微生物的選擇培養(yǎng)與計(jì)數(shù)課件高二下學(xué)期生物人教版選擇性必修3

配制培養(yǎng)基↓滅菌↓接種↓分離↓培養(yǎng)純培養(yǎng)物由單一個(gè)體繁殖所獲得的微生物群體如何從自然界中分離出需要的特定微生物？尋找目的菌種時(shí)要根據(jù)它對(duì)生存環(huán)境的要求，到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找。純培養(yǎng)一、選擇培養(yǎng)基完全培養(yǎng)基完全培養(yǎng)基+青霉素長(zhǎng)出各種各樣的細(xì)菌對(duì)青霉素有抗性的細(xì)菌對(duì)青霉素?zé)o抗性的細(xì)菌被淘汰怎樣選擇出對(duì)青霉素有抗性的細(xì)菌?概念：在微生物學(xué)中，允許特定種類的微生物生長(zhǎng)，同時(shí)抑制或阻止其他種類微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基。怎么證明一個(gè)選擇培養(yǎng)基具有選擇性？

應(yīng)設(shè)置基礎(chǔ)培養(yǎng)基（如牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基）或完全培養(yǎng)基作為對(duì)照，若基礎(chǔ)培養(yǎng)基或完全培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的菌落數(shù)菌多于該選擇培養(yǎng)基，則該選擇培養(yǎng)基具有選擇性。類型：①利用添加某種化學(xué)物質(zhì)進(jìn)行選擇培養(yǎng)加入青霉素的培養(yǎng)基分離酵母菌、霉菌等真菌（青霉素能殺死細(xì)菌、放線菌,對(duì)真菌不起作用）加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基分離金黃色葡萄球菌②利用改變培養(yǎng)條件進(jìn)行選擇培養(yǎng)70～80℃的高溫分離耐高溫的水生棲熱菌使用將PH調(diào)至酸性的培養(yǎng)基分離耐酸菌無(wú)氧環(huán)境下培養(yǎng)分離厭氧型和兼性厭氧型微生物③利用營(yíng)養(yǎng)缺陷進(jìn)行選擇培養(yǎng)不加氮源的無(wú)氮培養(yǎng)基分離固氮菌不加含碳有機(jī)物的無(wú)碳培養(yǎng)基分離自養(yǎng)型微生物石油是唯一碳源的培養(yǎng)基篩選出石油降解菌牛肉膏5.0g蛋白胨10.0gNaCl5.0g瓊脂20.0g蒸餾水定容到1000ml培養(yǎng)基一KH2PO41.4gNaH2PO42.1gMgSO4·7H2O0.2g葡萄糖10.0g尿素1.0g瓊脂15.0g蒸餾水定容到1000ml培養(yǎng)基二?可作為完全培養(yǎng)基（起對(duì)照作用）選擇哪種培養(yǎng)基更合適？如果讓你配制一種培養(yǎng)基，將土壤稀釋液中能分解尿素的細(xì)菌分離出來(lái)，培養(yǎng)基的配方該如何設(shè)計(jì)？討論：1.如果讓你配制一種培養(yǎng)基，將土壤稀釋液中能分解尿素的細(xì)菌分離出來(lái)，培養(yǎng)基的配方該如何設(shè)計(jì)？設(shè)計(jì)一種選擇培養(yǎng)基，用尿素作為唯一氮源，可以將分解尿素的細(xì)菌分離出來(lái)。這種培養(yǎng)基與普通培養(yǎng)基相比，只是用尿素作為唯一氮源，培養(yǎng)基的其他營(yíng)養(yǎng)成分（碳源、水、無(wú)機(jī)鹽）基本相同。2.該培養(yǎng)基與普通培養(yǎng)基有哪些共同點(diǎn)和不同點(diǎn)？3.從物理性質(zhì)來(lái)分，該培養(yǎng)基屬于什么培養(yǎng)基？為什么固體培養(yǎng)基，因?yàn)樘砑恿四虅┉傊伎迹簝H通過(guò)選擇培養(yǎng)基可以知道1g土壤中有多少能分解尿素的細(xì)菌嗎？還需要對(duì)土樣進(jìn)行適當(dāng)?shù)奶幚硪约翱茖W(xué)的測(cè)定微生物數(shù)量的方法P18探究實(shí)踐：能分解尿素的細(xì)菌都是異養(yǎng)型微生物，不能利用CO2來(lái)合成有機(jī)物，可用葡萄糖等有機(jī)物作為碳源。

