ABO血型系統(tǒng)及定型正反不符dy探素.ppt

1、ABO血型系統(tǒng)及定型,正定型（細(xì)胞定型） 用已知抗體特異性的試劑血清檢查紅細(xì)胞的抗原 玻片法 試管法 微量板法,ABO常規(guī)定型,ABO常規(guī)定型,反定型（血清定型） 用已知血型的試劑紅細(xì)胞檢查血清中的抗體 試管法 微量板法,正反定型結(jié)果相符時(shí)，才可以記錄血型結(jié)果。,ABO正反不符時(shí),受檢紅細(xì)胞是洗滌后懸浮于NS.嗎? 是用最敏感的試管法嗎? 受檢者年齡60嗎? 病人的丙種球蛋白減低嗎? 病人血清與O型普檢紅細(xì)胞的反應(yīng)與試劑紅細(xì)胞一樣嗎? 病人是白血病、腸道阻塞、胃癌、結(jié)腸或直腸癌嗎？ 混合視野反應(yīng)是輸血后標(biāo)本嗎？,技術(shù)上錯(cuò)誤的常見(jiàn)來(lái)源,血液標(biāo)本或試管鑒定不當(dāng) 紅細(xì)胞懸浮液過(guò)濃或過(guò)淡及纖維蛋白、小

2、血凝塊的干擾 人為的書(shū)寫錯(cuò)誤 標(biāo)本混亂 忽略觀察溶血現(xiàn)象 未加入試劑 未按照試劑生產(chǎn)商的說(shuō)明操作 離心機(jī)校準(zhǔn)不良 試劑受到污染 溫度在離心過(guò)程中增高,造成正反定型不符的4種變異情況,減弱的或減少的抗原反應(yīng) 未知的抗原反應(yīng) 減弱的或缺少的抗體反應(yīng) 未知的抗體反應(yīng),減弱或減少的抗原反應(yīng),A或B抗原的亞血型 A、B及AB型RBC與試劑抗血清作實(shí)驗(yàn)時(shí)，預(yù)期反應(yīng)：4 細(xì)胞分型法減弱的凝集反應(yīng)：健康獻(xiàn)血員可能A/B亞型 抗AB 血清能檢出某些不與抗A/抗B試劑發(fā)生反應(yīng)的A/B亞型,減弱或減少的抗原反應(yīng),疾病狀態(tài)下,抗原強(qiáng)度減弱 如:A型白血病/腫瘤患者在疾病活動(dòng)期改變?yōu)锳2或A3亞型 ,疾病緩解期復(fù)原 疾

3、病狀態(tài)下,血型物質(zhì)過(guò)量,中和抗A/抗B試劑,造成假陰性/弱凝集: 卵巢囊腫 胃癌 胰腺癌 腸道阻塞 對(duì)策:試管法 紅細(xì)胞三洗,未知抗原反應(yīng),獲得性A 奇異變形桿菌感染的O/B: 與抗A反應(yīng)呈混合視野,未知抗原反應(yīng),獲得性B RBC反應(yīng)象AB型,血清中有抗B抗體 細(xì)胞分型法: A抗原B抗原,獲得性B的成因,Gerbal等假設(shè)細(xì)菌的脫乙?；竏eactetylases可以將A的免疫結(jié)構(gòu)域糖N乙酰氨基半乳糖胺轉(zhuǎn)化為半乳糖胺。 這個(gè)半乳糖胺與B的免疫多糖半乳糖非常的相似，可以與某些抗B發(fā)生反應(yīng)。,抗體致敏的紅細(xì)胞,抗體吸附于紅細(xì)胞表面，可顯示直抗陽(yáng)性 自身免疫性溶血性貧血 抗高血壓藥物 輸血反應(yīng) 新生

