5食品添加劑辣椒橙.doc

食品添加劑 辣椒橙1 范圍 本標(biāo)準(zhǔn)適用于以辣椒果皮及其制品為原料，經(jīng)萃取、過(guò)濾、濃縮、脫辣椒素等工藝制成的食品添加劑辣椒橙。食品添加劑辣椒橙為橙色或橙紅色油狀液體。2 分子式和相對(duì)分子質(zhì)量2.1 分子式辣椒紅素：C40H56O3 辣椒玉紅素：C40H56O42.2 相對(duì)分子質(zhì)量辣椒紅素：584.85 辣椒玉紅素：600.85 3 技術(shù)要求應(yīng)符合表1的規(guī)定。表1 技術(shù)要求項(xiàng) 目指 標(biāo)檢驗(yàn)方法類(lèi)胡蘿卜素總量，w/% 標(biāo)稱(chēng)附錄A中A.3辣椒總堿/g/mL符合聲稱(chēng)附錄A中A.4辣椒紅素和辣椒玉紅素，w/% 類(lèi)胡蘿卜素總量的30%附錄A中A.5砷（以As計(jì)）/（mg/kg） 3.0附錄A中A.6鉛（Pb）/（mg/kg） 2.0附錄A中A.7總有機(jī)溶劑殘留量，w/% 0.005附錄A中A.8附錄A檢驗(yàn)方法 A.1 一般規(guī)定本標(biāo)準(zhǔn)所用試劑和水，在沒(méi)有注明其他要求時(shí)，均指分析純?cè)噭┖虶B/T 66822008規(guī)定的三級(jí)水。試驗(yàn)中所需標(biāo)準(zhǔn)溶液、雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液、制劑及制品在沒(méi)有注明其他規(guī)定時(shí)，均按GB/T 601、GB/T 602、GB/T 603規(guī)定配制和標(biāo)定。A.2 鑒別試驗(yàn)A.2.1 顯色反應(yīng) 在1滴試樣中加2滴3滴三氯甲烷和1滴硫酸，溶液呈深藍(lán)色。A.2.2 最大吸收樣品溶解在丙酮中，在約462nm處有最大吸收峰。樣品溶解在正己烷中，約在470nm處有最大吸收峰。A.2.3 高效液相色譜法通過(guò)測(cè)試，詳見(jiàn)“辣椒紅素和辣椒玉紅素含量測(cè)定”。A.3 類(lèi)胡蘿卜素總量的測(cè)定A.3.1 方法提要采用分光光度計(jì)法測(cè)定辣椒橙中的類(lèi)胡蘿卜素在最大吸收波長(zhǎng)處（約462nm）吸光度值，計(jì)算其含量。A.3.2 試劑和材料丙酮。A.3.3 儀器和設(shè)備A.3.3.1 分光光度計(jì)。A.3.3.2 比色皿：10mm。A.3.4 試樣溶液的配制準(zhǔn)確稱(chēng)取0.3g0.5g（精確至0.0002 g）辣椒橙加到100mL容量瓶中，加入丙酮搖動(dòng)溶解，定容，靜置2min。吸取該溶液1mL加入另外一個(gè)100mL容量瓶中，丙酮定容到刻度，充分搖動(dòng)。A.3.5 分析步驟將辣椒橙試樣溶液置于10mm比色皿中，在最大吸收波長(zhǎng)處（約462nm）讀取吸光度A。調(diào)整樣品濃度，使吸光度在0.30.7之間。A.3.6 結(jié)果計(jì)算類(lèi)胡蘿卜素總量以計(jì)，數(shù)值以%表示，按式（A.1）計(jì)算： （A.1）式中：A 辣椒橙試樣溶液的吸光度值；2100辣椒紅素/辣椒玉紅素在丙酮中462nm波長(zhǎng)處的吸光度；m試樣質(zhì)量的數(shù)值，單位為克（g）；計(jì)算結(jié)果表示到小數(shù)點(diǎn)后1位。