微生物檢驗(yàn)理論課 17螺旋體 學(xué)習(xí)資料

南方醫(yī)科大學(xué)第三附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科陳佑明電話62784781郵箱cym38432@163.com螺旋體

(Spirochaeta)

教學(xué)內(nèi)容與要求螺旋體的生物概念與生物特性螺旋體的分類及其所致疾病梅毒螺旋體感染患者的取材及實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)鉤端螺旋體、疏螺旋體的生物概念及檢測(cè)方法

螺旋體(Spirochaeta)是一類細(xì)長(zhǎng)、柔軟、彎曲呈螺旋狀的運(yùn)動(dòng)活潑的單細(xì)胞原核生物。全長(zhǎng)3～500微米，具有細(xì)菌細(xì)胞的所有內(nèi)部結(jié)構(gòu)。由核區(qū)和細(xì)胞質(zhì)構(gòu)成原生質(zhì)圓柱體，柱體外纏繞著一根或多根軸絲。軸絲的一端附著在原生質(zhì)圓柱體近末端的盤狀物上，原生質(zhì)圓柱體和軸絲都包以外包被，軸絲相互交疊并向非固著端伸展，超過(guò)原生質(zhì)圓柱體，類似外部的鞭毛，但具外包被。

概論a:用電子顯微鏡觀察負(fù)染制片螺旋體，軸絲、原生質(zhì)柱及外鞘；

b:螺旋體的橫截面。

用暗視野顯微鏡觀察含活菌的新鮮標(biāo)本，可看到運(yùn)動(dòng)活潑的螺旋體。結(jié)構(gòu)特點(diǎn)一：

與細(xì)菌的相似之處是：具有與細(xì)菌相似的細(xì)胞壁，內(nèi)含脂多糖和胞壁酸，以二分裂方式繁殖，無(wú)定型核（屬原核型細(xì)胞），對(duì)抗生素敏感。結(jié)構(gòu)特點(diǎn)二：

與原蟲的相似之處有：體態(tài)柔軟，胞壁與胞膜之間繞有彈性軸絲，借助它的屈曲和收縮能活潑運(yùn)動(dòng)，易被膽汁或膽鹽溶解。在分類學(xué)上由于更接近于細(xì)菌而歸屬在廣義的細(xì)菌范疇。螺旋體廣泛分布在自然界和動(dòng)物體內(nèi)，根據(jù)螺旋數(shù)目、螺旋大小、螺旋距離及規(guī)則程度、生理特性及寄生宿主細(xì)胞不同,結(jié)合rRNA序列分析，螺旋體分為1目3科13屬：第1科螺旋體科：9屬疏螺旋體屬（Borreliaspp），又名包柔氏螺旋體屬密螺旋體屬（Treponemaspp）第2科蛇形螺旋體科：2屬第3科鉤端螺旋體科：2屬鉤端螺旋體屬（Leptospiraspp）

上述三屬中可引起人患回歸熱和萊姆病、梅毒、鉤端螺旋體病的致病菌。螺旋體地理分布疾病螺旋體科：第1科密螺旋體屬梅毒螺旋體梅毒亞種T.pallidumsubspeciespallidum全世界梅毒（性傳播）梅毒螺旋體雅司亞種 T.pallidumsubspeciespertenue熱帶亞洲、非洲、南美、中美雅司(皮膚損傷)梅毒螺旋體地方亞種T.pallidumsubspeciesendemicum非洲、東南亞、中東、南斯拉夫地方性非性病性梅毒（黏膜損傷）品他病密螺旋體T.carateum中美、南美品他病(皮膚損傷)梅毒樣口腔螺旋體T.pallidum-likeoralspirochetes全世界壞死性齒齦炎疏螺旋體屬

杜通疏螺旋體Borreliaduttonii全世界蜱傳回歸熱

回歸熱疏螺旋體Borreliarecurrentis南美、歐亞、非洲、虱傳回歸熱

伯氏疏螺旋體Borreliaburgdorferi北美、歐洲、澳洲萊姆?。ㄓ豺纾^森疏螺旋體

Borreliavincentii鉤端螺旋體科：第3科全世界多種囗腔感染鉤端螺旋體屬問(wèn)號(hào)鉤端螺旋體（致病性鉤端螺旋體）全世界鉤端螺旋體病對(duì)人致病的螺旋體種類及致病情況