4、兒溶血病 放散技術(shù)移去抗體,減弱或缺少抗體反應(yīng),年齡70 丙球蛋白過(guò)低血癥 丙球蛋白缺乏血癥,未知的抗體反應(yīng),緡錢狀凝集 冷自身抗體 未知的ABO同種抗體 未知的其它同種抗體,ABO抗體的區(qū)別,天然抗體和免疫抗體,天然抗體 未經(jīng)可察覺(jué)的抗原刺激而產(chǎn)生的抗體 O型血清中多為IgG抗A和抗B A/B型血清中大多為IgM抗體 免疫抗體 妊娠/輸血等,緡錢狀凝集,球蛋白濃度增高:多發(fā)性骨髓瘤/原發(fā)性巨球蛋白血癥 纖維蛋白原增高 血管擴(kuò)張劑 霍奇金淋巴瘤 新生兒臍帶血中的華爾道膠,冷自身抗體,抗I是反定型中最常見(jiàn)的自身抗體 有時(shí)也見(jiàn)抗i和抗Pr 抗I通常凝集所有供者RBC包括患者自身及反定型所用RBC

5、抗I引起的凝集比抗A抗B所引起的凝集弱 臍帶血所帶的I抗原量少通常不被凝集,抗HI,與冷凝集有關(guān)的最常見(jiàn)的特異性抗體是抗I 有些冷抗體與I和H抗原強(qiáng)的細(xì)胞如（O和A2細(xì)胞）反應(yīng)最強(qiáng)，稱之為抗HI聯(lián)合抗體。,冷自身抗體之鑒別,抗I 抗i 抗H 抗HI 抗Pr 成OI + - + + + 成AI + - - - + 臍Oi - + + - + 酶OI + - + + + 抗HI： O成A2成B/A成臍O臍AB,未知的同種抗體,ABO同種抗體:A2/A2B中的抗A1 A1/A1B中的抗H 未知的同種抗體: 篩選細(xì)胞及反定型中的O細(xì)胞 一組譜細(xì)胞鑒定抗體特異性,ABO亞型,A抗原中主要為A1和A2 其

6、它A亞型：A3、Ax、Aend、Am、Ay、和Ael B亞型一般比A亞型更少：B3、Bx、Bm和Bel等,判斷ABO亞型:,1 紅細(xì)胞與抗A抗A1抗B及抗AB的凝集程度 2 紅細(xì)胞上H物質(zhì)活性的強(qiáng)弱 3 血清中是否存在抗A1 4 分泌型人的唾液中A、B和H物質(zhì),A1和A2的鑒別,各種弱A亞型的鑒別程序,A2,與人源性抗A試劑的反應(yīng)強(qiáng)度為4, 與抗H+/2+ 可能有不規(guī)則抗A1存在 (sometimes) 1-8% A2和22-35%的A2B存在抗 A1 血型物質(zhì) A H 舉例 抗A 抗B Ac Bc Oc 4+ 4+ + - -,A2,A1和A2決定簇的區(qū)別是僅存在量的差異 還是抗原決定簇結(jié)構(gòu)

7、不同？ 用A2細(xì)胞重復(fù)吸收來(lái)源于B型個(gè)體的抗A血清可以移去所有抗體，表明二者之間僅是量的差別。 A2和A2B個(gè)體常常產(chǎn)生抗A1，說(shuō)明A2細(xì)胞上缺乏A1細(xì)胞上的一種決定簇。,血型前體物質(zhì)：,Type1 Gal13GlcNAc 1R（血清） Type2 Gal14GlcNAc 1R （紅細(xì)胞） Type3 Gal13GalNAc1R（紅細(xì)胞） Type4 Gal13GalNAc 1R （紅細(xì)胞） Type5 Gal13Gal 1R（人工合成） Type6 Gal14Glc 1R,A1和A2同樣存在質(zhì)的區(qū)別,A1細(xì)胞出現(xiàn)重復(fù)的3型A抗原結(jié)構(gòu)，但A2細(xì)胞卻沒(méi)有。 抗A1是3型或4型A特異性的，或者抗A

