機(jī)能實(shí)驗(yàn) 藥物半數(shù)有效量ED50測(cè)定學(xué)習(xí)資料

戊巴比妥鈉半數(shù)有效量

（ED50）的測(cè)定

溫州醫(yī)科大學(xué)機(jī)能中心【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?.用小白鼠求戊巴比妥鈉的ED502.實(shí)驗(yàn)示例戊巴比妥鈉的LD50以供參考。3.求其治療指數(shù)。3/22/20252溫州醫(yī)科大學(xué)機(jī)能中心【實(shí)驗(yàn)原理】3/22/20253ED50是標(biāo)志藥物效應(yīng)的一個(gè)參數(shù)，它是指在一定的實(shí)驗(yàn)條件下，一群動(dòng)物用藥后，約半數(shù)動(dòng)物出現(xiàn)療效的劑量。LD50則是使半數(shù)動(dòng)物死亡的劑量，它是ED50的一個(gè)特例。為了對(duì)藥物的毒性和療效有一個(gè)較全面的考慮，可計(jì)算藥物的治療指數(shù)，治療指數(shù)=LD50/ED50，比值越大就越安全。求ED50和LD50的實(shí)驗(yàn)方法原則上相同，溫州醫(yī)科大學(xué)機(jī)能中心ED50和LD50均是以質(zhì)反應(yīng)為指標(biāo)的。如以最小有效量為橫坐標(biāo)，動(dòng)物有效累積百分率為縱坐標(biāo)，可繪成“長(zhǎng)尾”型曲線(xiàn)；如劑量改為對(duì)數(shù)值，則可繪出對(duì)稱(chēng)的“S”型曲線(xiàn)。該“S”型曲線(xiàn)向心對(duì)稱(chēng)，對(duì)稱(chēng)中心縱坐標(biāo)為50%死亡率，橫坐標(biāo)為logLD50；該曲線(xiàn)兩端平坦，中間坡度大，可以看出，中值劑量的死亡率變化很大，而兩端死亡率變化很小，故用LD50來(lái)表示毒力（或用ED50來(lái)表示效力）比用LD5更為靈敏、精確，且誤差也小。溫州醫(yī)科大學(xué)機(jī)能中心【材料與方法】3/22/20255一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：小白鼠，雌雄各半，18～22g。二、器材與藥品：鼠籠×2個(gè)、天平×1個(gè)、注射器1ml（或0.25ml）×1支、注射針頭51/2×1個(gè)、0.5%苦味酸（一支棉簽）、戊巴比妥鈉溶液（濃度為0.40%，0.32%，0.256%，0.2048%，0.1638%，0.1311％）。溫州醫(yī)科大學(xué)機(jī)能中心

三、方法與步驟：3/22/202561．預(yù)試0%及100%估計(jì)有效量（Dn、Dm）將戊巴比妥鈉配制成不同濃度的一系列藥液。在預(yù)試中以0.1ml～0.2ml/10g體重腹腔注射，求出一次給藥后有效率為0%的最大劑量（Dn）和100%的最小劑量（Dm）。假設(shè)預(yù)試結(jié)果求得戊巴比妥鈉Dn值為13.1mg/kg，Dm值為40mg/kg。則可在此范圍內(nèi)測(cè)定半數(shù)有效量（ED50）。溫州醫(yī)科大學(xué)機(jī)能中心2．選擇合理的劑量分組方案經(jīng)預(yù)試找到Dm和Dn值后，即可在此劑量范圍內(nèi)，按等比級(jí)數(shù)分成4~6個(gè)劑量組，計(jì)算各組劑量的公比（1/k或r）及分組組數(shù)（N）：N=1-log(Dm/Dn)/logk一般k值多采取0.75—0.85，不宜超過(guò)0.6—0.9。設(shè)本次實(shí)驗(yàn)分為6組，經(jīng)計(jì)算k值為0.8，故各組劑量為Dm、Dmk、Dmk2、Dmk3、Dmk4、Dmk5。溫州醫(yī)科大學(xué)機(jī)能中心3．配制等比藥液—低比系列稀釋法本法簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確，不易出錯(cuò)而且節(jié)省藥物。例：已知Dmax=40mg/kg，Dmin=13.11mg/kg，r=0.8，動(dòng)物體重為20g，每組10只，總重為200g，用藥量為0.1ml/10g（腹腔）。（1）一號(hào)藥液濃度=最高有效量/用藥液量

