2024-2025學年高中生物第一章無菌操作技術實踐第一節(jié)微生物的分離和培養(yǎng)第2課時微生物分離和培養(yǎng)的技術操作以大腸桿菌為例知能演練輕巧奪冠蘇教版選修1

PAGEPAGE1第2課時微生物分別和培育的技術操作（以大腸桿菌為例）[隨堂檢測][學生用書P13]學問點一培育基的配制1．在培育基的配制過程中，具有如下步驟，其正確依次為()①熔化②調pH③加棉塞④包扎⑤分裝⑥稱量A．①②⑥⑤③④B．⑥①②⑤③④C．⑥①②⑤④③D．①②⑤④⑥③解析：選B。上述步驟中，培育基的配制依次為稱量→熔化→調pH→分裝→加棉塞→包扎。2．牛肉膏蛋白胨培育基中加入瓊脂這一志向的凝固劑，下列關于瓊脂的說法，不正確的是()A．不被所培育的微生物分解利用，對所培育的微生物無毒害作用B．在微生物生長溫度范圍內保持固體狀態(tài)C．瓊脂凝固點低，利于微生物的生長D．瓊脂在滅菌過程中不會被破壞，透亮度好，凝固力強解析：選C。在液體培育基中加入凝固劑如瓊脂后，制成固體培育基，它是試驗室中最常用的培育基之一。固體培育基中可形成肉眼可見的單個細胞繁殖而來的子細胞群體，即菌落，用于微生物的分別、計數(shù)和菌種鑒定等。瓊脂作為一種志向的凝固劑，是其性質確定瓊脂不會被微生物利用且對微生物無毒害作用，在滅菌過程中不會被破壞，透亮度好，凝固力強。瓊脂在98℃以上可溶解于水，在45℃以下凝固，所以在微生物生長溫度范圍內保持固體狀態(tài)。學問點二無菌操作和接種技術3．做“微生物的分別與培育”試驗時，下列敘述正確的是()A．高壓滅菌加熱結束時，打開放氣閥使壓力表指針回到零后，開啟鍋蓋B．倒平板時，應將打開的皿蓋放到一邊，以免培育基濺到皿蓋上C．為了防止污染，接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后應趁熱快速挑取菌落D．用記號筆標記培育皿中菌落時，應標記在皿底上解析：選D。A項，在高壓滅菌的操作過程中，加熱結束后應讓滅菌鍋內溫度自然下降，待壓力表的壓力降到零時，打開排氣閥，旋松螺栓，打開蓋子。B項，倒平板時，用左手將培育皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，而不是完全取下放到一邊。C項，接種環(huán)經(jīng)火焰灼燒滅菌后應在火焰旁冷卻后再挑取菌落。D項，在微生物的培育中，一般將培育皿倒置，在皿底上用記號筆做標記。4．下圖為試驗室培育和純化大腸桿菌過程中的部分操作步驟，下列說法錯誤的是()A．①②③步驟操作時須要在酒精燈火焰旁進行B．步驟①中待倒入的培育基冷卻后蓋上培育皿的皿蓋C．步驟③中，每次劃線前后都需對接種環(huán)進行滅菌處理D．劃線接種結束后，將圖④平板倒置后放入培育箱中培育解析：選B。由圖可知，①是倒平板，②是用接種環(huán)沾取菌液，③是進行平板劃線，④是培育。①②③步驟操作時須要在酒精燈火焰旁進行，防止被雜菌污染，A正確；倒完平板后馬上蓋上培育皿，冷卻后將平板倒過來放置，B錯誤；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環(huán)上的菌種干脆來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù)目漸漸削減，以便得到菌落，C正確；劃線接種結束后，將平板倒置后放入培育箱中培育，有利于表面的水分更好的揮發(fā)和防止皿蓋上的水珠落入培育基造成污染，D正確。5．如圖是微生物平板劃線示意圖。劃線的依次為1→2→3→4→5。下列操作方法正確的是()A．操作前要將接種環(huán)放在火焰邊灼燒滅菌B．劃線操作應在火焰上進行C．在5區(qū)域中才可以得到所需菌落D．在1、2、3、4、5區(qū)域中劃線前后都要對接種環(huán)滅菌解析：選D。在每次劃線前后都要對接種環(huán)進行滅菌，接種環(huán)的滅菌方法應是在火焰上灼燒，接種時劃線操作是在火焰旁進行。在5個區(qū)域中，只要有單個活細菌，通過培育即可獲得所需菌落。6．