一、梅毒螺旋體

（TreponemaPallidum）微生物學(xué)

特

點(diǎn)◆透明：革蘭染色陰性，不易著色，故又稱蒼白螺旋體。Fontana鍍銀染色螺旋體成被棕褐色?！艚Y(jié)構(gòu)特點(diǎn)：細(xì)長(zhǎng)，

7～8×0.1～0.15um，形似細(xì)密的彈簧，螺旋彎曲規(guī)則，平均8～14個(gè)，兩端尖直。鍍銀染色油鏡10x100倍微生物學(xué)

特

點(diǎn)電鏡下觀察：有細(xì)胞壁和細(xì)胞膜，壁膜之間有三條類似鞭毛樣結(jié)構(gòu)纖維組成的軸原纖維（也稱軸絲endoflagella）,與運(yùn)動(dòng)有關(guān)。運(yùn)動(dòng)：移行“蛇”屈伸“爬蟲”滾動(dòng)環(huán)繞長(zhǎng)軸的旋轉(zhuǎn)◆微需氧或厭氧、橫斷分裂式繁殖◆體外培養(yǎng)困難◆在哺乳動(dòng)物（家兔睪丸）體內(nèi)繁殖Nichols株（毒力高）；細(xì)胞培養(yǎng)，最適宜的氣體環(huán)境為3%-4%O2可培養(yǎng)成功Reiter株（毒力、活力低）?！魧?duì)溫度、干燥均特別敏感，離體干燥1～2小時(shí)死亡，41℃中1小時(shí)死亡，50℃中5分鐘死亡，在4℃置3天后可死亡，對(duì)化學(xué)消毒劑敏感，1～2%石炭酸中數(shù)分鐘死亡，對(duì)青霉素、四環(huán)素、砷劑等敏感。

微生物學(xué)特性◆

梅毒螺旋體生活發(fā)育周期：（1）顆粒期（2）球形體期（3）螺旋體期◆平均約30小時(shí)增殖一代，發(fā)育周期與所致疾病周

期、隱伏發(fā)作及慢性病程有關(guān)。微生物學(xué)特性抗原分類抗原分為二類：1、密螺旋體抗原即梅毒表面特異性抗原：刺激機(jī)體產(chǎn)生特異的凝集抗體、制動(dòng)抗體或溶解抗體。與其他密螺旋體存在共同抗原，有交叉反應(yīng)。2、非密螺旋體抗原即磷脂類抗原：當(dāng)螺旋體侵入組織后，組織中的磷脂可粘附在螺旋體上，形成復(fù)合抗原，此種復(fù)合抗原可刺激機(jī)體產(chǎn)生抗磷脂的自身免疫抗體，稱為反應(yīng)素（Aegagin），可與牛心肌或其他正常動(dòng)物心肌提取的類脂質(zhì)和膽固醇、卵磷脂混合物起沉淀反應(yīng)或補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)。發(fā)病機(jī)理淋巴結(jié)腫大螺旋體入侵局部皮膚或粘膜炎癥反應(yīng)小血管內(nèi)皮細(xì)胞增生變厚、管腔填塞病灶區(qū)糜爛、潰瘍滲出液致病物質(zhì)：黏多糖、唾液酸、透明質(zhì)酸酶、外膜蛋白◆人是梅毒的唯一傳染源?！粝忍煨悦范荆夯济范镜脑袐D經(jīng)胎盤傳染給胎兒?！艉筇煨悦范荆撼錾蟾腥镜?，其中95%是由性交直接感染，少數(shù)通過(guò)輸血等間接途徑感染。

臨床意義：

先天性梅毒又稱胎傳梅毒。梅毒螺旋體經(jīng)胎盤進(jìn)入胎兒血循環(huán)，引起胎兒全身感染，螺旋體在胎兒內(nèi)臟（肝、脾、肺及腎上腺）及組織中大量繁殖，造成流產(chǎn)、早產(chǎn)或死胎，如胎兒不死則稱為梅毒兒，會(huì)出皮膚梅毒瘤、骨膜炎、馬鞍鼻、鋸齒形牙、神經(jīng)性耳聾等癥狀。后天獲得性梅毒表現(xiàn)復(fù)雜，依其傳染過(guò)程可分為三期：

