臨床檢驗技能操作

試驗一、血涂片的制備和染色

【原理】將一小滴血液勻稱涂在玻片上，呈單層緊密分布，制成薄血片。

用含天青B和伊紅的Romannowsky類染料進行染色。細(xì)胞中的堿性物質(zhì)

如RBC中的血紅蛋白與嗜酸性粒細(xì)胞胞質(zhì)中的嗜酸性顆粒等與酸性染料

伊紅結(jié)合染成紅色；細(xì)胞中的酸性物質(zhì)如淋巴細(xì)胞胞質(zhì)與嗜堿性粒細(xì)胞質(zhì)

中的嗜堿性顆粒等與堿性染料亞甲藍(lán)結(jié)合染成藍(lán)色；中性粒細(xì)胞的中性顆

粒呈等電狀態(tài)與伊紅和美藍(lán)均可結(jié)合，染成淡紫紅色。

【器材】

1.載玻片運用前，必需細(xì)致清洗，并用乙醇或軟布清潔。

2.推片選擇邊緣光滑的載玻片，在兩角分別作斜線標(biāo)記，然后用

坡璃切割刀裁去兩角，制成約15mm寬度的推片。

3.吸耳球。

4.顯微鏡。

5.酒精燈。

6.采血針。

7.注射器和針頭。

【試劑】

1.瑞氏(Wright)染液

(1)I液:包含瑞氏染料LOg、純甲醇(AR級以上)600ml、甘油15ml。

將全部染料放入清潔干燥的乳缽中，先加少量甲醇漸漸地研磨(至少

30min),以使染料充分溶解，再加一些甲醇混勻，然后將溶解的部分倒入

干凈的棕色瓶內(nèi)，乳缽內(nèi)剩余的未溶解的染料，再加入少許甲醇細(xì)研，如

此多次研磨，直至染料全部溶解，甲醇用完為止。再加15ml甘油密閉保

存。

(2)II液：磷酸鹽緩沖液(pH6.4~6.8),包含磷酸二氫鉀(KH2POJ

0.3g、磷酸氫二鈉(Na2HPO4)0.2g、蒸鐳水加至1000mL配好后用磷酸

鹽溶液校正pH,塞緊瓶口貯存。如無緩沖液可用簇新蒸僧水代替。

2.吉姆薩染液包含吉姆薩染料0.75g、甘油35ml、甲醇65ml。將

吉姆薩染料、甘油和甲醇放入含玻璃珠的容器內(nèi)，每天混勻3次，連續(xù)4

天，最終過濾備用。

3.瑞-吉復(fù)合染液

(1)I液：包含瑞氏染料1g、吉姆薩染料0.3g、甲醇500ml、中性甘

油10ml。將瑞氏染料和吉姆薩染料置干凈研缽中，加少量甲醇，研磨片刻，

再吸出上液*如此連續(xù)幾次，共用甲醇5002。收集于棕色玻璃瓶中，每

天早、晚各搖3min,共5d,以后存放1周即能運用。

⑵II液即磷酸鹽緩沖液(PH6.4?6.8)。包含無水磷酸二氫鉀6.64g、

無水磷酸氫二鈉2.56g,加少量蒸僧水溶解，用磷酸鹽調(diào)整pH,加水至

1000mlo

【操作】

1.采血

(1)靜脈采血法：用EDTAK抗凝1~2h內(nèi)的標(biāo)本，運用玻棒、毛細(xì)