“創(chuàng)衛(wèi)”是創(chuàng)建衛(wèi)生城市的簡稱?！靶l(wèi)生城市”是一個城市綜合功能和文明程度的重要標記。某同學欲利用所學習的微生物培育學問，通過試驗證明痰液中含有細菌，來提倡同學們不要隨地吐痰，為“創(chuàng)衛(wèi)”添一份力。請回答下列問題：(1)欲培育細菌必需先制備可供細菌生長的培育基。試驗室中常用牛肉膏蛋白胨固體培育基來培育微生物，該培育基的組成成分包括牛肉膏、蛋白胨、NaCl、________、H2O等；該培育基中微生物所需的氮源來自________；制備該培育基的步驟是：配制培育基→調整pH→分裝→包扎→滅菌→倒平板，其中滅菌常用的方法是______________；培育基滅菌后，須要冷卻到________℃左右才能倒平板，等平板冷凝后，還須要將平板倒置，主要目的是________________________________________________________________________________________________________________________________________________。(2)為了使試驗更有勸服力，該同學設置了空白比照組和若干試驗組，其中比照組的作用是__________________。若在某次調查中，某一試驗組平板上的平均菌落數(shù)為39個，而空白比照組的平板上出現(xiàn)了9個菌落，這種結果說明在此次調查中出現(xiàn)了________現(xiàn)象。答案：(1)瓊脂牛肉膏、蛋白胨高壓蒸汽滅菌法50防止皿蓋上的水珠落入培育基，造成污染(2)解除試驗組中非測試因素對試驗結果的影響(答案合理即可)污染[課時作業(yè)][學生用書P63(單獨成冊)]一、選擇題1．下面關于斜面接種大腸桿菌的主要目的，表述錯誤的是()A．菌種轉移B．擴大培育C．保存純凈菌種D．消毒答案：D2．下列有關微生物培育的敘述，正確的是()A．培育前均須要對培育基進行高壓蒸汽滅菌B．均要確保培育基中含有所需的全部養(yǎng)分物質C．平板劃線法和涂布平板法均可用于鑒定菌種D．均須要放在恒溫培育箱中通入氧氣培育解析：選C。微生物接種前，要對培育基進行高壓蒸汽滅菌，A錯誤；培育基中只須要含有滿意微生物生長須要的養(yǎng)分物質，B錯誤；平板劃線法和涂布平板法均可用于鑒定菌種，C正確；有些微生物屬于厭氧型，就不須要氧氣，D錯誤。3．某探討小組從有機廢水中分別微生物用于廢水處理。下列敘述正確的是()A．培育基分裝到培育皿后進行滅菌B．轉換劃線角度后需灼燒接種環(huán)再進行劃線C．接種后的培育皿需放在光照培育箱中培育D．培育過程中每隔一周視察一次解析：選B。微生物分別中培育基的制備應是先滅菌再倒平板，A項錯誤；每一次劃線前都要灼燒接種環(huán)，以殺死上次劃線結束后接種環(huán)上殘留的菌種，B項正確；接種后的培育皿應在恒溫培育箱中進行培育，C項錯誤；培育過程中視察的間隔時間不能太長，相宜條件下視察一次一般不超過24h，D項錯誤。4．斜面培育基形成的斜面的長度不超過試管總長的()A．1/5 B．2/3C．1/4 D．1/2解析：選D。擱置斜面長度不超過試管總長度的1/2。5．測定3類細菌對氧的需求，讓它們在3個不同的試管中生長，如圖顯示了細菌的生長層。據(jù)此推斷：只能在有氧培育基中繁殖、只能在無氧培育基中繁殖、在有氧和無氧的培育基中都能繁殖的細菌依次是()A．Ⅲ、Ⅰ、Ⅱ B．Ⅲ、Ⅱ、ⅠC．Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ D．Ⅰ、Ⅲ、Ⅱ答案：A6．要從多種細菌中分別某種細菌，培育基要用()A．加入青霉素的培育基B．固體培育基C．加入高濃度食鹽的培育基D．液體培育基解析：選B。假如加入青霉素則抑制大部分細菌生長；若加入高濃度食鹽，則只能選擇出金黃色葡萄球菌；液體培育基多用于生產，分別鑒定一般不用液體培育基。7．下列關于平板劃線操作的敘述，錯誤的是()A．每次劃線前都要灼燒接種環(huán)B．