（1）一期梅毒：梅毒螺旋體侵入皮膚粘膜約三周后，在侵入局部出現(xiàn)無(wú)痛性硬結(jié)及潰瘍，稱硬性下疳。局部組織鏡檢可見淋巴細(xì)胞及巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)。下疳多發(fā)生于外生殖器，其潰瘍滲出物含有大量梅毒螺旋體，傳染性極強(qiáng)。下疳?？勺匀挥?，約2～3個(gè)月無(wú)癥狀的隱伏期后進(jìn)入第二期。

后天獲得性梅毒表現(xiàn)復(fù)雜，依其傳染過(guò)程可分為三期：

（2）二期梅毒：此期的主要表現(xiàn)為全身皮膚粘膜出現(xiàn)梅毒疹，全身淋巴結(jié)腫大，有時(shí)亦累及骨、關(guān)節(jié)、眼及其他器官。在梅毒疹及淋巴結(jié)中有大量螺旋體。不經(jīng)治療癥狀一般可在3周～3個(gè)月后自然消退而痊愈；部分病例經(jīng)隱伏3～12個(gè)月后可再發(fā)作。二期梅毒因治療不當(dāng)，經(jīng)過(guò)5年或更久的反復(fù)發(fā)作，而進(jìn)入三期。

后天獲得性梅毒表現(xiàn)復(fù)雜，依其傳染過(guò)程可分為三期：

（3）三期梅毒：主要表現(xiàn)為皮膚粘膜的潰瘍性損害或內(nèi)臟器官的肉芽腫樣病變（梅毒瘤），嚴(yán)重者在經(jīng)過(guò)10～15年后引起心血管及中樞神經(jīng)系統(tǒng)損害，導(dǎo)致動(dòng)脈瘤、脊髓癆及全身麻痹等，此期的病灶中螺旋體很少，不易檢出。

一、二期梅毒又統(tǒng)稱為早期梅毒，此期傳染性強(qiáng)而破壞性小。三期梅毒又稱為晚期梅毒，該期傳染性小，病程長(zhǎng)、而破壞性大。

實(shí)驗(yàn)室檢查一、病原體直接檢查二、血清學(xué)實(shí)驗(yàn)（抗體檢測(cè)）

（1）非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)實(shí)驗(yàn)（2）梅毒螺旋體血清學(xué)實(shí)驗(yàn)三、核酸檢測(cè)：TP-PCR

四、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：兔感染試驗(yàn)病原體檢查之一——暗視野顯微鏡法◆可直接觀察到病灶分泌物中的梅毒螺旋體?！艚Y(jié)合臨床癥狀可直接診斷梅毒。◆適用于早期梅毒的診斷?！舨僮骱?jiǎn)單，經(jīng)濟(jì)、快速?！魧?duì)晚期及隱性梅毒患者或口腔病灶材料不適用。病原體檢查之二——鍍銀染色（Warthin-Starry）法

◆梅毒螺旋體有嗜銀特性，被染成黑褐色?！絷?yáng)性結(jié)果需謹(jǐn)慎解釋，因?yàn)轭愃泼范韭菪w的其他物質(zhì)易混淆。病原體檢查之三——免疫熒光染色◆待檢組織樣品通過(guò)單克隆抗體免疫熒光標(biāo)記后，在熒光顯微鏡下可見熒光顯色的梅毒螺旋體。病原體檢查之四——多功能顯微鏡檢測(cè)儀MDI◆一種綜合相差對(duì)比、暗視野及偏振光的可變投影顯微鏡，是在高清晰度的情況下連續(xù)放大40～15000倍?！羝涮攸c(diǎn)是待檢查標(biāo)本不需染色及任何加工處理，而是將“活的”真實(shí)的樣品直接進(jìn)行觀察，同時(shí)配有顯示器、錄像機(jī)和彩色激光打印機(jī)，可將觀察結(jié)果同步錄像和拍照。◆具有直接、方便、快速的優(yōu)點(diǎn)?！粲糜冖衿诿范驹\斷的陽(yáng)性率為83.75%?！舻變x器價(jià)格昂貴,技術(shù)人員要有一定經(jīng)驗(yàn)，很難普及到各個(gè)梅毒檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室。非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)實(shí)驗(yàn)（初篩實(shí)驗(yàn)）1.瓦氏實(shí)驗(yàn)、康氏實(shí)驗(yàn)（敏感性低、特異性差）2.性病研究實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)VDRL

