動物克隆胚胎的構(gòu)建職業(yè)教育醫(yī)學(xué)生物技術(shù)專業(yè)教學(xué)課件

職業(yè)教育醫(yī)學(xué)生物技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫動物克隆胚胎的構(gòu)建職業(yè)教育醫(yī)學(xué)生物技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫1.1供體（donor)細(xì)胞的獲得

供體細(xì)胞的獲得主要有2種途徑。一條途徑是直接從新鮮組織消化分離，不經(jīng)過體外培養(yǎng)直接用于體細(xì)胞克隆。多用于卵丘細(xì)胞等易于分離的細(xì)胞。其優(yōu)點是操作迅速、簡便，細(xì)胞不易發(fā)生遺傳變異；缺點是不能進(jìn)行細(xì)胞周期同期化和基因的改造。職業(yè)教育醫(yī)學(xué)生物技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫1.1供體（donor)細(xì)胞的獲得

另一條途徑是通過一定的方法建立體細(xì)胞的原代細(xì)胞系，經(jīng)過體外培養(yǎng)后用于體細(xì)胞克隆。此種方法多用在成纖維細(xì)胞等易于體外培養(yǎng)的細(xì)胞。其優(yōu)點是在體外培養(yǎng)過程中，可以進(jìn)行基因改造并可以進(jìn)行細(xì)胞周期的同期化處理，還可以獲得很多遺傳背景相同的克隆動物；缺點是體外培養(yǎng)可能影響克隆胚胎的重編程能力，從而影響克隆效率。職業(yè)教育醫(yī)學(xué)生物技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫1.2細(xì)胞周期同期化處理

體細(xì)胞克隆是兩個不同來源的細(xì)胞之間核質(zhì)的重新組合的過程，因此，核質(zhì)的協(xié)調(diào)是保證克隆效率的重要條件。細(xì)胞處于不同的細(xì)胞周期具有不同的細(xì)胞核結(jié)構(gòu)和胞內(nèi)蛋白組分。職業(yè)教育醫(yī)學(xué)生物技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫1.2細(xì)胞周期同期化處理用于細(xì)胞核移植的供體細(xì)胞（核）有3大類：早期胎細(xì)胞、胚胎干細(xì)胞、胚胎成纖維細(xì)胞（嚴(yán)格來講胚胎成纖維細(xì)胞也是體細(xì)胞）和體細(xì)胞，它們可來自活休或體外培養(yǎng)的細(xì)胞。移植前采用機械吹打或酶消化分散成單個細(xì)胞，培養(yǎng)、處理，使核供體細(xì)胞周期與受體細(xì)胞周期相協(xié)調(diào)和同步化，然后獲取細(xì)胞核（可含少量細(xì)胞質(zhì)）為供體。職業(yè)教育醫(yī)學(xué)生物技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫1.3

核移植（nucleartransplantation)

利用顯微操作技術(shù)將供體細(xì)胞移植到去核的卵母細(xì)胞并將細(xì)胞核融入到卵母細(xì)胞胞質(zhì)中是體細(xì)胞克隆中最為精細(xì)的一步。此操作通常需要借助顯微操作儀，對操作技能要求比較高。此操作通常有2種方法，即間接細(xì)胞融合法和直接注入法。職業(yè)教育醫(yī)學(xué)生物技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫1.3.1

間接細(xì)胞融合法

間接細(xì)胞融合法就是將供體細(xì)胞注射到卵周隙中，通過細(xì)胞融合使供體細(xì)胞核進(jìn)入到受體胞質(zhì)中。該技術(shù)發(fā)源于20世紀(jì)70年代，最初是使用滅活的仙臺病毒介導(dǎo)細(xì)胞質(zhì)膜的融合，而后逐漸被毒性較低的聚乙烯乙二醇代替。與化學(xué)誘導(dǎo)膜融合同時發(fā)展起來的電融合技術(shù)是目前最為常用的方法。電融合效率高，操作簡便，但其受到的影響因素很多，如溫度、電脈沖參數(shù)、融合液的滲透壓、離子種類和濃度等。職業(yè)教育醫(yī)學(xué)生物技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫1.3.2

直接注入法

由于小鼠卵胞質(zhì)膜較脆、抗電擊能力差，而且小鼠體細(xì)胞較小，因此電融合率較低；再者，小鼠胚胎基因組激活發(fā)生在二細(xì)胞期，甚至在受精卵后期就開始表達(dá)，留給移入核的重編程時間短。因此Wakayama等利用Piezo驅(qū)動的注射