HE4 崔恒 北京大學(xué)人民醫(yī)院.ppt

1、新型卵巢癌標(biāo)記物HE4的研究進(jìn)展,崔 恒 北京大學(xué)人民醫(yī)院 婦科腫瘤中心,世界范圍統(tǒng)計資料,癌 新發(fā) 死亡 宮頸 470,000 230,000 卵巢 190,000 114,000 內(nèi)膜 188,000 45,000,美國2008,卵巢癌的現(xiàn)狀,一個難題：無成熟的早期診斷方法； 二個70%：確診時約70%已屬晚期；治療后即使是已達(dá)到臨床完全緩解的病人仍有70%最終將復(fù)發(fā)； 三個進(jìn)展：手術(shù)病理分期、腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)、紫杉醇+卡鉑化療方案 四個焦點：保留生育/生理功能、早期的輔助治療、晚期的治療、復(fù)發(fā)的診斷和治療,卵巢癌的診斷策略-早期診斷,卵巢癌的早期診斷一直是卵巢癌研究中最具挑戰(zhàn)性的課題 腫瘤

2、診斷的三大支柱 圖像診斷：B超 CT、MRI PET/CT 血液與體液檢測：腫瘤標(biāo)記物 細(xì)胞學(xué)與組織學(xué)診斷,現(xiàn)階段卵巢癌的診斷,目前常用的診斷方法包括：1）婦科三合診；2）陰式彩色B超；3）血清CA125的檢測；4）計算機斷層掃描（CT）、磁共振成像（MRI）、正電子發(fā)射斷層掃描（PET或PET/CT）等,關(guān)于診斷正在研究中的有： 放射免疫顯像（RII） 新的或多種血清標(biāo)記物的檢測 血清中卵巢癌特異抗體的檢測 惡性腫瘤危險指數(shù)評分（RMI) 癌基因和抗癌基因突變的檢測，特別是與遺傳相關(guān)基因的檢測（芯片） 發(fā)現(xiàn)和尋找新的特異抗原和基因,腫瘤標(biāo)記物的定義,與腫瘤相關(guān)的抗原或某種生物活性物質(zhì) 腫瘤細(xì)

3、胞異常表達(dá) 反映癌變發(fā)生、發(fā)展過程 可被檢出,有效的腫瘤標(biāo)記物,特異性強 敏感性高 交叉反應(yīng)小 早期診斷率高 隨病情變化監(jiān)測值變化明顯,臨床應(yīng)用,腫瘤診斷及鑒別診斷 腫瘤殘存 復(fù)發(fā)的預(yù)測及復(fù)發(fā)部位監(jiān)測 療效觀察及預(yù)后評估 對無癥狀早期癌及高危人群的篩查,血清腫瘤標(biāo)志物的檢測,CA125是應(yīng)用最多的卵巢癌血清腫瘤標(biāo)志物，特別是最常用的監(jiān)測卵巢癌復(fù)發(fā)的指標(biāo)。 期卵巢癌患者僅有約30-50% 35u/ml，監(jiān)測復(fù)發(fā)的敏感性、特異性、陽性預(yù)測值分別為79、95、100。 1健康婦女、3良性卵巢腫瘤、6非卵巢相關(guān)的良性疾病可有血清CA125水平升高。在子宮內(nèi)膜異位癥、盆腔結(jié)核、炎癥等甚至高達(dá)50-70%

4、,卵巢癌相關(guān)的其它標(biāo)志物,基因分析和組織化學(xué)分析已發(fā)現(xiàn)許多新的可能與卵巢癌相關(guān)的標(biāo)志物 MUC1 Kallikreins：hK4, hK6, hK8, hK10 Mesothelin Antileukoproteinase 1 (ALP1) Osteopontin VEGF S100A1 Inhibin LPA B7-H4 HE4，表達(dá)上調(diào)在卵巢癌中最常見，且在早、晚期患者中mRNA和蛋白的表達(dá)均上調(diào)。,HE4,HE4 （Human Epididymis Secretory Protein 4,人附睪分泌蛋白4） 1991年由Kirchhoff等從人的附睪中克隆出cDNA，基因定位在染色體 2

