保健食品功能檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)方法（2022年版）

附件3

保健食品功能檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)方法（2022年版）

適用范圍

1保健功能檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)應(yīng)符合《保健食品功能檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則（2。22年版）九

2保健功能檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)方法僅作為推薦性方法，不作為強(qiáng)制性方法。針對(duì)已納入功能目錄的保健功能新

的評(píng)價(jià)方法，參照保健功能目錄的納入程序，認(rèn)可作為保健功能檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)的推薦性方法后，可注冊(cè)使用。

目錄

第一部分、保健食品評(píng)價(jià)試驗(yàn)項(xiàng)目、試驗(yàn)原則及結(jié)果判定............................I

一、有助于增強(qiáng)免疫力.........................................................1

二、有助于抗氧化.............................................................1

三、輔助改善記憶.............................................................2

四、緩解視覺(jué)疲勞.............................................................3

五、清咽澗喉.................................................................3

六、有助于改善睡眠...........................................................4

七、緩解體力疲勞.............................................................4

八、耐缺氧...................................................................5

九、有助于控制體內(nèi)脂肪.......................................................5

十、有助于改善骨密度.........................................................6

十一、改善缺鐵性貧血.........................................................7

十二、有助于改善座瘡.........................................................7

十三、有助于改善黃褐斑.......................................................8

十四、有助于改善皮膚水份狀況.................................................8

十五、有助于調(diào)節(jié)腸道菌群.....................................................9

十六、有助于消化.............................................................10

十七、有助于潤(rùn)腸通便.........................................................11

十八、輔助保護(hù)胃粘膜.........................................................11

十九、有助于維持血脂（膽固庫(kù)/甘油三酯）健康水平..............................12

二十、有助于維持血糖健康水平.................................................14

二十一、有助于維持血壓健康水平...............................................15

二十二、對(duì)化學(xué)性肝損傷有輔助保護(hù)作用.........................................15

二十三、對(duì)電離輻射危害有輔助保護(hù)作用.........................................16

二十四、有助于排鉛...........................................................17

第二部分功能學(xué)檢驗(yàn)方法........................................................18

一、有助于增強(qiáng)免疫力檢驗(yàn)方法.................................................18

二、有助于抗氧化檢驗(yàn)方法.....................................................31

三、輔助改善記憶檢驗(yàn)方法….......「52

四、緩解視覺(jué)疲勞檢驗(yàn)方法.....................................................63

五、清咽潤(rùn)喉檢驗(yàn)方法.........................................................67

六、有助于改善睡眠檢驗(yàn)方法...................................................72

七、緩解體力疲勞檢驗(yàn)方法.....................................................75

八、耐缺氧檢驗(yàn)方法..................................81

九、有助于控制體內(nèi)脂肪檢驗(yàn)方法...............................................84

十、有助于改善骨密度檢驗(yàn)方法.................................................88

十一、改善缺鐵性貧血檢驗(yàn)方法.................................................96

十二、有助于改善座瘡檢驗(yàn)方法.................................................107

十三、有助于改善黃褐斑檢驗(yàn)方法...............................................109

十四、有助于改善皮膚水份狀況檢驗(yàn)方法.........................................111

十五、有助于調(diào)節(jié)腸道菌群檢驗(yàn)方法.............................................113

十六、有助于消化檢驗(yàn)方法.....................................................119

十七、有助于潤(rùn)腸通便檢驗(yàn)方法.................................................124

十八、輔助保護(hù)胃粘膜檢驗(yàn)方法.................................................128

十九、有助于維持血脂（膽固醇/甘油三酯）健康水平檢驗(yàn)方法......................132

二十、有助于維持血糖健康水平檢驗(yàn)方法.........................................137

二十一、有助于維持血壓健康水平檢驗(yàn)方法.......................................146

二十二、對(duì)化學(xué)性肝損傷有輔助保護(hù)作用檢驗(yàn)方法................................149

二十三、對(duì)電離輻射危害有輔均保護(hù)作用檢驗(yàn)方法................................156

二十四、有助于排鉛檢驗(yàn)方法...................................................164

第一部分、保健食品評(píng)價(jià)試驗(yàn)項(xiàng)目、試驗(yàn)原則及結(jié)果判定

1有助于增強(qiáng)免疫力

1.1試驗(yàn)項(xiàng)目

1.1.1體重

1.1.2臟器/體重比值測(cè)定：胸腺/體重比值，脾臟/體重比值

1.1.3細(xì)胞免疫功能測(cè)定：小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)，遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)實(shí)驗(yàn)

1.1.4體液免疫功能測(cè)定：抗體生成細(xì)胞檢測(cè)，血清溶血素測(cè)定

1.1.5單核一巨噬細(xì)胞功能測(cè)定：小鼠碳廓清實(shí)驗(yàn)，小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

1.1.6NK細(xì)胞活性測(cè)定

1.2試驗(yàn)原則

1.2.1所列指標(biāo)均為必做項(xiàng)目。

1.2.2采用正常或免疫功能低下的模型動(dòng)物進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.3結(jié)果判定

有助于增強(qiáng)免疫力判定；在細(xì)胞免疫功能、體液免疫功能、單核一巨噬細(xì)胞功能、NK細(xì)胞活性四個(gè)方

面任兩個(gè)方面結(jié)果陽(yáng)性，可判定該受試樣品具有有助于增強(qiáng)免疫力作用。

其中細(xì)胞免疫功能測(cè)定項(xiàng)目中的兩個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果均為陽(yáng)性，或任一個(gè)實(shí)驗(yàn)的兩個(gè)劑量組結(jié)果陽(yáng)性，可判定

細(xì)胞免疫功能測(cè)定結(jié)果陽(yáng)性。體液免疫功能測(cè)定項(xiàng)目中的兩個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果均為陽(yáng)性，或任一個(gè)實(shí)驗(yàn)的兩個(gè)劑量

組結(jié)果陽(yáng)性，可判定體液免疫功能測(cè)定結(jié)果陽(yáng)性。單核一巨噬細(xì)胞功能測(cè)定項(xiàng)目中的兩個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果均為陽(yáng)性,

或任一個(gè)實(shí)驗(yàn)的兩個(gè)劑量組結(jié)果陽(yáng)性，可判定單核一巨噬細(xì)胞功能結(jié)果陽(yáng)性。NK細(xì)胞活性測(cè)定實(shí)驗(yàn)的一個(gè)

以上劑量組結(jié)果陽(yáng)性，可判定NK細(xì)胞活性結(jié)果陽(yáng)性。

2有助于抗氧化

2.1試驗(yàn)項(xiàng)目

2.1.1動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

2.1.1.1體重

2.1.1.2脂質(zhì)氧化產(chǎn)物：丙二醛或血清8-表氫氧-異前列腺素(8-Isoprostane)

2.1.1,3蛋白質(zhì)氧化產(chǎn)物：蛋白質(zhì)戮基

2.1.1.4抗氧化酶：超氧化物歧化酶或谷胱甘肽過(guò)氧化物酶

2.1.1.5抗氧化物質(zhì)：還原型谷胱甘肽

2.1.2人體試食試驗(yàn)

2.121脂質(zhì)氧化產(chǎn)物：丙二醛或血清8-表氫氧-異前列腺素(8-Isoprostane)

2.1.2.2超氧化物歧化酶

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2.1.2.3谷胱甘肽過(guò)氧化物酶

2.2試驗(yàn)原則

2.2.1動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和人體試食試驗(yàn)所列的指標(biāo)均為必測(cè)項(xiàng)Ro

2.2.2脂質(zhì)氧化產(chǎn)物指標(biāo)中丙二醛和血清表氫氧-異前列腺素任選其一進(jìn)行指標(biāo)測(cè)定，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)抗氧化海指

標(biāo)中超氧化物歧化的和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶任選其一進(jìn)行指標(biāo)測(cè)定。

2.2.3氧化損傷模型動(dòng)物和老齡動(dòng)物任選其一進(jìn)行生化指標(biāo)測(cè)定。

2.2.4在進(jìn)行人體試食試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)對(duì)受試樣品的食用安全性作進(jìn)一步的觀察。

2.3結(jié)果判定

2.3.1動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：脂質(zhì)氧化產(chǎn)物、蛋白質(zhì)氧化產(chǎn)物、抗氧化酶、抗氧化物質(zhì)四項(xiàng)指標(biāo)中三項(xiàng)陽(yáng)性，可判定該

