臨床微生物學(xué)檢驗

臨床微生物學(xué)檢驗按細(xì)胞組成及結(jié)構(gòu)分類非細(xì)胞型微生物病毒(virus)、亞病毒、朊粒原核細(xì)胞型微生物細(xì)菌、螺旋體、衣原體、支原體、立克次體、放線菌真核細(xì)胞型微生物真菌(fungus)按與人類關(guān)系分類正常微生物群(normalflora)條件致病微生物(conditionedpathogen)機體免疫力下降細(xì)菌寄居部位改變或發(fā)生菌群失調(diào)病原微生物(pathogenicmicrobes)如鼠疫、炭疽、霍亂等2、微生物學(xué)microbiology

3、醫(yī)學(xué)微生物學(xué)

medicalmicrobiology研究與醫(yī)學(xué)有關(guān)得病原微生物得生物學(xué)特性、致病性與免疫性以及特異性診斷和防治得學(xué)科。二、臨床微生物學(xué)得性質(zhì)與任務(wù)臨床微生物學(xué)(clinicalmicrobiology):又稱診斷微生物學(xué),就是研究病原微生物檢查及微生物與宿主相互關(guān)系得一門應(yīng)用學(xué)科,側(cè)重研究感染性疾病快速、準(zhǔn)確地檢出病原體得策略與方法。臨床微生物學(xué)得性質(zhì)和任務(wù)研究感染性疾病得病原體特征提供快速、準(zhǔn)確得病原學(xué)診斷指導(dǎo)臨床合理應(yīng)用抗菌藥物監(jiān)控醫(yī)院感染臨床微生物檢驗得思路與原則原則:確保檢驗結(jié)果正確可靠確保分析前質(zhì)量保證檢驗質(zhì)量、快速準(zhǔn)確提供檢驗信息全面了解機體正常菌群定性、定量和定位分析,并結(jié)合病情加強與臨床聯(lián)系檢驗前質(zhì)量保證正確填寫檢驗申請:醫(yī)師應(yīng)提供傾向性診斷確保臨床標(biāo)本可靠:正確采集與運送檢驗中質(zhì)量保證人員、試劑、儀器設(shè)備選擇合適得實驗方法、制定標(biāo)準(zhǔn)化操作程序、建立質(zhì)量控制系統(tǒng)檢驗后質(zhì)量保證正確分析檢驗結(jié)果加強與臨床得聯(lián)系三、臨床微生物學(xué)檢驗得現(xiàn)狀、發(fā)展和展望感染性疾病得現(xiàn)狀易感人群不斷增加新病原體不斷出現(xiàn)感染因子在非感染性疾病中得作用明顯細(xì)菌耐藥和醫(yī)院感染問題日趨嚴(yán)重快速診斷方法不斷發(fā)展分子生物學(xué)技術(shù)飛速發(fā)展計算機技術(shù)推動臨床微生物學(xué)進(jìn)步細(xì)菌得形態(tài)結(jié)構(gòu)與功能大家有疑問的，可以詢問和交流可以互相討論下，但要小聲點第一節(jié)細(xì)菌得形態(tài)與結(jié)構(gòu)一、細(xì)菌得大小、形態(tài)與排列1、大小:計量單位就是微米(μm)2、形態(tài)球形:雙球、鏈球、葡萄球菌等桿形:球桿菌、小桿菌、中等桿菌大桿菌等螺形:螺菌和弧菌光學(xué)顯微鏡

細(xì)菌得結(jié)構(gòu)基本結(jié)構(gòu):核質(zhì)、細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞膜、細(xì)胞壁特殊結(jié)構(gòu):鞭毛、菌毛、芽胞、莢膜二、第二節(jié)細(xì)菌基本結(jié)構(gòu)一、細(xì)胞壁(cellwall)位于菌細(xì)胞最外層,與胞質(zhì)膜緊密相連,就是一層堅韌得膜狀結(jié)構(gòu)革蘭陽性菌與陰性菌細(xì)胞壁組成不同,共有組分為肽聚糖(一)肽聚糖(peptidoglycan)革蘭陽性菌聚糖骨架:N-乙酰葡糖胺、N-乙酰胞壁酸四肽側(cè)鏈:L-丙氨酸、D-谷氨酸、L-賴氨酸、D-丙氨酸五肽交聯(lián)橋:5個甘氨酸革蘭陰性菌聚糖骨架四肽側(cè)鏈:第三位氨基酸多變革蘭陽性菌細(xì)胞壁得肽聚糖結(jié)構(gòu)革蘭陽性菌細(xì)胞壁得肽聚糖結(jié)構(gòu)革蘭陰性菌細(xì)胞壁得肽聚糖結(jié)構(gòu)(二)革蘭陽性菌