(venerealdiseaseresearchlaboratory)3.快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片實(shí)驗(yàn)RPR

(rapidplasmareagincirclecardtest)4.不加熱血清反應(yīng)素實(shí)驗(yàn)USR

(unheatedserumreagin)5.甲苯胺紅不加熱血清反應(yīng)素試驗(yàn)TRUST

(Toluidinereaginunheatedserumtest)性病研究實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)VDRL◆

美國(guó)Pangborn等發(fā)明一種性病研究實(shí)驗(yàn)室抗原(VDRL)，是從牛心肌中提取的心磷脂，適量加入膽固醇及卵磷脂以提高敏感性，通常稱這種抗原為心磷脂抗原?！?/p>

屬于微量玻片法，是唯一推薦用于檢測(cè)腦脊液(CSF)反應(yīng)素的試驗(yàn)。對(duì)診斷神經(jīng)梅毒具有重要價(jià)值?！?/p>

優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)單，2h內(nèi)出結(jié)果，試劑及對(duì)照血清已標(biāo)準(zhǔn)化，費(fèi)用低?！?/p>

缺點(diǎn)是Ⅰ期梅毒敏感性不高?？焖傺獫{反應(yīng)素環(huán)狀卡片實(shí)驗(yàn)RPR◆

是20世紀(jì)80年代問(wèn)世的非特異性梅毒血清學(xué)試驗(yàn)?！?/p>

檢測(cè)血清中非特異性抗體，所用抗原為標(biāo)準(zhǔn)的牛心肌脂抗原，主要用于Ⅰ期梅毒的診斷。◆

用于Ⅰ期梅毒陽(yáng)性率為75%～85%。該方法有操作簡(jiǎn)便、迅速、結(jié)果容易判定、不需滅活、不需顯微鏡、抗原不需新鮮配制等優(yōu)點(diǎn)，適用于大量標(biāo)本檢測(cè)?！鬜PR試驗(yàn)和DF方法對(duì)Ⅰ期梅毒的診斷相互配合，可早期診斷梅毒。缺點(diǎn)是當(dāng)抗體含量過(guò)高時(shí)，易出現(xiàn)假陰性反應(yīng)，即前帶現(xiàn)象(prozonephenomenon)，會(huì)有漏檢及生物學(xué)假陽(yáng)性反應(yīng)。對(duì)潛伏期梅毒、神經(jīng)梅毒不敏感。

不加熱血清反應(yīng)素實(shí)驗(yàn)USR◆

是VDRL抗原的改良，在玻片上做絮狀反應(yīng),肉眼讀取結(jié)果，本方法在我國(guó)目前廣泛采用。◆

優(yōu)點(diǎn)是血清不需加熱滅活，抗原懸液可保存4個(gè)月，不需用時(shí)現(xiàn)配制，節(jié)省操作時(shí)間，但主觀性強(qiáng)易出現(xiàn)漏檢。USR與RPR試驗(yàn)可作為療效觀察或隨訪有否復(fù)發(fā)或再感染的指征。甲苯胺紅不加熱血清反應(yīng)素試驗(yàn)TRUST◆

該試驗(yàn)所用的抗原是從牛心提取的心磷脂和從雞蛋黃提取的卵磷脂及膽固醇?！?/p>

與RPR方法比較，本試驗(yàn)是VDRL試劑中加了甲苯胺紅溶液，陽(yáng)性呈紅色的不同程度的凝塊懸于液體中，在白色紙卡上,結(jié)果清晰易讀，簡(jiǎn)便快速，穩(wěn)定性好，對(duì)非特異性反應(yīng)素抗體導(dǎo)致的陽(yáng)性標(biāo)本TRUST法的檢出率和重復(fù)性都強(qiáng)于RPR法，TRUST法比RPR、USR效價(jià)測(cè)定高一個(gè)滴度?！?/p>

缺點(diǎn)是許多因素影響結(jié)果,如高脂血癥和抗心磷脂抗體陽(yáng)性的血清均可干擾而出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。而且該試驗(yàn)在非淋菌性尿道炎患者中存在生物學(xué)假陽(yáng)性。自身免疫性疾病患者中也在生物學(xué)假陽(yáng)性。梅毒螺旋體血清學(xué)實(shí)驗(yàn)1.熒光密螺旋體抗體吸收實(shí)驗(yàn)FTA-ABS