=40（mg/kg）/10(ml/kg)=4mg/ml=0.4%(2)每組藥液量=每組動(dòng)物總重×用藥液量

=200g×0.01ml/g=2ml（為留有余地本例取4ml）溫州醫(yī)科大學(xué)機(jī)能中心（3）一號(hào)藥液需用量=每組藥液量/（1－r）

=4ml/（1－0.8）

=20ml（4）精確配制0.4%藥液約20ml，從中吸取4ml為一號(hào)液，供第一組用藥。（5）配二號(hào)藥液，在余下的16ml一號(hào)液中加生理鹽水4ml，混勻后吸出4ml為二號(hào)液，依次類(lèi)推，配出一系列比值1:0.8的藥液。溫州醫(yī)科大學(xué)機(jī)能中心4．動(dòng)物隨機(jī)分組選體重20g左右小鼠60只，雌雄兼用，每組10只。先將雌雄分開(kāi)，然后分別稱(chēng)重標(biāo)色，每一檔體重即為一個(gè)配伍組，根據(jù)均衡隨機(jī)分組法，將配伍組中的每只小鼠隨機(jī)分配到各組中去。并將各組編號(hào)。溫州醫(yī)科大學(xué)機(jī)能中心5．隨機(jī)確定各組給藥劑量將動(dòng)物組別隨機(jī)確定各組動(dòng)物的給藥劑量。每組分別不同劑量戊巴比妥鈉40、32、25.6、20.48、16.38、13.11mg/kg，藥液容量均為0.1ml/10g，腹腔注射。6．觀察指標(biāo)觀察及記錄給藥15分鐘后，各組出現(xiàn)催眠反應(yīng)（翻正反射消失）的鼠數(shù)。溫州醫(yī)科大學(xué)機(jī)能中心3/22/202512計(jì)算ED50有以下幾種方法：加權(quán)機(jī)率單位法（Bliss法）、機(jī)率單位圖解法、序貫法及點(diǎn)斜法（又稱(chēng)孫氏改良計(jì)算法）。其中孫氏改良計(jì)算法簡(jiǎn)便、精確度較好，計(jì)算ED50的全部數(shù)據(jù)，不受目測(cè)者個(gè)人的影響，下面僅介紹該方法。本法要求以下實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)條件：各組動(dòng)物數(shù)相等，組間劑量呈等比級(jí)數(shù)有效率包括0%及100%至少要包括20%以下及80%以上?！綞D50的計(jì)算】溫州醫(yī)科大學(xué)機(jī)能中心1.匯總整個(gè)實(shí)驗(yàn)室各濃度組催眠反應(yīng)的鼠數(shù)后記入下表，采用公式

ED50=1og-1[Xm-i(Σp-0.5)]（其中Xm=最大劑量對(duì)數(shù)值，P=動(dòng)物催眠率（用小數(shù)表示），Σp=各組死亡率的總和，i=相鄰兩組劑量比值的對(duì)數(shù)（高劑量做分子））計(jì)算出現(xiàn)催眠反應(yīng)的ED50。溫州醫(yī)科大學(xué)機(jī)能中心2.求ED50的標(biāo)準(zhǔn)誤（SED50）∑P2為各組有效率平方和求ED50的95%平均可信限（L95） L95=ED50±4.5·ED50·SED50溫州醫(yī)科大學(xué)機(jī)能中心不同劑量戊巴比妥鈉對(duì)小鼠的影響3/22/202515組別劑量D(mg/kg)1ogD實(shí)驗(yàn)鼠數(shù)催眠鼠數(shù)催眠反應(yīng)百分率%PED50(mg/kg)140.001.602010232.001.505110325.601.408210420.481.311310516.381.214410613.111.117510溫州醫(yī)科大學(xué)機(jī)能中心【注意事項(xiàng)】1.分組時(shí)采用均衡隨機(jī)法。2.實(shí)驗(yàn)室保持安靜，實(shí)驗(yàn)操作的過(guò)程中盡量避免喧嘩，以致影響催眠的效果，已睡