A.4 辣椒總堿的測(cè)定A.4.1 方法提要采用高效液相色譜法測(cè)定辣椒總堿（降二氫辣椒堿、辣椒堿和二氫辣椒堿）的含量。A.4.2 試劑和材料A.4.2.1 合成辣椒堿標(biāo)樣，純度大于99%。A.4.2.2 乙醇。A.4.2.3 丙酮。A.4.2.4 乙腈。 A.4.3 儀器和設(shè)備A.4.3.1 高效液相色譜儀：帶有20L定量環(huán)、熒光檢測(cè)器或紫外檢測(cè)器。A.4.3.2 檢測(cè)器：熒光檢測(cè)器-激發(fā)波長(zhǎng)280nm，發(fā)射波長(zhǎng)325nm。 紫外檢測(cè)器-檢測(cè)波長(zhǎng)280nm。A.4.3.3 色譜柱：長(zhǎng)為150mm，內(nèi)徑為4.6mm的不銹鋼柱，固定相為C18、粒徑5m。A.4.3.4 固相萃取小柱：C18 SEP-PAK 6mL。A.4.4 色譜分析條件A.4.4.1 流動(dòng)相：乙腈：水溶液=40:60 水溶液為1%乙酸溶液（v/v）。A.4.4.2 流量：1.5mL/min 。A.4.4.3 進(jìn)樣量：20L。A.4.5 標(biāo)樣溶液的配制準(zhǔn)確稱(chēng)取75mg 合成辣椒堿，純度大于99%，（CAS RN：2444-46-4）加入500mL容量瓶中，加乙醇溶解稀釋到刻度，搖勻，此溶液為標(biāo)準(zhǔn)溶液A，濃度為150g/mL。吸取10mL標(biāo)準(zhǔn)溶液A加入到100mL容量瓶中，加乙醇溶解稀釋到刻度，搖勻，此溶液為標(biāo)準(zhǔn)溶液B，濃度為15g/mL。吸取5mL標(biāo)準(zhǔn)溶液B加入到100mL容量瓶中，加乙醇溶解稀釋到刻度，搖勻，此溶液標(biāo)準(zhǔn)溶液C，濃度為0.75g/mL。A.4.6 樣品溶液的配制準(zhǔn)確稱(chēng)取5g辣椒橙加到50mL容量瓶中，避免樣品粘到容量瓶?jī)?nèi)壁上。加入5mL丙酮，搖動(dòng)直至樣品完全溶解。傾斜45角觀(guān)察樣品是否粘附瓶底。緩慢加入乙醇（95%或無(wú)水乙醇）直到溶液渾濁，稀釋到刻度，混合均勻。用10mL注射器直接吸取5mL樣品溶液加入到規(guī)格為6mL固相萃取柱中，避免樣品粘附到注射器的內(nèi)壁上。樣品通過(guò)萃取柱并收集到25mL的容量瓶中。用5mL乙醇洗滌萃取柱，洗滌三次，洗滌液收集到容量瓶中。乙醇定容， 經(jīng)0.45 m過(guò)濾器過(guò)濾，濾液裝入玻璃瓶中。A.4.7 分析步驟在A.4.4規(guī)定的色譜條件下，分別用微量注射器吸取試樣溶液和合適的標(biāo)準(zhǔn)溶液注入并充滿(mǎn)定量環(huán)，進(jìn)行色譜檢測(cè)，待最后一個(gè)組分流出完畢，用色譜工作站或積分儀進(jìn)行結(jié)果處理。進(jìn)樣順序是標(biāo)準(zhǔn)溶液、試樣溶液、標(biāo)準(zhǔn)溶液。A.4.8 結(jié)果計(jì)算降二氫辣椒堿濃度以cN計(jì)，數(shù)值以g/mL表示，按式（A.2）計(jì)算： （A.2）式中： N降二氫辣椒堿的平均峰面積數(shù)值； cS 標(biāo)樣濃度g/mL； A1 標(biāo)樣的平均峰面積數(shù)值； rN降二氫辣椒堿相對(duì)標(biāo)樣的響應(yīng)因子。