受試樣品有助于抗氧化動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性。

2.3.2人體試食試驗(yàn)：脂質(zhì)氧化產(chǎn)物、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過(guò)氧化物醉三項(xiàng)指標(biāo)中二項(xiàng)陽(yáng)性，旦對(duì)機(jī)

體健康無(wú)影響，可判定該受試樣品具有有助于抗氧化的作用。

3輔助改善記憶

3.1試驗(yàn)項(xiàng)目

3.1.1動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

3.1.1.1體垂

3.L1.2跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)

3.I.1.3避暗實(shí)驗(yàn)

3.1.1.4穿梭箱實(shí)驗(yàn)

3.1.1.5水迷宮實(shí)驗(yàn)

3.1.2人體試食試驗(yàn)

3.121指向記憶

3.1,2.2聯(lián)想學(xué)習(xí)

3.1.2.3圖象自由回憶

3.1.2.4無(wú)意義圖形再認(rèn)

3.1.2.5人像特點(diǎn)聯(lián)系回憶

3.1.2.6記憶商

3.2試驗(yàn)原則

3.2.1動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和人體試食試驗(yàn)為必做項(xiàng)目。

3.2.2跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)、避暗實(shí)驗(yàn)、穿梭箱實(shí)驗(yàn)、水迷宮實(shí)驗(yàn)四項(xiàng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中至少應(yīng)選三項(xiàng)，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可

靠性。

323正常動(dòng)物與記憶障礙模型動(dòng)物任選其一。

3.2.4動(dòng)物實(shí)驗(yàn)應(yīng)重復(fù)一次（重新飼養(yǎng)動(dòng)物，重復(fù)所做實(shí)驗(yàn)）。

3.2.5人體試食試驗(yàn)統(tǒng)一使用臨床記憶量表。

-2-

3.2.6在進(jìn)行人體試食試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)對(duì)受試樣品的食用安全性作進(jìn)一步的觀察。

3.3結(jié)果判定

3.3.1動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)、避暗實(shí)驗(yàn)、穿梭箱實(shí)驗(yàn)、水迷宮實(shí)驗(yàn)四項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中任二項(xiàng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性。且重.復(fù)

實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致（所重復(fù)的同一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)兩次結(jié)果均為陽(yáng)性），可以判定該受試樣品輔助改善記憶動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果

陽(yáng)性。

3.3.2人體試食試驗(yàn)：記憶商結(jié)果陽(yáng)性，可判定該受試樣品具有輔助改善記憶的作用。

4緩解視覺(jué)疲勞

4.1人體試食試驗(yàn)項(xiàng)目

4.1.1分別于試食前后進(jìn)行眼部癥狀及眼底檢查，血、尿常規(guī)檢查，肝、腎功能檢查，癥狀詢(xún)問(wèn)、用眼情況

調(diào)查；于試驗(yàn)前進(jìn)行一次胸片、心電圖、腹部B超檢查。

4.1.2明視持久度

4.13視力

4.2試驗(yàn)原則

4.2.1受試樣品試食時(shí)間為30天，必要時(shí)可延長(zhǎng)至60天。

4.2.2所列指標(biāo)均為必做項(xiàng)目。

423在進(jìn)行人體試食試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)對(duì)受試樣品的食用安全性作進(jìn)一步的觀察。

4.3結(jié)果判定

4.3.1試驗(yàn)組自身比較或試驗(yàn)組與對(duì)照組組間比較，癥狀改善有效率且癥狀總積分差異有顯著性（尸<0.05）。

4.3.2試驗(yàn)組自身比較或試驗(yàn)組與對(duì)照組組間比較，明視持久度差異有顯著性（P<0.05）,且平均明視持久度

提商大于等于10%。

具備431及432可判定該受試物具有緩解視覺(jué)疲勞功能。

5清咽潤(rùn)喉

5.1試驗(yàn)項(xiàng)目

5.1.1動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

5.1.1.1體重

5.1.1.2大鼠棉球植入實(shí)驗(yàn)

5.1.13大鼠足趾腫脹實(shí)驗(yàn)

5.1.1.4小鼠耳腫脹實(shí)驗(yàn)

5.1.2人體試食試驗(yàn)：咽部癥狀、體征

5.2試驗(yàn)原則

5.2.1動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和人體試食試驗(yàn)所列指標(biāo)均為必做項(xiàng)目。

5.2.2應(yīng)對(duì)臨床癥狀、體征進(jìn)行觀察.

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5.2.3在進(jìn)行人體試食試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)對(duì)受試樣品的食用安全性作進(jìn)一步的觀察。

5.3結(jié)果判定

5.3.1動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：大鼠棉球植入實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性，同時(shí)大鼠足趾腫脹實(shí)驗(yàn)或小鼠耳腫脹實(shí)驗(yàn)結(jié)果任意一項(xiàng)陽(yáng)性,

可判定該受試樣品清咽潤(rùn)喉動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性。

5.3.2人體試食試驗(yàn)：試食組自身比較及試食組與對(duì)照組組間比較，咽部癥狀及體征有明顯改善，癥狀及體

征的改善率明顯增加，可判定該受試樣品具有清咽潤(rùn)喉。

6有助于改善睡眠

6.1試驗(yàn)項(xiàng)目

6.1.1體重

6.1.2延長(zhǎng)戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間實(shí)驗(yàn)

6.1.3戊巴比妥鈉（或巴比妥鈉）閾下劑量催眠實(shí)驗(yàn)

6.1.4巴比妥鈉睡眠潛伏期實(shí)驗(yàn)

6.2試驗(yàn)原則

6.2.1所列指標(biāo)均為必做項(xiàng)目。

6.2.2需觀察受試樣品對(duì)動(dòng)物直接睡眠的作用。

6.3結(jié)果判定

延長(zhǎng)戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間實(shí)驗(yàn)、戌巴比妥鈉（或巴比妥鈉）閾下劑量催眠實(shí)驗(yàn)、巴比妥鈉睡眠潛伏

期實(shí)驗(yàn)三項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中任二項(xiàng)陽(yáng)性，且無(wú)明顯直接睡眠作用，可判定該受試樣品具有有助于改善睡眠的作用。

7緩解體力疲勞

7.1實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目

7.1.1動(dòng)物體重

7.1.2負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)

7.1.3血乳酸

7.1.4血清尿素

7.1.5肝糖原或肌糖原

7,2試驗(yàn)原則

7.2.1動(dòng)物實(shí)驗(yàn)所列指標(biāo)均為必做項(xiàng)目。

7.2.2實(shí)驗(yàn)前必須對(duì)同批受試樣品進(jìn)行違禁藥物的檢測(cè)。

7.2.3運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)與生化指標(biāo)檢測(cè)相結(jié)合。

7.3結(jié)果判定

負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性，血乳酸、血清尿素、肝融原/肌糖原三項(xiàng)生化指標(biāo)口任二項(xiàng)指標(biāo)陽(yáng)性，訶判定該

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受試樣品具有緩解體力疲勞的作用。

8耐缺氧

8.1試驗(yàn)項(xiàng)目

8.1.1體重

8.1.2常壓耐缺氧實(shí)驗(yàn)

8.1.3亞硝酸鈉中毒存活實(shí)驗(yàn)

8.1.4急性腦缺血性缺氧實(shí)驗(yàn)

8.2試驗(yàn)原則

所列指標(biāo)均為必做項(xiàng)目。

8,3結(jié)果判定

常壓耐缺氧實(shí)驗(yàn)、亞硝酸鈉中毒存活實(shí)驗(yàn)、急性腦缺血性缺氧實(shí)驗(yàn)三項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中任二項(xiàng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性，可

判定該受試樣品具有耐缺氧的作用。

9有助于控制體內(nèi)脂肪

9.1試驗(yàn)項(xiàng)目

9.1.1動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

9.1,1.1體重、體重增重

9.1.1.2攝食量、攝入總熱量

9.I.L3體內(nèi)脂肪含量（睪丸及腎周?chē)緣|）

9.L1.4脂/體比

9.1.2人體試食試驗(yàn)

9.1.2.1體重

9.1.2.2腰圍、臀圍

9.1.2,3體內(nèi)脂肪含量

9.2試驗(yàn)原則

9.2.1動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和人體試食試驗(yàn)所列指標(biāo)均為必做項(xiàng)目。

