洗發(fā)水中米諾地爾檢測方法的建立

1、 學(xué)校代碼：10904學(xué) 士 學(xué) 位 論 文洗發(fā)水中米諾地爾檢測方法的建立姓 名：張瓊瓊學(xué) 號：3指導(dǎo)教師： 王 飛學(xué) 院：生命科學(xué)學(xué)院專 業(yè)：制藥工程完成日期：2015年5月29日 學(xué) 士 學(xué) 位 論 文洗發(fā)水中米諾地爾檢測方法的建立姓 名：張瓊瓊學(xué) 號：3指導(dǎo)教師： 王 飛學(xué) 院：生命科學(xué)學(xué)院專 業(yè)：制藥工程完成日期：2015年5月29日 摘 要米諾地爾具有防脫發(fā)的藥理活性，但不得將其加入化妝品中，為檢測洗發(fā)水中是否含有米諾地爾，本論文首先對洗發(fā)水進行前處理，采用紫外分光光度法進行檢測，檢測波長為231nm。經(jīng)實驗，該方法的檢測限LOD為0.038g/ml，平均回收率為99.72%，精密度

2、RSD小于2%，在24h內(nèi)吸光值變化不大，吸光值與濃度的線性關(guān)系為A=0.2324C+0.0052，R2=0.9997。由結(jié)果可知，本法專屬性較強，靈敏度較高，回收率較高，精密度較好，穩(wěn)定性較好，線性關(guān)系良好，可用于檢測洗發(fā)水中是否含有米諾地爾。關(guān)鍵詞：紫外分光光度法；洗發(fā)水；米諾地爾 AbstractMinoxidil have the medicinal activity of anti-hair loss, but minoxidil shall not be added to cosmetics.To detect whether contain minoxidil in shampo

3、o, the sample first of all was pre-treated , and the content of Minoxidil was determined by UV Spectrophotometry, the measured wavelength is 231nm. By experiment, the method of the detection limit LOD is 0.038g/ml, the average recovery is 99.72%, the precision of RSD is less than 2%, the absorbance

4、value change within 24h is not big, the linear relationship between absorbance and concentration is A=0.2324C+0.0052，R2=0.9997.To sum up,the method have strong specificity, high sensitivity,the method of recovery rate is higher, the precision is good, the stability is good,and has good linearity, an

5、d can be used to detect whether contain minoxidil in shampoo. Key words: UV; Shampoo; Minoxidil目 錄第1章 前 言1第2章 料材與儀器22.1 原料與試劑22.2 儀器與設(shè)備2第3章 實驗方法33.1 米諾地爾對照品溶液的制備33.2 洗發(fā)水供試品溶液的制備33.3 專屬性試驗33.3.1 鑒別實驗33.3.2 空白干擾33.4 檢測限試驗33.5 回收率試驗43.6 精密度試驗43.7 穩(wěn)定性試驗43.8 線性試驗4第4章 結(jié)果與分析54.1 專屬性試驗結(jié)果54.1.1 鑒別實驗結(jié)果54.1.2

6、空白干擾結(jié)果54.2 檢測限試驗結(jié)果64.3 回收率試驗結(jié)果64.4 精密度試驗結(jié)果64.5 穩(wěn)定性試驗結(jié)果74.6 線性關(guān)系8第5章 結(jié)論與討論9參考文獻10致 謝12第1章 前 言脫發(fā)是日常生活中的常見現(xiàn)象，隨著社會壓力不斷增大和生活節(jié)奏的加快，環(huán)境的不斷惡化，以及不良的飲食習(xí)慣，脫發(fā)患者越來越多。在日常生活中，人們在抑制脫發(fā)時，除了改善飲食情況外，更多地通過使用防脫洗發(fā)水治療脫發(fā)。由于防脫洗發(fā)水非常熱銷，一些不法商家在巨大經(jīng)濟利益驅(qū)使下，在中草藥育發(fā)類化妝品中違法添加米諾地爾以增強抗脫發(fā)效果。根據(jù)我國2007年版化妝品衛(wèi)生規(guī)范規(guī)定：米諾地爾及其鹽和衍生物為化妝品禁用組分，即在我國米諾地爾