8、1可以優(yōu)先與3型或4型A反應(yīng)。,只有A1轉(zhuǎn)移酶能夠轉(zhuǎn)化3型H加一個(gè)N乙酰氨基半乳糖基成為3型A 因此A2細(xì)胞上可以檢測(cè)到3型H而不是3型A抗原。,雙花扁豆植物血凝素檢測(cè)N乙酰氨基半乳糖胺，當(dāng)過(guò)量的濃度下，它可以凝集A2細(xì)胞，因此將它用作A亞型分型試劑更多是依賴A1和A2表現(xiàn)型數(shù)量上的差異。,A3,最早由Friedenreich在1936年描述 與抗A和抗AB共同孵育時(shí)：“混合視野外觀”（mixed field agglutination）。即：小的凝集塊周圍是大量未凝集的細(xì)胞。 與抗A反應(yīng)強(qiáng)度低于A2 與抗AB反應(yīng)呈混合視野,但并不增強(qiáng) 偶有抗A1 (occasionally) 血型物質(zhì) A

9、H A3不像是A2和O細(xì)胞的嵌合體,Aend（Afinn，Abantu）,Aend最早由Weiner 等于1959年描述 類似于A3細(xì)胞：它們與一些抗A和抗AB表現(xiàn)很弱的混合視野外觀 Aend分泌型的唾液中只有H物質(zhì)，但是無(wú)A物質(zhì) 抗A1出現(xiàn)在部分Aend個(gè)體的血清中 10細(xì)胞凝集（Mf）,Am,Am細(xì)胞不能被抗A和抗AB凝集，或者僅能發(fā)生很弱的凝集。Am細(xì)胞可以吸附放散抗A 。 Am分泌型的唾液中包含正常含量的A和H物質(zhì)，Am血清中通常無(wú)抗A1。 Am作為ABO位點(diǎn)上一個(gè)稀有的等位基因遺傳 Am在法國(guó)獻(xiàn)血者的頻率是150 000中有1例。（A型人中占0.0015%），中國(guó)臺(tái)灣的數(shù)據(jù)是400

10、000萬(wàn)人中1例。,Am,抗原性較弱 抗A: - / w+ 抗H 4+(甚至?xí)^(guò)Oc) 無(wú)抗A1產(chǎn)生,與抗AB反應(yīng)不增強(qiáng) 血型物質(zhì): A H,Ax,Ax表現(xiàn)型最初由Fischer和Hahn于1935年報(bào)道，它的主要血清學(xué)特點(diǎn)是： 紅細(xì)胞與多數(shù)來(lái)源于B型血清的抗A不發(fā)生反應(yīng)，但是可以被大多數(shù)來(lái)源于O型個(gè)體的抗AB凝集，沒(méi)有混合視野表現(xiàn)。 血清中含有抗A1，后者有時(shí)候可以凝集A1和A2細(xì)胞。 除了H物質(zhì)，Ax分泌型個(gè)體唾液中可以撿出痕量的A物質(zhì),Ax,抗A: -/ w+ 抗H:4+(與Oc的抗H差不多) 常有抗A1(Frequently) ,比A2 A3都高 與抗A+B的反應(yīng)比抗A明顯增強(qiáng) 血型

11、物質(zhì) H,Ax,Ax表現(xiàn)型具有很高的遺傳異質(zhì)性： 許多家系資料表明Ax以ABO位點(diǎn)上一種稀有的等位基因的方式遺傳 在一些家庭中遺傳背景不清楚 在兩項(xiàng)獨(dú)立的研究中，法國(guó)Ax的頻率為1/77000 (A型人中的0.003%)和1/44000,Aint,與抗A1反應(yīng)較弱 2+ 與抗A及抗H反應(yīng)較強(qiáng) 4+/3+ 僅有A1和Aint的細(xì)胞與抗A1發(fā)生反應(yīng),Aint,Landsteiner和Levine：有些A型個(gè)體的紅細(xì)胞既不能定義為A1也不能定義為A2 Aint在黑人中較白人更為常見(jiàn)， Aint是作為ABO位點(diǎn)上的一個(gè)等位基因遺傳的。 它的H抗原強(qiáng)度象A2一樣強(qiáng)，甚至更強(qiáng)。,Ael,在通常的條件下，A