管、注射針頭等在距載玻片一端1cm處加1滴抗凝血，直徑約4mm。

(2)皮膚采血法：選擇第三、四手指，并先采紅細(xì)胞、白細(xì)胞計數(shù),

再采血1滴置干凈玻片上用于血涂片制備。

2.制作涂片左手平執(zhí)載玻片，或放在類似桌子等平坦地方，右手

持推片從后方移動接近血滴，使血液沿推片邊緣綻開，將推片與載玻片呈

30。?45。角，用勻稱速度向前將血液推成厚薄相宜的血涂片，血涂片應(yīng)呈

舌狀，頭、體、尾三部分，且清晰可見。全部血液必需在推片到達(dá)末端前

用完。推大于一片血片。貧血病人推片速度要快。

3.干燥涂片

空氣干燥：快速干燥。

4.標(biāo)記涂片在載玻片的一端用記號筆編號，注明患者姓名或門診/

住院號。

5.染色

(1)瑞氏染色法：待血涂片干透后，用蠟筆在兩端畫線，以防染色

時染液外溢。然后將玻片平置于染色架上，滴加染液(I液)3~5滴，使

其快速蓋滿血涂片，約05~lmin后，滴加等量或稍多的緩沖液(II液)，

輕輕搖動玻片或用吸球?qū)?zhǔn)血涂片吹氣，使染液充分混合。5?lOmin后用

流水沖去染液，待干。

(2)吉姆薩染色法：將固定的血涂片置于被pH6.4?6.8磷酸鹽緩沖

液稀釋10~20倍的吉姆薩染液中，浸染10?30min(標(biāo)本較少可用滴染)。

取出用流水沖洗，待干燥后顯微鏡檢查。

(3)瑞一吉復(fù)合染色法：操作步驟同瑞氏染色法，只是染色時將瑞

一吉復(fù)合染液I液和II液替代瑞氏染液的I液和II液。

6.視察結(jié)果將干燥后的血涂片置顯微鏡下視察。用低倍鏡視察血

涂片體、尾交界處的血細(xì)胞。在顯微鏡下，成熟紅細(xì)胞染成粉紅色；血小

板染成紫色；中性粒細(xì)胞胞質(zhì)染成粉紅色，含紫紅色顆粒；嗜酸性粒細(xì)胞

含大的桔黃色顆粒；嗜堿性粒細(xì)胞胞質(zhì)含有大量深紫藍(lán)色顆粒；單核細(xì)胞

胞質(zhì)染成灰藍(lán)色；淋巴細(xì)胞胞質(zhì)染成淡藍(lán)色。視察后顯微鏡擦拭。

【留意事項】

1.瑞氏染液簇新配制的染液偏堿，染色效果較差，經(jīng)在室溫下貯

存肯定時間，美藍(lán)漸漸轉(zhuǎn)變?yōu)樘烨郆后方可運用，這一過程稱染料成熟。

放置時間愈久，天青B愈多，染色效果愈好，但必需蓋嚴(yán)瓶口，以免甲醇

揮發(fā)或氧化成甲酸。甲醇必需用AR(無丙酮)。染液中也可加中性甘油3ml,

防止甲醇揮發(fā)，使細(xì)胞染色較清晰°

2.采血

(1)不能采集以下部位的血液：①示指或拇指血液。②感染部位血

液，如甲溝炎。③耳垂部位血液，含單核細(xì)胞太多。

4.干燥涂片血涂片干透后方可固定染色，否則細(xì)胞尚未堅固地吸

附在玻片上，在染色過程中簡單脫落。

5.染色步驟

(1)操作留意事項與操作不當(dāng)?shù)暮蠊姳?-3。

操作留意事項操作不當(dāng)?shù)暮蠊?/p>

加染液應(yīng)適量過少則易蒸發(fā)沉淀，一旦染料沉積在血涂片

上，則不易沖洗，使細(xì)胞深染不易檢查C

沖洗時不能先倒掉染液，應(yīng)染料鎮(zhèn)靜在血涂片上

以流水沖洗

沖洗時間不能過久脫色

沖洗完的血涂片應(yīng)立放于支剩余水分浸泡脫色

架上

(2)染色時間與染液濃度、室溫與細(xì)胞多少有關(guān)。染液淡、室溫低、

細(xì)胞多則染色時間要K；反之，可削減染色時間。必要時可增加染液量或

延長時間。沖洗前，應(yīng)先在低倍鏡下視察有核細(xì)胞是否染色清晰，核質(zhì)是

否分明。應(yīng)當(dāng)在詳細(xì)實踐中摸索合適的時間，特殊是在更換染液時。每批

染色液和緩沖液，均需試染，以便駕馭染色時間和加緩沖液的比例。

6.結(jié)果視察低倍鏡下視察血涂片應(yīng)厚薄相宜，細(xì)胞不重疊，頭尾

與兩側(cè)有肯定的空隙，一些體積大的特殊細(xì)胞常在血涂片的尾部出現(xiàn)。如

有可能，干燥后的血涂片先用中性樹膠封片后再視察，不僅能長期保存血

涂片，而且視察效果更佳。

染色效可能緣由訂正措施

果

太藍(lán)涂片太厚、沖洗時間太短、中性水在含1%硼酸的95%乙醇溶

pH太高、染色時間太長、稀釋染液沖洗2次，用中性水沖洗,

液重復(fù)運用、貯存染液暴露于陽光待干鏡檢

太紅沖洗時間太長、中性水pH太低、規(guī)范操作。簇新配置中性水。

貯存染液質(zhì)量不佳、涂片干燥前加保證染液質(zhì)量不佳

封片

太淡染色時間太短、沖洗時間太長復(fù)染。應(yīng)先加緩沖液，后加

染液，或加染液與緩沖液的

混合液，不行先加染液

染料沉染料沉淀、染液未過濾、涂片太臟用甲醇沖洗2次，并馬上用

積水沖掉甲醇，待干后復(fù)染

藍(lán)色背固定不當(dāng)、涂片未固定貯存過久、留意涂片的固定。運用EDTA

景運用肝素抗凝劑抗凝靜脈血

試驗二、白細(xì)胞計數(shù)與分類計數(shù)

原理：用白細(xì)胞稀釋液將血液稀釋肯定的倍數(shù)，同時破壞溶解紅細(xì)胞。將

稀釋的血液注入血紅細(xì)胞計數(shù)板，在顯微鏡下計數(shù)肯定體積內(nèi)的白細(xì)胞

數(shù)，經(jīng)換算即可求出每升血液中的白細(xì)胞數(shù)量。

器材：顯微鏡、改良牛鮑計數(shù)板、試管、吸管、微量吸管、滴棒。

試劑：白細(xì)胞稀釋液

操作：

1s加稀釋液用吸管吸取白細(xì)胞稀釋液0.38ml于小試管中。

2、吸取血液用微量吸管吸取簇新全血或末稍血203,擦去管尖外部余

血。將吸管插入小試管中白細(xì)胞稀釋液的底部，輕輕放出血液，并吸取上

層白細(xì)胞稀釋液清洗吸管2~3次。

3、混勻?qū)⒃嚬苤醒号c稀釋液混勻，待細(xì)胞懸液完全變?yōu)樽睾稚?/p>

4、充池再次將小試管中的細(xì)胞懸液混勻。用滴棒蘸取細(xì)胞懸液1滴，充

入改良Neubauer計數(shù)板的計數(shù)池中，室溫靜置2?3min,待白細(xì)胞完全

下沉。充兩個池雙份計數(shù)取平均值。

5、計數(shù)在低倍鏡下計數(shù)四角4個大方格內(nèi)的白細(xì)胞總數(shù)。

6、計算：白細(xì)胞=4X10X20X106=20X107L

留意事項：

1s稀釋用吸管、微量吸血管、血紅細(xì)胞計數(shù)板均為計量工具，運用前需

經(jīng)過嚴(yán)格的校正，否則將干脆影響計數(shù)結(jié)果的精確。

2、運用標(biāo)本可為由靜脈搏穿刺實行的簇新全血，也可為靜脈末梢血。采

集末梢血時，應(yīng)留意采血部位不得有凍瘡、水腫、發(fā)結(jié)、炎癥等，以免標(biāo)

本失去代表性；同時也應(yīng)留意不能過度擠壓，以免組織液混入引起血液凝

因或造成計數(shù)結(jié)果不精確。

3、在充池時，如充液不足、液體外溢、斷續(xù)充液，或產(chǎn)生氣泡、充液后

移動蓋玻片等，均會使細(xì)胞分布不勻稱，造成計數(shù)結(jié)果不精確。

4、計數(shù)池內(nèi)的細(xì)胞分布應(yīng)勻稱，一般狀況下各大方格間的細(xì)胞數(shù)相差不

超過10%,若相差太大，應(yīng)重新充池。

5、計數(shù)大小方格內(nèi)的壓線細(xì)胞時，遵循數(shù)上不數(shù)下、數(shù)左不數(shù)右的原則。

6、白細(xì)胞數(shù)量過多時，可采納加人稀釋倍數(shù)的方法，留意區(qū)分雜質(zhì)和白

細(xì)胞。

分類計數(shù)：

原理：將血液制成細(xì)胞分布勻稱的血涂片，用瑞氏染液染色，依據(jù)各類細(xì)

