全盟自愿咨詢檢測培訓(xùn)班概要.ppt

1、艾滋病檢測技術(shù),錫盟疾病預(yù)防控制中心,冀昌龍,HIV實驗室診斷方法 病原學(xué)檢測 血清抗體檢測 靶細胞的檢測 病毒載量檢測,特異性實驗診斷,HIV抗體測定 抗原測定 核酸測定 病毒分離 CD4淋巴細胞計數(shù),HIV抗體篩查檢測,程序篩查、復(fù)檢、確認 原理酶聯(lián)免疫、凝集、層析 標本血液、唾液、尿液、組織液 產(chǎn)品ELISA、快速,常用HIV抗體檢測方法,明膠顆粒凝集試驗（PA) 酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA） 快速HIV檢測 免疫印記法 （ Western Blot） 其他方法：免疫熒光法（IFA）、放 射免疫沉淀實驗,艾滋病的檢測,艾滋病的檢測主要是抗體檢測、抗原監(jiān)測和核酸檢測，一般實驗室主要進行抗

2、體檢測，主要是需要條件比較簡單； 艾滋病初篩檢測是不能直接告訴被檢者，必須經(jīng)過確認后才可以告知； 目前，每個省市自治區(qū)一般只有一家艾滋病確認實驗室。 “艾滋病病毒抗體初篩實驗室、采供血機構(gòu)或其它進行艾滋病病毒檢驗的機構(gòu)檢測發(fā)現(xiàn)的艾滋病病毒抗體陽性結(jié)果的標本應(yīng)盡快送確認實驗室確認。在確認之前，不得通知受檢者?！?酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）,如果待測血漿中出現(xiàn)HIV 抗體，則它會與固定于試驗孔內(nèi)的HIV 抗原以及隨血漿加入的同類酶聯(lián)抗原形成夾心; 試驗孔經(jīng)過徹底洗滌后除去未結(jié)合的酶。加入一種顯色劑； 結(jié)合形式的酶會催化顯色反應(yīng)； 血漿中出現(xiàn)的抗體就會由于顏色變化而被顯示出來,ELISA酶聯(lián)免疫

3、吸附實驗 ELISA Enzyme linked immuno sorbent assay,HIV 抗原包被平板,病人抗體,顯色劑,酶,+ ve,- ve,對照,陰性,陽性,? 結(jié)果,ELISA 平板,（PA）檢測的基本原理,檢測HIV1/2抗體的體外診斷試劑 將重組HIV-1抗原(HIV-1/gp41和HIV-1/P24)和HIV-2抗原（HIV-2/gp36)包被在人工載體明膠粒子上 這些致敏粒子和血中的HIV-1抗體或HIV-2抗體發(fā)生凝集反應(yīng)，由此可以檢測出血清和血漿中的HIV-1/2的抗體,（PA）檢測結(jié)果的判定,金標法（膠體硒法）基本原理,本HIV1/2快速測試試劑是用一種免疫層析

4、法原理定性測定血樣中HIV1/2抗體 樣品層析遷移到硒膠體-抗原結(jié)合物包被處，與之相結(jié)合，此結(jié)合物繼續(xù)遷移通過固相包被的合成肽和重組抗原的病人結(jié)果窗口,金標法（膠體硒法）結(jié)果判定,快速診斷試驗（RT） Rapid Tests,優(yōu)點: 操作快; 不需定量; 不需專門設(shè)備和人員培訓(xùn); 同一天出結(jié)果。 為保證試驗質(zhì)量必須用WHO 推薦的快速HIV 抗體試驗。,免疫印跡實驗（WB） Western Blot Assay,檢測血漿中能與各種的病毒蛋白反應(yīng)HIV 抗體； 不同的病毒蛋白根據(jù)其分子量不同在電泳凝膠上被分成不同的條帶； 然后將這些蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移或點到硝酸纖維膜上，與病人血漿共同孵育。 HIV 抗體

5、與特異抗原蛋白反應(yīng)，并結(jié)合到纖維膜目標蛋白移動的相同位置上； 用測色技術(shù)檢測結(jié)合的抗體。,不同情況下的抗體試驗An Assay for Every Occasion,抗體試驗選擇視具體情況而定，主要取決于三個因素： 試驗?zāi)康模?試驗的靈敏度和特異度; 檢測人群中HIV 感染率。,HIV抗體檢測的目的,HIV抗體檢測可用于監(jiān)測、診斷、血液篩查。 以監(jiān)測為目的的檢測是為了解不同人群HIV感染率及其變化趨勢而進行的檢測，檢測的人群包括各類高危人群和一般人群。 以診斷為目的的檢測是為了確定個體HIV感染狀況而進行的檢測，包括臨床檢測和自愿咨詢檢測、術(shù)前檢測、根據(jù)特殊需要進行的體檢等。 以血液篩查為目的

