動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)與單克隆抗體課件高二下學(xué)期生物人教版選擇性必修3

第2節(jié)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)第2章細(xì)胞工程動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)與單克隆抗體情境導(dǎo)入問(wèn)題：為什么要號(hào)召新冠感染痊愈者捐獻(xiàn)自己的血漿？這樣的血漿對(duì)新冠重癥感染患者有什么作用呢？

血漿中有新冠病毒的抗體,可以用于治療新冠感染患者。

但一個(gè)捐獻(xiàn)者的200-300毫升的血漿，如果合格，一般也只能治療2-3個(gè)患者。思考：抗體為什么不人工制備呢？傳統(tǒng)抗體如何制備？

抗體是在抗原物質(zhì)的刺激下，由漿細(xì)胞（B淋巴細(xì)胞）產(chǎn)生的，可與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合的免疫球蛋白。1.傳統(tǒng)抗體制備方法及缺陷缺陷：產(chǎn)量低、純度低，且抗體的特異性差、靈敏度低。不能無(wú)限增殖產(chǎn)生大量抗體動(dòng)物體內(nèi)抗原

刺激漿細(xì)胞抗體多種B淋巴細(xì)胞增殖分化抗原不純抗體不純?nèi)绾谓鉀Q這個(gè)問(wèn)題呢？病原體表面多個(gè)抗原決定簇，被免疫系統(tǒng)視為不同獨(dú)立的激活信號(hào)，形成不同B淋巴細(xì)胞每一個(gè)B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體。思考：有什么方法解決傳統(tǒng)抗體制備存在產(chǎn)量低、純度低、特異性差的問(wèn)題？1個(gè)B淋巴細(xì)胞B淋巴細(xì)胞群大量單一抗體克隆產(chǎn)生在體外培養(yǎng)條件下，一個(gè)B淋巴細(xì)胞是不可能無(wú)限增殖的！米爾斯坦【英國(guó)】科勒【德國(guó)】解決1975年，英國(guó)科學(xué)家米爾斯坦和德國(guó)科學(xué)家科勒設(shè)計(jì)了一個(gè)極富創(chuàng)造性的試驗(yàn)方案：抗體B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞(單克隆抗體)骨髓瘤細(xì)胞能無(wú)限增殖既能無(wú)限增殖，又能產(chǎn)生足夠數(shù)量的特定抗體雜交瘤細(xì)胞【細(xì)胞克隆】是一種無(wú)性繁殖技術(shù)，通過(guò)將單個(gè)細(xì)胞從群體內(nèi)分離出來(lái)單獨(dú)培養(yǎng)，使其重新繁衍成一個(gè)新的細(xì)胞群。單克隆抗體：由單一雜交瘤細(xì)胞增殖產(chǎn)生的特異性抗體。如何將B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合得到雜交瘤細(xì)胞呢？思考與討論單克隆抗體分析概念中“單”和“克隆”的含義?？偨Y(jié)單克隆抗體的概念？注：B淋巴細(xì)胞指的是活化的B淋巴細(xì)胞（指從成熟的B細(xì)胞向漿細(xì)胞分化的時(shí)期），其融合的效率最高，若直接用漿細(xì)胞，融合效率很低。自主閱讀教材P48，思考下列問(wèn)題1.動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)的概念、原理、結(jié)果分別是什么？2.動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)常用的誘導(dǎo)方法有哪些？4.動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)有何意義？在現(xiàn)實(shí)生活中的應(yīng)用有哪些？3.什么是滅活？滅活病毒誘導(dǎo)融合的原理？融合實(shí)質(zhì)及完成的標(biāo)志？