胞的形態(tài)特點和顏色差異將白細(xì)胞進行分類并計數(shù)。通常分類100個白細(xì)

胞，計算得出各種白細(xì)胞所占的百分率。

器材：顯微鏡、分類計數(shù)器、香柏油、拭鏡紙、清潔液。

試劑：瑞氏染液、磷酸鹽緩沖液

操作：

1、染色將血涂片用瑞氏染液染色，沖洗干凈，自然干燥后待用。

2、低倍鏡視察低倍鏡下視察白細(xì)胞分布和染色狀況。

3、油鏡視察選擇血涂片體尾交界處細(xì)胞分布勻稱、著色良好的區(qū)域，按

肯定的方向依次對所見的每1個白細(xì)胞進行分類，并用白細(xì)胞分類計數(shù)器

作好記錄，共計數(shù)100個白細(xì)胞。

4、計算求出各類細(xì)胞所占的百分率

留意事項：

1、由于各種白細(xì)胞體積大小不等，體積較小的淋巴細(xì)胞在血涂片的頭、

體部較多，而尾部和兩側(cè)以中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞較多，因此分類最佳區(qū)

域為體、尾交界處。

2、分類時要有秩序地、沒肯定方向連續(xù)地進行，既不重復(fù)亦不遺漏，避

開主觀選擇視野。

3、分類計數(shù)結(jié)果的記錄也可采納手工畫“正”或"++++”的方法。

試驗三、紅細(xì)胞計數(shù)

原理：稀釋液將血液稀釋肯定倍數(shù)，充入計數(shù)池后，在顯微鏡下計數(shù)肯定

體積內(nèi)的紅細(xì)胞數(shù)量，經(jīng)換算求出每升血液中的紅細(xì)胞數(shù)量。

器材：微鏡、改良牛鮑記板、試管、微量吸管、玻璃棒。

試劑：細(xì)胞稀釋液

操作：

1、加稀釋液取小試管1支，加紅細(xì)胞稀釋液2ml。

2、加血用清潔干燥微量吸管采集末稍血或抗凝血10ul擦去管外余血，

輕輕加至紅細(xì)胞稀釋液底部，再輕吸上清液清洗吸管2?3次，馬上混勻。

3、充池混勻后用微量吸管或玻璃棒將紅細(xì)胞懸液充入計數(shù)池，室溫下平

放3?5min,待細(xì)胞下沉后于顯微鏡下計數(shù)。

4、計數(shù)用高倍鏡依次計數(shù)中心大方格內(nèi)4角和正中5個中方格內(nèi)的紅細(xì)

胞數(shù)。

5、計算

紅細(xì)胞/L=Nx5x10xi0限200二NxlO】。二100xio12

N：表示5個中方格內(nèi)數(shù)得的紅細(xì)數(shù)。

x5：將五個中方格紅細(xì)胞數(shù)換算成1個大方格紅細(xì)胞數(shù)。

xlO:將1個大方格紅細(xì)胞數(shù)換13血液內(nèi)紅細(xì)胞數(shù)。

xlO6：1L=106UI

200：為血液的稀釋倍數(shù)。

留意事項：白細(xì)胞

試驗四、網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)

原理：織紅細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)殘存的少量核蛋白體和核糖核酸等嗜堿性物質(zhì)，在

活體染色時可被煌焦油藍(lán)染成藍(lán)色網(wǎng)狀或顆粒狀，可與完全成熟的紅細(xì)胞

區(qū)分。

器材：微鏡、香柏油、拭鏡紙、清潔液、試管、玻片

試劑：10g/l煌焦油藍(lán)水溶液，標(biāo)本簇新全血。

操作：

1、加染液于小試管中加入10g/L煌焦油藍(lán)生理鹽水溶液2滴，再加入簇

新全血2滴，馬上混勻，置室溫下15?20min。室溫不行過低37度。

2、制備涂片取1小滴制成薄血涂片，自然干燥。

3、視察在低倍鏡下選擇紅細(xì)胞分布勻稱的部位進行視察。

4、計數(shù)在油鏡下計數(shù)至少1000個紅細(xì)胞中的網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)。

5、計算

網(wǎng)織紅細(xì)胞分?jǐn)?shù)二M/1000

網(wǎng)織紅細(xì)胞肯定值（網(wǎng)織紅細(xì)胞/L）=紅細(xì)胞/Lx網(wǎng)織紅細(xì)胞分?jǐn)?shù)

試驗五、紅細(xì)胞沉降率

原理：肯定量的枸椽酸鈉抗凝全血置于特制血沉管中，直立于特制血沉架

上lh后讀取紅細(xì)胞下沉后血漿的高度。

器材：魏氏血沉管、血沉架、吸管、試管。

試劑：09mmol/L枸椽酸鈉溶液，簇新全血。

操作：

1、加抗凝劑吸取濃度為109mmol/L的枸檬酸鈉0.4ml于試管中。

2、采靜脈血取靜脈血1.6ml,加入含抗凝劑的試管中，混勻。

3、裝血沉管用血沉管吸入混勻全血至刻度“0”處，拭去管外殘留余

血O

4、立血沉管將血沉管直立于血沉架上。

留意事項：

1、運用分析純枸椽酸鈉抗凝劑，配制時濃度應(yīng)精確，配成后液體不渾

濁、無沉淀，保存期為2周。

2、嚴(yán)格限制采血量，使抗凝劑與血液比例為1：4O

3、血沉管內(nèi)徑要標(biāo)準(zhǔn)，放置要垂直，不得傾斜。

4、胞在單位時間內(nèi)下沉的速度與血漿蛋白的量與質(zhì)，血漿中脂類的量和

質(zhì)，紅細(xì)胞的大小與數(shù)量，是否成串錢相聚以與血沉管的內(nèi)徑、清潔度、

放置位置是否垂直，室溫凹凸等因素都有關(guān)系。

5、采集時應(yīng)空腹。

6、血沉的標(biāo)本要在采集后3h內(nèi)測定，并充分混勻。

7、溫過低、過高和貧血時，對結(jié)果有影響。為此，血沉應(yīng)盡量放在18~

25C。室溫下測定。室溫過高時血沉加快，可以按溫度系數(shù)校正。室溫過低

時血沉減慢，無法校正。

試驗六、血小板計數(shù)