灼燒接種環(huán)后，要馬上用接種環(huán)接種，防止雜菌污染接種環(huán)C．要在酒精燈火焰旁進行D．接種前，要將菌種試管口通過火焰解析：選B。灼燒接種環(huán)后，將接種環(huán)伸入管內，讓環(huán)端先接觸培育基上未長菌的部位，使其冷卻，然后輕輕挑取少量菌體，再進行接種。灼燒接種環(huán)后，不行馬上用接種環(huán)接種，以免接種環(huán)溫度過高，將菌種殺死。8．微生物培育是微生物工程中的基礎技術。下列相關敘述正確的一項是()A．病毒和細菌的培育基成分相同B．平板劃線法中的劃線是連續(xù)進行的C．微生物培育基中并不都必需添加碳源或氮源D．在培育的過程中，細胞種類、數(shù)目都不斷地增加解析：選C。病毒和細菌的培育基成分有區(qū)分。平板劃線法中的劃線可以是連續(xù)的，也可以是間斷的。微生物的培育過程中，細胞數(shù)目不斷增加，細胞的種類不變。9．下列關于對大腸桿菌的接種的敘述，不正確的是()A．接種環(huán)在接種的試管斜面上輕輕劃“S”型曲線B．在微生物培育操作過程中，為防止雜菌污染，需對培育基、培育皿和接種環(huán)進行消毒C．不能用剛剛灼燒過的接種環(huán)干脆挑取菌種D．運用過的培育基及其培育物必需經(jīng)過滅菌處理后才能丟棄解析：選B。滅菌是指采納劇烈的物理或化學方法使物體內外全部的微生物恒久丟失生長繁殖實力，所以，對培育基、培育皿和接種環(huán)進行滅菌而不是消毒；因為灼燒過的接種環(huán)溫度太高，干脆接觸菌種會將菌種殺死，所以要將接種環(huán)接觸沒有菌種的培育基的頂端待溫度降低后再挑取菌種；有的大腸桿菌會釋放一種劇烈的毒素，所以運用過的培育基及其培育物必需經(jīng)過滅菌處理后才能丟棄，以防止培育物的擴散。10．如何推斷制作的培育基是否滅菌徹底()A．看培育基是否透亮B．有沒有殲滅細菌菌體C．未接種的培育基在恒溫箱中保溫1～2天后檢驗有無菌落生長D．是否殲滅了微生物的芽孢、孢子解析：選C。配制好的培育基是否滅菌徹底通常在運用前，在恒溫箱中保溫1～2天后檢驗有無菌落生長，若無則說明滅菌徹底。11．下列操作屬于滅菌的是()A．接種前用火焰灼燒接種環(huán)B．接種前用酒精擦拭雙手C．將平板倒置，放入培育箱中培育D．接種在酒精燈的火焰旁完成解析：選A。要正確區(qū)分滅菌、消毒和防止雜菌污染。A項屬于滅菌，B項屬于消毒，C、D項都是試驗操作過程中防止雜菌污染的措施，與滅菌無關。12．下列依次表示倒平板、接種的位置，以及劃線法接種的路徑示意圖，其中錯誤的是()解析：選D。倒平板時，用左手將培育皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，右手將錐形瓶中的培育基倒入培育皿，左手馬上蓋上培育皿的皿蓋，防止空氣中的雜菌污染，故A正確；接種時，左手將培育皿打開一條縫隙，右手將沾有菌種的接種環(huán)快速伸入平板內，故B正確；劃線時要從上一次劃線的末端起先進行，讓菌種來源于上一次劃線末端，故C正確，D錯誤。二、非選擇題13．急性腸胃炎、手足口病分別是由細菌、病毒通過消化道進入人體導致的。因此檢驗飲用水的細菌、病毒的含量是有效監(jiān)控疾病發(fā)生的必要措施。請回答下列與檢驗飲用水有關的問題：(1)檢驗大腸桿菌含量時，通常將水樣進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的水樣用玻璃涂布器分別涂布到固體培育基的表面進行培育，記錄菌落數(shù)量，這種方法稱為________。下圖所示的四種菌落分布圖中，不行能由該方法得到的是________。(2)用該方法統(tǒng)計樣本菌落數(shù)量是否須要比照組？________。為什么？________________________________________________________________________。(3)有三種材料或用具須要消毒或滅菌：①培育細菌用的培育基與培育皿；②玻璃棒、試管、燒瓶和吸管；③試驗操作者的雙手。