細(xì)胞壁特殊組分磷壁酸壁磷壁酸膜(脂)磷壁酸一些特殊表面蛋白SPA、M蛋白等(三)革蘭陰性菌細(xì)胞壁特殊組分-外膜脂蛋白:位于肽聚糖層和脂質(zhì)雙層之間脂質(zhì)雙層:鑲嵌有外膜蛋白脂多糖(LPS):即革蘭陰性菌內(nèi)毒素脂質(zhì)A:內(nèi)毒素得毒性部分,無特異性核心多糖:屬特異性特異多糖:即O抗原,有種和型得特異性周漿間隙(periplasmicspace):

位于革蘭陰性菌細(xì)胞膜和外膜得脂質(zhì)雙層之間,含有多種蛋白酶、核酸酶、解毒酶及特殊結(jié)合蛋白,在細(xì)菌獲得營養(yǎng)、解除有害物質(zhì)毒性方面具有重要作用。(四)細(xì)胞壁缺陷型細(xì)菌—細(xì)菌L型1、概念:細(xì)菌細(xì)胞壁得肽聚糖結(jié)構(gòu)受到理化或生物因素作用被破壞或合成被抑制,在高滲環(huán)境下仍然能夠生長和分裂者。G+菌:原生質(zhì)體(protoplast)G-

菌:原生質(zhì)球(spheroplast)2、形態(tài)染色高度多形性:球狀、桿狀、絲狀絕大多數(shù)染色為革蘭陰性,著色不均3、培養(yǎng)特性培養(yǎng)條件:高滲環(huán)境生長緩慢,典型菌落為油煎蛋狀4、致病性某些L型引起慢性感染,如尿路感染、骨髓炎、心內(nèi)膜炎等回復(fù)(返祖):L型脫離誘導(dǎo)劑后繼續(xù)培養(yǎng),仍可恢復(fù)成原來細(xì)菌得形態(tài)與特性。二、細(xì)胞膜(cellmembrane)半透性薄膜—脂質(zhì)雙層結(jié)構(gòu)中介體(mesosome):部分細(xì)胞膜內(nèi)陷、折疊、卷曲形成得囊狀物,多見于革蘭陽性細(xì)菌。又稱之為擬線粒體。細(xì)胞膜上不含膽固醇三、細(xì)胞質(zhì)(cytoplasm)1、核糖體(ribosome)2、質(zhì)粒(plasmid)3、胞質(zhì)顆粒異染顆粒:細(xì)菌含有儲藏高能磷酸鍵得多聚偏磷酸鹽顆粒小亞基:四環(huán)素族鏈霉素卡那霉素大亞基:氯霉素紅霉素

原核細(xì)胞,不具成形得核。遺傳物質(zhì)稱為核質(zhì)或擬核(nucleoid)。無核膜、核仁和有絲分裂器;因其功能與真核細(xì)胞得染色體相似,決定細(xì)菌得遺傳變異,亦稱細(xì)菌得染色體(chromosome)。一般為單倍體,就是一個共價閉合環(huán)狀雙鏈DNA分子四、核質(zhì)(nuclearmaterial

)第三節(jié)細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)一、莢膜(capsule)概念:某些細(xì)菌在其細(xì)胞壁外包繞一層黏液性物質(zhì),為疏水性多糖或蛋白質(zhì)得多聚體。化學(xué)組成:多糖或多肽功能保護(hù)細(xì)菌-抗吞噬、抗有害物質(zhì)損傷黏附作用-與致病性有關(guān)有免疫原性-細(xì)菌分型、鑒定細(xì)菌檢查方法墨汁負(fù)染法莢膜染色法電鏡觀察法莢膜腫脹試驗原理:特異性抗血清與相應(yīng)細(xì)菌得莢膜抗原特異性結(jié)合形成復(fù)合物后,可使細(xì)菌莢膜顯著增大出現(xiàn)腫脹。方法:先多價再單價作玻片凝集試驗二、菌毛(pilus或fimbriae)概念:許多革蘭陰性菌和少數(shù)革蘭陽性菌菌體表面存在著一種比鞭毛更細(xì)、更短而直硬得絲狀物。化學(xué)組成:蛋白質(zhì)種類及功能普通菌毛:數(shù)量多、短而細(xì),與黏附、致病有關(guān)性菌毛:數(shù)量少、粗而長得中空管狀結(jié)構(gòu),與傳遞遺傳物質(zhì)有關(guān)三、鞭毛(flagellum)概念:許多細(xì)菌菌體上附有細(xì)長并呈波狀彎曲得絲狀物。鞭毛5~20μm×12~30nm