原理：液經(jīng)稀釋液按肯定比例稀釋和破壞紅細(xì)胞后，充入血細(xì)胞計數(shù)板內(nèi)

在顯微鏡下計數(shù)肯定范圍內(nèi)的血小板數(shù)量，經(jīng)過換算求出每升血液中血小

板的數(shù)量。

器材微鏡，血細(xì)胞計數(shù)板，采血針，血紅蛋白吸管，試管。

試劑10g/L草酸鐵稀釋液。

操作：

1、吸取稀釋液精確吸取10g/L草酸核稀釋液0.38ml,置于清潔小試管

中。

2、采血常規(guī)消毒無名指，穿刺后，讓血液自然流出，精確采血20ul.置

于含有草酸鏤的稀釋液中，馬上充分混勻。

3、稀釋靜置待完全溶血后再混勻lmin,置室溫lOmin。

4、充液靜置取混勻的血小板懸液1滴充入血細(xì)胞計數(shù)板內(nèi)，靜置10~

15min,使血小板充分下沉?？諝飧稍锏募竟?jié)應(yīng)將血細(xì)胞計數(shù)板置濕盒內(nèi)。

5、計數(shù)用高倍鏡計數(shù)血細(xì)胞計數(shù)板中心大方格內(nèi)的四角和中心共5個中

方格內(nèi)血小板數(shù)量。

6、計算每升血小板數(shù)二5個中方格內(nèi)血小板數(shù)xlO'/L

留意事項

1、草酸鐵稀釋液要清潔，無細(xì)菌、塵埃等污染。存放時間較長后應(yīng)過濾

后再運用。

2、毛細(xì)血管采血時，針刺應(yīng)達(dá)3mm深，使血液流暢。拭去第1滴血后馬

上采血，以防血小板聚集和破壞。假如同時做白細(xì)胞和血小板計數(shù)時，應(yīng)

先采血做血小板計數(shù)。

3、血液加入血小板稀釋液內(nèi)要充分混勻，但不行過度振蕩，以免導(dǎo)致血

小板破壞和聚集。

4、血小板懸液充入血細(xì)胞計數(shù)板內(nèi)須要靜置10~15min,使血小板完全

下沉后再計數(shù)。但應(yīng)留意保持濕度，避開水分蒸發(fā)而影響計數(shù)結(jié)果。

5、計數(shù)時間線不行太強，留意微有折光性的血小板與塵埃等的鑒別，附

著在血紅細(xì)胞旁的血小板也要留意，不要漏數(shù)。

6、應(yīng)在lh內(nèi)計數(shù)完畢，否則結(jié)果偏低。

7、所用計量器材必需標(biāo)準(zhǔn)化。

8、檢查前，患者應(yīng)避開服用含有阿司匹林與其他抗血小板藥物。

試驗七、尿葡萄糖定性檢查

原理：葡萄糖或其他還原性糖的醛基在熱堿性溶液中，能將班氏試劑的藍(lán)