2.梅毒螺旋體熒光抗體雙染色試驗(yàn)FTA-ABS-DS3.梅毒螺旋體抗體血球凝集實(shí)驗(yàn)TPHA4.梅毒螺旋體抗體明膠凝集實(shí)驗(yàn)TPPA

5.梅毒螺旋體抗體免疫印跡實(shí)驗(yàn)（Western

blotting）6.梅毒螺旋體抗體酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)TP-ELISA7.梅毒螺旋體抗體化學(xué)發(fā)光檢測(cè)CMIA8.梅毒螺旋體抗體膠體金免疫層析法GICA

熒光密螺旋體抗體吸收實(shí)驗(yàn)FTA-ABS◆是以密螺旋體無(wú)毒株(Reiter株)抗原吸收待檢血清，排除了同屬抗原的交叉結(jié)合，保證了試驗(yàn)結(jié)果的特異性；以整條梅毒螺旋體檢測(cè)血清中抗體，確保各種抗原分子的完整存在，提高了試驗(yàn)的敏感性?！鬎TA-ABS-IgG不能反映病程活動(dòng)性，不能診斷胎傳梅毒，而用FTA-ABS-IgM檢測(cè)IgM抗體來(lái)診斷胎傳梅毒。它的主要缺點(diǎn)是需熒光顯微鏡設(shè)備，實(shí)驗(yàn)人員要有一定的專業(yè)技能和工作經(jīng)驗(yàn)，尤其當(dāng)標(biāo)本熒光微弱病情可疑時(shí)，試驗(yàn)結(jié)果判定常帶有主觀色彩。梅毒螺旋體熒光抗體雙染色試驗(yàn)FTA-ABS-DS◆技術(shù)要求較高，費(fèi)時(shí)費(fèi)錢，多用于實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)。梅毒螺旋體明膠凝集實(shí)驗(yàn)TPPA◆

目前國(guó)內(nèi)較多醫(yī)院常用于梅毒血清抗體檢測(cè)方法之一?！?/p>

將特異性梅毒螺旋體抗原包被在明膠顆粒上，與血清中的特異性抗體結(jié)合后出現(xiàn)肉眼可見的凝集反應(yīng)的檢測(cè)方法?！?/p>

作為梅毒抗體檢測(cè)的確證方法，有著很高的敏感度和特異性?！?/p>

有文獻(xiàn)報(bào)道TPPA的敏感性比TPHA好。操作較簡(jiǎn)便、結(jié)果易清晰判斷，但價(jià)格昂貴和結(jié)果判斷難以自動(dòng)化等缺點(diǎn)限制其用于血站大規(guī)模的血液篩查。TPPA操作圖TPPA結(jié)果判讀梅毒血清試驗(yàn)結(jié)果判斷

RPRUSRTRUSTTPHAFTA-ABS

TPPA反應(yīng)結(jié)果判斷陰性陰性陰性陰性

排除梅毒感染初期，尚未產(chǎn)生任何抗體；AIDS病人合并感染梅毒陰性陰性陽(yáng)性陽(yáng)性既往患梅毒；對(duì)FTA-ABS及TPPA非特異性反應(yīng)陽(yáng)性陰性陰性陰性生物性假陽(yáng)性(BFP)；可疑早期梅毒陽(yáng)性陰性陽(yáng)性陽(yáng)性早期梅毒；陳舊性梅毒陰性陽(yáng)性陰性陰性梅毒治愈，對(duì)TPHA非特異性反應(yīng)陰性陽(yáng)性陽(yáng)性陽(yáng)性先天梅毒；梅毒治愈；其它螺旋體感染陽(yáng)性陽(yáng)性陰性陽(yáng)性可疑既往患梅毒，梅毒螺旋體抗體消失陽(yáng)性陽(yáng)性陽(yáng)性陽(yáng)性梅毒(治愈或未治愈)

龍振華，鄺捷，苗鋼.《臨床皮膚科雜志》2002年9月第9期

梅毒螺旋體免疫印跡實(shí)驗(yàn)◆是20世紀(jì)80年代發(fā)展起來(lái)的一種檢測(cè)技術(shù)。◆結(jié)合了免疫學(xué)和分子生物學(xué)的特點(diǎn)，敏感性高，特異性強(qiáng)。該試驗(yàn)是通過(guò)電泳轉(zhuǎn)移硝酸纖維膜抗原條上含有梅毒螺旋體的各種成分來(lái)確認(rèn)是否梅毒感染。梅毒螺旋體酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)ELISA◆是一種基于基因工程的特異性檢測(cè)技術(shù)，靈敏度和特異性均較高，特異性抗體在梅毒的潛伏期即產(chǎn)生約感染后2周，對(duì)梅毒的晚期輔助診斷較好?！?/p>