5、0q12-q13.1，全長為12kb左右，由5個外顯子和4個內(nèi)含子組成，編碼的蛋白質(zhì)與細(xì)胞外蛋白酶抑制劑有很高的同源性，是一種酸性蛋白質(zhì)。 1999年Schummer等發(fā)現(xiàn)HE4 mRNA在卵巢癌組織中高表達(dá)，而在癌旁組織中 不表達(dá)。HE4在惡性腫瘤中的高表達(dá)多見于卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌，少見于肺腺癌及間皮瘤。,HE4在早期（I期）的卵巢癌中的敏感性及檢測卵巢癌總的敏感性均高于CA125，是卵巢癌敏感及特異的標(biāo)志物，可用于對卵巢癌的早期診斷及輔助監(jiān)控卵巢癌患者的治療情況。 英國的一項研究對200，000婦女用30多種腫瘤標(biāo)記物分別單獨或與CA125聯(lián)合進(jìn)行卵巢癌篩查，HE4可以使診斷卵巢癌的敏感度

6、和特異度提高,Biochemistry of HE4,HE4 - Human Epidiymis secretory protein 4 Member of the WAP-gene family of protease inhibitors (new name WFDC-gene family) Characterized by an approx 50 aa sequence with 8 highly conserved cysteine residues that form 4 disulphide bridges. WFDC (Whey Acidic Protein Four Dis

7、ulphide Core) Tumour associated WFDC-proteins ALP1, Elafin, HE4 (WFDC2), PS20 (WFDC1),HE4 mRNA expression profile,Restricted expression profile in normal tissue Expressed in normal epididymis, and epithelia of the respiratory and reproductive tract Tumor-restricted expression in ovarian cancer 90 %

8、of serous ovarian cancer HE4 mRNA highly expressed in lung adenocarcinomas 60 % high expression in AdC 10 % high expression in SqC,From Galgano et al Modern Pathol (2006)19; 847 - 853,Expression of HE4 mRNA in cancer,HE4 antigen expression in Ovarian cancer,Galgano et al Modern Pathol (2006)19; 847

9、- 853,HE4 antigen is highly expressed in serous, endometroid and clear cell ovarian cancer Mucinous, germ cell or sex cord ovarian cancer barely express HE4,Drapkin et al Cancer Res (2005) 65;2162-2169,HE4 是一種適宜的卵巢癌血清標(biāo)志物,HE4 可分泌入體液 正常卵巢不表達(dá)，而在卵巢癌高表達(dá)-特異性好 在早期和晚期HE4表達(dá)均呈高度上調(diào) 早期病例具有高度敏感性 HE4的表達(dá)獨立于CA125的表

10、達(dá) 聯(lián)合檢測將較各自單獨檢測獲得更 多的信息,HE4診斷試劑盒,HE4 EIA試劑盒由瑞典Fujirebio Diagnostics AB公司生產(chǎn)，已經(jīng)獲得了FDA認(rèn)證和CE認(rèn)證，在美國、歐洲等多個國家上市銷售，現(xiàn)正在申請在中國上市注冊。 Fujirebio Diagnostics AB公司研制的HE4 EIA試劑是國外唯一用于定量檢測人血清中HE4的試劑，國內(nèi)尚無任何檢測HE4的試劑上市銷售。,HE4 EIA 方法的建立,主要試劑： 2H5 and 3D8 MAb established using HE4-Mouse Ig fusion protein as immunogen Hells

11、trom et al, Cancer Research 63, 3695 3700, 2003 檢測原理： Two-step forward sandwich immunoassay based on Bio 2H5 MAb for catching of HE4 and HRP 3D8 MAb for detection,HE4 用于監(jiān)測卵巢癌,約 80%患者HE4與CA125相符，與病情一致,Study on 80 patients, 4,4 observations/patient Measured concordance between biomarker change 11-17,C

12、- 45,C- 45,TH: Teaching hospital NTH: Nonteaching hospital,Type of Surgeon Impacts Survival rates,Type of Hospital Impacts Survival rates,ROMA,ROMA value = expPI / 1 + expPI x 100,Risk of Ovarian Malignancy Algorithm (ROMA) value Estimate of the risk of ovarian cancer given that the patient had a pe