色硫酸銅還原為黃色的氫氧化亞銅，進而形成紅色氧化亞銅沉淀。

器材：試管架、中試管、滴管、試管夾、酒精燈。

試劑：

1s甲液枸椽酸鈉，無水碳酸鈉，蒸鐳水加熱助溶。

2、乙液硫酸銅，蒸儲水加熱助溶。冷卻后，將乙液緩慢加入甲液中，不

斷混勻，冷卻至室溫后補充蒸鐳水至1000ml。如溶液不透亮則須要過濾,

煮沸后出現(xiàn)沉淀或變色則不能應(yīng)用。

操作：

1、鑒定班氏試劑質(zhì)量取中號試管1支，加入班氏試劑2.0ml,搖動試管

緩緩加熱至沸騰，視察試劑有無顏色與性狀改變，若試劑仍為透亮藍(lán)色，

可進行以下試驗。

2、加尿液向班氏試劑中加離心后的尿液02ml,混勻。

3、加熱煮沸接著煮沸l(wèi)~2min,或置沸水浴5min,自然冷卻。

4、推斷結(jié)果推斷結(jié)果見表

糖定性試驗結(jié)果推斷

反應(yīng)現(xiàn)象報告方式葡萄糖含量（mmol/L）

藍(lán)色不變一<5.6

藍(lán)色中略帶綠色，但無沉淀±5.6?11.2

綠色伴少許黃綠色沉淀+<28

較多黃綠色沉淀,以黃為++28~56

土黃色渾濁，有大量沉淀+++57~112

大量棕紅色或磚紅色沉淀++++>112

留意事項：

1、試劑與尿液的比例為10：lo

2、煮混時應(yīng)時常搖動試管以防爆沸噴出，出可在沸水浴中試驗。

3、檢驗糖尿病患者尿液中葡萄糖，應(yīng)空腹或餐后2h留取尿標(biāo)本0

4、尿液中有大量尿酸鹽存在時，煮沸后也呈渾濁并帶綠色，但久置后并

不變黃色而呈灰藍(lán)色，故必需于冷卻后視察結(jié)果。尿中含大量鏤鹽時可抑

制氧化亞銅沉淀的生成，應(yīng)加堿煮沸除去。蛋白含量較高時也影響銅鹽的

沉淀，可用加熱乙酸法除去。

5、一些非糖還原性物質(zhì)，如水合氯醛、氨基比林、PAS、阿匹林、青霉素、

鏈霉素、VitC、異煙腫等，當(dāng)基在尿中含量過高時亦呈陽性反應(yīng)，應(yīng)停藥

3d后再進行檢查。在靜脈輸注大劑量VitC者5d內(nèi)不宜做尿糖定性，或定

性時先將尿液煮沸使之分解破壞。

試驗八尿沉渣鏡檢

原理：采納顯微鏡視察的方法，依據(jù)尿液細(xì)胞、管型等有形成分的形態(tài)特

征，識別并記錄其在顯微鏡肯定視野內(nèi)的數(shù)量。

器材：載玻片、離心機、刻度離心管、蓋玻片、滴管、一般顯微鏡、定量

尿沉渣分析板。

操作：

1、未離心干脆涂片法

(1)混勻：充分混勻尿液。

(2)制備涂片：取混勻的尿液1滴于載玻上，加蓋玻片，留意避開產(chǎn)生氣

泡。

(3)視察計數(shù)：①先用低倍視察全片細(xì)胞、管型等成分的分布狀況，然后

用高倍鏡確認(rèn)。留意運用暗視野視察尿液有形成分，特殊是透亮管型。②

管型在低倍鏡下視察，至少計數(shù)20個視野；細(xì)胞在高倍鏡下視察至少計

數(shù)10個視野，取其三均值報告；尿結(jié)晶和鹽類數(shù)量以每一高倍視野+、2

+、3+、4+報告。計數(shù)時要留意細(xì)胞的完整性，還要留意有無其他異樣

巨大細(xì)胞、寄生蟲蟲卵、滴蟲、細(xì)菌、粘液絲等，男性尿液標(biāo)本還要留意

有無精子與卵磷脂小體。

2、離心沉淀涂片法

(1)離心尿液：透用于尿外觀非明顯渾濁的尿標(biāo)本，是尿沉渣檢查標(biāo)準(zhǔn)化

推行的方法。取尿液10ml離心5min,要求相對離心力為400go1500r/min

離心5min

(2)提取尿沉渣：手持離心管傾斜45。~90。，用滴管吸去上層尿液，保留

下層0.2ml尿沉渣。

(3)涂片：輕輕混勻尿沉渣后，取1滴置載玻片上，用18mmxl8mm或

22mmx22mm的蓋玻片覆蓋后顯微鏡檢查。

（4）視察計數(shù)：與未離心尿干脆涂片法相同。

3、定量尿沉渣分析法定量尿沉渣分析板由1塊硬質(zhì)塑料板制成，每塊板

內(nèi)分為10個統(tǒng)一深度的計數(shù)池，每1個計數(shù)池內(nèi)的計數(shù)區(qū)為l.Oul計數(shù)區(qū)

分為10個大方格，每個大方格又分為9個小方格。

（1）未離心法：干脆取充分混勻的尿液1滴充入定量尿沉渣分析計數(shù)池內(nèi)，

在低倍鏡下計數(shù)10個大方格內(nèi)管型總數(shù)，在高倍鏡下計數(shù)10個大方格內(nèi)

細(xì)胞總數(shù)，此即每微升尿液某種細(xì)胞或管型的數(shù)量。

（2）離心法：尿液標(biāo)本處理同離心尿沉淀涂片法，然后充池計數(shù)，方法同

上。

4、報告結(jié)果

（1）涂片法：細(xì)胞以最低數(shù)?最高數(shù)/HP、管型以最低數(shù)~最高數(shù)/低倍鏡

視野報告。結(jié)晶以所占視野面報告，無結(jié)晶為（一）；結(jié)晶占1/4視野：+）；

結(jié)晶占1/2視野為（++）；結(jié)晶占3/4視野為（+++）；結(jié)晶滿視野為（++++）。

假如細(xì)胞、管理的數(shù)量過多難以計算，也可按結(jié)晶的報告方式報告結(jié)果。

（2）定量尿沉渣分析板法：以每微升某種細(xì)胞或管型數(shù)報告。

試驗九尿沉渣定量檢查

（一小時尿沉渣計數(shù)法）

操作：

1.標(biāo)未收集：患者先排尿棄去，精確收集3h尿液于干燥容器內(nèi)送檢

（標(biāo)本留取時間5:30?8:30）。

2,精確測量3h尿量，充分混合。取混勻尿液10ml,置刻度離心管中，

1500r/min離心5min,用吸管吸奔J_層尿液9ml,留下1ml,充分混勻。

吸取混勻尿液1滴，注于血細(xì)胞計數(shù)板內(nèi)。細(xì)胞共數(shù)10個大方格，管型

共數(shù)20個大方格。最終計算出紅細(xì)胞/h、白細(xì)胞/h、管型/h。

留意事項：

1.尿液應(yīng)簇新，PH應(yīng)在6以下。

2.尿液比重最好在1.026以上。

3.如尿液中含多量磷酸鹽時，應(yīng)加少量稀醋酸液（切勿加多），使其

溶解；含大量尿酸鹽時，應(yīng)加溫使其溶解。

4,亦可采納尿沉渣定量分析板或尿沉渣自動分析儀進行尿沉渣定量

檢查，詳見有關(guān)資料。

試驗十本-周氏蛋白定性檢查

試劑：

1.200g/L磺基水楊酸溶液；

2.2mol/L醋酸鹽緩沖溶液（pH4.9±0.1）c

操作：

1.先蔣尿液用磺基水楊酸法作蛋白定性檢查，如呈陰性反應(yīng)，則可認(rèn)