9.2.2動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中大鼠肥胖模型法和預(yù)防大鼠肥胖模型法任選其一。

9.2.3控制體內(nèi)多余脂肪，不單純以減輕體重為目標(biāo)。

924引起腹瀉或抑制食欲的受試樣品不能作為有助于控制體內(nèi)脂肪食品。

9.2.5每日營(yíng)養(yǎng)素?cái)z入量應(yīng)基本保證機(jī)體正常生命活動(dòng)的需要。

9.2.6對(duì)機(jī)體健康無(wú)明顯損害。

9.2.7實(shí)驗(yàn)前應(yīng)對(duì)同批受試樣品進(jìn)行違禁藥物的檢測(cè)。

928以各種營(yíng)養(yǎng)素為主要成分替代主食的有助于控制體內(nèi)脂肪食品可以不進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，僅進(jìn)行人體試食

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試驗(yàn)。

9.2.9不替代主食的有助于控制體內(nèi)脂肪試驗(yàn)，應(yīng)對(duì)試食前后的受試者膳食和運(yùn)動(dòng)狀況進(jìn)行觀察。

9.2.10替代主食的有助于控制體內(nèi)脂肪試驗(yàn)，除開(kāi)展不替代主食的設(shè)計(jì)指標(biāo)外，還應(yīng)設(shè)立身體活動(dòng)、情緒、

工作能力等測(cè)量表格，排除服用受試樣品后無(wú)相應(yīng)的.負(fù)面影響產(chǎn)生。結(jié)合替代主食的受試樣品配方，對(duì)每日

騰食進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)學(xué)評(píng)估.

9.2,11在進(jìn)行人體試食試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)對(duì)受試樣品的食用安全性作進(jìn)一步的觀察。

9.3結(jié)果判定

9.3.1動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)組的體重或體重增重低于模型對(duì)照組，體內(nèi)脂肪含量或脂/體比低于模型對(duì)照組，差異

有顯著性，攝食量不顯著低于模型對(duì)照組，可判定該受試樣品有助于控制體內(nèi)脂肪動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性。

9.3.2人體試食試驗(yàn)：

不替代主食的有助于控制體內(nèi)脂肪受試樣品：試食組自身比較及試食組與對(duì)照組組間比較，體內(nèi)脂肪含

量減少，皮下脂肪四個(gè)點(diǎn)中任兩個(gè)點(diǎn)減少，腰圍與臀圍之一減少，且差異有顯著性，運(yùn)動(dòng)耐力不下降，對(duì)機(jī)

體健康無(wú)明顯損害，并排除膳食及運(yùn)動(dòng)對(duì)有助于控制體內(nèi)脂肪作用的影響，可判定該受試樣品具有有助于控

制體內(nèi)脂肪的作用。

替代主食的有助于控制體內(nèi)脂肪受試樣品：試食組試驗(yàn)前后自身比較，其體內(nèi)脂肪含量減少，皮下脂肪

四個(gè)點(diǎn)中至少有兩個(gè)點(diǎn)減少，腰圍與臀圍之?減少，且差異有顯著性（入0.05）,微量元素、維生素營(yíng)養(yǎng)學(xué)評(píng)

價(jià)無(wú)異'常，運(yùn)動(dòng)耐力不下降，情緒、工作能力不受影響，并排除運(yùn)動(dòng)對(duì)有助于控制體內(nèi)脂肪作用的影響，可

判定該受試樣品具有有助于控制體內(nèi)脂肪的作用。

10有助于改善骨密度

104試驗(yàn)項(xiàng)目

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)；分為方案一（補(bǔ)鈣為主的受試物）和方案二（不含鈣或不以補(bǔ)鈣為主的受試物）兩種。

10.1.1體重

10.1.2母鈣含量

10.1.3骨密度

10.2試驗(yàn)原則

10.2.1根據(jù)受試樣品作用原理的不同，方案一和方案二任選其一進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。

10.2.2所列指標(biāo)均為必做項(xiàng)目。

10.2.3使用未批準(zhǔn)用于食品的鈣的化合物，除必做項(xiàng)目外，還必須進(jìn)行鈣吸收率的測(cè)定；使用屬營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑

范圍內(nèi)的鈣源及來(lái)自普通食品的鈣源（如可食動(dòng)物的骨、奶等），可以不進(jìn)行鈣的吸收率實(shí)驗(yàn)。

10.3結(jié)果判定

方案一

骨鈣含量或骨密度顯著高于低鈣對(duì)照組且不低于相應(yīng)劑量的碳酸鈣對(duì)照組，鈣的吸收率不低于碳酸鈣對(duì)照

組，可判定該受試樣品具有有助于改善骨密度的作用。

方案二

-6-

不含鈣的產(chǎn)品，骨鈣含量或骨密度較模型對(duì)照組明顯增加，且差異有顯著性，可判定該受試樣品具有有助于

改善骨密度的作用。

不以補(bǔ)鈣為主（可少量含鈣）的產(chǎn)品，骨鈣含量或骨密度較模型對(duì)照組明顯增加，差異有顯著性，且不

低于相應(yīng)劑量的碳酸鈣對(duì)照組，鈣的吸收率不低于碳酸鈣對(duì)照組，可判定該受試樣品具有有助于改善骨密度

的作用。

11改善缺鐵性貧血

11.1試驗(yàn)項(xiàng)目

11.1.1動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

11.1.1.1體重

11.1.1.2血紅蛋白

11.1.1.3紅細(xì)胞壓積/紅細(xì)胞內(nèi)游離原嚇附

11.1.2人體試食試驗(yàn)

11.1.2.1血紅蛋白

11.1.2.2血清鐵蛋白

11.1.2.3紅細(xì)胞內(nèi)游離原嚇咻/血清運(yùn)鐵蛋白飽和度

11.2試驗(yàn)原則

11.2.1動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和人體試食試驗(yàn)所列指標(biāo)均為必做項(xiàng)目。

11.2.2針對(duì)兒童的人體試食試驗(yàn)，只測(cè)血紅蛋白和紅細(xì)胞內(nèi)游離原嚇咻。

11.2.3在進(jìn)行人體試食試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)對(duì)受試樣品的食用安全性作進(jìn)一步的觀察。

113結(jié)果判定

H.3.I動(dòng)物實(shí)驗(yàn)；血紅蛋白指標(biāo)陽(yáng)性，紅細(xì)胞內(nèi)游離原嚇咻/紅細(xì)胞壓積二項(xiàng)指標(biāo)一項(xiàng)指標(biāo)陽(yáng)性，可判定該受

試樣品改善缺鐵性貪血?jiǎng)游飳?shí)驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性。

11.3.2人體試食試驗(yàn)

11.3.2.1針對(duì)改善兒童缺鐵性貧血功能的，血紅蛋白和紅細(xì)胞內(nèi)游離原嚇咻二項(xiàng)指標(biāo)陽(yáng)性，可判定該受試樣

品具有改善缺鐵性貧血作用。

11.3.2,2針對(duì)改善成人缺鐵性貧血功能的，血紅蛋白指標(biāo)陽(yáng)性，血清鐵蛋臼、紅細(xì)胞內(nèi)游離原葉咻/血清運(yùn)鐵

蛋白飽和度二項(xiàng)指標(biāo)一項(xiàng)指標(biāo)陽(yáng)性，可判定該受試樣品具有改善缺鐵性貧血作用。

12有助于改善座瘡

12.1人體試食試驗(yàn)項(xiàng)目

12.1.1瘞瘡數(shù)量

12.1.2皮損狀況

-7-

12.1.3皮膚油份

12.2試驗(yàn)原則

12.2.1所列的指標(biāo)均為必做項(xiàng)目。

12.2.2試驗(yàn)前后應(yīng)針對(duì)固定皮膚范圍內(nèi)的瘙瘡數(shù)量及皮損狀況進(jìn)行分析。

12.2.3在進(jìn)行人體試食試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)對(duì)受試樣品的食用安全性作進(jìn)一步的觀察。