可作為檢驗(yàn)科的常規(guī)操作技術(shù)，操作簡(jiǎn)便，試劑價(jià)格比較便宜，適合血站獻(xiàn)血者篩查、醫(yī)院大批量體檢和大、中型醫(yī)院檢驗(yàn)室對(duì)梅毒感染的晚期檢查，但耗時(shí)比TRUST長(zhǎng)，需要酶標(biāo)儀、洗板機(jī)。其次要缺點(diǎn)該法檢測(cè)的是梅毒IgM和IgG的混合抗體，梅毒IgG抗體治愈后相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)間內(nèi)仍然具有較高的陽(yáng)性率，以致終身陽(yáng)性，因此，TP-ELISA陽(yáng)性只說(shuō)明正在感染或曾經(jīng)感染過(guò)，不能判斷梅毒疾病活動(dòng)與否，所以不能作為療效監(jiān)測(cè)手段。核酸檢測(cè)（TP-PCR）◆檢測(cè)梅毒螺旋體DNA，特異性強(qiáng)敏感性高。◆檢測(cè)樣品：分泌物、組織、體液等?！舭谢颍簍pf21、BMP、tmpA、tmpB、47kDa、16SrRNA、polA等◆臨床意義：血清學(xué)陰性的早期梅毒、神經(jīng)梅毒的診斷；區(qū)分胎傳梅毒和母體梅毒。兔感染試驗(yàn)◆將標(biāo)本接種于梅毒血清反應(yīng)陰性的新西蘭兔睪丸內(nèi)，18～20℃、無(wú)抗生素飼料喂養(yǎng)，逐日觀察睪丸。一旦炎癥出現(xiàn)，抽取睪丸液作暗視野顯微鏡直接鏡檢，同時(shí)取血清做RPR或微量血清凝集反應(yīng)，每三周一次，共三個(gè)月，兩者陰性才能報(bào)告“無(wú)梅毒螺旋體梅毒亞種檢出”?！舨襟E繁瑣，成本高，不適合臨床檢測(cè)。二、鉤端螺旋體

（Leptospira)

病原學(xué)特點(diǎn)

◆引起鉤端螺旋體病，也稱鉤體病?！羧诵蠊不肌！羧澜绺鞔笾蘧辛餍小２≡瓕W(xué)特點(diǎn)◆菌體纖細(xì)、長(zhǎng)絲狀，長(zhǎng)約6～12μm，直徑0.1～0.2μm，約有18個(gè)螺旋?！舾锾m染色陰性，著色較難?！舭狄曇帮@微鏡下可見細(xì)密、規(guī)則、

珍珠狀排列的細(xì)鏈螺旋，兩端彎曲成C、

S或8字形，運(yùn)動(dòng)活潑?！艋窘Y(jié)構(gòu)：外膜、內(nèi)鞭毛、原質(zhì)柱狀體，內(nèi)鞭毛二根微生物學(xué)特性◆需氧生長(zhǎng)?！粼趐H7.2～7.4的含兔血清或TWEEN80的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好，約12～16小時(shí)繁殖一代?！魧?duì)熱和酸的抵抗力弱，60℃1分鐘即死亡；在0.2%來(lái)蘇爾、1：2000升汞、1%石炭酸中10～30分即被滅活。◆對(duì)青霉素敏感，在酸堿度為中性的濕土或水中可存活20天，甚至數(shù)月。

抗原構(gòu)造◆屬特異性抗原:糖蛋白或脂蛋白，只存在鉤端螺旋體屬中。

genus-specificproteinantigen,GP-Ag◆群特異性抗原：存在鉤端螺旋體內(nèi)部，為脂多糖復(fù)合物。

serogroup-specificantigen◆型特異性抗原：在鉤端螺旋體表部，為多糖蛋白復(fù)合物。

serovar-specificantigen血清分型◆世界：25個(gè)血清群270多種血清型◆中國(guó)：19個(gè)血清群160多種血清型◆常見：波摩拿群：分布最廣