6、的檢測是為了防止輸血傳播HIV而進行的檢測，包括獻血員篩查和原料血漿篩查。,明確HIV抗體檢測的要點,1 篩查試驗陽性不能出陽性報告。 2 嚴格遵守實驗室標準操作程序（SOP）。 3 嚴格按照試劑盒說明書操作。 4 注意防止樣品間交叉污染。,試驗特征 Test Characteristics,每一個生物學(xué)試驗都有可能產(chǎn)生假陽性和假陰性結(jié)果； 生物學(xué)試驗的精確度可用三個指標來描述: 靈敏度； 特異度； 預(yù)測值。,靈敏度、特異度,靈敏度是一個試驗檢出真陽性的能力； 高靈敏度的試驗很少產(chǎn)生假陰性結(jié)果； 高靈敏度的試驗用于絕對避免假陰性結(jié)果的情況，如輸血服務(wù)。 特異度一個實驗檢出真陰性能力； 高特異度

7、的實驗很少產(chǎn)生假陽性結(jié)果； 高特異度的實驗用于絕對避免假陽性結(jié)果的情況，如個體的HIV 感染的診斷。,預(yù)測值 Predictive Value,一個具體試驗準確地測定個體感染HIV 可能性隨著人群HIV 感染率的不同而變化。 假陰性結(jié)果在低流行人群中少見； 假陽性結(jié)果在高流行區(qū)域少見； 假陰性結(jié)果在高流行區(qū)域常見； 假陽性結(jié)果在低流行區(qū)域常見。,數(shù)學(xué)表達 Mathematical expression,靈敏度 = a/a+c 陽性預(yù)測值= a/a+b 特異度 = d/b+d 陰性預(yù)測值= d/c+d,WHO 推薦的靈敏度和特異度的最低標準分別是 99 %和 95 % 。,檢測策略 Testin

8、g Strategies,首選敏感性高的試劑 主張重復(fù)檢測所有陽性結(jié)果，盡可能避免假陽性產(chǎn)生； 必須權(quán)衡重復(fù)HIV 檢測在準確度方面的收益與增加的成本；,系列試驗和平行試驗 Serial Versus Parallel Testing,系列試驗（最常見）： 第一次試驗用高靈敏度的試驗以減少假陰性結(jié)果； 第二次試驗在第一個試驗為陽性時才做 平行試驗： 進行兩個抗體的檢測； 兩個試驗的靶抗原和原理不同； 一個試驗高度靈敏，而另一試驗高度特異。,平行試驗的優(yōu)缺點,平行試驗的優(yōu)點： 降低高感染率人群假陰性結(jié)果風(fēng)險； 只需一次指尖取血； 二個試驗比一個試驗的感覺好； 降低病人被叫回做第二次試驗的恥辱感。

9、 缺點：費用高,HIV快檢程序框圖 Serial HIV rapid testing schema,HIV抗體檢測的替代策略,檢測程序,重復(fù)檢測 篩查試驗 確認試驗,實驗室診斷,檢測的質(zhì)量保證,開展工作前 人員培訓(xùn)； 實驗室安全； 樣品收集； 試劑盒選擇和可用性； 有效期； 貯存。,檢測的質(zhì)量保證,工作階段 書面的操作程序手冊； 檢測操作； 正確使用試劑； 包含內(nèi)對照； 質(zhì)量監(jiān)控。,檢測的質(zhì)量保證,結(jié)果分析階段 解釋結(jié)果； 抄錄結(jié)果； 結(jié)果錄入數(shù)據(jù)庫； 記錄維護； 回顧質(zhì)控。,檢測結(jié)果的報告和處理,篩查試驗呈陰性反應(yīng)出具HIV抗體陰性報告。 篩查試驗呈陽性反應(yīng)，可出具“HIV抗體待復(fù)查”報告，不能出陽性報告。同時應(yīng)盡快進行以下處理：,（1）填寫HIV抗體復(fù)查送檢單，經(jīng)一名檢測操作人員和一名具有中級以上技術(shù)職稱的人員審核簽字。 （2）盡可能重新采集受檢者的血樣。 （3）將二份血樣（或僅原血樣）連同HIV抗體復(fù)查送檢單一并送當?shù)匕滩『Y查中心實驗室，再轉(zhuǎn)送艾滋病確認實驗室，或