微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用（第一課時）高二生物課件（人教版2019選擇性必修3）

發(fā)酵工程傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的應(yīng)用微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用發(fā)酵工程及其應(yīng)用微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)微生物的培養(yǎng)和計數(shù)趙全華第2節(jié)微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用第一課時微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)從社會中來

向經(jīng)過殺菌處理的牛奶中添加某些對人體有益的細(xì)菌，再經(jīng)過發(fā)酵就可以制成酸奶。一般家庭自制酸奶可能會導(dǎo)致腸胃不適，主要原因是有雜菌混入。那么怎么才能保證無處不在的雜菌不混入發(fā)酵物中呢？應(yīng)用無菌技術(shù)和微生物的培養(yǎng)技術(shù)應(yīng)該對制作用具和原料進(jìn)行滅菌處理，再接種純的菌種，并控制發(fā)酵條件，避免雜菌進(jìn)入本節(jié)聚焦1.什么是培養(yǎng)基，如何配制？2.什么是無菌技術(shù)？3.怎樣進(jìn)行酵母菌的純培養(yǎng)？①要為人們需要的微生物提供合適的營養(yǎng)和環(huán)境條件；②要確保其他微生物無法混入，并將需要的微生物分離出來。1._____________________________________是研究和應(yīng)用微生物的前提，也是發(fā)酵工程的重要基礎(chǔ)。防止雜菌污染，獲得純凈的微生物培養(yǎng)物2.在實驗室培養(yǎng)微生物的要求:培養(yǎng)基的配制人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)培養(yǎng)基概念：作用：用以培養(yǎng)、分離、鑒定、保存微生物或積累其代謝產(chǎn)物有無凝固劑瓊脂液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基微生物的分離、鑒定、活菌計數(shù)、菌種保藏擴大培養(yǎng)、工業(yè)生產(chǎn)劃分標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基種類特點用途物理性質(zhì)組成成分功能不加凝固劑加凝固劑，如瓊脂工業(yè)生產(chǎn)觀察微生物的運動、分類鑒定微生物分離、鑒定、活菌計數(shù)、保藏菌種含化學(xué)成分不明確的天然物質(zhì)工業(yè)生產(chǎn)培養(yǎng)基成分明確分類、鑒定在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì),以抑制不需要的微生物的生長,促進(jìn)所需要的微生物的生長培養(yǎng)、分離出特定微生物在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品,用以鑒別不同種類的微生物鑒別不同種類微生物天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基培養(yǎng)基類型固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基基本成分碳源氮源水無機鹽無機碳源：CO2、CO32-、HCO3-有機碳源：牛肉膏、蛋白胨等無機氮源：NH4＋、NO3-有機氮源：牛肉膏、蛋白胨、尿素等培養(yǎng)基成分組分含量提供的主要營養(yǎng)牛肉膏5g碳源、磷酸鹽和維生素等蛋白胨10g氮源和維生素等NaCl5g無機鹽H2O定容至1000mL水1000mL牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的營養(yǎng)構(gòu)成

培養(yǎng)乳酸桿菌需添加維生素；培養(yǎng)霉菌需調(diào)至酸性；培養(yǎng)細(xì)菌需調(diào)至中性或弱堿性；培養(yǎng)厭氧微生物需提供無氧環(huán)境。在主要營養(yǎng)物質(zhì)的基礎(chǔ)上，培養(yǎng)基還需要滿足微生物生長的條件有：對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及O2的需求：10無菌技術(shù)

獲得純凈的微生物培養(yǎng)物的關(guān)鍵是______________。防止雜菌污染防止雜菌污染的方法：①消毒：是指使用較為溫和的物理、化學(xué)或生物等方法殺死物體表面或內(nèi)部一部分微生物。②滅菌：是指使用強烈的理化方法殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子。11無菌的范圍：①實驗操作的空間、操作者的衣著和手，進(jìn)行清潔和消毒②培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等進(jìn)行滅菌③實驗操作時應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍的物品相接觸為避免周圍環(huán)境中微生物的污染，實驗操作應(yīng)在超凈工作臺并在酒精燈火焰附近進(jìn)行。注意類型適用范圍操作方法消毒滅菌較為溫和理化方法，殺死部分微生物（不包括芽孢、孢子）強烈的理化方法，殺死所有微生物（包括芽孢、孢子）煮沸消毒法日常生活100℃煮沸5～6min巴氏消毒法不耐高溫的液體（如牛奶）62～65℃煮30min或80-90℃煮30s-1min化學(xué)藥劑生物活體、水源等擦拭等,如用酒精擦拭雙手、用氯氣消毒水源紫外線紫外線照射30min灼燒滅菌接種的金屬工具、接種時用的試管口或瓶口等直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒干熱滅菌耐高溫、需要保持干燥的物品,如玻璃器皿和金屬用具等物品放入干熱滅菌箱,160～170℃加熱2～3h濕熱滅菌培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿等,生產(chǎn)和實驗室常用高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi),100kPa,溫度121℃,15～30min接種室、接種箱，超凈工作臺無菌方法傳統(tǒng)發(fā)酵通常直接利用原材料中天然酵母菌工業(yè)生產(chǎn)通常使用人工選育的高活性釀酒酵母如何獲得純種酵母菌？在微生物學(xué)中，將接種于培養(yǎng)基內(nèi)，在合適條件下形成的含特定種類微生物的群體成為培養(yǎng)物；純培養(yǎng)的步驟包括：配制培養(yǎng)基、滅菌、接種、分離和培養(yǎng)微生物的純培養(yǎng)培養(yǎng)物：純培養(yǎng)物、純培養(yǎng)：由單一個體繁殖所獲得的微生物群體稱為純培養(yǎng)物，獲得純培養(yǎng)物的過程就是純培養(yǎng)。酵母菌的純培養(yǎng)分散的微生物在適宜的固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部可以繁殖形成肉眼可見的、有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體，這就是菌落。菌落特征：大小、形狀、隆起程度、顏色等。功能：鑒定菌種的重要依據(jù)獲得單菌落的方法：平板劃線法、稀釋涂布平板法不同菌落的顏色與形狀方法步驟1.制備培養(yǎng)基配制培養(yǎng)基稱取去皮馬鈴薯200g，切成小塊，加水1000ml，加熱煮沸至馬鈴薯軟爛，用紗布過濾。向濾液中加入20g葡萄糖、15-20g瓊脂，用蒸餾水定容至1000ml。