黃疸出血群：毒力最強(qiáng)流感傷寒群七日熱群發(fā)病機(jī)理鉤體入侵破損的皮膚或粘膜局部繁殖經(jīng)淋巴系統(tǒng)或直接進(jìn)入血循環(huán)毒素作用于全身各系統(tǒng)滲出液接觸疫水全身重要器官毛細(xì)血管損害，功能障礙，DIC臨床意義鉤體病潛伏期為3～30天，分三期：（1）敗血癥期（2）器官損傷期（六型）流感傷寒型肺出血型黃疸出血型腦膜腦炎型休克型腎型（3）恢復(fù)期各種鉤端螺旋體病的臨床癥狀病型

型別

癥狀

體征流感傷寒型流感傷寒型、七日熱型、波摩拿型發(fā)熱、酸痛、全身不適、乏力眼結(jié)膜充血、腓腸肌疼痛、全身淺表淋巴結(jié)腫大、壓痛肺出血型血痰、咯血五征象：面色蒼白、青紫；心慌、煩燥；心率加快；呼吸急促；肺部啰音黃疸出血型黃疸出血型、秋季型、澳洲型、犬型黃疸、出血、腎損害腦膜腦炎型劇烈頭痛、頸項(xiàng)強(qiáng)直、嘔吐、畏光腦膜刺激癥休克型脈細(xì)>100次/分、四肢厥冷、皮膚蒼白、少尿收縮壓<70mmHg腎型蛋白尿、少尿、重者無(wú)尿、酸中毒蛋白尿、管型尿、血尿、腎區(qū)叩痛實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)一、一般檢驗(yàn)二、病原學(xué)檢驗(yàn)三、血清學(xué)檢驗(yàn)四、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)一般檢驗(yàn)

鉤端螺旋體入侵機(jī)體后產(chǎn)生的毒素會(huì)引起一系列的功能異?；蛭蓙y（1）患者的白細(xì)胞總數(shù)增加；中性粒輕度增高或正常，黃疸出血型常增高（2）血沉持續(xù)增高（3）早期患者尿內(nèi)可見少量蛋白、RBC、WBC及管型病原學(xué)檢驗(yàn)（1）顯微鏡直接鏡檢（2）抗原檢測(cè)（3）核酸檢測(cè)（4）分離培養(yǎng)及鑒定病原學(xué)檢驗(yàn)之一——顯微鏡直接鏡檢◆差速離心暗視野顯微鏡檢查：適用于血、尿、腦脊液、尿液及組織標(biāo)本的鉤端螺旋體檢查。

暗視野顯微鏡觀察或Fontana鍍銀染色鏡檢病原學(xué)檢驗(yàn)之二——抗原檢測(cè)◆血、尿、腦脊液直接制成涂片或差速離心后的沉淀制成的涂片，空氣干燥、丙酮固定后滴加熒光抗體，置濕盒37℃孵育后熒光顯微鏡檢查，可見發(fā)出明顯綠色熒光的細(xì)長(zhǎng)呈C或S形、兩端有鉤的典型菌體，或短小、有3個(gè)螺旋、染色明亮的不典型菌體?！羧秉c(diǎn)：一定比例的假陽(yáng)性，熒光抗體的制備困難。病原學(xué)檢驗(yàn)之三——核酸檢測(cè)◆聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）：檢測(cè)標(biāo)本中鉤端螺旋體特異DNA片段，如23SrDNA可診斷。通用引物G1-G2?！鬌NA分子雜交：同位素、地高辛或生物素標(biāo)記特異性DNA探針的雜交技術(shù)，檢測(cè)患者或動(dòng)物血液、尿中鉤端螺旋體DNA。病原學(xué)檢驗(yàn)之四——分離培養(yǎng)和鑒定◆Korthof培養(yǎng)基?！?8℃?！魀H7.2-7.6◆每周常規(guī)檢查一次培養(yǎng)物，共5次，無(wú)鉤端螺旋體生長(zhǎng)才能報(bào)陰性結(jié)果。血清學(xué)檢驗(yàn)（1）顯微凝集試驗(yàn)（2）補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)（3）間接凝集試驗(yàn)（4）溶血試驗(yàn)（5）酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)血清學(xué)檢驗(yàn)之一——顯微凝集試驗(yàn)