數(shù)量與部位:①單毛菌②雙毛菌③叢毛菌④周毛菌化學(xué)組成:蛋白質(zhì)

功能:運動器官致病作用有抗原性(H抗原)鞭毛得檢查壓滴法或懸滴法培養(yǎng)法染色法四、芽胞(endospore或spore)概念強大得抵抗力芽胞就是否被殺死作為判斷滅菌效果得指標(biāo)細(xì)菌芽胞得形態(tài)胞質(zhì)顆粒核糖體菌毛擬核細(xì)胞壁細(xì)胞膜質(zhì)粒鞭毛莢膜細(xì)菌結(jié)構(gòu)總結(jié)第二章

細(xì)菌得生理與遺傳變異第一節(jié)細(xì)菌得生理一、細(xì)菌得化學(xué)組成1、與其她生物相似:水、無機鹽、蛋白質(zhì)、糖類、脂類、核酸2、特有成分:肽聚糖、DAP、磷壁酸、

D型氨基酸、DPA、LPS二、細(xì)菌得物理性狀1、帶電現(xiàn)象pI革蘭陽性菌2~3

革蘭陰性菌4~52、光學(xué)性質(zhì):細(xì)菌為半透體3、體積微小,相對表面積大4、高滲透壓革蘭陽性菌20~25

革蘭陰性菌5~65、有半透性三、細(xì)菌得代謝(一)細(xì)菌得能量代謝1、發(fā)酵:以有機物為受氫體2、呼吸:以無機物為受氫體有氧呼吸:以分子氧為受氫體厭氧呼吸:以其她無機物為受氫體(二)細(xì)菌得分解代謝1、糖得分解:多糖→單糖→丙酮酸進(jìn)入三羧酸循環(huán):中間代謝產(chǎn)物+CO2+H2O發(fā)酵丙酮酸:產(chǎn)生各種酸類、酮類、醛類、醇類2、蛋白質(zhì)和氨基酸得分解:蛋白質(zhì)→短肽→氨基酸脫氨:苯丙氨酸→苯丙酮酸脫羧:生成胺和CO23、對其她物質(zhì)得代謝:如尿素、枸櫞酸鹽等(三)細(xì)菌得合成代謝1、熱原質(zhì)2、毒素與侵襲性酶3、色素4、抗生素5、細(xì)菌素6、維生素四、細(xì)菌生長繁殖得條件1、充足得營養(yǎng)物質(zhì)水:碳源和氮源:合成菌體成分;提供能量無機鹽:生長因子:細(xì)菌生長繁殖所必需,但自身不能合成得物質(zhì),如維生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等。據(jù)此將細(xì)菌分為苛養(yǎng)菌與非苛養(yǎng)菌兩大類苛養(yǎng)菌檢出率反映微生物實驗室得檢測水平營養(yǎng)物質(zhì)肉浸液:提供碳源、氮源牛肉膏:主要提供氮源,營養(yǎng)價值低,無糖糖(醇)類:提供碳源和能源血液:提供特殊生長因子;檢測細(xì)菌溶血特性雞蛋與動物血清:制備營養(yǎng)要求特殊得培養(yǎng)基無機鹽類:常用氯化鈉2、適宜得酸堿度pH:7、2~7、63、合適得溫度35℃~37℃培養(yǎng)箱一般定在35℃(34℃~36℃)4、必要得氣體O2、CO2專性需氧菌:有完善得呼吸酶系統(tǒng)專性厭氧菌兼性厭氧菌微需氧菌:低氧壓(5%氧濃度)生長好,高時抑制專性厭氧菌厭氧原因缺乏氧化還原電勢高得酶:細(xì)胞色素和細(xì)胞色素氧化酶缺乏分解有害基團(tuán)得酶類2O2-+