（教材P48的相關(guān)信息）一、動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)1.概念：使兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的技術(shù)。2.結(jié)果：融合后形成的雜交細(xì)胞，具有原來(lái)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞的遺傳信息。3.原理：細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性4.誘導(dǎo)融合的常用方法：與植物原生質(zhì)體融合的基本原理相同5.動(dòng)物細(xì)胞融合的過(guò)程：細(xì)胞膜融合細(xì)胞核融合細(xì)胞質(zhì)融合細(xì)胞融合的實(shí)質(zhì)6.動(dòng)物細(xì)胞融合完成的標(biāo)志：兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞核融合為一個(gè)細(xì)胞核物理法：離心法、電融合法化學(xué)法：聚乙二醇（PEG)融合法生物法：滅活病毒誘導(dǎo)法（動(dòng)物細(xì)胞融合特有的誘導(dǎo)方法）注意：誘導(dǎo)融合之前，用胰蛋白酶或膠原蛋白酶使細(xì)胞分散。（不能，動(dòng)物細(xì)胞的全能性受限）思考：通過(guò)動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)能否形成完整個(gè)體？滅活的病毒顆粒粘附于細(xì)胞表面病毒顆粒細(xì)胞膜融合細(xì)胞核融合形成雜交細(xì)胞在病毒的作用下，使細(xì)胞互相凝聚滅活病毒誘導(dǎo)法滅活是指用物理或化學(xué)手段使病毒或細(xì)菌失去感染能力，但是并不破壞這些病原體的抗原結(jié)構(gòu)。原理：病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能夠與細(xì)胞膜上的糖蛋白發(fā)生作用，使細(xì)胞互相凝聚，細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細(xì)胞膜打開，細(xì)胞發(fā)生融合病毒的不同“身份”：在免疫調(diào)節(jié)中病毒屬于抗原；在基因工程中可作為載體；在細(xì)胞工程中可作為誘導(dǎo)劑。不滅活可以嗎？不滅活的病毒的不可以用作細(xì)胞融合誘導(dǎo)劑，會(huì)感染動(dòng)物細(xì)胞。7.意義：突破了有性雜交的局限，使遠(yuǎn)緣雜交（種間、屬間、科間、動(dòng)植物之間）成為可能

8.應(yīng)用：（1）細(xì)胞融合技術(shù)已經(jīng)成為研究細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤和培育生物新品種等的重要手段。（2）利用動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)發(fā)展起來(lái)的雜交瘤技術(shù)，為制造單克隆抗體開辟了新途徑。19世紀(jì)30年代，科學(xué)家曾在患肺結(jié)核、天花和麻疹等疾病的病人的病理組織中觀察到多核細(xì)胞。如何解釋這一現(xiàn)象？【答案】病人體內(nèi)的病毒等誘導(dǎo)多個(gè)體細(xì)胞融合形成了多核細(xì)胞。植物體細(xì)胞雜交動(dòng)物細(xì)胞融合原理細(xì)胞融合前的處理方法誘導(dǎo)細(xì)胞融合的方法細(xì)胞融合成功的標(biāo)志主要用途意義細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性、植物細(xì)胞的全能性細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性用果膠酶和纖維素酶去除細(xì)胞壁用胰蛋白酶或膠原蛋白酶使細(xì)胞分散成單個(gè)細(xì)胞電融合法、離心法；聚乙二醇（PEG）融合法、高Ca2+-高pH融合法PEG融合法、電融合法、滅活病毒誘導(dǎo)法再生出細(xì)胞壁細(xì)胞核的融合獲得完整的雜種植株主要用于制造單克隆抗體打破生殖隔離，實(shí)現(xiàn)遠(yuǎn)緣雜交育種，培育植物新品種突破了有性雜交的局限，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能動(dòng)物細(xì)胞融合和植物體細(xì)胞雜交的比較課堂歸納動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)01(1)與植物原生質(zhì)體融合相比，動(dòng)物細(xì)胞融合特有的誘導(dǎo)因素有

聚乙二醇(PEG)、滅活的病毒()(2)滅活的含義是用物理或化學(xué)手段使病毒或細(xì)菌失去感染能力，

但并不破壞它們的抗原結(jié)構(gòu)()×聚乙二醇(PEG)融合法并不是動(dòng)物細(xì)胞融合所特有的。√合作探究二：請(qǐng)同學(xué)們自主閱讀教材P48-49，小組合作思考討論完成問(wèn)題。

3.會(huì)有幾種細(xì)胞融合方式？雜交瘤細(xì)胞具有什么特點(diǎn)？1.單克隆抗體制備過(guò)程中為什么給小鼠注射特定的抗原蛋白？4.如何大規(guī)模進(jìn)行培養(yǎng)得到大量的單克隆抗體？2.產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞的獲得需要幾次篩選？各自篩選的方法和目的是什么？【舊知識(shí)回顧】抗體1.定義：機(jī)體產(chǎn)生的專門應(yīng)對(duì)