辣椒堿濃度以cC計(jì)，數(shù)值以g/mL表示，按式（A.3）計(jì)算： （A.3） 式中： C辣椒堿的平均峰面積數(shù)值； cS 標(biāo)樣濃度g/mL； A1 標(biāo)樣的平均峰面積數(shù)值； rC辣椒堿相對(duì)標(biāo)樣的響應(yīng)因子。 二氫辣椒堿濃度以cD計(jì)，數(shù)值以g/mL表示，按式（A.4）計(jì)算： （A.4）D二氫辣椒堿的平均峰面積數(shù)值； cS 標(biāo)樣濃度g/mL； A1 標(biāo)樣的平均峰面積數(shù)值； rD二氫辣椒堿相對(duì)標(biāo)樣的響應(yīng)因子。 樣品中辣椒總堿（降二氫辣椒堿、辣椒堿和二氫辣椒堿）以w2計(jì)，數(shù)值以g/mL表示，按式（A.5）計(jì)算：w2= + + （A.5） 式中：cN降二氫辣椒堿的濃度g/mL；cC,辣椒堿的濃度g/mL；cD 二氫辣椒堿的濃度g/mL。 表A.1 各辣椒堿參數(shù)各辣椒堿名稱(chēng)紫外檢測(cè)器響應(yīng)因子（UV）熒光檢測(cè)器響應(yīng)因子（FLU）相對(duì)保留時(shí)間/min降二氫辣椒堿（rN）0.980.920.90辣椒堿（rC）0.890.881.00二氫辣椒堿（rD）0.930.931.58A.5 辣椒紅素和辣椒玉紅素含量的測(cè)定A.5.1 方法提要采用高效液相色譜法，用面積歸一化法測(cè)定辣椒紅素和辣椒玉紅素的含量。A.5.2 試劑和材料A.5.2.1 丙酮：色譜純。A.5.2.2 無(wú)水硫酸鈉。A.5.2.3 氫氧化鉀-甲醇溶液：2g氫氧化鉀溶于100mL甲醇。A.5.2.4 乙醚。A.5.3 儀器和設(shè)備A.5.3.1 高效液相色譜儀：帶有二極管陣列檢測(cè)器，波譜范圍350 nm600nm。A.5.3.2 色譜柱：長(zhǎng)為250 min，內(nèi)徑為4mm的不銹鋼柱，固定相為C18。A.5.4 色譜分析條件A.5.4.1 檢測(cè)波長(zhǎng):450nm。A.5.4.2 流量：1.5mL/min。 A.5.4.3 進(jìn)樣量：5L。A.5.4.4 梯度洗脫：時(shí)間/min丙酮水-10（進(jìn)樣前）752507525575251095517955221000277525A.5.5 樣品溶液的配制稱(chēng)取0.2g樣品溶于適量丙酮中，轉(zhuǎn)移至500mL分液漏斗，加入丙酮至溶液體積為100mL，再加入100mL乙醚，混合均勻，過(guò)濾。加入100mL氫氧化鉀-甲醇溶液，靜置1h，定時(shí)搖動(dòng)。除去水相，用水洗滌有機(jī)相數(shù)次，直到洗液無(wú)色。經(jīng)無(wú)水硫酸鈉過(guò)濾，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在35以下蒸干。將干燥的色素轉(zhuǎn)移至25mL容量瓶中，用丙酮溶解定容，冷卻?？稍诜治銮坝贸暡òl(fā)生器將樣品充分溶解，經(jīng)0.45m過(guò)濾器過(guò)濾。A.5.6 分析步驟在A.5.4規(guī)定的色譜條件下，用微量注射器吸取5L試樣溶液注入進(jìn)樣閥，待最后一個(gè)組分流出完畢，用色譜工作站或積分儀進(jìn)行結(jié)果處理。