乙肝表面抗原測定.ppt

1、乙肝表面抗原測定,組員:王安娜、李婷玉、羅夢嬌、翁博文,綜述,乙型肝炎病毒： 機體感染HBV后血清中首先出現(xiàn)的標志物，可作為乙肝的早期診斷和普查 HBsAg無傳染源性而有免疫原性，可刺激機體產(chǎn)生抗-HBs 通過血液檢測是唯一檢測是否感染乙肝病毒的唯一途徑 乙肝病毒是通過血液傳播，主要通過母嬰，血液和性傳播。日常生活和工作接觸不會傳播乙肝病毒。 如果HBsAg、HBeAg和抗HBc三項陽性（即為大三陽），其血液就有高度傳染性,凝集反應(yīng),2.間接凝集反應(yīng)：反向間接凝集,基本原理： 將抗體致敏的紅細胞與樣本中相應(yīng)抗原作血凝試驗，觀察紅細胞凝集現(xiàn)象，用以判斷樣本中相應(yīng)抗原的有無及其效價。,凝集反應(yīng),3

2、.協(xié)同凝集反應(yīng),基本原理： 以金黃色葡萄球菌為載體； 將特特異性抗體先結(jié)合至金黃色葡萄球菌表面； 其Fab段游離與菌體表面，遇到相應(yīng)抗原時與之結(jié)合； 即可導致金黃色葡萄球菌凝集成塊，稱為協(xié)同凝集試驗。,凝集反應(yīng),沉淀反應(yīng),沉淀反應(yīng),可溶性抗原（如細菌浸出液、細胞裂解上清液及血清蛋白等）與相應(yīng)抗體特異性結(jié)合，在電解質(zhì)存在的條件下，出現(xiàn)肉眼可見的沉淀物，稱為沉淀反應(yīng)。,參與沉淀反應(yīng)的抗原稱為：沉淀原 參與沉淀反應(yīng)的抗體稱為：沉淀素,沉淀反應(yīng),凝膠沉淀試驗,單向瓊脂擴散試驗： 抗原或抗體這兩種成分中只有一種擴散，將已知抗體與瓊脂混合，將抗原置于凝膠孔中，抗原則呈輻射狀擴散，在孔的周圍與抗體結(jié)合，在比

3、例合適的地方形成肉眼可見的沉淀環(huán)。當抗體的濃度一定時，抗原的濃度與形成沉淀環(huán)的直徑成正比。 雙向瓊脂擴散試驗： 雙向免疫擴散是指抗原和抗體在同一凝膠內(nèi)部擴散，彼此相遇后形成特 異性的沉淀線。該反應(yīng)是將抗原和抗體加入同一凝膠中兩個相隔一定間距的小孔內(nèi)，使兩者進行相互擴散。當抗原和抗體濃度之比相適宜時，彼此相遇形成一白色弧型沉淀線。,沉淀反應(yīng),免疫電泳技術(shù),對流免疫電泳：雙向瓊脂擴散試驗+電泳 火箭免疫電泳：單向瓊脂擴散試驗+電泳 免疫電泳：雙向瓊脂擴散試驗+區(qū)帶電泳,沉淀反應(yīng),酶標記免疫測定技術(shù),酶聯(lián)免疫吸附劑測定法,簡稱酶聯(lián)免疫法，或者ELISA法。 是固相酶免儀測定中最具代表性的一種 既可檢

4、測抗原又可檢測抗體 3種必要的試劑： 固相的抗原或抗體 酶標記的抗原或抗體 酶作用的底物,雙抗體夾心法,酶聯(lián)免疫吸附劑測定法,基本原理： 將已知抗體包被到固相載體上，使待測標本中的相應(yīng)抗原與抗體結(jié)合，然后再與酶標抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物，洗去多余未結(jié)和成分，加底物后的顯色，根據(jù)顯色反應(yīng)的強度確定待檢抗原的含量。,2.雙位點一步法,基本原理： 在雙抗體夾心法基礎(chǔ)上使用針對抗原分子上兩個不同抗原決定簇的單克隆抗體，分別作為固相抗體和酶標抗體。測定時將待檢標本和酶標抗體同時加入進行反應(yīng)，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物，洗滌后，即可加入底物，顯色后進行抗原的定性或定量測定。,酶聯(lián)免疫吸

5、附劑測定法,3.競爭法,基本原理： 酶標抗原和待檢抗原對固相抗體具有相同的結(jié)合力，在同一反應(yīng)體系中兩者競爭結(jié)合固相抗體。 若將固相抗體和酶標抗原固定限量，且前者的結(jié)合位點少于酶標和非酶標抗原的分子數(shù)量和，免疫反應(yīng)后，結(jié)合與固相酶標抗原量與標本中待檢抗原含量成反比。,酶聯(lián)免疫吸附劑測定法,熒光免疫分析技術(shù),熒光免疫顯微技術(shù),用熒光素標記抗體； 與特異性抗原作用； 除去游離的熒光抗體，借助顯微鏡觀察； 檢測固定組織上的相遇抗原或者血清中的相應(yīng)抗體。,1.直接法,基本原理： 將特異性熒光抗體直接滴加于待檢抗原標本上，直接與相應(yīng)抗原反應(yīng)，檢測未知抗原。,熒光免疫顯微技術(shù),2.間接法,基本原理： 用熒光