的

；2.特點(diǎn)：

性，一種抗體只能與一種抗原結(jié)合；3.分布：①

（主要）；

②

；抗原特異蛋白質(zhì)血清組織液及外分泌液(如乳汁)【傳統(tǒng)抗體的獲得】①方法：向動(dòng)物體內(nèi)反復(fù)注射某種

，使動(dòng)物產(chǎn)生

，

然后從動(dòng)物血清中分離所需

。②缺陷：

、

、

?？乖贵w抗體體液免疫產(chǎn)量低純度低特異性差2.單克隆抗體制備的過(guò)程B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞誘導(dǎo)融合將骨髓瘤細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞融合能產(chǎn)生抗體，但不能大量增殖不能產(chǎn)生抗體，但能大量增殖PEG融合法電融合法滅活病毒誘導(dǎo)法注射特定的抗原培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞從脾中提取目的：獲得產(chǎn)生特定抗體的B淋巴細(xì)胞多種培養(yǎng)基中共出現(xiàn)幾種細(xì)胞？其中融合的細(xì)胞有幾種？(只考慮兩兩融合)①產(chǎn)生其他抗體的B淋巴細(xì)胞

②產(chǎn)生針對(duì)注射抗原的抗體的B淋巴細(xì)胞2.單克隆抗體制備的過(guò)程多種雜交細(xì)胞：未融合的細(xì)胞B-骨、骨-骨、B-B、第一次篩選：用特定的選擇培養(yǎng)基（HAT培養(yǎng)基）在該培養(yǎng)基上，未融合的親本細(xì)胞和融合的具有同種核的細(xì)胞都會(huì)死亡，只有融合的雜交瘤細(xì)胞才能生長(zhǎng)雜交瘤細(xì)胞：（既能迅速大量增殖，又能產(chǎn)生抗體）第二次篩選：克隆化培養(yǎng)、抗體檢測(cè)（可進(jìn)行多次）抗體檢測(cè)呈陽(yáng)性的雜交瘤細(xì)胞（分泌的抗體能與特定抗原結(jié)合）每一個(gè)孔中盡量只接種一個(gè)雜交瘤細(xì)胞克隆化培養(yǎng)多孔細(xì)胞培養(yǎng)板（能產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細(xì)胞）雜交瘤細(xì)胞中有能產(chǎn)生其他抗體的細(xì)胞篩選的所有雜交瘤細(xì)胞都能產(chǎn)生所需的抗體？？抗體檢測(cè)呈陽(yáng)性的雜交瘤細(xì)胞注射到小鼠腹腔內(nèi)體外培養(yǎng)單克隆抗體從細(xì)胞培養(yǎng)液中提取從小鼠腹水中提?。ǎ墚a(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細(xì)胞）（分泌的抗體能與特定抗原結(jié)合）2.單克隆抗體制備的過(guò)程優(yōu)點(diǎn)：不需培養(yǎng)基，易于控制培養(yǎng)條件，操作簡(jiǎn)單，成本較低。缺點(diǎn)：規(guī)模小，產(chǎn)量少優(yōu)點(diǎn)：可大規(guī)模培養(yǎng)，產(chǎn)量大。缺點(diǎn)：需要認(rèn)為控制培養(yǎng)條件，成本高特異性強(qiáng)靈敏度高可大量制備特點(diǎn)如何擴(kuò)大培養(yǎng)得到大量的單克隆抗體？雜交瘤細(xì)胞的選擇原理HAT培養(yǎng)基篩選雜交瘤細(xì)胞所使用的特定培養(yǎng)基H次黃嘌呤（hypoxanthine）氨基蝶呤(aminopterin)胸腺嘧啶核苷（thymidine）背景材料AT①細(xì)胞合成DNA有D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基嘌呤阻斷。②B淋巴細(xì)胞中有這兩種DNA的合成途徑，但不能分裂增殖。

③鼠骨髓瘤細(xì)胞中只有D途徑，沒(méi)有S途徑，但能不斷分裂增殖。B，B-B：不能無(wú)限增殖，死亡瘤，瘤-瘤：不能無(wú)限增殖，死亡雜交瘤細(xì)胞：（B-瘤）能無(wú)限增殖，生長(zhǎng)D途徑、S途徑D途徑D途徑、S途徑高度分化的細(xì)胞一般不具備分裂能力篩選出雜交瘤細(xì)胞方法？培養(yǎng)基中加入氨基嘌呤雜交瘤細(xì)胞（既能迅速大量增殖，又能產(chǎn)生抗體）抗體檢測(cè)呈陽(yáng)性的雜交瘤細(xì)胞（分泌的抗體能與特定抗原結(jié)合）對(duì)上述經(jīng)選擇培養(yǎng)的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測(cè)，經(jīng)多次篩選，就可獲得足夠數(shù)量的能分泌所需抗體的細(xì)胞篩選出雜交瘤細(xì)胞之后的第二次篩選目的是什么？方法是什么？其原理是什么？目的是篩選出能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞。方法是抗體檢測(cè)（抗原-抗體雜交）。其原理是抗原-抗體的特異性結(jié)合。由于初次篩選出的雜交瘤細(xì)胞有多種，且融合細(xì)胞中染色體可能會(huì)隨機(jī)丟失，導(dǎo)致部分雜交瘤細(xì)胞在培養(yǎng)時(shí)會(huì)失去增殖或分泌抗體的能力，因此后續(xù)需要經(jīng)過(guò)多次篩選出能產(chǎn)生專一抗體的雜交瘤細(xì)胞。【拓展】