2H+SODH2O2+O2

2H2O2觸酶2H2O+O2H2O2+AH2

過氧化物酶2H2O+A五、細(xì)菌生長繁殖得規(guī)律(一)細(xì)菌繁殖方式無性繁殖:二分裂方式代時:20~30min中介體介導(dǎo)G+菌分裂G-菌分裂(二)細(xì)菌得生長曲線生長曲線:將定量細(xì)菌接種于適宜得液體培養(yǎng)基中,間隔一定時間取樣計數(shù)活菌數(shù)目,以培養(yǎng)時間為橫坐標(biāo),活菌數(shù)得對數(shù)為縱坐標(biāo)繪制而成得反映細(xì)菌體外繁殖規(guī)律得曲線。生長曲線-四個時期遲緩期:體積增大,細(xì)菌數(shù)不增加對數(shù)期:分裂最旺盛時期,研究細(xì)菌形態(tài)、鑒定細(xì)菌、保存菌種得最佳時期穩(wěn)定期:細(xì)菌產(chǎn)生芽胞、外毒素衰退期:細(xì)菌出現(xiàn)形態(tài)改變第二節(jié)細(xì)菌得遺傳與變異一、細(xì)菌得遺傳物質(zhì)(一)細(xì)菌染色體(二)染色體以外得遺傳物質(zhì)1、質(zhì)粒2、噬菌體3、轉(zhuǎn)座因子4、整合子和基因盒1、質(zhì)粒:細(xì)菌染色體以外得遺傳物質(zhì),就是環(huán)狀閉和得雙鏈DNA,攜帶遺傳信息。質(zhì)粒種類致育性質(zhì)粒(F質(zhì)粒):與性菌毛有關(guān)耐藥性質(zhì)粒(R質(zhì)粒):與細(xì)菌得耐藥性有關(guān)毒力質(zhì)粒(Vi質(zhì)粒)細(xì)菌素質(zhì)粒代謝質(zhì)粒質(zhì)粒得特征具有自我復(fù)制得能力緊密型質(zhì)粒:數(shù)量少、大,與染色體復(fù)制同步松弛型質(zhì)粒:數(shù)量多、小,復(fù)制與染色體無關(guān)決定細(xì)菌得某些性狀特征可自行丟失與消除具有轉(zhuǎn)移性具有相容性和不相容性2、噬菌體:就是一類感染細(xì)菌、真菌、放線菌或螺旋體等微生物得病毒。毒性噬菌體:能在宿主菌內(nèi)復(fù)制增殖,產(chǎn)生許多子代噬菌體,并最終裂解細(xì)菌。建立溶菌周期。細(xì)菌進(jìn)行噬菌體分型;鑒定細(xì)菌溫和噬菌體:噬菌體基因組整合于宿主菌染色體中,不引起細(xì)菌裂解,并隨細(xì)菌得分裂而傳至子代菌體。建立溶源周期。與細(xì)菌得遺傳變異有關(guān)

溫和噬菌體有溶原性周期和溶菌性周期,而毒性噬菌體只有一個溶菌性周期。3、轉(zhuǎn)座因子概念:就是一類在細(xì)菌染色體、質(zhì)粒、噬菌體之間自行移動得遺傳成分,就是基因組中一段具有轉(zhuǎn)位特性得獨立得DNA序列。分類:插入序列(insertionsequenceIS)轉(zhuǎn)座子(transposon)/復(fù)合轉(zhuǎn)座子4、整合子和基因盒整合子:就是一種運動性得DNA分子,具有獨特結(jié)構(gòu)可捕獲和整合外源性基因,使之轉(zhuǎn)變成為功能性基因得表達(dá)單位?；蚝?帶有功能性基因得DNA分子,能被整合子捕獲并使功能性基因得以表達(dá)。二、細(xì)菌得變異基因突變基因得轉(zhuǎn)移與重組基因得轉(zhuǎn)移與重組基因轉(zhuǎn)移外源性得遺傳物質(zhì)由供體菌轉(zhuǎn)入受體菌得過程。基因重組轉(zhuǎn)移得遺傳物質(zhì)與受體菌DNA整合在一起得過程。轉(zhuǎn)移和重組得方式轉(zhuǎn)化、接合、轉(zhuǎn)導(dǎo)、溶原性轉(zhuǎn)換、原生質(zhì)體融合1、轉(zhuǎn)化(transformation)概念:受體菌直接攝取供體菌游離DNA

片段并整合重組。條件:(1)轉(zhuǎn)化得DNA為小片段(2)受體菌處于感受態(tài)

小鼠體內(nèi)肺炎鏈球菌得轉(zhuǎn)化試驗2、接合(conjugation)細(xì)菌通過性菌毛相互連接溝通,將遺傳物質(zhì)從供體菌轉(zhuǎn)移給受體菌得過程。接合性質(zhì)粒非接合性質(zhì)粒(1)F質(zhì)粒得接合高頻重組菌(Hfr):整合有F質(zhì)粒得細(xì)菌F’質(zhì)粒:Hfr菌中得質(zhì)粒