12.3結(jié)果判定

試食組座瘡數(shù)量明顯減少且大于等于20%,皮損程度積分明顯減少，差異均有顯著性，皮膚油份不顯

著增加，可判定該受試樣品具有有助于改善座瘡的作用。

13有助于改善黃褐斑

13.1人體試食試驗(yàn)項(xiàng)目

13.1.1黃褐斑面積

13.1.2黃褐斑顏色

13.2試驗(yàn)原則

132.1所列的指標(biāo)均為必做項(xiàng)目。

13.2.2試驗(yàn)前后應(yīng)針對(duì)固定皮膚范圍內(nèi)的黃褐斑而積及顏色進(jìn)行分析。

13.2.3在進(jìn)行人體試食試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)對(duì)受試樣品的食用安全性作進(jìn)一步的觀察。

133結(jié)果判定

試食組黃褐斑面積明顯減少且大于等于10%,顏色積分明顯下降，差異均有顯著性，且不產(chǎn)生新的黃褐

斑，可判定該受試樣品具有有助于改善黃褐斑的作用。

14有助于改善皮膚水份狀況

14.1人體試食試驗(yàn)項(xiàng)目；皮膚水份

14.2試驗(yàn)原則

14.2.1皮膚水份值的測(cè)定點(diǎn)試驗(yàn)前后應(yīng)保持一致。

14.2.2在進(jìn)行人體試食試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)對(duì)受試樣品的食用安全性作進(jìn)一步的觀察。

14.3結(jié)果判定：試食組皮膚水份明顯改善，差異有顯著性，可判定該受試樣品具有有助于改善皮膚水份狀況

-8-

的作用。

15有助于調(diào)節(jié)腸道菌群

15.1試驗(yàn)項(xiàng)目

15.1.1動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

15.1.1.1體重

15.1.1.2雙歧桿菌

15.1.1.3乳桿菌

15.1.1.4腸球菌

15.1.1.5腸桿菌

15.1.1.6產(chǎn)氣莢膜梭菌

15.1.2人體試食試驗(yàn)

15.1.2.1雙歧桿菌

15.1.2.2乳桿菌

15.1.2.3腸球菌

15.1.2.4腸桿菌

15.1.2.5擬桿菌

15.1.2.6產(chǎn)氣莢膜梭菌

15.2試驗(yàn)原則

15.2.1動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和人體試食試驗(yàn)所列指標(biāo)均為必做項(xiàng)目。

15.2.2正常動(dòng)物或腸道菌群紊亂模型動(dòng)物任選其一。

15.2.3受試樣品中含雙歧桿菌、乳桿菌以外的其它益生菌時(shí)，應(yīng)在動(dòng)物和人體試驗(yàn)中加測(cè)該益生菌。

15.2.4在進(jìn)行人體試食試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)對(duì)受試樣品的食用安全性作進(jìn)一步的觀察。

15.3結(jié)果判定

153.1動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：符合以下任一項(xiàng)，可判定該受試樣品有助于調(diào)節(jié)腸道菌群動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性。

15.3.1.1雙歧桿菌和/或乳桿菌（或其它益生菌）明顯增加，梭菌減少或無(wú)明顯變化，腸球菌、腸桿菌無(wú)明顯

變化6

153.1.2雙歧桿菌和/或乳桿菌（或其它益生菌）明顯增加，梭菌減少或無(wú)明顯變化，腸球菌和/或腸桿菌明顯

增加，但增加的幅度低于雙歧桿菌、乳桿菌（或其它益生菌）增加的幅度e

15.3.2人體試食試驗(yàn)；符合以下任一項(xiàng)，可判定該受試樣品具有有助于調(diào)節(jié)腸道菌群的作用。

153.2.1雙歧桿菌和/或乳桿菌（或其它益生菌）明顯增加，梭菌減少或無(wú)明顯變化，腸球菌、腸桿菌、擬桿

菌無(wú)明顯變化。

15.3.2.2雙歧桿菌和/或乳桿菌（或其它益生菌）明顯增加，梭菌減少或無(wú)明顯變化，腸球菌和/或腸桿菌、擬

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桿菌明顯增加，但增加的幅度低于雙歧桿菌、乳桿菌（或其它益生菌）增加的幡度。

16有助于消化

16.1試驗(yàn)項(xiàng)目

16.1.1動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

16.1.1.1體重、體重增重、攝食量和食物利用率

16.1.1.2小腸運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)

16.1.1.3消化酶測(cè)定

16.1.2人體試食試驗(yàn)

16.1.2.1兒童方案

16.1.2.1.1食欲

16.1.2.1.2食量

16.1.2.1.3偏食狀況

16.1.2.1.4體重

16.1.2.1.5血紅蛋白含量

16.1.2.2成人方案

16.1.2.2.1臨床癥狀觀察

16.1.2.2.2胃/腸運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)

16.2試驗(yàn)原則

16.2.1動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和人體試食試驗(yàn)所列指標(biāo)均為必做項(xiàng)目。

162.2根據(jù)受試樣品的適用人群特點(diǎn)在人體試食試驗(yàn)方案中任選其一。

16.2.3在進(jìn)行人體試食試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)對(duì)受試樣品的食用安全性作進(jìn)一步的觀察。

16.3結(jié)果判定

163.1動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：動(dòng)物體重、體重增重、攝食量、食物利用率，小腸運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)和消化酶測(cè)定三方面中任二方

面實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性，可判定該受試樣品有助于消化動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性。

163.2人體試食試驗(yàn)

163.2.1針對(duì)改善兒童消化功能的，食欲、進(jìn)食量、偏食改善結(jié)果陽(yáng)性，體重和血紅蛋白二項(xiàng)指標(biāo)中任一項(xiàng)

指標(biāo)結(jié)果陽(yáng)性，可判定該受試樣品具有有助于消化的作用。

163.2.2針對(duì)改善成人消化功能的，臨床癥狀明顯改善，胃/腸運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性，可判定該受試樣品具有有

助于消化的作用。

-10-

17有助于潤(rùn)腸通便

17.1試驗(yàn)項(xiàng)目

I7.I.1動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

17.1.1.1體重

17.1.1.2小腸運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)

17.1.1.3排便時(shí)間

17.1.1.4糞便重量

17.1.1.5糞便粒數(shù)

17.1,1.6糞便性狀

17.1.2人體試食試驗(yàn)

17.1.2.1癥狀體征

17.1.2.2糞便性狀

17.1.2.3排便次數(shù)

17.1.2.4排便狀況

17.2試驗(yàn)原則

17.2.1動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和人體試食試驗(yàn)所列指標(biāo)均為必做項(xiàng)目。

17.2.2除對(duì)便秘模型動(dòng)物各項(xiàng)必測(cè)指標(biāo)進(jìn)行觀察外，還應(yīng)對(duì)正常動(dòng)物進(jìn)行觀察，不得引起動(dòng)物明顯腹瀉。

17.2.3排便次數(shù)的觀察時(shí)間試驗(yàn)前后應(yīng)保持一致。

17.2.4在進(jìn)行人體試食試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)對(duì)受試樣品的食用安全性作進(jìn)一步的觀察。

17.3結(jié)果判定

173.1動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：排糞便重量和糞便粒數(shù)一項(xiàng)結(jié)果陽(yáng)性，同時(shí)小腸運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)和排便時(shí)間一項(xiàng)結(jié)果陽(yáng)性，可判

定該受試樣品有助于潤(rùn)腸通便動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性。

17.3.2人體試食試驗(yàn)：排便次數(shù)明顯增加，同時(shí)糞便性狀和排便狀況一項(xiàng)結(jié)果明顯改善，可判定該受試樣品

具芍有助于潤(rùn)腸通便的作用。

18輔助保護(hù)胃粘膜

18.1試驗(yàn)項(xiàng)目

18.1.1動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

18.1.1.1體重

18.1.1.2胃粘膜損傷大體觀察

18.1.1.3胃粘膜組織病理學(xué)檢查

18.1.2人體試食試驗(yàn)

18.1.2.1臨床癥狀

-11-

18.1.2.2體征

18.1.2.3胃鏡觀察

18.2試驗(yàn)原則

18.2.1動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的體重和⑶粘膜損傷大體觀察為必做項(xiàng)目，目粘膜組織病理學(xué)檢查為選做項(xiàng)目：人體試食試

驗(yàn)所列指標(biāo)均為必做項(xiàng)目。

18.2.2無(wú)水乙醇、消炎痛致急性胃粘膜損傷模型或冰醋酸致慢性胃潰瘍模型任選其一進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。

18.2.3在進(jìn)行人體試食試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)對(duì)受試樣品的安全性作進(jìn)一步的觀察。