為尿液標(biāo)本中本-周氏蛋白陰性。

2,取透亮尿液4ml于試管中，再加入醋酸鹽緩沖液1ml,混勻后，放

置56C。水浴中15分鐘。如有渾濁或出現(xiàn)沉淀，再將試管放入沸水中，煮

沸3分鐘，視察試管中渾濁或沉淀的改變，如渾濁變清、渾濁減弱或沉淀

削減，均提示本-周氏蛋白陽性。若煮沸后，渾濁增加或沉淀增多，表明

此尿液中還有其它蛋白質(zhì)，此時應(yīng)將試管從沸水中取出，馬上過濾。如濾

液起先透亮，溫度下降后渾濁，再煮沸時又透亮，提示本-周氏蛋白為陽

性。

留意事項：

1.過多的本-周氏蛋白，在90C。以上不易完全溶解，故需與比照管

比較，也可將尿液稀釋后再測。

2.煮沸過濾除去尿中白、球蛋白時，動作要快速，并需保持高溫，否

則本-周氏蛋白也會濾去。

試驗十一尿含鐵血黃素定性試驗

試劑：

1.20g/L亞鐵富化鉀水溶液（用時簇新配制）；

2.3%鹽酸。

操作：

1.取混勻的簇新尿液15ml,以2000r7min離心5min,傾去上清液。

2,在沉渣中加入簇新配制的20g/L亞鐵氟化鉀水溶液與3%鹽酸液各

2ml,充分混勻,室溫靜置lOmin。

3.再離心沉淀，取沉淀物涂片，加蓋玻片后用高倍鏡（必要時用油鏡）

檢杳

.一i如見有分散或成堆藍(lán)色閃光顆粒（直徑l~3um）即為陽性，如在

細(xì)胞內(nèi)則更為可信。

留意事項：

1.全部試管、玻片、試劑均應(yīng)防止鐵劑污染，以免出現(xiàn)假陽性。

2.一般應(yīng)做陰性比照，如亞鐵氟化鉀與鹽酸混和后即顯深藍(lán)色，表示

試劑已污染高鐵，不宜再用。

試驗十一尿乳糜定性檢查

【試劑】

1.乙酸（AR）；

2.蘇丹III醋酸乙醇染色液或猩紅染色液。

【操作】

1.取尿5-10ml,加乙酸2-3ml,混合振搖后，使脂肪溶于乙酸。

靜置數(shù)分鐘后，2000r/min離心5mino

2,吸取乙酸與尿液的界面層涂片，加蘇丹III醋酸乙醇染色液或猩紅染

色液1滴。

3.鏡檢視察是否有紅色脂肪小滴。

［留章事項］

1.尿液中加少量飽和氫氧化鈉，再加乙酸，有助于澄清。

2.將分別的乙配層隔水蒸干，若留有油狀沉淀，也可加蘇丹川，鏡檢

證明有無脂肪小滴。

試驗十二尿膽色素原定性試驗

【試劑】

1,對二甲氨基苯甲醛試劑；

2.飽和醋酸鈉溶液；

3.氯仿；

4.正丁醇。

【操作】__

1.在試管中，加入尿標(biāo)本2ml與對二甲氨基苯甲醛試劑2ml,混合。

2,馬上加飽和醋酸鈉溶液4ml,混合，加氯仿3ml,振搖混合后，上

層水溶液呈紅色者為陽性反應(yīng)。

3.陽性結(jié)果應(yīng)用下法證明：如尿膽原含量多，用一次氯仿不能完全抽

提尿膽原，應(yīng)多次用氯仿抽提，直至氯仿層呈淡粉紅色或無色為止，再視

察上層水溶液色澤。如上層水溶液為紅色時，再加正丁醇4ml插提，如水

溶液仍呈紅色則證明尿中膽色素元為陽性。

【留意事項】

1.醋酸鈉溶液必需為飽和液。

2.當(dāng)尿膽色素原濃度太高時，應(yīng)將尿標(biāo)本稀釋25~100倍。

3.尿液必需簇新，不能久置。

試驗十三尿苯丙酮酸定性試驗

（三氯化鐵法）

【試劑】

1.lOOg/L三氯化鐵液；

2.磷酸鹽沉淀劑。

【操作】

L尿液4ml加磷酸鹽沉淀劑1ml,混勻，靜置3min,如出現(xiàn)沉淀，

可用濾紙過濾或離心除去。

2,濾液中加入濃鹽酸2~3滴和100g/L三氯化鐵溶液2~3滴，每加

1滴馬上視察顏色改變。以尿液顯藍(lán)綠色并持續(xù)2?4min,為陽性。

【留意事項】

1.尿中若含酚類藥物（如水楊酸制劑）與氯丙嗪，也可與氯化鐵結(jié)合

顯色，試驗前應(yīng)停用此類藥物。膽紅素也可造成假陽性。

2.小兒誕生后6周內(nèi)不易查出。故于誕生6周后檢查為宜。

3.大多數(shù)苯丙酮尿癥患者的尿液可出現(xiàn)陽性。但約1/4-1/2病例可

能會漏檢

4.亦可采納2.4-二硝基苯月井法。

試驗十四腦脊液顯微鏡檢查

器材：顯微鏡、改良牛鮑計數(shù)板、微量吸管、刻度吸管、小試管。

試劑：生理鹽水或紅細(xì)胞稀釋液，1%冰乙酸，白細(xì)胞稀釋液，瑞氏染液或

瑞■吉染液。

操作：

(1)充池：干脆用微量吸管吸取混勻的腦脊液，充入血細(xì)胞計數(shù)板的上下

2個計數(shù)池。

⑵計數(shù)：靜置2?2min后，低倍鏡下計數(shù)2個計數(shù)池內(nèi)四角和中心大方

格共10個大方格內(nèi)的細(xì)胞數(shù)。

(3)計算：10個大方格內(nèi)的細(xì)胞總數(shù)即為每微升腦脊液細(xì)胞總數(shù)，再換算

成每升腦脊液細(xì)胞總數(shù)。

1細(xì)胞總數(shù)：

(1)澄'蓍腦普液：混勻后用滴管干脆滴入計數(shù)池，計數(shù)10個大方格

內(nèi)紅、白細(xì)胞數(shù)，其總和即為每ul的細(xì)胞數(shù)，(如細(xì)胞較多，可計數(shù)一大

格內(nèi)的細(xì)胞數(shù)xlO)。

(2)渾濁或帶血腦脊液：用血紅蛋白吸管吸取混勻的腦脊液20ul,

加入含紅細(xì)胞稀釋液0.38ml的小試管內(nèi)，混勻后滴入計數(shù)池內(nèi)，用低倍鏡

計數(shù)4個大方格中的細(xì)胞總數(shù)，再乘以50即為每ul腦脊液的細(xì)胞總數(shù)。

2.白細(xì)胞數(shù)：

(1)非血性標(biāo)本：小試管內(nèi)放入冰乙酸1?2滴，轉(zhuǎn)動試管，使內(nèi)壁

沾有冰乙酸后傾去之，然后滴加混勻的腦脊液3?4滴，數(shù)分鐘后，混勻

充入計數(shù)池，按細(xì)胞總數(shù)操作中的紅、白細(xì)胞計數(shù)法計數(shù)。

(2)血性標(biāo)本：將混勻的腦脊液用1%冰乙酸溶液稀釋后，按細(xì)胞總

數(shù)操作中的紅、白細(xì)胞計數(shù)法計數(shù)，結(jié)果x稀釋倍數(shù)。

3.細(xì)胞分類：

(1)干脆分類法：白細(xì)胞計數(shù)后，將低倍鏡換成高倍鏡，干脆在高

倍鏡下依據(jù)細(xì)胞核的形態(tài)分別計數(shù)單個核細(xì)胞(包括淋巴細(xì)胞與單核細(xì)