雜交瘤細(xì)胞的抗體檢測(cè)和克隆化培養(yǎng)將雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行有限稀釋，用多孔細(xì)胞培養(yǎng)板培養(yǎng)，使每孔細(xì)胞不超過(guò)一個(gè)，通過(guò)培養(yǎng)讓其增殖。多孔細(xì)胞培養(yǎng)板然后檢測(cè)各孔上清液中細(xì)胞分泌的抗體，那些上清液可與特定抗原結(jié)合的培養(yǎng)孔為陽(yáng)性孔。陽(yáng)性孔中的細(xì)胞還不能保證是來(lái)自單個(gè)細(xì)胞，挑選陽(yáng)性孔的細(xì)胞繼續(xù)進(jìn)行有限稀釋，一般需進(jìn)行3～4次，直至確信每個(gè)孔中增殖的細(xì)胞為單克隆細(xì)胞。第一次篩選第二次篩選原因方法結(jié)果誘導(dǎo)融合后得到的細(xì)胞中，除雜交瘤細(xì)胞之外，還有未融合的親本細(xì)胞，也有融合的具有同種核的細(xì)胞由于小鼠在生活中還受到其他抗原的刺激，所以經(jīng)第一次篩選之后獲得的雜交瘤細(xì)胞中有能產(chǎn)生其他抗體的細(xì)胞用特定的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行篩選對(duì)經(jīng)選擇性培養(yǎng)的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測(cè)，經(jīng)多次篩選得到能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞篩選獲得雜交瘤細(xì)胞獲得足夠數(shù)量的能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞兩次篩選的比較課堂歸納單克隆抗體第二次篩選雜交細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞體外或體內(nèi)培養(yǎng)第一次篩選骨髓瘤細(xì)胞

誘導(dǎo)融合分泌特異抗體的雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞群提取已免疫的B淋巴細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)小結(jié)：既能大量繁殖又能產(chǎn)生抗體優(yōu)點(diǎn)：特異性強(qiáng)、靈敏度高、可大量制備注射抗原單克隆抗體制備的過(guò)程中，應(yīng)用到的技術(shù)手段單克隆抗體制備過(guò)程的原理細(xì)胞膜的流動(dòng)性和細(xì)胞增殖二、單克隆抗體的制備過(guò)程3.單克隆抗體制備過(guò)程中的相關(guān)考點(diǎn)總結(jié)（1）該過(guò)程中應(yīng)用到的技術(shù)_______________________________________（2）原理_______________________________________（3）注射特定抗原的目的_________________________________________________________________________（4）誘導(dǎo)融合的方法______________________________________動(dòng)物細(xì)胞特有的誘導(dǎo)融合方法為_______________________動(dòng)物細(xì)胞融合、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性、細(xì)胞增殖用特定的抗原對(duì)小鼠進(jìn)行免疫，并從該小鼠的脾中得到能產(chǎn)生特定抗體的B淋巴細(xì)胞PEG融合法、電融合法、滅活病毒誘導(dǎo)法滅活病毒誘導(dǎo)法（5）第一次篩選的目的______________________

第一次如何篩選___________________________

篩選原理_________________________________________________________________________________篩選獲得雜交瘤細(xì)胞用特定的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行篩選在選擇培養(yǎng)基上，未融合的親本細(xì)胞和融合的具有同種核的細(xì)胞都會(huì)死亡，只有融合的雜交瘤細(xì)胞才能生長(zhǎng)3.單克隆抗體制備過(guò)程中的相關(guān)考點(diǎn)總結(jié)（6）雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn)__________________________________（7）第二次篩選的目的________________________________________________如何篩選___________________________________________________選擇抗體檢測(cè)呈___性的雜交瘤細(xì)胞，即_____________