18.3結(jié)果判定

183.1動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)組與模型對(duì)照組比較，胃粘膜損傷明顯改善，可判定該受試樣品動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性。

183.2人體試食試驗(yàn)：試食組與對(duì)照組比較，臨床癥狀、體征積分明顯減少，胃鏡復(fù)查結(jié)果有改善或不加重,

可判定該受試樣品具有輔助保護(hù)自粘膜的作用。

19有助于維持血脂（膽固醇/甘油三酯）健康水平

根據(jù)血脂界常的類(lèi)型，有助于維持血脂（膽固酥/甘油三酯）健康水平按照不同的血脂異常分型設(shè)立分類(lèi)

的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和人體試食試驗(yàn)。

19.1試驗(yàn)項(xiàng)目

19.1.1根據(jù)受試樣品的作用機(jī)制,分成三種情況

19.1.1.1有助于維持血脂健康水平功能：同時(shí)維持血總膽固酥和血甘油三酯健康水平

19.1.1.2有助于維持血膽固靜健康水平功能：?jiǎn)渭兙S持血膽固酷健康水平

19.1.1.3有助于維持血甘油三酯健康水平功能：?jiǎn)渭兙S持血甘油三酯健康水平

19.1.2觀察指標(biāo)

19.1.2.1體重

19.1.2.2血清總膽固醉

19.1.2.3血清甘油三酯

19.1.2.4血清高密度脂蛋臼膽固醇

19.1.2.5血清低密度脂蛋白膽固醇

19.1.3人體試食試驗(yàn)

19.1.3.1血清總膽固醇

19.1.3.2血清甘油三酯

19.1.3.3血清高密度脂蛋白膽固醉

19.1.3.4血清低密度脂蛋白膽固醇

19.2試驗(yàn)原則

19.2.1動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和人體試食試驗(yàn)所列指標(biāo)均為必測(cè)項(xiàng)目。

19.2.2根據(jù)受試樣品的作用機(jī)制，可在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的兩個(gè)動(dòng)物模型中任選一項(xiàng)。

19.2.3根據(jù)受試樣品的作用機(jī)制，可在人體試食試驗(yàn)的三個(gè)方案中任選一項(xiàng)。

-12-

19.2.4在進(jìn)行人體試食試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)對(duì)受試樣品的食用安全性作進(jìn)一步的觀察。

19.3結(jié)果判定

193.1動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：

1931.1混合型高脂血癥動(dòng)物模型

有助于維持血脂健康水平（膽冏醇油三酯）功能結(jié)果判定：模型對(duì)照組和空白對(duì)照組比較，血清甘油

三酯升高，血清總膽固醇或低密度脂蛋白膽固醇升高，差異均有顯著性，判定模型成立。（1）各劑量組與

模型對(duì)照組比較，任一劑量組血清總膽固醇或低密度脂蛋白膽固醇降低，口任一劑量組血清甘油三酯降低，

差異均有顯著性，同時(shí)各劑量組血清高密度脂蛋白膽固醇不顯著低于模型對(duì)照組，可判定該受試樣品有助于

維持血脂健康水平功能動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性。（2）各劑量組與模型對(duì)照組比較，任一劑量組血清總膽固醇或

低密度脂蛋白膽固醇降低，差異均有顯著性，同時(shí)各劑量組血清甘油三酯不顯著高于模型對(duì)照組，各劑量組

血清高密度脂蛋白膽固醇不顯著低于模型對(duì)照組，可判定該受試樣品有助于維持血膽固醇健康水平功能動(dòng)物

實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性。（3）各劑量組與模型對(duì)照組比較，任一劑量組血清甘油三酯降低，差異均有顯著性，同時(shí)

各劑量組血清總膽固醇及低密度脂蛋白膽固醇不顯著高于模型對(duì)照組，血清高密度脂蛋白膽固醇不顯著低于

模型對(duì)照組，可判定該受試樣品有助于維持血甘油三酯健康水平功能動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性。

193.1.2高膽固醇血癥動(dòng)物模型

模型對(duì)照組和空白對(duì)照組比較，血灣總膽固醇（TC）或低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）升高，差異有

顯著性，血清甘油三酯（TG）差異無(wú)顯至性，判定模型成立。各劑量組與模型對(duì)照組比較，任一劑量組血清

總旭固障或低密度脂蛋白膽固醉降低，差異有顯著件，并且各劑量組血清高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）不

顯著低于模型對(duì)照組，血清甘油二酯不顯著高于模型對(duì)照組，可判定該受試樣品有助于維持血膽固醒健康水

平功能動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性。

19.3.2人體試食試驗(yàn)

指標(biāo)判定標(biāo)準(zhǔn)：

有效：TC降低＞10%或降至正常；TG降低＞15%或降至正常；HDL”C上升X）.l04mmol/L。

血脂總有效：TC、TG、HDL-C三項(xiàng)指標(biāo)均達(dá)到有效標(biāo)準(zhǔn)者。

無(wú)效：未達(dá)到有效標(biāo)準(zhǔn)者。

19.321有助于維持血脂（膽固醇/甘油三酯）健康水平結(jié)果判定

試食組自身比較及試食組與對(duì)照組組間比較，受試者血清總膽固醇、甘油二酯、低密度脂蛋白膽固醇降

低，差異均有顯著性，同時(shí)血清高密度脂蛋白膽固醇不顯著低于對(duì)照組，試驗(yàn)組血脂總有效率顯著高于對(duì)照

組，可判定該受試樣品有助于維持血脂（膽固醉/甘油三酯）健康水平人體試食試驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性。

19.3,2,2有助于維持血膽固醇健康水平功能結(jié)果判定

試食組自身比較及試食組與對(duì)照組組間比較，受試者血清總膽固醇、低密度脂蛋白膽固靜降低，差異有

顯著性，同時(shí)血清甘油三酯不顯著高于對(duì)照組，血清高密度脂蛋白膽固醉不顯著低于對(duì)照組，試驗(yàn)組血清總

膽固醇有效率顯著高于對(duì)照組，可判定該受試樣品有助于維持血膽固醇健康水平功能人體試食試驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)

性,

193.2.3有助于維持血甘油三麗健康水平功能結(jié)果判定

試食組自身比較及試食組與對(duì)照組組間比較，受試者血清甘油三酯降低，差異有顯著性，同時(shí)血潔思膽

-13-

同醉和低密度脂蛋白膽冏醉不顯著高于對(duì)照組，血清高密度脂蛋白膽冏醉不顯著低于對(duì)照組，試驗(yàn)組血清甘

油三酯有效率顯著高于對(duì)照組，可判定該受試樣品有助于維持血甘油三酯健康水平功能人體試食試臉結(jié)果陽(yáng)

性,

20有助于維持血糖健康水平

20.1試驗(yàn)項(xiàng)目

20.1.1動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

分為方案一（胰島損傷高血糖模型）和方案二（胰島素抵抗糖/脂代謝紊亂模型）兩種

20.1.1.1方窠一（胰島損傷高血糖模型）

20.1.1.1.1體重

20.1.1.1.2空腹血糖

20.1.1.1.3糖耐量

20.1.1.2方窠二（胰島素抵抗糖/脂代謝紊亂模型）

20.1.1.2.1體重

20.1.1.2.2空腹血糖

20.1.1.2.3糖耐量

20.1.1.2.4胰島素

20.1.1.2.5總膽固醇

20.1.1.2.6甘油三酯

20.1.2人體試食試驗(yàn)

20.1.2.1空腹血糖

20.1.2.2餐后2小時(shí)血糖

20.123糖化血紅蛋白（HbAlc）或糖化血清蛋白

20.1.2.4總膽固醇

20.1.2.5甘油三酯

20.2試驗(yàn)原則

20.2.1動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和人體試食試驗(yàn)所列指標(biāo)均為必做項(xiàng)目。

20.2.2根據(jù)受試樣品作用原理不同，方案一和方案二動(dòng)物模型任選其一進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。

20.2.3除對(duì)高血糖模型動(dòng)物進(jìn)行所列指標(biāo)的檢測(cè)外，應(yīng)進(jìn)行受試樣品對(duì)正常動(dòng)物空腹血糖影響的觀察。

20.2.4人體試食試驗(yàn)可在臨床治療的基礎(chǔ)上進(jìn)行。

20.2.5應(yīng)對(duì)臨床癥狀和體征進(jìn)行觀察。

20.2.6在進(jìn)行人體試食試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)對(duì)受試樣品的食用安全性作進(jìn)?步的觀察.