滅菌將配制好的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到錐形瓶中，加棉塞，包上牛皮紙，并用皮筋勒緊，再放入高壓蒸汽滅菌鍋中，在壓力為100kPa、溫度為121℃的條件下，滅菌15-30min。將5-8套培養(yǎng)皿包成一包，用幾層牛皮紙包緊，放入干熱滅菌箱內(nèi)，在160-170℃滅菌2h。倒平板待培養(yǎng)基冷卻到50℃左右時，在酒精燈火焰附近倒平板。1234（1）拔出錐形瓶的棉塞（2）將瓶口迅速通過火焰（3）用拇指和食指將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，將培養(yǎng)基（10-20mL）倒入培養(yǎng)皿，立即蓋上皿蓋（4）等待培養(yǎng)基冷卻凝固后，將培養(yǎng)皿倒轉(zhuǎn)過來放置倒平板的具體步驟1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50℃左右時，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養(yǎng)基的溫度？可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺溫度下降到剛剛不燙手即可。2.在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？最好不要用這個平板培養(yǎng)微生物。防止空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生。將所倒平板放入37℃的恒溫箱中培養(yǎng)12h～24h，觀察是否有菌落存在以確定是否被污染或滅菌是否徹底。4.怎么確定所倒平板未被雜菌污染？3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？既可以防止培養(yǎng)基表面的水分揮發(fā)；又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。思考2.接種和分離酵母菌

通過接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基表面。經(jīng)過數(shù)次劃線后培養(yǎng)可以分離得到單菌落。單個細(xì)胞微生物群單個菌落連續(xù)劃線分散或稀釋生長繁殖原理：“平板劃線”實驗操作連續(xù)劃線法分區(qū)劃線法1.灼燒接種環(huán)，直至接種環(huán)金屬絲燒紅2.在火焰旁冷卻接種環(huán)，拔出酵母菌培養(yǎng)液試管的棉塞

3.試管口通過火焰

4.在火焰附近用接種環(huán)蘸取一環(huán)菌液

5.試管口通過火焰，并塞上棉塞

6.將皿蓋打開一條縫隙，將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi)，劃3-5條平行線，蓋上皿蓋。注意不要劃破培養(yǎng)基7.灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從第一次劃線的末端開始作第二次劃線。重復(fù)以上操作，作第三、四、五次劃線。注意不要將最后一區(qū)的劃線與第一區(qū)相連“平板劃線”實驗操作重復(fù)實驗：劃3個平板空白對照：1個不劃線①接種環(huán)只蘸一次菌液,但要在培養(yǎng)基不同位置連續(xù)劃線多次②劃線首尾不能相接③每次劃線前接種環(huán)進(jìn)行滅菌④劃線后,培養(yǎng)皿倒置培養(yǎng)注意：為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時,仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？思考：灼燒時期目的取菌種前每次劃線前接種結(jié)束后殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者殺死上次劃線時殘留菌種，使下一次劃線的菌種直接來源上次劃線的末端，從而使每次劃線時菌種數(shù)目逐漸減少，直至得到單個細(xì)胞殺死接種環(huán)上原有微生物3.培養(yǎng)酵母菌完成平板劃線后，待菌液被培養(yǎng)基吸收，將接種后的平板和一個未接種的平板倒置，放入28℃左右(培養(yǎng)溫度因酵母菌種類的不同而稍有差異)的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24-48h。思考：為什么要同時放入未接種的平板？作對照，該培養(yǎng)皿無菌落說明培養(yǎng)基沒有污染下列為幾位同學(xué)描述的平板劃線接種法的劃線方式，其中正確的是（

）A.B.C.D.C試一試下列關(guān)于滅菌和消毒的說法不正確的是(

)A．滅菌是指殺死環(huán)境中的所有微生物，包括芽孢和孢子B．滅菌和消毒實質(zhì)上是相同的C．接種環(huán)用灼燒法滅菌D．常用的滅菌方法有灼燒滅菌、干熱滅菌、濕熱滅菌等B培養(yǎng)基的類型培養(yǎng)基的營養(yǎng)物質(zhì)消毒滅菌微生物的