_____________（8）抗體檢測(cè)原理_______________________________________獲得足夠數(shù)量的能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測(cè)（進(jìn)行多次篩選）分泌的抗體能與特定的抗原結(jié)合抗原和抗體能夠特異性結(jié)合(分子水平的鑒定）既能迅速大量增殖，又能產(chǎn)生抗體（9）如何獲取大量所需雜交瘤細(xì)胞___________________________________________________________（10）如何獲取單克隆抗體①體外培養(yǎng)___________________________②小鼠腹腔內(nèi)培養(yǎng)_________________________（11）單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)______________________________________________________________________________在體外條件下大規(guī)模培養(yǎng)（接種于培養(yǎng)液中）或注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖從細(xì)胞培養(yǎng)液中獲取從小鼠腹水中獲取能準(zhǔn)確地識(shí)別抗原的細(xì)微差異，與特定抗原發(fā)生特異性結(jié)合，并且可以大量制備陽(yáng)【小結(jié)①】被廣泛用作

，在多種疾病的診斷和病原體鑒定中發(fā)揮重要作用；病毒蛋白的檢測(cè)依賴抗體【資料1】利用同位素或熒光標(biāo)記的單克隆抗體在特定組織中成像的技術(shù)，可定位診斷腫瘤、心血管畸形等疾病?！举Y料2】用抗人絨毛膜促性腺激素單克隆抗體做成的“早早孕診斷試劑盒”。在妊娠第8天就可以做出診斷，這比原來(lái)的診斷方法提前了10d左右，可以避免孕婦在不知道妊娠的情況下因服用藥物而對(duì)胎兒造成不利影響。該方法檢測(cè)的準(zhǔn)確率在90%以上。診斷試劑【資料3】使用高效的細(xì)胞毒素類藥物進(jìn)行化療可以有效殺傷腫瘤細(xì)胞。但細(xì)胞毒素沒(méi)有特異性，在殺傷腫瘤細(xì)胞的同時(shí)還會(huì)對(duì)健康細(xì)胞造成傷害，這限制了它在臨床上的應(yīng)用。抗體-藥物偶聯(lián)物(ADC)，將細(xì)胞毒素與能特異性識(shí)別腫瘤抗原的單克隆抗體結(jié)合，實(shí)現(xiàn)了對(duì)腫瘤細(xì)胞的選擇性殺傷。【小結(jié)②】可以

。運(yùn)載藥物1.ADC的抗體和藥物各具有什么作用？

抗體主要發(fā)揮靶向運(yùn)輸作用，即通過(guò)特異性結(jié)合靶細(xì)胞表面的抗原，將連接的藥物輸送到靶細(xì)胞；

藥物發(fā)揮治療效應(yīng)，如殺傷靶細(xì)胞單克隆抗體的應(yīng)用2.除了細(xì)胞毒素，還有哪些物質(zhì)理論上可以作為ADC偶聯(lián)的藥物？①可以用放射性同位素標(biāo)記單克隆抗體進(jìn)行靶向放療；②一些作用于細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的藥物可以通過(guò)阻斷腫瘤細(xì)胞的信號(hào)通路來(lái)抑制其生長(zhǎng)，理論上也可以將這些藥物與單克隆抗體結(jié)合進(jìn)行治療單克隆抗體的應(yīng)用3.單克隆抗體診斷試劑盒和ADC在臨床應(yīng)用上各具有什么優(yōu)勢(shì)？①單克隆抗體診斷試劑盒中的單克隆抗體只與特定的抗原反應(yīng)，因此檢測(cè)的特異性和靈敏度大大提高；生產(chǎn)單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞可以傳代培養(yǎng)、冷凍保存和復(fù)蘇利用，有利于控制產(chǎn)品的質(zhì)量和標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)診斷試劑盒；②ADC能夠協(xié)同發(fā)揮抗體特異性識(shí)別的靶向作用和細(xì)胞毒素對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用，因此它在臨床上具有靶點(diǎn)清楚、毒副作用小等優(yōu)點(diǎn)4.單克隆抗體在臨床上還有哪些應(yīng)用？你可以課后搜集資料，然后以“單克隆抗體在臨床上的應(yīng)用”為主題，出一期黑板報(bào)或制作電子板報(bào)宣傳相關(guān)知識(shí)?！举Y料4】單克隆抗體藥物已被廣泛用于腫瘤、自身免疫病等疾病的治療，如:利妥昔單抗被用于治療復(fù)發(fā)難治的低分化B細(xì)胞淋巴瘤；