203結(jié)果判定

203.1動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：

方案一：空腹血糖和糖耐量二項(xiàng)指標(biāo)中一項(xiàng)指標(biāo)陽(yáng)性，且對(duì)正常動(dòng)物空腹也糖無(wú)影響，即可判定該受試

-14-

樣品有助于維持血糖健康水平動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性。

方案二：空腹血糖和糖耐量二項(xiàng)指標(biāo)中一項(xiàng)指標(biāo)陽(yáng)性，血脂（總膽固醇、甘油三酯）無(wú)明顯升高，且對(duì)

正常動(dòng)物空腹血糖無(wú)影響，即可判定該受試樣品有助于維持血糖健康水平動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性。

203.2人體試食試驗(yàn)：空腹血糖、餐后2小時(shí)血糖、糖化血紅蛋白（或糖化血清蛋白）、血脂四項(xiàng)指標(biāo)均無(wú)

顯著升高，且空腹血糖、餐后2小時(shí)血糖兩項(xiàng)指標(biāo)中一項(xiàng)指標(biāo)陽(yáng)性，對(duì)機(jī)體健康無(wú)不利影響，可判定該受試

樣猛具有有助于維持血糖健康水平的作用。

21有助于維持血壓健康水平

21.1試驗(yàn)項(xiàng)目

21.1.1動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

21.1,1.1體重

21.1.1.2血壓

21.1.1.3心率

21.1.2人體試食試驗(yàn)

21.1.2.1臨床癥狀與體征

21.1.2.2血壓

21.1.2.3心率

21.2試驗(yàn)原則

21.2.1動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和人體試食試驗(yàn)所列指標(biāo)均為必做項(xiàng)目。

21.2.2動(dòng)物實(shí)驗(yàn)應(yīng)選擇高血壓模型動(dòng)物和正常動(dòng)物進(jìn)行所列指標(biāo)的觀察。

21.2.3人體試食試驗(yàn)可在臨床治療的基礎(chǔ)上進(jìn)行。

21.2.4在進(jìn)行人體試食試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)對(duì)受試樣品的食用安全性作進(jìn)一步的觀察。

213結(jié)果判定

213.1動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物血壓明顯低于對(duì)照組，且對(duì)實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物心率和正常動(dòng)物血壓及心率無(wú)影響，可

判定該受試樣品有助于維持血壓健康水平動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性。

213.2人體試食試驗(yàn)：舒張壓或收縮壓二項(xiàng)指標(biāo)中任一指標(biāo)結(jié)果陽(yáng)性，可判定該受試樣品具有有助于維持血

壓健康水平的作用。

22對(duì)化學(xué)性肝損傷有輔助保護(hù)作用

22A試驗(yàn)項(xiàng)目

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)分為方案一（四氯化碳肝損傷模型）和方案二（酒精肝損傷模型）兩種。

22.1.1方案一（四氯化碳肝損傷模型）

22.1.1,1體重

22.1.1.2谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）

22.1.1.3谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）

-15-

22.1.1.4肝組織病理學(xué)檢查

22.1.2方案二(酒精肝損傷模型)

22.1.2.1體重

22.1.2.2丙二醛(MDA)

22.1.2.3還原型谷胱甘肽(GSH)

22.1.2.4甘油三酯(TG)

22.1.2.5肝組織病理學(xué)檢查

22.2試驗(yàn)原則

22.2.1所列指標(biāo)均為必做項(xiàng)目。

22.2.2根據(jù)受試樣品作用原理的不同，方案一和方案二任選其一進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。

22.3結(jié)果判定

方案一(四氯化碳肝損傷模型)：病理結(jié)果陽(yáng)性，谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酸二指標(biāo)中任一項(xiàng)指標(biāo)陽(yáng)性，

可判定該受試樣品具有對(duì)化學(xué)性肝損傷有輔助保護(hù)作用功能作用。

方案二(酒精肝損傷模型)：①肝臟MDA、GSH、TG三項(xiàng)指標(biāo)結(jié)果陽(yáng)性，可判定該受試樣品對(duì)乙醇引

起的肝損傷有輔助保護(hù)功能，②肝臟MDA、GSH、TG三指標(biāo)中任二項(xiàng)指標(biāo)陽(yáng)性，且肝臟病理結(jié)果陽(yáng)性，可

判定該受試樣品具有對(duì)乙醉引起的肝損傷有輔助保護(hù)作用功能的作用。

23對(duì)電離輻射危害有輔助保護(hù)作用

23.1實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目

23.1.1體重

23.1.2外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)

23.1.3骨髓細(xì)胞DNA含量或骨髓有核細(xì)胞數(shù)

23.1.4小鼠骨髓細(xì)胞微核實(shí)驗(yàn)

23.1.5血/組織中超氧化物歧化幅活性實(shí)驗(yàn)

23.1.6血清溶血素含量實(shí)驗(yàn)

23.2實(shí)驗(yàn)原則

外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)、骨髓細(xì)胞DNA含量或骨髓有核細(xì)胞數(shù)、小鼠骨髓細(xì)胞微核實(shí)驗(yàn)、血/組織中超

氧化物歧化酶活性實(shí)驗(yàn)、血清溶血素含量實(shí)驗(yàn)中任選擇三項(xiàng)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

23.3結(jié)果判定

在外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)、骨髓細(xì)胞DNA含量或骨髓有核細(xì)胞數(shù)、小鼠骨髓細(xì)胞微核、血/組織中超氧

化物歧化酹活性、血清溶血素含量五項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中任何二項(xiàng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性，可判定該受試樣品具有對(duì)電離輻射危

害芍輔助保護(hù)作用功能的作用3

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24有助于排鉛

24.1試驗(yàn)項(xiàng)目

24.1.1動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

24.1.1.1體重

24.1.1.2血鉛

24.1.1.3骨鉛

24.1.1.4肝組織鉛

24.1.2人體試食試驗(yàn)

24.1.2.1血鉛

24.1.2.2尿鉛

24.1.2.3尿鈣

24.1.2.4尿鋅

24.2試驗(yàn)原則

24.2.1動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和人體試食試驗(yàn)所列指標(biāo)均為必做項(xiàng)目。

24.2.2應(yīng)對(duì)臨床癥狀、體征進(jìn)行觀察。

24.2.3對(duì)尿鉛進(jìn)行多次測(cè)定，以了解體內(nèi)鉛的排出情況。

24.2.4在進(jìn)行人體試食試險(xiǎn)時(shí)，應(yīng)對(duì)受試樣品的食用安全性作進(jìn)一步的觀察。

24.3結(jié)果判定

24.3.1動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)組與模型對(duì)照組比較，骨鉛含量顯著降低，同時(shí)血鉛或肝鉛含量顯著降低，可判定該

受試樣品動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性。

243.2人體試食試臉：試食組與對(duì)照組組間比較，至少兩個(gè)觀察時(shí)點(diǎn)尿鉛排出量增加且顯著高于試驗(yàn)前，或

總尿鉛排出量明顯增加。同時(shí)，對(duì)總尿鈣、總尿鋅的排出無(wú)明顯影響，或總尿鈣、總尿鋅排出增加的幅度小

于總尿鉛排出增加的幅度，可判定該受試樣品具有有助于排鉛的作用。

-17-

第二部分功能學(xué)檢驗(yàn)方法

一、有助于增強(qiáng)免疫力檢驗(yàn)方法

1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

推薦用近交系小鼠，18—22g,單一性別，每組10—15只。

2.劑量分組及受試樣品給予時(shí)間

實(shí)驗(yàn)設(shè)三個(gè)劑量組和一個(gè)陰性對(duì)照組，以人體推薦量的10倍為其中的一個(gè)劑量組，另設(shè)二個(gè)劑量組，

必要時(shí)設(shè)陽(yáng)性對(duì)照組。

受試樣品給予時(shí)間30天，必耍時(shí)可延長(zhǎng)至45天。免疫模型動(dòng)物實(shí)驗(yàn)時(shí)間可適當(dāng)延長(zhǎng)。

3.實(shí)驗(yàn)方法

3.1ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)

可任選下列方法之一

3.1.1MTT法

3.1.1.1原理

當(dāng)T淋巴細(xì)胞受ConA刺激后發(fā)生母細(xì)胞發(fā)生增殖反應(yīng)，活細(xì)胞特別是增殖細(xì)胞中的線粒體水解的可將