僅通過(guò)選擇培養(yǎng)基可以知道1g土壤中有多少能分解尿素的細(xì)菌嗎？分離：獲得分解尿素的細(xì)菌的純培養(yǎng)物計(jì)數(shù)：測(cè)定分解尿素的細(xì)菌的數(shù)量可否直接制備土壤溶液，利用平板劃線法接種到選擇培養(yǎng)基上，進(jìn)行培養(yǎng)計(jì)數(shù)？不能。平板劃線法最開(kāi)始的劃線細(xì)菌可能會(huì)長(zhǎng)成一片，導(dǎo)致無(wú)法計(jì)數(shù)，此外灼燒接種環(huán)的時(shí)候也會(huì)殺死一部分細(xì)菌。A.梯度稀釋菌液

B.涂布平板稀釋度足夠高時(shí)，能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)菌落。聚集的微生物菌液梯度稀釋涂布平板單個(gè)細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖單個(gè)菌落

取土樣時(shí)用的鐵鏟和取樣袋在使用前都需要滅菌。操作完成后，一定要洗手。已稀釋10倍6支試管，分別加入9ml無(wú)菌水（1）注意：多余的酒精在燒杯中滴盡，然后再放在火焰上灼燒。移液槍（2）涂布平板1×107該過(guò)程中所有操作都應(yīng)在酒精燈火焰旁進(jìn)行；待涂布的菌液被培養(yǎng)基吸收后，將平板倒置，放入30～37℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1～2d，在涂布有合適濃度菌液的平板上就可以觀察到分離的單菌落。4.稀釋涂布平板法和平板劃線法的比較方法平板劃線法稀釋涂布平板法純化原理接種工具單菌落的獲得用途效果圖相同點(diǎn)連續(xù)劃線梯度稀釋→涂布平板接種環(huán)涂布器從最后劃線區(qū)挑取稀釋度合適的整個(gè)平板上都可找到單菌落分離純化菌種，獲得單菌落①分離純化菌種，獲得單菌落②用于計(jì)數(shù)①都能分離純化菌種；②都在固體培養(yǎng)基上進(jìn)行二、微生物的選擇培養(yǎng)A104（2）統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目時(shí)，要選擇菌落數(shù)范圍為多少的平板？（3）在同一稀釋度下，至少對(duì)3個(gè)平板進(jìn)行重復(fù)計(jì)數(shù)求平均值的原因是什么？（4）通過(guò)此方法統(tǒng)計(jì)的細(xì)菌的數(shù)目與它的實(shí)際數(shù)目相同嗎？①②③④比實(shí)際值偏大三、微生物的數(shù)量測(cè)定1.間接計(jì)數(shù)—稀釋涂布平板法（1）2.直接計(jì)數(shù)—計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)法甲同學(xué)做此實(shí)驗(yàn)在稀釋倍數(shù)105獲得3個(gè)平板，菌落數(shù)分別是80、90、100，涂布平板時(shí)均使用0.1ml菌液，試計(jì)算每克土壤中可以分離尿素的細(xì)菌數(shù)目？（80+90+100）/30.1×105=9×107個(gè)/克2.直接計(jì)數(shù)—計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)法（1）原理：利用細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下觀察、計(jì)數(shù)，然后再計(jì)算一定體積樣品中微生物的數(shù)量。血細(xì)胞計(jì)數(shù)板：細(xì)菌計(jì)數(shù)板：常用于相對(duì)較大的酵母菌細(xì)胞、霉菌孢子等的計(jì)數(shù)。對(duì)細(xì)菌等較小的細(xì)胞進(jìn)行觀察和計(jì)數(shù)。三、微生物的數(shù)量測(cè)定土壤是微生物的天然培養(yǎng)基，下面是有關(guān)土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)的實(shí)驗(yàn)過(guò)程，請(qǐng)根據(jù)下圖回答相關(guān)問(wèn)題。（1）為分離出土壤中分解尿素的細(xì)菌，應(yīng)該用

的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行分離。

（2）若取土樣5g，應(yīng)加入

中配制成1×101倍稀釋的土壤溶液。因土壤中細(xì)菌密度很大，需要不斷加以稀釋，配制成如上圖所示的不同濃度的土壤溶液。取樣稀釋前，一定要

以減少誤差。

稀釋倍數(shù)1×1031×1041×1051×1061×107平均菌落數(shù)>5003672482618以尿素為唯一氮源45mL無(wú)菌水搖勻（振蕩、混勻）課堂練習(xí)稀釋倍數(shù)1×1031×1041×1051×1061×107平均菌落數(shù)>5003672482618（3）從1×103~107倍稀釋的稀釋液中分別吸取0.1mL加到固體培養(yǎng)基上，用

將其分散，每個(gè)濃度稀釋液至少接種

個(gè)平板，以減少實(shí)驗(yàn)誤差。（4）將接種的培養(yǎng)皿

在30-37℃的