12、el細(xì)胞與抗A和抗AB不發(fā)生凝集，雖然它們可以結(jié)合這些抗體，結(jié)合的抗體可以通過(guò)吸收放散技術(shù)檢測(cè)到 Ael分泌型唾液中無(wú)A物質(zhì)，僅有H物質(zhì)，血清中常含有抗A1，也可以含有能夠凝集A2細(xì)胞的抗體,Ael,在Ael血清和紅細(xì)胞膜上不能檢出A轉(zhuǎn)移酶。 在法國(guó)150000例獻(xiàn)血者中，沒(méi)有檢測(cè)到Ael表現(xiàn)型，在中國(guó)臺(tái)灣400000人中撿出5例Ael個(gè)體 Ael以ABO位點(diǎn)上的一種稀有的等位基因遺傳的。,Aw,Olsson等 對(duì)其它弱A亞型的ABO基因的外顯子、剪切部位和啟動(dòng)子進(jìn)行序列測(cè)定 那些表現(xiàn)型不太容易被劃分到任何現(xiàn)存的分類中。這些異常的基因被稱作Aw（15）。,Subgroups of A,B亞型,

13、弱的B變異型是很少的。 可能是由于在許多群體中B基因的頻率要相對(duì)低得多。 弱B亞型較難以分類。 Salmon做出結(jié)論：B亞型最好的分類應(yīng)參照A變異型：B3、Bx、Bm和Bel，另外加上那些不符合其它4種類型的Bw。,B3,1972年 Wiener和Cioffi首先報(bào)道一例ABH非分泌型B3。 它被作為最稀少的一種B亞型 這種表現(xiàn)型以與抗B和抗AB呈現(xiàn)混合視野反應(yīng)為特點(diǎn) 血清中缺乏抗B 唾液中含有正常含量的B抗原 B3通常是由于ABO位點(diǎn)上的稀有等位基因所致。,Bx,一種異質(zhì)性的血型 典型的Bx紅細(xì)胞與抗B和抗AB呈弱凝集。 血清中含有弱的抗B Bx分泌型唾液中含有一些B物質(zhì)，后者常常僅能通過(guò)B

14、x細(xì)胞與抗B的凝集抑制試驗(yàn)才能檢測(cè)到 Bx是ABO位點(diǎn)上的一種稀有的等位基因。,Bm,Bm細(xì)胞不能被抗B或抗AB凝集 B抗原僅能通過(guò)敏感的技術(shù)比如吸收放散抗B才能檢測(cè)到。 Bm分泌型唾液中B物質(zhì)的含量接近正常B Bm個(gè)體的血清中不含有抗B。 通常Bm是作為ABO位點(diǎn)上一個(gè)變異的基因來(lái)遺傳的，但是有幾個(gè)例外報(bào)道。,Bel,Bel紅細(xì)胞與抗B和AB不發(fā)生凝集反應(yīng)，但是它們的確可以結(jié)合抗B，抗體可以通過(guò)放散技術(shù)被檢測(cè)到。 Bel分泌型唾液中不出現(xiàn)B物質(zhì)，血清中可能存在抗B抗體。 Bel作為ABO位點(diǎn)上的稀有基因而遺傳，,Bw,Olsson等確認(rèn)了7種新的等位基因，它們與正常B基因相比有1個(gè)核苷酸改變，導(dǎo)致一個(gè)氨基酸的取代（見(jiàn)表2.19Bw2到8），所有這些等位基因與B的弱表達(dá)相關(guān)，但是沒(méi)有做進(jìn)一步分類。,正反不符的解決,正定型中意外陽(yáng)性或陰性 洗滌細(xì)胞 加入自身對(duì)照 增加血清/細(xì)胞比例 降低孵育溫度,延長(zhǎng)孵育時(shí)間 4 /22 /37 15min-30min 鏡檢 用不同來(lái)源的抗體試驗(yàn) 用人源性試劑作吸收放散(并作相應(yīng)對(duì)照),吸收放散試驗(yàn) 檢測(cè)紅細(xì)胞上的弱A/B 抗原,NS.三洗受檢1ml紅細(xì)胞 加入等量人源性抗A或抗B 充分混勻41小時(shí)，離心去上清 4冷鹽水充分洗滌細(xì)胞58次（留末次洗滌液） 56熱放散 檢測(cè)放散液及最后一次洗滌液 注意：要