7、不得用于化妝品原料及其添加成分1。米諾地爾為白色或類白色結(jié)晶性粉末，在冰醋酸中溶解，在甲醇中略溶，在氯仿或水中微溶，在丙酮中極微溶解2。米諾地爾結(jié)構(gòu)式見圖1-1。圖1-1 米諾地爾結(jié)構(gòu)式米諾地爾是一種周圍血管舒張藥3，是世界上唯一對脫發(fā)有明顯療效的外用化學(xué)藥，局部長期使用，可刺激脫發(fā)和斑禿患者的毛發(fā)生長4-5，美國FDA已通過了2%和5%米諾地爾溶液為非處方藥6。但長期大量使用米諾地爾可產(chǎn)生一系列不良反應(yīng)，包括刺激性皮炎（紅腫、皮屑和灼痛）、非特異性過敏反應(yīng)、過敏性鼻炎、面部腫脹、頭暈、眩暈、胸痛、血壓變化等4,7。目前，市場上的洗發(fā)水質(zhì)量參差不齊，違法添加米諾地爾的現(xiàn)象嚴(yán)重，本論文采用紫外分

8、光光度法8-9檢測洗發(fā)水中是否含有米諾地爾，以期為洗發(fā)水的使用安全性和穩(wěn)定性提供保障。第2章 料材與儀器2.1 原料與試劑所用原料與試劑見表 2-1。表2-1 原料與試劑原料與試劑批號生產(chǎn)廠家米諾地爾-中國藥品生物制品檢定所甲醇（分析純）天津市福晨化學(xué)試劑廠海飛絲洗發(fā)水廣州寶潔有限公司檸檬酸（分析純）天津市福晨化學(xué)試劑廠冰醋酸（分析純）天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司2.2 儀器與設(shè)備所用儀器與設(shè)備見表2-2。表2-2 儀器與設(shè)備儀器名稱型號生產(chǎn)廠家紫外分光光度計UV-2000尤尼柯（上海）有限公司高速臺式離心機TGL-16G上海安亭科學(xué)儀器廠電子天平FA1204B上海精科天美科學(xué)儀器有限公司電熱恒

9、溫鼓風(fēng)干燥箱101-2上海一恒科學(xué)儀器有限公司水浴鍋HH-4金壇市盛藍(lán)儀器制造有限公司第3章 實驗方法3.1 米諾地爾對照品溶液的制備 精密稱取于105干燥至恒重的米諾地爾對照品2mg，取適量甲醇-水（70:30）溶液將其溶解，轉(zhuǎn)移至250ml容量瓶中，加甲醇-水（70:30）溶液定容，搖勻，作為標(biāo)準(zhǔn)貯備液，于4避光保存10。3.2 洗發(fā)水供試品溶液的制備洗發(fā)水前處理過程：取洗發(fā)水適量于燒杯中，加入適量的甲醇-水（70:30）溶液，攪勻，轉(zhuǎn)移至容量瓶中，定容，搖勻，然后利用分液漏斗分離，取上層清液，以4000r/min離心15min，取清液，過0.45m微孔濾膜11-13。 取洗發(fā)水2.5ml

10、于燒杯中，加入米諾地爾對照品溶液3ml,轉(zhuǎn)移至25ml容量瓶中，加甲醇-水（70:30）溶液定容，搖勻，經(jīng)前處理，即得濃度為1.056g/ml的供試品溶液。3.3 專屬性試驗 3.3.1 鑒別實驗 鑒別實驗采用顯色反應(yīng)，米諾地爾在冰醋酸和檸檬酸的作用下顯紅色14。 取米諾地爾對照品溶液2ml置試管中，編號1，加冰醋酸4ml與檸檬酸40mg，置水浴中加熱5min。取供試品溶液2ml置試管中，編號2，加冰醋酸4ml與檸檬酸40mg，置水浴中加熱5min。取洗發(fā)水適量，經(jīng)前處理后，取2ml置試管中，編號3，加冰醋酸4ml與檸檬酸40mg，置水浴中加熱5min。3.3.2 空白干擾取適量洗發(fā)水，經(jīng)前處

11、理，作為空白對照液；取適量甲醇-水（70:30）溶液為空白，采用紫外分光光度法在231nm處測其吸光值。3.4 檢測限試驗采用標(biāo)準(zhǔn)偏差法：取2.5ml洗發(fā)水，不加米諾地爾標(biāo)準(zhǔn)品，經(jīng)前處理，得空白對照液，取適量甲醇-水（70:30）溶液為空白，采用紫外分光光度法在231nm處測其吸光值，連續(xù)測定3次；再取2.5ml洗發(fā)水，加入米諾地爾標(biāo)準(zhǔn)品溶液3ml，用甲醇-水（70:30）溶液定容到25ml，濃度為1.056g/ml，取適量甲醇-水（70:30）溶液為空白，采用紫外分光光度法在231nm處測其吸光值，并按下式計算。檢測限LOD=f3S空=3S空計算15。3.5 回收率試驗 按照制備供試品溶液的