胞)和多核細(xì)胞，應(yīng)數(shù)100個白細(xì)胞，并以百分率表示。若白細(xì)胞少于100

個，應(yīng)干脆寫出單核、多核細(xì)胞的詳細(xì)數(shù)字。

(2)染色分類法：如干脆分類不易區(qū)分細(xì)胞時，可將腦脊液離心沉

淀，取沉淀物2滴，加正常血清1滴，推片制成勻稱薄膜，置室溫或37C。

溫箱內(nèi)待干，進行瑞氏染色后用油鏡分類。

如見有不能分類的細(xì)胞，應(yīng)另行描述報告。

留意事項：

1、干脆白細(xì)胞計數(shù)時，也可用微量吸管吸取冰乙酸后盡可能全部吹出，

僅使吸管內(nèi)壁粘附少許冰乙酸，再吸以少量混勻的腦脊液于吸管中，數(shù)分

鐘后吸管內(nèi)紅細(xì)胞溶解，然后再充池計數(shù)。

2、細(xì)胞計數(shù)時，如發(fā)覺較多細(xì)胞有皺縮或腫脹等異樣現(xiàn)象，應(yīng)照實報告,

以幫助臨床醫(yī)學(xué)鑒別是陳舊性出血或簇新出血。

3、血性腦脊液中的白細(xì)胞必需校正后才有價值，校正方法是分別計數(shù)血

液紅細(xì)胞、白細(xì)胞數(shù)和腦脊液細(xì)胞總數(shù)、白細(xì)胞數(shù)，扣除因出血而帶進腦

脊液的白細(xì)胞數(shù)。

腦脊液紅細(xì)胞數(shù)x血液白細(xì)胞數(shù)

白細(xì)胞校正數(shù)腦脊液白細(xì)胞未校正數(shù)一血液內(nèi)紅細(xì)胞數(shù)

4、細(xì)胞涂片時，為了使細(xì)胞簡單粘在玻片上，可取沉淀的細(xì)胞懸液2滴,

加血清1滴，混勻后涂片。

5、涂片染色分類時，如見內(nèi)皮細(xì)胞或異樣細(xì)胞，則另行描述報告，必要

時用巴氏或HE染色查找腫瘤細(xì)胞。

6、試驗結(jié)果后，血細(xì)胞計數(shù)板用075%乙醇浸泡消毒60min,忌用酚浸泡,

以免損壞計數(shù)板。

7、細(xì)胞計數(shù)時，應(yīng)留意新型隱球菌與白細(xì)胞的區(qū)分。

試驗十五腦脊液蛋白質(zhì)定性檢查

原理：腦脊液中球蛋白與苯酚結(jié)合，形成不溶性蛋白鹽而產(chǎn)生白色渾濁或

沉淀。

器材：小試管、刻度吸管、尖滴管。

試劑：5%飽和苯酚溶液

操作：

1、加試劑取試劑2ml于小試管中。

2、加標(biāo)本用尖滴管垂直滴加腦脊液標(biāo)本1~2滴。

3、視察結(jié)果在黑暗背景下馬上用肉眼視察結(jié)果。

4、推斷結(jié)果

(1)清晰透亮，不呈現(xiàn)云霧狀為(一)。

(2)呈微白霧狀，對光不易望見，黑色背景下才能見到(±)o

（3）灰白色云霧狀為（+3

（4）白色渾濁或白色薄云狀沉淀為（++）。

（5）白色絮狀沉淀或白色濃云塊狀為（+++）。

（6）馬上形成白色凝塊為（++++）。

留意事項：

1、當(dāng)室溫在10C。以下時，應(yīng)將試劑保存在37C。溫箱中，否則飽和度降低,

可致假陽性。

2、試管內(nèi)徑以小為佳，一般為（13±l）mm,加入試劑后馬上視察結(jié)果。

3、標(biāo)本中如紅細(xì)胞過多，應(yīng)離心沉淀取上清液檢測。

試驗十六漿膜腔積液顯微鏡檢查

器材：顯微鏡、改良牛鮑計數(shù)板、微量吸管、小試管。

試劑：生理鹽水或紅細(xì)胞稀釋液，冰乙酸，白細(xì)胞稀釋液，瑞氏染液或瑞

-吉染液。

操作：

（一）有核細(xì)胞計數(shù)

1、干脆計數(shù)法

(1法除紅細(xì)胞：在小試管內(nèi)放入冰乙酸1~2滴，轉(zhuǎn)動試管，使內(nèi)壁粘附

少許冰乙酸后傾去，滴加混勻漿膜腔積液3~4滴，混勻，放置數(shù)分鐘，

破壞紅細(xì)胞。

(2)充池：用微量吸管取混勻破壞紅細(xì)胞后的漿膜腔積液充入血細(xì)胞計數(shù)

板的2個計數(shù)池內(nèi)。

(3)計數(shù)：靜置2~3min后，低倍鏡計數(shù)2個計數(shù)池內(nèi)四周和中心大方格

共10個大方格內(nèi)的有核細(xì)胞數(shù)。

(4)計算：10個大方格有核細(xì)胞總數(shù)即每微升漿膜腔積液的有核細(xì)胞總

數(shù)，再換算成每升漿膜腔積液的有核細(xì)胞數(shù)。

2、稀釋計數(shù)法

(1)稀釋破壞紅細(xì)胞：依據(jù)標(biāo)本內(nèi)有核細(xì)胞多少，用白細(xì)胞稀釋液對標(biāo)本

進行肯定倍數(shù)稀釋，混勻，放置數(shù)分鐘，破壞紅細(xì)胞。

(2)充池：用微量吸管取混勻稀釋后的漿膜腔液充入1個計數(shù)池。

(3)計數(shù)：靜置2~3min后，低倍鏡計數(shù)1個計數(shù)池內(nèi)的四角和中心大方

格共5個大方格內(nèi)的有核細(xì)胞總數(shù)。

(4)計算：依據(jù)5個大方格內(nèi)的有核細(xì)胞總數(shù)稀釋倍數(shù)，計算每升漿膜腔

積液的有核細(xì)胞數(shù)。

(二)有核細(xì)胞分類

1s干脆分類法有核細(xì)胞計數(shù)后，將低倍鏡轉(zhuǎn)為高倍鏡，干脆在高倍鏡下

依據(jù)細(xì)胞形態(tài)和細(xì)胞核形態(tài)進行分類，共分類計數(shù)100個有核細(xì)胞，分別

計數(shù)單個核細(xì)胞（包括淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞與間皮細(xì)胞）和多個核細(xì)胞（粒