出峰順序： 新葉黃素、 辣椒玉紅素、 紫黃質(zhì)、辣椒紅素、氧化玉米黃素、 玉米黃質(zhì)、類(lèi)胡蘿卜黃色素 A、玉米黃質(zhì)、隱辣椒質(zhì)、-玉米黃質(zhì)、-胡蘿卜素。A.5.7 結(jié)果計(jì)算樣品中辣椒紅素和辣椒玉紅素含量以計(jì)，數(shù)值以%表示，按式（A.6）計(jì)算：（A.6）式中：A2 試樣中辣椒紅素的峰面積數(shù)值；A3 試樣中辣椒玉紅素的峰面積數(shù)值；Ai試樣中各組分i的峰面積之和。計(jì)算結(jié)果表示到小數(shù)點(diǎn)后1位。A.6 砷的測(cè)定A.6.1 方法提要辣椒橙經(jīng)濕法消解后，制備成試樣溶液，用原子吸收光譜法測(cè)定砷的含量。A.6.2 試劑和材料A.6.2.1 硝酸A.6.2.2 硫酸溶液：1+1A.6.2.3 硝酸-高氯酸混合溶液：3+1A.6.2.4 砷（As）標(biāo)準(zhǔn)溶液：按GB/T 602配制和標(biāo)定后，再根據(jù)使用的儀器要求進(jìn)行稀釋配制成含砷相應(yīng)濃度的三種標(biāo)準(zhǔn)溶液。A.6.2.5 氫氧化鈉溶液：1g/L。A.6.2.6 硼氫化鈉溶液：8g/L(溶劑為1g/L的氫氧化鈉溶液) 。A.6.2.7 鹽酸溶液：1+10。A.6.2.8 碘化鉀溶液：200g/L。A.6.3 儀器和設(shè)備A.6.3.1 原子吸收光譜儀。A.6.3.2 儀器參考條件：砷空心陰極燈分析線(xiàn)波長(zhǎng)：193.7nm；狹縫：0.5 nm1.0nm；燈電流：6 mA10 mA 。A.6.3.3 載氣流速：氬氣 250mL/min。A.6.3.4 原子化器溫度：900。A.6.4 分析步驟A.6.4.1 試樣消解稱(chēng)取約1g試樣（精確至0.001g），置于250mL三角或圓底燒瓶中，加10mL15mL硝酸和2mL硫酸溶液，搖勻后用小火加熱趕出二氧化氮?dú)怏w，溶液變成棕色，停止加熱，放冷后加入5mL硝酸-高氯酸混合液，強(qiáng)火加熱至溶液透明或微黃色，如仍不透明，放冷后再補(bǔ)加5mL硝酸-高氯酸混合溶液，繼續(xù)加熱至溶液透明無(wú)色或微黃色并產(chǎn)生白煙（避免燒干出現(xiàn)炭化現(xiàn)象），停止加熱，放冷后加5mL水加熱至沸，除去殘余的硝酸-高氯酸(必要時(shí)可再加水煮沸一次)，繼續(xù)加熱至發(fā)生白煙，保持10min，放冷后移入100mL容量瓶（若溶液出現(xiàn)渾濁、沉淀或機(jī)械雜質(zhì)須過(guò)濾），用鹽酸溶液稀釋定容。同時(shí)按相同的方法制備空白溶液。A.6.4.2 測(cè)定量取25mL消解后的試樣溶液至50mL容量瓶，加入5mL碘化鉀溶液，用鹽酸溶液稀釋定容，搖勻，靜置15min。同時(shí)按相同的方法以空白溶液制備空白測(cè)試液。開(kāi)啟儀器，待儀器及砷空心陰極燈充分預(yù)熱，基線(xiàn)穩(wěn)定后，用硼氫化鈉溶液作氫化物還原發(fā)生劑，以標(biāo)準(zhǔn)空白、標(biāo)準(zhǔn)溶液、樣品空白測(cè)試液及樣品溶液的順序，按電腦指令分別進(jìn)樣。測(cè)試結(jié)束后電腦自動(dòng)生成工作曲線(xiàn)及扣除樣品空白后的樣品溶液中砷濃度，輸入樣品信息（名稱(chēng)、稱(chēng)樣量、稀釋體積等），即自動(dòng)換算出試樣中砷含量。