12、方法制備三份供試品溶液，濃度依次為1.76、2.46、3.52g/ml，以空白對照液為空白，采用紫外分光光度法在231nm處測其吸光值，對各濃度平行測定3次，并按C樣=A樣C標(biāo)/A標(biāo)計算16。3.6 精密度試驗 按照制備供試品溶液的方法制備三份供試品溶液，濃度依次為1.76、2.46、3.52g/ml，編號為第一組、第二組、第三組，以空白對照液為空白，采用紫外分光光度法在231nm處測其吸光值，對各濃度平行測定3次。3.7 穩(wěn)定性試驗 按照制備供試品溶液的方法制備三份供試品溶液，濃度依次為1.76、2.46、3.52g/ml，編號為第一組、第二組、第三組，于4放置0、3、6、9、24h，以空白

13、對照液為空白，采用紫外分光光度法在231nm處測其吸光值，對各濃度平行測定3次17。 3.8 線性試驗準(zhǔn)確量取米諾地爾對照品溶液3、4、5、6、7、10、14ml，分別置于25ml容量瓶中，加甲醇-水（70:30）溶液定容，搖勻，得不同濃度溶液，以甲醇-水（70:30）溶液為空白，采用紫外分光光度計，采用紫外分光光度法在231nm處測其吸光值18。 第4章 結(jié)果與分析4.1 專屬性試驗結(jié)果4.1.1 鑒別實驗結(jié)果鑒別實驗結(jié)果見圖4-1。圖4-1 鑒別實驗結(jié)果由圖4-1可得，1號試管中是米諾地爾對照品溶液，顯紅色；2號試管中是供試品溶液，顯紅色，說明供試品溶液中含米諾地爾，即米諾地爾加入洗發(fā)水中

14、后，經(jīng)前處理，未破壞其結(jié)構(gòu)，可用紫外分光光法在波長231nm處測其吸光值；3號試管是空白對照液，不顯色。4.1.2 空白干擾結(jié)果平行測定3次空白對照液，吸光值分別為0.046、0.040、0.043，平均值是0.043。由吸光值可知，空白對照液在波長231nm處有吸收，對測定產(chǎn)生干擾。故試驗中，不以甲醇-水（70:30）溶液做空白，而采用空白對照液為空白，以消除干擾。4.2 檢測限試驗結(jié)果檢測限項下，平行測定3次空白對照液，吸光值分別為0.046、0.040、0.043，平均值是0.043，方差S空為0.003。濃度為1.056g/ml的供試品溶液，其吸光值為0.251。 檢測限LOD=f3S

15、空=3S空=30.003=0.038g/ml。由LOD值可知，每毫升供試品溶液中含1.056g米諾地爾時，最低檢測限濃度為0.038g/ml，靈敏度較好。4.3 回收率試驗結(jié)果回收率試驗結(jié)果見表4-1。編號投入量g測得量g回收率%平均回收率%RSD%14444.406100.9224444.375100.8534444.191100.4346261.61899.3856261.40399.0499.721.5766261.61899.3878889.47999.3588889.15799.09988 89.15799.00表4-1 回收率試驗結(jié)果（n=9）由表4-1可得，三組供試品溶液的平均回

16、收率為99.72%（RSD=1.57%，n=9），RSD2%，回收率較高。4.4 精密度試驗結(jié)果精密度試驗結(jié)果見表4-2。表4-2 精密度試驗結(jié)果組別編號濃度g/ml吸光度平均值RSD%10.418第一組21.760.4170.4170.1030.41610.578第二組22.460.5760.5770.1230.57810.837第三組23.520.8340.8350.1730.834 由表4-2可得，三組供試品溶液的吸光值RSD分別為0.10%（n=2）、0.12%（n=2）、0.17%（n=2），三組供試品溶液的RSD值均小于2%，其精密度良好。4.5 穩(wěn)定性試驗結(jié)果穩(wěn)定性試驗結(jié)果見表4

17、-3。表4-3 穩(wěn)定性試驗結(jié)果組別編號濃度g/ml吸光值 0h 3h 6h 9h 24h10.4180.4170.4170.4150.410第一組21.760.4170.4170.4150.4160.41530.4160.4130.4200.4160.41610.5780.5760.5780.5740.575第二組22.460.5760.5770.5750.5760.57530.5780.5770.5780.5760.57610.8370.8350.8340.8350.834第三組23.520.8340.8340.8370.8360.83530.8340.8350.8350.8350.835由

