或無法進行，C正確；D、患者的測序結(jié)果為5'-CTACCTGTGAT-3'，對照個體的測序結(jié)果為5'-CTACCCGTGAT-3'，對比患者和對照個體的測序結(jié)果可知，患者該段序列中某位點的堿基C突變?yōu)門，D正確。15．抗蟲和耐除草劑玉米“雙抗12-5”是我國自主研發(fā)的轉(zhuǎn)基因品種。在轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的研發(fā)、生產(chǎn)、銷售等環(huán)節(jié)，可采用PCR技術(shù)進行基因監(jiān)測，為轉(zhuǎn)基因生物安全監(jiān)管提供依據(jù)。下列敘述錯誤的是（

）A．PCR開始階段的預變性可使模板DNA變性更充分B．PCR循環(huán)過程中，復性的目的是使DNA聚合酶與模板相結(jié)合C．進行PCR基因監(jiān)測時，應使用待檢目的基因的特征序列作為引物D．安全監(jiān)管中，應阻止檢測出轉(zhuǎn)基因擴增產(chǎn)物的非轉(zhuǎn)基因標識農(nóng)產(chǎn)品上市【答案】B【詳解】A、預變性是使模板DNA充分變性，在變性過程中氫鍵斷裂，雙鏈DNA解旋為單鏈，A正確；B、PCR循環(huán)過程中，復性的目的是使引物與模板相結(jié)合，B錯誤；C、進行PCR基因監(jiān)測時，應使用待檢目的基因的特征序列作為引物，保證能獲得目的基因，C正確；D、轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品需要進行安全評估才能上市，所以安全監(jiān)管中，應阻止檢測出轉(zhuǎn)基因擴增產(chǎn)物的非轉(zhuǎn)基因標識農(nóng)產(chǎn)品上市，D正確。16．基因工程技術(shù)給人類生產(chǎn)生活和醫(yī)療帶來巨大的影響，下面有關(guān)說法正確的是（

）A．限制酶具有專一性，因此不同的限制酶不能產(chǎn)生相同的黏性末端B．在自然條件下，農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法不適用于將目的基因?qū)氪蠖鄶?shù)的單子葉植物細胞C．只要有證據(jù)證明轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品不安全，就應禁止轉(zhuǎn)基因技術(shù)的研究D．將藥用蛋白基因與乳腺中特異表達的基因的調(diào)控元件重組在一起，導入哺乳動物的乳腺細胞，可獲得乳腺生物反應器【答案】B【詳解】A、同尾酶能產(chǎn)生相同的黏性末端，即有的限制酶雖然識別的堿基序列不同，但切割后可產(chǎn)生相同的黏性末端，A錯誤；B、在自然條件下，農(nóng)桿菌不能感染大多數(shù)的單子葉植物，故農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法不適用于將目的基因?qū)氪蠖鄶?shù)的單子葉植物細胞，B正確；C、轉(zhuǎn)基因技術(shù)是中性的，不應禁止，C錯誤；D、將藥用蛋白基因與乳腺中特異表達的基因的調(diào)控元件重組在一起，導入哺乳動物的受精卵可獲得乳腺生物反應器，D錯誤。17．隨著轉(zhuǎn)基因技術(shù)的發(fā)展，其安全性問題引發(fā)了極大的關(guān)注，下列敘述錯誤的是（

）A．轉(zhuǎn)基因農(nóng)產(chǎn)品可能會引發(fā)過敏反應B．轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物中都含有會危害健康的毒性蛋白C．轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物可通過傳粉將轉(zhuǎn)入的基因擴散到其近緣物種中D．對轉(zhuǎn)基因安全性的爭議源于對基因結(jié)構(gòu)、功能及調(diào)控機制了解有限【答案】B【詳解】A、轉(zhuǎn)基因農(nóng)產(chǎn)品可能會引發(fā)過敏反應，這是轉(zhuǎn)基因安全性需要考慮的一個方面，A正確；B、并不是所有轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物中都含有會危害健康的毒性蛋白，這種說法過于絕對，B錯誤；C、轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物可通過傳粉將轉(zhuǎn)入的基因擴散到其近緣物種中，這是轉(zhuǎn)基因技術(shù)可能帶來的生態(tài)風險，C正確；D、對轉(zhuǎn)基因安全性的爭議源于對基因結(jié)構(gòu)、功能及調(diào)控機制了解有限，這是正確的，因為了解有限所以存在爭議，D正確。18．CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)已被廣泛應用于基因治療等領(lǐng)域。其基本工具sgRNA/Cas9來源于原核細胞，包括具有導向功能的sgRNA和行使DNA雙鏈切割功能的Cas9蛋白，技術(shù)原理如圖甲所示?；卮鹣铝袉栴}：I.某研究團隊以人乳腺癌MDA-MB-231細胞、Lenti-CAS9-sgRNA質(zhì)粒等為材料，進行原位定點敲除乳腺癌細胞中的人源粘著斑蛋白（VCL）基因，以研究該基因在細胞中的作用，為乳腺癌的治療提供理論支持。(1)獲取目的基因。經(jīng)過改造的質(zhì)粒已經(jīng)插入了Cas9蛋白基因如圖乙，故只需要根據(jù)基因的部分序列人工合成sgRNA基因即可。(2)構(gòu)建表達載體。人工合成的sgRNA基因如圖丙，需要通過擴增，為了確保酶切后能正確連接到質(zhì)粒上（相應酶切序列如圖丙），需在引物1的5'端加上堿基序列，引物2的5'端加上堿基序列。(3)導入受體細胞。利用慢病毒將包含SgRNA基因的重組質(zhì)粒及相應對照質(zhì)粒（空質(zhì)粒）分別轉(zhuǎn)入不同的乳腺癌MDA-MB-231細胞。感染后用篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系。設計轉(zhuǎn)入空質(zhì)粒的乳腺癌細胞的目的是。(4)檢測與鑒定。獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系，培養(yǎng)3d后收集細胞全部蛋白檢測VCL，結(jié)果如圖丁，顯示敲除成功。檢測特定蛋白質(zhì)的原理是。Ⅱ、其他應用(5)敲入