MTT(一種淡黃色的喋氮鹽)分解為蘭紫色結(jié)晶，其光密度值能反映細(xì)胞的增殖情況。

3.1.1.2儀器和材料

RPMI1640細(xì)胞培養(yǎng)液、小牛血清、2?疏基乙醉(2-ME),青霉素、鏈霉素、刀豆蛋白A(ConA)、鹽酸、

異丙醇、MTT、Hank's液、PBS緩沖液(pH7.2-7.4)

紗布或200月篩網(wǎng)、24孔培養(yǎng)板，96孔培養(yǎng)板(平底)，手術(shù)器械、二氧化碳培養(yǎng)箱、酶標(biāo)儀、721分

光光度計(jì)、超凈工作臺(tái)、高壓滅菌器、無(wú)菌濾器°

3.LL3實(shí)驗(yàn)步驟

3.1.1.3.1試劑配制

完全培養(yǎng)液RPMI1640培養(yǎng)液過(guò)濾除菌，用前加入10%小牛血清，1%谷氨酰胺(200mmol/L),青霉素

(lOOU/mL),鏈霉素(100pg/L)及5X10-5mol/L的2-筑基乙醉，用無(wú)菌的ImobL的HCI或lmol/L的NaOH

調(diào)pH至7.0-72即完全培養(yǎng)液,

ConA液用雙蒸水配制成lOOpg/mL的溶液，過(guò)濾除菌，在低溫冰箱(-20℃)保存。

無(wú)菌Hank's液用前以3.5%的無(wú)菌NaHCC^調(diào)pH至727.4。

MTT液將5mgMTT溶于1mLpH7.2的PBS中，現(xiàn)配現(xiàn)用。

酸性異丙醇溶液96mL異丙醇中加入4mLlmol/L的HCL臨用前配制。

3.1.13.2脾細(xì)胞懸液制備

無(wú)菌取脾，置于盛有適量無(wú)菌Hanks液平皿中，用鑲子輕輕將脾磨碎，制成單個(gè)細(xì)胞懸液。經(jīng)200目篩

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網(wǎng)過(guò)濾，或用4層紗布將牌磨碎，用Hank、液洗2次，每次離心lOmin（1000r/nnn）o然后將細(xì)胞懸浮于1mL

的完全培養(yǎng)液中，用臺(tái)酚絲染色計(jì)數(shù)活細(xì)胞數(shù)（應(yīng)在95%以上），調(diào)整細(xì)胞濃度為3X106個(gè)/mL。

3.1.13.3淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)

將每一份脾細(xì)胞懸液分兩孔加入24孔培養(yǎng)板中，每孔1mL,一孔加75HLeonA液（相當(dāng)于7.5Ng/mL）,

另一孔作為對(duì)照，置5%CO2,37CCO2艇箱中培養(yǎng)72h。培養(yǎng)結(jié)束前4h,每孔輕輕吸去上清液0.7mL,加入

0.7mL不含小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液，同時(shí)加入MTT（5mg/mL）50pL/孔，繼續(xù)培養(yǎng)4h。培養(yǎng)結(jié)束后,

每孔加入1mL酸性異丙醇，吹打混勻，使紫色結(jié)晶完全溶解。然后分裝到96孔培養(yǎng)板中，每個(gè)孔作3個(gè)平

行孔，用醒標(biāo)儀，以570nm波長(zhǎng)測(cè)定光密度值。也可將溶解液直接移入2mL比色杯中，721分光光度計(jì)上在

波長(zhǎng)570nm測(cè)定OD值。

3.1.1.4數(shù)據(jù)處理及結(jié)果判定

一般采用方差分析，但需按方差分析的程序先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，方差齊，計(jì)算尸值，產(chǎn)值<凡出，結(jié)

論：各組均數(shù)間差異無(wú)顯著性；產(chǎn)值2尺%,PW0.05,用多個(gè)實(shí)驗(yàn)組和一個(gè)對(duì)照組間均數(shù)的兩兩比較方法進(jìn)

行統(tǒng)計(jì)；對(duì)非正態(tài)或方差不齊的數(shù)據(jù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿(mǎn)足正態(tài)或方差齊要求后，用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進(jìn)

行統(tǒng)計(jì)；若變量轉(zhuǎn)換后仍未達(dá)到正態(tài)或方差齊的口的，改用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。

用加ConA孔的光密度值減去不加ConA孔的光密度值代表淋巴細(xì)胞的增殖能力，受試樣品組的光密度

差值顯著高于對(duì)照組的光密度差值，可判定該項(xiàng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性。

3.1.1.5注意事項(xiàng)

本實(shí)驗(yàn)中ConA的濃度很重要，過(guò)低不能刺激足夠的細(xì)胞增殖，過(guò)高會(huì)抑制細(xì)胞增殖，不同批號(hào)的ConA

在實(shí)驗(yàn)前要進(jìn)行預(yù)試，以找到最佳濃度。

3.1.2同位素?fù)饺敕?/p>

3.1.2.1原理

T淋巴細(xì)胞在有絲分裂原PHA、ConA等的刺激下，產(chǎn)生增殖反應(yīng)，DNA和RNA合成明顯增加，如在

培養(yǎng)液中加入咱一胸腺啥咤核甘（3H-TdR）,則可被轉(zhuǎn)化中的細(xì)胞攝入。測(cè)定標(biāo)記淋巴細(xì)胞的放射強(qiáng)度可反

映淋巴細(xì)胞增?殖的程度。

3.1.2.2儀器和材料

RPMI1640細(xì)胞培養(yǎng)液、小牛血清、2?筑基乙醇（2?ME）、青霉素、鏈霉素、刀豆蛋白A（ConA）.Hank's

液、PBS緩沖液（pH7.2?7.4）、3H?TdR、閃爍液［2,5?二苯基惡哇（PPO）0.5g、l,4?雙?（5?苯基惡哇基）?苯（POPOP）

0.25g>二甲苯500mL混勻］

200目篩網(wǎng)，96孔培養(yǎng)板（平底），手術(shù)器械、二氧化碳培養(yǎng)箱、超停工作臺(tái)、液體閃爍儀、多頭細(xì)胞

取集器、49型玻璃纖維濾紙。

3.1,2.3實(shí)驗(yàn)步驟

3.1.2.3』脾細(xì)胞懸液制備

無(wú)菌取脾，置于盛有適量無(wú)菌Hank's液的小平皿中，用鏡子輕輕將脾撕碎，制成單細(xì)胞懸液。經(jīng)200

目篩網(wǎng)過(guò)濾，用Hank's液洗3次，每次離心lOminUOOOr/min）。然后將細(xì)胞懸浮于2mL的完全培養(yǎng)液中，

用臺(tái)酚蘭染色計(jì)數(shù)活細(xì)胞數(shù)（應(yīng)在95%以上），最后用RPMH640完全培養(yǎng)液將細(xì)胞數(shù)調(diào)成5X1（）6個(gè)/mL。

3』232淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)

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將脾細(xì)胞懸液加入到96孔培養(yǎng)板中，200山孔，每一份脾細(xì)胞懸液分裝6個(gè)孔，3孔加ConA（5闡mL）,

另3個(gè)孔不加ConA作為對(duì)照。置5%CO2,37"C培養(yǎng)72h,培養(yǎng)結(jié)束前6h,每孔加入3H-TdR20RL,使其終

濃度為（3.7-18.5）XK/Bq/mLo用多頭細(xì)胞收集器將細(xì)胞取集于玻璃纖維濾紙上。濾紙片充分干燥后置測(cè)

量瓶中，加入7mL閃爍液，用液閃儀測(cè)定每分鐘脈沖數(shù)（cpm）。

3.1.2.4數(shù)據(jù)處理及結(jié)果判定

一般采用方差分析，但需按方差分析的程序先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，方差齊，計(jì)算尸值，產(chǎn)值＜尸0.05,結(jié)

論：各組均數(shù)間差異無(wú)顯著性：尸值》305,PW0.05,用多個(gè)實(shí)驗(yàn)組和一個(gè)對(duì)照組間均數(shù)的兩兩比較方法進(jìn)

行統(tǒng)計(jì)；對(duì)非正態(tài)或方差不齊的數(shù)據(jù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿(mǎn)足正態(tài)或方差齊要求后，用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進(jìn)