（macroscopicagglutinationtest,MAT)◆檢測(cè)鉤端螺旋體抗體的金標(biāo)準(zhǔn)◆所用抗原為活的鉤端螺旋體◆待測(cè)血清用PBS緩沖液等倍稀釋◆

單份效價(jià)1：400以上或雙份血清效價(jià)增高4倍以上有診斷意義動(dòng)物實(shí)驗(yàn)◆將可能感染有鉤端螺旋體的疫水（或血液、尿液、腦脊液等）接種于幼年豚鼠的腹腔?！裘咳毡O(jiān)測(cè)，如生命體征出現(xiàn)明顯變化（口、鼻、肛門出血、唇、眼、結(jié)膜、耳黃染及體溫聚降至37℃以下），立即解剖，取肝腎組織作培養(yǎng)，腎切面壓印片鍍銀染色或腎臟鹽水漂洗液暗視野鏡檢。三、回歸熱疏螺旋體（B.recurretis）疏螺旋體的一種，是引起人類周期性反復(fù)發(fā)作回歸熱的病原體?？煞侄悾?/p>

虱傳回歸熱（流行性回歸熱）蜱傳回歸熱（地方性回歸熱）生物學(xué)特性：5-10個(gè)不規(guī)則的螺旋，運(yùn)動(dòng)活潑；革蘭染色陰性，Giemsa染色呈紫紅色。虱傳回歸熱疏螺旋體與變形桿菌OX株有部分共同抗原。三、回歸熱疏螺旋體（B.recurretis）所致疾?。和蝗桓邿帷㈩^痛、肝脾腫大，發(fā)熱持續(xù)1周左右驟退，同時(shí)血中螺旋體消失，間歇1-2周后又再次發(fā)熱，血液中再次出現(xiàn)螺旋體，癥狀再現(xiàn)。反復(fù)發(fā)作3-10次，故稱回歸熱。機(jī)制：螺旋體外膜蛋白易發(fā)生變異之故。微生物學(xué)檢驗(yàn)：螺旋體檢查：發(fā)熱期采血，制成厚涂片，直接用暗視野顯微鏡檢查或Giemsa染色或Wright染色后鏡檢。豚鼠對(duì)蜱型回歸熱疏螺旋敏感，對(duì)虱型有抵抗力。培養(yǎng)：蜱或患者血液接種于BSK培養(yǎng)基上。三、回歸熱疏螺旋體（B.recurretis）四、伯氏疏螺旋體（B.burgdorferi）是萊姆病的病原體。萊姆病最初于1977年在美國(guó)康涅狄格州的萊姆鎮(zhèn)發(fā)現(xiàn)而得名，1982年由Burgdorferi從疫區(qū)的硬蜱及患者體內(nèi)分離出伯氏疏螺旋體。自然疫源性疾病，流行較廣。1985年我國(guó)在黑龍江省林區(qū)首次發(fā)現(xiàn)萊姆病，迄今已在十多個(gè)省區(qū)均有本病存在。生物學(xué)特性：形態(tài)：長(zhǎng)10-40um,寬0.1-0.3um，兩端稍尖，有3-10個(gè)大而稀疏不規(guī)則的螺旋。革蘭染色陰性，但不易著色，Giemsa或Wright染色著色良好，呈紫紅色，鍍銀染色呈棕褐色。運(yùn)動(dòng)方式：滾動(dòng)、翻轉(zhuǎn)、移動(dòng)三種。四、伯氏疏螺旋體（B.burgdorferi）抗原成分：主要有鞭毛蛋白（41kD），外膜蛋白A(OspA)、B(OspB)、C(OspC)、60kD，脂蛋白等，分布于螺旋體的鞭毛、外膜及細(xì)胞膜上。培養(yǎng)特性：營(yíng)養(yǎng)要求高，培養(yǎng)基需含有長(zhǎng)鏈飽和與不飽和脂肪酸、葡萄糖、氨基酸和牛血清蛋白等。所致疾病與發(fā)病機(jī)制：萊姆病，人普遍易感。儲(chǔ)存宿主：鼠類，傳播媒介：硬蜱，潛伏期：3-30天，慢性移行性紅斑（ECM），并伴有乏力、頭痛、發(fā)熱、肌痛等。未經(jīng)治療，約80%可發(fā)展至晚期：慢性關(guān)節(jié)炎、慢性神經(jīng)系統(tǒng)或皮膚等異常。伯氏螺旋體致病機(jī)