生物化學(xué)實驗 生化實驗操作考核要點（新） 學(xué)習(xí)資料

【實驗操作考核要點】一、目的要求1．掌握組織樣品的制備方法，了解其注意事項。2．了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鑒定與蒽酮比色測定糖原含量的原理和注意事項，掌握其操作方法。3．正確操作使用刻度吸管和可調(diào)微量移液器。4．熟練運用溶液混勻的各種方法（視具體情況，采用合適的混勻方法）。5．正確掌握溶液轉(zhuǎn)移的操作。6．正確操作使用分光光度計。二、操作考核內(nèi)容按百分制計。1．吸量管操作（20分）；2．可調(diào)式微量移液器操作（20分）；3．溶液混勻操作（視具體情況，采用合適的混勻方法）（15分）；4．溶液轉(zhuǎn)移操作（10分）；5．分光光度計比色操作（25分）。6．整體表現(xiàn)（10分）。三、操作考核標(biāo)準(zhǔn)（一）吸量管操作（20分，每項操作5分）1．執(zhí)管要求右手拿吸量管，左手拿橡皮球，只能用食指而不能用拇指按壓吸量管上口來調(diào)節(jié)吸取液量的刻度；吸液、排液整個操作過程吸量管應(yīng)始終保持垂直。2．坐姿要求腰、背保持豎直，看刻度時眼睛保持平視。3．吸取溶液吸量管插入液面深度約0.5cm，不能一插到底，也不能插入過淺而吸進(jìn)空氣致使溶液進(jìn)入橡皮球內(nèi)；調(diào)控吸量管吸取液量的刻度時，吸量管尖應(yīng)離開液面靠在容器內(nèi)壁上。4．排出液體吸量管尖應(yīng)靠上受納容器內(nèi)壁，讓管內(nèi)溶液自然流出。不能用橡皮球吹壓，而且在流凈后吸量管尖?？渴芗{容器內(nèi)壁至少3秒。（二）可調(diào)式微量移液器操作（20分，每項操作5分）1．設(shè)定容量值轉(zhuǎn)動加樣器的調(diào)節(jié)旋鈕，反時針方向轉(zhuǎn)動旋鈕，可提高設(shè)定取液量。順時針方向轉(zhuǎn)動旋鈕，可降低設(shè)定取液量。在調(diào)整設(shè)定移液量的旋鈕時，不要用力過猛，并應(yīng)注意使取液器顯示的數(shù)值不超過其可調(diào)范圍。2．吸液（1）選擇合適的吸頭安放在取液套筒上，稍加扭轉(zhuǎn)壓緊吸嘴使之與套筒之間無空氣間隙；（2）把按鈕壓至第一停點，垂直握持加樣器,使吸頭浸入液面下2~3毫米處,然后緩慢平穩(wěn)地松開按鈕，吸入液體，等一秒鐘，然后將吸頭提離液面，貼壁停留2-3秒，使管尖外側(cè)的液滴滑落。3．放液（1）將吸頭口貼到容器內(nèi)壁底部并保持100°~40°傾斜；（2）平穩(wěn)地把按鈕壓到第一停點，等一秒鐘后再把按鈕壓到第二停點以排出剩余液體；（3）壓住按鈕，同時提起加樣器，使吸頭貼容器壁擦過，再松開按鈕。按吸頭彈射器除去吸頭。4．壓放按鈕時保持平穩(wěn)；加樣器不得倒轉(zhuǎn)；吸頭中有液體時不可將加樣器平放。取液器吸嘴為一次性使用。實驗完畢，將取液器讀數(shù)調(diào)至最大量程值，豎立放于支架上。（三）溶液的混勻（操作流程中下劃實線的三處，每項操作5分，共15分）1．肝糖原的提取與鑒定操作中，肝勻漿上清液中加5ml95%乙醇后的混勻最好用傾倒混勻，也可用滴管或吸量管吸、吹混勻，或用玻璃棒攪拌混勻。2．肝糖原定量測定中，肝組織消化液沸水浴后全部轉(zhuǎn)入100ml容量瓶，加水至刻線后的混勻應(yīng)采用倒轉(zhuǎn)混勻。3．肝糖原定量測定中，加蒽酮溶液后的混勻，可將試管傾斜約45o再作旋轉(zhuǎn)混勻。因蒽酮溶液（濃硫酸配制）比重大于樣品水溶液很多，一加入便沉于管底（加試劑的順序一定不能顛倒），不傾斜試管旋轉(zhuǎn)混勻不了。（四）溶液的轉(zhuǎn)移（操作流程中下劃波紋線的兩處，每項操作5分，共10分）1．在研缽中研磨后的肝勻漿轉(zhuǎn)入試管離心可用滴管或取液器吸取轉(zhuǎn)移，如果采用倒入，不能灑落管外，應(yīng)盡量轉(zhuǎn)移干凈。2．肝組織沸水浴后的消化液轉(zhuǎn)入100ml容量瓶前應(yīng)冷卻；轉(zhuǎn)入時用玻璃棒引入，玻璃棒頭插入容量瓶靠瓶頸磨口下約1cm處，玻璃棒上端不要靠上瓶口邊沿，引入時試管口靠玻璃棒的位置靠近容量瓶口，不要離開瓶口太高，以免消化液沾染玻璃棒較長；轉(zhuǎn)入過程中，溶液不要沾染到容量瓶磨砂口上，更不能滴灑到容量瓶外面；應(yīng)用蒸餾水洗消化管3遍以上，洗液一并全部轉(zhuǎn)入容量瓶。（五）分光光度計的操作（25分）1．波長選擇，儀器調(diào)零，靈敏度擋選擇等操作正確（5分）。2．溶液轉(zhuǎn)移到比色杯操作（10分）手接觸比色杯毛面；倒液量不超過比色杯體積的2/3；比色溶液不能灑落在色杯外或試管外；濺出比色杯外液體的擦拭；空白液、標(biāo)準(zhǔn)液、待測液的放置順序；不能在儀器上方倒液。3．比色操作（5分）：蓋蓋；調(diào)透光度；空白調(diào)零；測定（拉桿、記錄）。4．比色后操作（5分）：比色杯溶液的倒出；比色杯清洗。（六）整體表現(xiàn)（10分）1．小組分工協(xié)作有序，不忙亂。2．實驗結(jié)束后實驗臺面的整理：器材按要求清洗干凈、器材與試劑瓶歸回原位和臺面衛(wèi)生整潔。四、實驗報告結(jié)果要求1．肝糖原的提取、鑒定鑒定方法①和鑒定方法②中最后的“呈色對比”和“觀察顏色變化”，結(jié)果一定要明確表達(dá)是“有變化”或“沒有變化”，有變化的話還要具體寫出變成什么顏色了。而且要作出明確結(jié)論：“有糖原”或“沒有糖原”，如果顏色轉(zhuǎn)變成紅色不很明顯，可以寫“有少量糖原”、“有極少量糖原”或“有微量糖原”等，但不能寫“可能有少量糖原”、“可能有極少量糖原”或“可能有微量糖原”等帶“可能”的結(jié)論。在這里結(jié)論“沒有糖原”不是說絕對沒有糖原，而只是說用這種鑒定方法鑒定不出有糖原的存在。2．肝糖原的定量測定測定數(shù)據(jù)應(yīng)記入結(jié)果欄內(nèi)，計算過程應(yīng)先寫出計算公式，再代入測定數(shù)據(jù)進(jìn)行計算，結(jié)果保留小數(shù)點后3位。如果是直接列式計算，