曲妥珠單抗被用于治療乳腺癌等?！拘〗Y(jié)③】自身也可用于

；治療疾病

單克隆抗體在臨床上的應(yīng)用涉及治療、診斷等方面。單克隆抗體藥物已被廣泛用于腫瘤、自身免疫病等疾病的治療，如利妥昔單抗被用于治療復(fù)發(fā)難治的低分化B細(xì)胞淋巴瘤；曲妥珠單抗被用于治療乳腺癌等。在臨床診斷方面，單克隆抗體被廣泛用于-些感染性疾病的檢測(cè)、腫瘤的診斷、激素和細(xì)胞因子的測(cè)定等。以單克隆抗體在診斷腫瘤方面的應(yīng)用為例，用放射性同位素或熒光標(biāo)記抗腫瘤表面抗原的單克隆抗體，可以用這些抗體來(lái)對(duì)體內(nèi)的腫瘤進(jìn)行定位，輔助診斷并確定腫瘤的復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移等。一、單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)：①能準(zhǔn)確地識(shí)別抗原的細(xì)微差異。②與特定抗原發(fā)生特異性結(jié)合。③可以大量制備。二、單克隆抗體的應(yīng)用：1.廣泛用作診斷試劑2.運(yùn)載藥物：3.直接用于治療疾病。特異性強(qiáng)靈敏度高可大量制備1.用作診斷試劑——最廣泛的應(yīng)用（1）原理___________________________________________________（2）具體應(yīng)用及部分實(shí)例①多種疾病的診斷實(shí)例：利用同位素或熒光標(biāo)記的單克隆抗體在特定組織中成像的技術(shù)，可定位診斷腫瘤、心血管畸形等疾病。②病原體的鑒定實(shí)例：乙肝病毒表面抗原定量檢測(cè)試劑盒③其他類型診斷實(shí)例：早早孕診斷試劑盒單克隆抗體能準(zhǔn)確地識(shí)別抗原的細(xì)微差異，與特定抗原發(fā)生特異性結(jié)合優(yōu)點(diǎn)：準(zhǔn)確、高效、簡(jiǎn)易、快速抗原-抗體雜交法2.運(yùn)載藥物和治療疾病(主要用于癌癥治療)（1）具體應(yīng)用實(shí)例與藥物結(jié)合，制成______________________，殺傷癌細(xì)胞；ADC通常由_____、_____和_____三部分組成；（2）原理通過(guò)將藥物與__________________________的單克隆抗體結(jié)合，實(shí)現(xiàn)對(duì)腫瘤細(xì)胞的_______________；發(fā)揮殺傷作用的為______________________________________；單克隆抗體作用為_______________；（3）優(yōu)點(diǎn)________________________________________________________抗體-藥物偶聯(lián)物（ADC）抗體接頭藥物能特異性識(shí)別腫瘤細(xì)胞抗原選擇性殺傷放射性同位素、化學(xué)藥物或細(xì)胞毒素靶向運(yùn)輸作用靶點(diǎn)清楚、毒副作用小（不會(huì)對(duì)健康細(xì)胞造成傷害）、療效高單克隆抗體單獨(dú)使用，也可直接用于治療疾?。粚?shí)例：利妥昔單抗（美羅華）是一種針對(duì)CD20抗原的人鼠嵌合型單克隆抗體，是第一個(gè)被FDA批準(zhǔn)用于臨床治療的單抗。進(jìn)入人體后能通過(guò)介導(dǎo)抗體依賴的細(xì)胞毒性作用、補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒性作用和抗體與CD20分子結(jié)合引起的直接效應(yīng)，抑制細(xì)胞生長(zhǎng)，改變細(xì)胞周期以及凋亡等方式殺死淋巴瘤細(xì)胞。課堂小結(jié)(1)B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合后，得到的都是雜交瘤細(xì)胞()(2)單克隆抗體制備過(guò)程中兩次篩選的目的相同()(3)ADC的抗體具有靶向運(yùn)輸作用、藥物具有治療作用()×只考慮兩兩融合有3種，即BB、BG、GG，故還需要進(jìn)行篩選?！獭敛煌?。第一次篩選是為了篩選出雜交瘤細(xì)胞；第二次篩選是為了獲得能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞。課后訓(xùn)練1.判斷下列敘述的正誤：(3)步驟②的細(xì)胞必須經(jīng)過(guò)步驟③克隆化培養(yǎng)和__________才能篩選得到符合要求的雜交瘤細(xì)胞，雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn)是__________________________________。雜交瘤細(xì)胞可采用注射到小