6、素標記抗球蛋白抗體，鑒定未知抗原或未知抗體； 先是未標記抗體（一抗）與標本中的抗原反應(yīng)； 再用已標記的二抗與一抗反應(yīng)； 通過觀察熒光現(xiàn)象，從而達到檢測未知抗原或抗體的目的。,熒光免疫顯微技術(shù),3.補體結(jié)合法,基本原理： 利用補體結(jié)合反應(yīng)的原理，用熒光素標記抗補體的抗體，測定未知抗原或抗體 先是標本中的抗原與抗體反應(yīng)形成抗原-抗體復(fù)合物后，加入補體與之結(jié)合。 再加上抗補體的熒光素標記抗體，通過熒光現(xiàn)象檢測抗原或抗體,熒光免疫顯微技術(shù),放射免疫技術(shù),放射免疫,基本原理： 標記抗原（Ag*）和非標記抗原（Ag）對特異性抗體（Ab）的競爭結(jié)合反應(yīng),免疫放射,基本原理： 以過量的放射性核素標記抗體與待測

7、抗原進行的非競爭性結(jié)合反應(yīng)； 待充分反應(yīng)后，除去游離的標記抗體； Ag-Ab*復(fù)合物的放射性強度與待測抗原呈正比關(guān)系。,免疫放射,技術(shù)類型 1、單位點IRMA 過量標記抗體與待測抗原反應(yīng)，形成抗原-標記抗體復(fù)合體 反應(yīng)平衡后分離剩余的標記抗體 測定上清液的放射量（放射強度與待測抗原的量呈正比關(guān)系） 2、雙位點IRMA（雙抗原夾心法） 固相抗體與待測抗原結(jié)合， 形成固相抗體-待測抗原-標記抗體復(fù)合物 分離游離的標記抗體，測定固相上的放射性強度,金標記免疫技術(shù),斑點免疫金層析試驗,免疫金,測試區(qū)：特異抗體,參照區(qū)：抗免疫金抗體,發(fā)光免疫技術(shù),化學發(fā)光酶免疫測定,基本原理 用參與催化某一化學發(fā)光反應(yīng)

8、的酶來標記抗原或抗體與固相化的抗體或抗原試劑反應(yīng) 形成固相包被抗體-待測抗原-酶標記抗體復(fù)合物 洗滌后加入發(fā)光底物，酶催化和分解底物發(fā)光 傳送至計算機數(shù)據(jù)處理系統(tǒng) 計算出測定物的濃度,發(fā)光免疫技術(shù),化學發(fā)光酶免疫測定,發(fā)光免疫技術(shù),化學發(fā)光免疫測定,基本原理 用化學發(fā)光劑直接標記抗原或抗體（化學發(fā)光劑標記物）； 與待測標本中相應(yīng)抗體或抗原、磁顆粒性的抗原或抗體反應(yīng)； 通過磁場把結(jié)合狀態(tài)（沉淀部分）和游離狀態(tài)的化學發(fā)光劑 標記物分離開來； 加入發(fā)光促進劑進行發(fā)光反應(yīng)； 通過對發(fā)光強度的檢測進行定量或定性檢測。,發(fā)光免疫技術(shù),電化學發(fā)光免疫測定,是電化學發(fā)光和免疫測定相結(jié)合的產(chǎn)物。,發(fā)光免疫技術(shù),

9、新 技 術(shù),實時熒光定量PCR（FQ-PCR）,FQ-PCR是一種實時定量檢測技術(shù),融匯了PCR的靈敏性、DNA雜交的特異性和光譜技術(shù)的精確定量等優(yōu)點。基本原理是利用TaqDNA聚合酶的5-3外切核酸酶活性,在擴增的同時降解雜交于擴增區(qū)域內(nèi)的探針,使連接于雜交探針的熒光淬滅基團和熒光發(fā)射基團分離而產(chǎn)生熒光,因此熒光強度的變化能反映擴增產(chǎn)物量的變化。,基因芯片,基因芯片是近幾年生命科學研究領(lǐng)域的一項新檢測技術(shù)，它是指固定基質(zhì)上集成各種可以作為受體的生物信息，利用受體與連接物間的反應(yīng)來進行生物學的檢測。主要包括蛋白芯片和基因芯片。蛋白芯片是將位置和結(jié)構(gòu)已知的大量蛋白、多肽分子、酶、抗原、抗體按預(yù)先設(shè)計好的方式固定于滴定板、濾膜和載玻片等各種載體上組成密集的分子排列，當熒光、免疫金等標記的靶分子與芯片上的探針分子結(jié)合后，通過一些定量檢測方法對標記信號的強度進行檢測，從而判斷樣品中的靶分子的數(shù)量，達到一次實驗同時檢測多種生物樣品的目的。,微粒子酶免疫分析(MEIA),MEIA檢測HBsAg是目前世界上檢測乙型肝炎病毒標志物的金標準，采用順磁性微粒作為固相載體，用穩(wěn)定的4-甲基磷酸傘型酮(MUP)測出熒光發(fā)光的強