18、表4-3可得，三份供試品溶液，濃度依次為1.76、2.46、3.52g/ml，于4放置0、3、6、9、24h，于231nm處測定吸光值，在24小時內(nèi)吸收度幾乎無變化，表明其穩(wěn)定性較好。4.6 線性關(guān)系線性關(guān)系見圖4-2。圖4-2 米諾地爾標(biāo)準(zhǔn)曲線 以米諾地爾的濃度C為橫坐標(biāo)，以吸光值A(chǔ)為縱坐標(biāo)，進行回歸計算，求得的直線回歸方程為A=0.2312C+0.0089，R2=0.9996，表明在1-5g/ml范圍線性關(guān)系良好。第5章 結(jié)論與討論 根據(jù)2010版中國藥典2部附錄XIX A藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗證指導(dǎo)原則，在建立藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)時，分析方法需經(jīng)驗證，驗證內(nèi)容有：準(zhǔn)確度，精密度、專屬性、檢測限、

19、定量限、線性、范圍和耐用性。經(jīng)實驗，該方法的檢測限LOD=0.038g/ml，平均回收率99.72%，精密度RSD小于2%，在24h內(nèi)吸光值變化不大，吸收度與濃度線性關(guān)系A(chǔ)=0.2324C+0.0052，R2=0.9997。由結(jié)果可知，本法專屬性較強，靈敏度較高，回收率較高，精密度較好，穩(wěn)定性較好，在1-5g/ml濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，即紫外分光光度法可用于檢測洗發(fā)水中是否含有米諾地爾。米諾地爾在甲醇中略溶，在水中微溶，在實驗中采用甲醇-水（70:30）溶液配制米諾地爾溶液，增加米諾地爾的溶解性，溶解過程中也采用了超聲助溶，超聲時間不宜過長。 米諾地爾結(jié)構(gòu)中的氮易被氧化，在光照下易變黃，所以

20、于4避光保存。必要時可以加入抗氧化劑亞硫酸鈉及絡(luò)合劑乙二胺四乙酸二鈉。在洗發(fā)水前處理過程中，用了多種試劑分離成分，其中運用甲醇和乙腈試劑處理后的回收率較高，考慮到成本問題，甲醇較便宜，所以實驗中用甲醇對洗發(fā)水進行處理。在采用紫外分光光度法對供試品溶液進行檢測時，由于空白對照液對檢測有干擾，所以采用空白對照液做為空白。本論文采用紫外分光光度法對洗發(fā)水中米諾地爾進行檢測，方法較便捷，也較準(zhǔn)確，但外界的干擾因素較多，通過查閱文獻，國內(nèi)暫行的化妝品中米諾地爾的檢測方法即采用的高效液相色譜法19-20，但也不是很成熟。所以運用紫外分光光度法對洗發(fā)水中米諾地爾進行檢測比較可靠。參考文獻1 中華人民共和國衛(wèi)

21、生部.化妝品衛(wèi)生規(guī)范S.2007:10.2 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（2010年版2部）M.北京:中國醫(yī)藥 科技出版社,2010:283-284.3 中國臨床藥學(xué)雜志J.中國臨床藥學(xué)雜志,2001,10(1):68-68.4 陳聲利,孫建方.米諾地爾治療脫發(fā)的藥理與臨床研究J.國外醫(yī)學(xué)(皮膚性病 學(xué)分冊),2004,30(5):276-278.5 代秀菊,涂平,秦儉,等.米諾地爾對培養(yǎng)人頭皮毛囊生長的影響J.臨床皮膚科 雜志,2002,31(1):6-8.6 羅金文,顏琳琦,李櫻紅,等.HPLC測定化妝品中非法添加的米諾地爾J.中國 現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué),2013,06,30(6):665-

22、667.7 于春芬,楊素珍,薛紅.外用米諾地爾治療脫發(fā)綜述J.山東醫(yī)藥工業(yè),2000,19 (3):22-23.8 莫玉芳,葉廷武.紫外分光光度法測定米諾地爾洗劑中米諾地爾的含量J.廣 東藥學(xué),2004,14(5):18-21.9 陳勇川,羅東,唐先哲,等.紫外分光光度法測定復(fù)方長壓啶搽劑中兩組份的含 量J.華西藥學(xué)雜志,2000,15(1):62-63.10 鄧?yán)?林彩,胡斌,等.高效液相色譜法測定生發(fā)素中米諾地爾含量J.中國藥 業(yè)，2011,20(3):18-19.11 管繼萍,王國團,程立華.高效液相色譜法測定米諾地爾洗劑的含量J.中國醫(yī) 院藥學(xué)雜志,2006,26(10):1298-1299.12 郭燕萍,陳珍鳳,鄭基蒙.復(fù)方米諾地爾溶液中米諾地爾的含量測定J.中國藥 學(xué)雜志,2005,14(1):52-54.13 虞成華,朱偉,陸志蕓,等.液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定化妝品中米諾地爾的含量J.香料香精化妝品,2011,08,4:36-39.14 吳畏,石莎.米諾地爾生發(fā)液的制備及