13、lvic mass; their HE4 and CA125 values; and their menopausal status,Biomarker and ROMA Scatterplot,ROMA Validation trial - Conclusions,At a specificity of 75%, the overall sensitivity for EOC+LMP was 89% Overall sensitivity for EOC was 94% Pre-menopausal women 89% Post-menopausal women 95% NPV 94% fo

14、r EOC+LMP in Pre- and postmenopausal women combined NPV 97% for EOC 17/279 (6%) patients classified as low risk had EOC or LMP 9/17 had LMP tumor 1 (0.4%) had late stage (III/IV) cancer ROMA effectively stratifies patients with pelvic mass into groups with low and high risk of having epithelial ovar

15、ian cancer,C- 50,ROMA vs RMI,Risk of Malignancy Index (RMI) RMI = U x M x serum CA 125 level U= 0 for imaging score of 0 = 1 for imaging score of 1 = 3 for imaging score of 2-5 M= 1 if premenopausal = 3 if postmenopausal,Jacobs I et al. Br J Obstet Gynecol.1990; 97:992-929.,ROMA has increased sensit

16、ivity compared with RMI,Benign and EOC: All Stages,*Two Sample Test of Equality of Proportions p=0.0129 CI: Confidence Interval,ROMA Has Increased Sensitivity vs RMI For Early Stage Cancer,Benign and EOC: Stage I & II,*Two Sample Test of Equality of Proportions p=0.0510 CI: Confidence Interval,表 患者被

17、ROMA劃分為高危組和低危組的分布,月經(jīng)狀態(tài) 疾病 高危(例 ) 低危(例) 合計(例) 敏感性(%) 特異性(%) PPV (%) NPV (%) 絕經(jīng)后 惡性 35 2 37 EOC 28 0 28 良性 4 8 12 合計a 32 8 40 100.0 66.7 87.5 100.0 合計b 39 10 49 94.6 66.7 89.7 80.0 絕經(jīng)前 惡性 12 4 16 EOC 8 0 8 良性 23 103 126 合計a 31 103 134 100.0 81.7 25.8 100.0 合計b 35 107 142 75.0 81.7 22.9 96.3 全部 惡性 47 6

18、 53 EOC 36 0 36 良性 27 111 138 合計a 63 111 174 100.0 80.4 57.1 100.0 合計b 74 117 191 88.7 80.4 63.5 94.9 a：指EOC與良性腫瘤的合計，b：指惡性腫瘤與良性腫瘤的合計,HE4 Clinical Investigations,Italy Mestre-Venice Pelvic mass Milano Pelvic mass Brescia Endometrial cancer Roma Ongoing real life study Norway Oslo Many biobank studies

19、 Sweden Stockholm Biobank pelvic mass Brasil Sao Paolo Ovarian cancer Belgium Leuven Pelvic mass,HE4 Clinical Investigations,HE4用于卵巢癌的動態(tài)監(jiān)測和對復(fù)發(fā)的診斷 血清HE4與CA125聯(lián)合檢測用于鑒別卵巢癌和卵巢子宮內(nèi)膜異位癥 血清HE4 檢測用于子宮內(nèi)膜癌的診斷和隨訪 血清HE4用于肺癌的診斷,HE4聯(lián)合CA125鑒別診斷子宮內(nèi)膜異位癥和卵巢癌,HE4的編碼基因WFDC2主要在卵巢子宮內(nèi)膜樣癌、子宮內(nèi)膜癌中有表達(dá), 并且在正常的子宮內(nèi)膜腺體中也有表達(dá)，但是在子宮內(nèi)膜異位病灶中是否有表達(dá)尚不明確，,我們實驗室最檢測了57例卵巢子宮內(nèi)膜異位癥患者血漿中HE4和CA125的濃度。數(shù)據(jù)結(jié)果與49例卵巢癌，60例卵巢良性腫物，50例健康對照作對比，初步探討血清人附睪分泌蛋白4(HE4)