行統(tǒng)計(jì)；若變量轉(zhuǎn)換后仍未達(dá)到正態(tài)或方差齊的目的，改用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。

以每分鐘膿沖數(shù)（cpm）表示增殖程度，用刺激指數(shù)（SI）來(lái)表示

?1=實(shí)驗(yàn)孔cpm

對(duì)照孔cpm

受試樣品組的SI值顯著高于對(duì)照組的SI值，即可判定該項(xiàng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性。

3.2遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)（DTH）

可任選下列方法之一

3.2.1二硝基氟藻誘導(dǎo)小鼠DTH（耳腫脹法）

3.2.1.1原理

二硝基籟苯（DNFB）稀釋液可與腹壁皮膚蛋臼結(jié)合成完全抗原，由此刺激T淋巴細(xì)胞增殖成致敏淋巴

細(xì)胞。4?7天后再將其涂抹于耳部進(jìn)行抗原攻擊，使局部腫脹，一般在抗原攻百后24?48h達(dá)高峰，其腫脹

程度可以反應(yīng)映遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)程度。

3.2.1.2材料

DNFB、丙酮、麻油、硫化飲、打孔器。

3.2,1.3實(shí)驗(yàn)步驟

3.2.1.3.1試劑配制

DNFB溶液DNFB溶液應(yīng)新鮮配制，稱(chēng)取DNFB50mg,置清潔干燥小瓶中，將預(yù)先配好的5mL丙酮麻

油溶液（丙酮；麻油=1;1）,倒入小瓶，蓋好瓶塞并用膠布密封?；靹蚝?，用250pL注射器通過(guò)瓶蓋取用。

3.2.132致敏每鼠腹部皮膚用硫化鐵脫毛或剃毛，范圍約3cmX3cm,用DNFB溶液50嘰均勻涂抹致敏。

3.2.133DTH的產(chǎn)生與測(cè)定5天后，用DNFB溶液10pL均勻涂抹于小鼠右耳（兩面）進(jìn)行攻擊。攻擊后

24h頸椎脫臼處死小鼠，明下左右耳殼。用打孔器取下直徑8mm的耳片，稱(chēng)重.

3.2.1.4數(shù)據(jù)處理與結(jié)果判定

一般采用方差分析，但需按方差分析的程序先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，方差齊，計(jì)算產(chǎn)值，產(chǎn)值〈死.05,結(jié)

論：各組均數(shù)間差異無(wú)顯著性；尸值2%岫PW0.05,用多個(gè)實(shí)驗(yàn)組和一個(gè)對(duì)照組間均數(shù)的兩兩比較方法進(jìn)

行統(tǒng)計(jì)：對(duì)非正態(tài)或方差不齊的數(shù)據(jù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿(mǎn)足正態(tài)或方差齊要求后，用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進(jìn)

行統(tǒng)計(jì)；若變量轉(zhuǎn)換后仍未達(dá)到正態(tài)或方差齊的目的，改用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。

用左右耳重量之差表示DTH的程度。受試樣品組的重量差值顯著高于與對(duì)照組的重量差值，可判定該

項(xiàng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性。

-20-

321.5注意事項(xiàng)

操作時(shí)應(yīng)避免DNFB與皮膚接觸。

3.2.2綿羊紅細(xì)胞（SRBC）誘導(dǎo)小鼠DTH（足跖增厚法）

3.2.2.1原理

SRBC可刺激T淋巴細(xì)胞增殖成致敏淋巴細(xì)胞，4天后，當(dāng)再以SRBC攻擊時(shí)，攻擊部位出現(xiàn)腫脹，其

腫脹程度可反映遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)程度。

3.222材料

游標(biāo)卡尺（精密度0.02mm）、SRBC、微量注射器（50吐）。

3.223實(shí)驗(yàn)步驟

3.22.3.1致敏小鼠用2%（v/v）SRBC腹腔或靜脈免疫，每只鼠注射0.2mL（約1乂10?個(gè)SRBC）。

322.3.2DTH的產(chǎn)生與測(cè)定免疫后4天，測(cè)量左后足跖部厚度，然后在測(cè)量部位皮下注射20%（v/v）SRBC,

每只鼠20HL（約1乂10&個(gè)SRBC）,注射后于24h測(cè)量左后足柘部厚度，同一部位測(cè)量三次，取平均值。

322.4數(shù)據(jù)處理和結(jié)果判定

一般采用方差分析，但需按方差分析的程序先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，方差齊，計(jì)算F值，產(chǎn)值＜凡3,結(jié)

論：各組均數(shù)間差異無(wú)顯著性；產(chǎn)值＞用必PW0.05,用多個(gè)實(shí)驗(yàn)組和一個(gè)對(duì)照組間均數(shù)的兩兩比較方法進(jìn)

行統(tǒng)計(jì)；對(duì)非正態(tài)或方差不齊的數(shù)據(jù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿(mǎn)足正態(tài)或方差齊要求后，用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進(jìn)

行統(tǒng)計(jì)：若變量轉(zhuǎn)換后仍未達(dá)到正態(tài)或方差齊的目的，改用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。

以攻擊前后足跖厚度的差值來(lái)表示DTH的程度。受試樣品組的差值顯著高于對(duì)照組的差值，可判定該

項(xiàng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性。

322.5注意事項(xiàng)

測(cè)量足跖厚度時(shí)，最好由專(zhuān)人來(lái)進(jìn)行。卡尺緊貼足跖部，但不要加壓，否則會(huì)影響測(cè)量結(jié)果。

攻擊時(shí)所用的SRBC要新鮮（4C保存期不超過(guò)1周）。

3.3抗體生成細(xì)胞檢測(cè)（Jerne改良玻片法）

3.3.1原理

經(jīng)過(guò)綿羊紅細(xì)胞（SRBC）免疫的小鼠脾細(xì)胞懸液與一定量的SRBC混合，在補(bǔ)體參與下，使分泌抗體

的脾細(xì)胞周?chē)腟RBC溶解，形成肉眼可見(jiàn)的空斑。溶血空斑數(shù)可反映抗體生成細(xì)胞數(shù)。

3.3.2儀器和材料

二氧化碳培養(yǎng)箱、恒溫水浴、離心機(jī)、手術(shù)器械、玻片架、200目篩網(wǎng)、SRBC、補(bǔ)體（豚鼠血清）、Hank's

液、RPMI1640培養(yǎng)液、SA緩沖液、瓊脂糖。

3.3.3實(shí)驗(yàn)步驟

3.3.3.1SRBC綿羊頸靜脈取血，將羊血放入有玻璃珠的滅菌錐形瓶中，朝一個(gè)方向搖動(dòng)，以脫纖維，放入4℃

冰箱保存?zhèn)溆茫杀４?周。

3.332制備補(bǔ)體采集豚鼠血，分離出血清（至少5只豚鼠的混合血清），將1mL壓積SRBC加入到5mL

豚鼠血清中，4c冰箱放置30min,經(jīng)常振涉，離心取上清，分裝，一70C保存。用時(shí)以SA緩沖液按1：8

—15稀釋。

3.333玻片涂膜在清潔玻片上刷上一薄層瓊脂糖（0.5g瓊脂糖加雙蒸水至100mL,加熱溶解），干后可長(zhǎng)

-21-

期保存?zhèn)溆谩?/p>

3.334免疫動(dòng)物取脫纖維的羊血，用生理鹽水洗滌3次，每次離心(2000r/ir.in)lOmin,計(jì)數(shù)細(xì)胞，每只

鼠經(jīng)腹腔或靜脈注射SRBC5X?2X1()8個(gè)。也可將壓積SRBC用生理鹽水配成2%(v/v)的細(xì)胞懸液，

每只鼠腹腔注射0.2mL。

333.5脾細(xì)胞懸液制備

將SRBC免疫4?5天后的小闌頸椎脫臼處死，取出脾臟，放在盛有Hanks液的小平皿內(nèi)，輕輕磨碎脾

臟，制成細(xì)胞懸液，經(jīng)200日篩網(wǎng)過(guò)濾，或用4層紗布將脾磨碎，離心(iOOOr；min)lOmin,用Hanks液洗

2遍，最后將細(xì)胞懸浮在5mLRPMI1640培養(yǎng)液中，計(jì)數(shù)細(xì)胞，并將細(xì)胞濃度調(diào)整為5x106個(gè)/