平行測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不大于0.1mg/kg，取其算術(shù)平均值作為測(cè)定結(jié)果。A.7 鉛的測(cè)定A.7.1 方法提要辣椒橙經(jīng)濕法消解后，制備成試樣溶液，用原子吸收光譜法測(cè)定鉛的含量。A.7.2 試劑和材料A.7.2.1 鉛（Pb）標(biāo)準(zhǔn)溶液：按GB/T 602配制和標(biāo)定后,再根據(jù)使用的儀器要求進(jìn)行稀釋配制成含鉛相應(yīng)濃度的三種標(biāo)準(zhǔn)溶液。A.7.2.2 氫氧化鈉溶液：1g/L。A.7.2.3 硼氫化鈉溶液：8g/L(溶劑為1g/L的氫氧化鈉溶液) 。A.7.2.4 鹽酸溶液：1+10。A.7.3 儀器和設(shè)備A.7.3.1 原子吸收光譜儀 。A.7.3.2 儀器參考條件：GB 5009.12-2010 第三法 火焰原子吸收光譜法。A.7.4 分析步驟可直接采用A.6.4.1的試樣溶液和空白溶液。按GB 5009.12-2010 第三法 火焰原子吸收光譜法操作。平行測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不大于1.0mg/kg，取其算術(shù)平均值作為測(cè)定結(jié)果。A.8 總有機(jī)溶劑殘留量A.8.1 方法提要采用氣相色譜法，用內(nèi)標(biāo)法測(cè)定總有機(jī)溶劑（乙酸乙酯，甲醇，乙醇，丙酮，2-丙醇，己烷）殘留量。A.8.2 試劑和材料A.8.2.1 甲醇。A.8.2.2 內(nèi)標(biāo)物：3-甲基-2-戊酮。A.8.3 儀器和設(shè)備A.8.3.1 氣相色譜儀。A.8.3.2 檢測(cè)器：氫火焰離子化檢測(cè)器。A.8.3.3 色譜柱：石英毛細(xì)管柱，長(zhǎng)為30m，直徑為0.53mm，膜厚1m（如DB-1或能達(dá)到同等分離效果的其他毛細(xì)管柱）。A.8.4 色譜分析條件A.8.4.1 載氣：氦氣。A.8.4.2 流量：5mL/min。A.8.4.3 氣化室溫度：140。A.8.4.4 檢測(cè)器溫度：300。A.8.4.5 柱溫：35保持5min，然后以5/min 升溫至90，保持6min。A.8.4.6 進(jìn)樣量：1.0mL (分流狀態(tài)下)。A.8.5 溶液配制A.8.5.1 內(nèi)標(biāo)溶液的配制準(zhǔn)確量取50.0mL甲醇加入到50mL進(jìn)樣瓶中，密封，稱(chēng)重，然后通過(guò)隔膜注射15L3-甲基-2-戊酮，稱(chēng)重，精確至0.01mg。A.8.5.2 樣品溶液的配制準(zhǔn)確稱(chēng)取0.20g樣品加入樣品瓶中，再加入5.0mL甲醇和1.0mL內(nèi)標(biāo)溶液，60加熱10min,充分搖動(dòng)10秒鐘。A.8.5.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)溶液的配制準(zhǔn)確量取50.0mL甲醇加入到50mL樣品瓶中，密封。準(zhǔn)確稱(chēng)量，精確到0.01mg。通過(guò)隔膜注入50