其中須要消毒的是________，須要滅菌的是________。(4)已知大腸桿菌能發(fā)酵乳糖并產酸產氣，現(xiàn)供應足量的已滅菌的乳糖蛋白胨培育液和具塞試管，應如何推斷待檢水樣中是否含有大腸桿菌？________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________。解析：(1)平板劃線法所得菌落集中呈線狀，D的菌落分布狀況可推斷為平板劃線法接種。(2)為推斷培育基滅菌是否合格，本試驗須要比照。(3)消毒是指運用較溫柔的物理或化學方法殺死物體表面或內部的部分微生物(不包括芽孢和孢子)。滅菌是指運用劇烈的理化因素殺死物體內外全部的微生物，包括芽孢和孢子。對人的手不能進行滅菌。(4)依據(jù)題意大腸桿菌能產生氣體，對培育基進行接種視察有無氣泡產生來推斷大腸桿菌的有無。答案：(1)涂布平板法D(2)須要因為須要推斷培育基是否被雜菌污染(培育基滅菌是否合格)(3)③①②(4)通過無菌操作向試管內注入肯定量待測水樣。再注入已滅菌的乳糖蛋白胨培育液將試管充溢，塞上塞子，混勻后置于37℃恒溫箱培育24h。若試管內有氣泡生成，則說明水樣中有大腸桿菌14．炭疽病是由炭疽桿菌引起的一種人畜共患傳染病。炭疽桿菌兩端截平、呈竹節(jié)狀排列，菌落呈卷發(fā)狀。對炭疽病疑似患者，可依據(jù)噬菌體的宿主專一性，通過試驗確診。(1)細菌培育：采集疑似患者的樣本，分別培育，獲得可疑菌落。(2)細菌鑒定：試驗流程如圖所示①對配制的液體培育基等需實行________法滅菌；試驗所用液體培育基的碳源為________(填“無機碳”或“有機碳”)。②選擇可疑菌落制片后，用________視察，可看到呈竹節(jié)狀排列的桿菌。③接種可疑菌后，35℃培育24小時，液體培育基變渾濁，緣由是____________________。比照組試管中應加入________，與試驗組同時培育6小時后，若試驗組液體培育基的渾濁度比比照組________(填“高”或“低”)，則可明確疑似患者被炭疽桿菌感染，反之則解除。解析：(2)①培育可疑炭疽桿菌之前應先將液體培育基進行高壓蒸汽滅菌。由于炭疽桿菌是異養(yǎng)生物，因此培育基中的碳源應是有機碳。②視察細菌應用顯微鏡。③接種可疑菌24小時后，液體培育基變渾濁的緣由是細菌大量繁殖。答案：(2)①高壓蒸汽滅菌有機碳②顯微鏡③細菌大量繁殖等量生理鹽水低15．某化工廠的污水池中含有一種有害的難以降解的有機化合物A。探討人員用化合物A、磷酸鹽、鎂鹽以及微量元素配制的培育基，勝利篩選到能高效降解化合物A的細菌(目的菌)。試驗的主要步驟如圖所示。請分析回答下列問題：(1)培育基中加入化合物A的目的是________，這種培育基屬于________培育基。(2)“目的菌”生長所需的氮源和碳源是來自培育基中的________。試驗須要振蕩培育，由此推想“目的菌”的代謝類型是________________。(3)在上述試驗操作過程中，獲得純凈“目的菌”的關鍵是________________________________________________________________________。(4)轉為固體培育基時，常采納平板劃線法進行接種，此過程中所用的接種工具是________，操作時采納________滅菌的方法。(5)如何確認培育基滅菌是否合格？________________________________________________________________________________________________________________________________________________。解析：欲篩選可降解有機物A的微生物，需配制只以有機物A為唯一碳源的選擇培育基，以保障目的菌的生長，抑制非目的菌的生長繁殖；若需“振蕩”培育，表明該目的菌為好氧型；平板劃線接種的工具為接種環(huán)，運用前后均需灼燒滅菌。答案：(1)篩選目的菌選擇(2)化合物A異養(yǎng)需氧型(3)防止外