細(xì)胞）的百分率。方法基本與腦脊液同，漏出液中有核細(xì)胞數(shù)量常在100X

106/L以下；滲出液中有核細(xì)胞數(shù)量較多，常在500X107L以上。

2、涂片染色分類法在抽出穿刺液后，馬上以1000r/min離心5min,取

沉淀物制成勻稱的薄片，置于室溫下或37C。恒溫箱內(nèi)盡快干燥，瑞氏或瑞

-吉染色后油鏡分類計數(shù)100個有核細(xì)胞。一般標(biāo)本中可見到淋巴細(xì)胞、

嗜中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、間皮細(xì)胞等。

留意事項：

1、有核細(xì)胞計數(shù)應(yīng)包括間皮細(xì)胞。

2、必要時可采納細(xì)胞玻片離心沉淀儀收集細(xì)胞，以提高白細(xì)胞分類計數(shù)

的精確性。

3、有核細(xì)胞分類計數(shù)誤差大，尤其是陳舊性、細(xì)胞變形的標(biāo)本，故舉薦

采納涂片染色分類計數(shù)。

4、染色分類計數(shù)過程中，若發(fā)覺間皮細(xì)胞和不能分類的異樣細(xì)胞應(yīng)中外

描述或作HE、巴氏染色查找腫瘤細(xì)胞。

試驗十七漿膜腔積液粘蛋白定性試驗

原理：漿膜腔上皮細(xì)胞在炎癥刺激下分泌粘蛋白。粘蛋白是一種酸性糖蛋

白，其等電點pH為3~5,因此，可在稀乙酸中出現(xiàn)白色沉淀。

器材：100ml量筒，滴管。

試劑:冰乙酸、蒸鐳水。

操作：

1、加試劑加2~3滴冰乙酸于100ml量筒中，再加大約100ml蒸僧水，

混勻，此時溶液的pH為3?5,靜置數(shù)分鐘。

2、加標(biāo)本垂直滴加待測標(biāo)本1滴于量筒中。

3、視察結(jié)果馬上在黑色背景下視察有無白色云霧狀沉淀生成與其下降程

度。

4、推斷結(jié)果

（1）陰性、陽性結(jié)果的推斷。

1）陰性：清晰，不顯霧狀或有稍微白色霧狀渾濁，但在下降過程中消逝。

2）陽性：出現(xiàn)白色霧狀渾濁并漸漸下沉至量筒底部不消逝。

（2）陽性程度的推斷

1）漸呈白霧狀為（土）

2）可見灰白色霧狀為（+）

3）白色薄云狀為（++）

4）白色濃玄狀（++++）

留意事項:

1s血性漿膜腔積液經(jīng)離心沉淀后，用上清液進行檢查。

2、量筒的高度與蒸偏水的量要足夠。

3、加入標(biāo)本后馬上在黑色背景下細(xì)致視察結(jié)果。如渾濁不明顯，下沉緩

慢，中途消逝者為陰性。

試驗十八精子活動率和活動力檢查

原理：精液液化后，將精液滴于載玻片上，顯微鏡下視察精子的活動狀況,

計算活動率和活動力Q

器材：顯微鏡，載玻片，蓋玻片。

試劑：5g/L伊紅Y染液

標(biāo)本：簇新液化精液°

操作：

1s計算精子活動率取液化精液1滴于載玻片上，加蓋玻片，高倍鏡下視

察100個精子，計數(shù)有尾部活動精子數(shù)，計算其百分率，即精子活動率C

2、視察精子活動力在視察活動率的同時，視察精子活動的強度，將精子

活動分為a、b、c、d四個級別，即精子活動力。a級：精子呈前向快速運

動；b級：緩慢或呆滯的前向運動；c級：非前向運動；d級：死精子。

3、染色若不活動精子大于50%,可進行體外活體染色，以鑒別其死活。

取簇新液化精液和伊紅Y染液1滴于載玻片上，混勻，lmin后推成薄片，

自然干燥后于顯微鏡（高倍鏡）下視察。死精子呈紅色，活精子不著色。視

察100個精子，以不著色精子的百分率報告精子活率。

留意事項：

1、排精后lh內(nèi)送檢，時間過長，精子活動率和活動力減低。

2、檢查時留意保溫，溫度過低，精子活動率、活動力下降。如室溫低于

10C。時，應(yīng)將標(biāo)本先放入37co溫育5-lOmin后鏡檢。

試驗十九精子計數(shù)

原理：采納碳酸氫鈉破壞精液的粘稠度，甲醛固定精子，然后充計數(shù)池，

顯微鏡下計數(shù)肯定范圍內(nèi)的精子數(shù)，換算成每升精液中的精子數(shù)。

試劑：精子稀釋液。

標(biāo)本：簇新精液化精液?

操作：

1、取稀釋液取精子稀釋液0.38ml于小試管內(nèi)。

2、加精液加入混勻的液化精液203,充分混勻。

3、充池取1滴精子懸液充入計數(shù)池內(nèi)，靜置3~5min。

4、視察高倍鏡下計數(shù)中心大方格內(nèi)四角與中心5個中方格內(nèi)的精子數(shù)。

以精子頭部作為基準(zhǔn)進行計數(shù)。

5、計算

精子計數(shù)二5個中方格內(nèi)精子數(shù)xlo'/L

精子總數(shù)二精子數(shù)/Lx精液量(ml)xl()3

如