項(xiàng)目二畜禽活體檢驗(yàn)技術(shù).ppt

項(xiàng)目二 畜禽活體檢驗(yàn)技術(shù),教學(xué)目的,熟悉畜禽流行病現(xiàn)狀特點(diǎn)及預(yù)防，病原菌的鑒定方法 ,病毒的分離和鑒定 掌握畜禽臨床檢疫步驟 , 病原菌的分離和培養(yǎng)方法, 各種動(dòng)物臨床檢疫要點(diǎn) ,病原菌的分離和培養(yǎng)方法,教學(xué)重點(diǎn),教學(xué)難點(diǎn),一、畜禽流行病現(xiàn)狀,1.很多病毒侵害宿主的免疫系統(tǒng) 2.動(dòng)物病原體呈現(xiàn)加速變異的趨勢(shì)，畜禽間及向人類傳播的風(fēng)險(xiǎn)也越來(lái)越大 3.環(huán)境在疫病的流行中占有重要地位 4.全球氣候變暖擴(kuò)大了傳染病的分布范圍,任務(wù)一 一般流行病的基本知識(shí),二、畜禽流行病的特點(diǎn),1.幼齡畜禽疫病突出 2.新的流行病增多 3.寄生蟲(chóng)病是放牧牲畜的主要危害,三、畜禽流行病發(fā)生的條件及預(yù)防,傳染源 指在體內(nèi)有病原體微生物、寄生蟲(chóng)生長(zhǎng)繁殖并能不斷向外界排出病原體的患病畜禽或其他動(dòng)物。 傳染途徑 就是病原體由傳染源排出，經(jīng)過(guò)一定方式再傳入其他易感動(dòng)物所經(jīng)過(guò)的途徑。 易感動(dòng)物 是指對(duì)某種傳染病、寄生蟲(chóng)病易于感染的動(dòng)物。,傳染源,傳染途徑,易感動(dòng)物,基本環(huán)節(jié),四、動(dòng)物免疫接種,1.預(yù)防接種 為了防患于未然，平時(shí)有計(jì)劃地按一定的免疫程序給健康畜群進(jìn)行的免疫接種，稱為預(yù)防接種。,2.緊急接種 和終止疾病的流行，使疫區(qū)和受威脅區(qū)尚未發(fā)病的畜禽盡快建立起特異性保護(hù)所進(jìn)行的應(yīng)急性免疫接種。,任務(wù)二 臨床檢疫,1.畜禽的群體檢查 靜態(tài)觀察 運(yùn)動(dòng)檢查 采食觀察,一、臨床檢疫步驟,2.畜禽的個(gè)體檢查 包括群體檢查時(shí)發(fā)現(xiàn)異常個(gè) 體或抽樣檢查（5%20%）的個(gè)體,1）視診 2）觸診 3）叩診 4）聽(tīng)診 5）檢查體溫、脈搏、呼吸數(shù) 6）檢查滲出物、漏出物、分泌物、病理性產(chǎn)物的顏色、質(zhì)度、氣味等,二、各種動(dòng)物臨床檢疫要點(diǎn),1.豬的臨床檢查 （1）群體檢查 1）運(yùn)動(dòng)時(shí)的檢查 2）休息時(shí)的檢查 3）采食飲水狀態(tài)的檢查,2）體溫檢查 豬患急性熱性傳染病時(shí)，在病的發(fā)生和發(fā)展期，大多表現(xiàn)體溫升高，所以在豬的檢疫中，檢查體溫是個(gè)非常必要的步驟。 在檢疫中，要把檢查體溫和其它方面的檢查結(jié)合起來(lái)進(jìn)行綜合判斷。,3）個(gè)體檢查 個(gè)體檢查的著眼點(diǎn)為 精神外貌，姿態(tài)步樣。眼、鼻、口腔及咽喉，被毛、皮膚及四蹄，肛門及排泄物，攝食及飲水，以及體溫的變化等。,2.牛的臨床檢查 （1）群體檢查 1）運(yùn)動(dòng)時(shí)的檢查,2）休息時(shí)的檢查,3）攝食飲水時(shí)的檢查,（2）體溫檢查 牛的急性傳染病和焦蟲(chóng)病等，常表現(xiàn)體溫升高，因此在牛的檢疫中，檢查體溫是一個(gè)重要步驟。 對(duì)大群牛的檢溫，一般常采用“排隊(duì)保定法”或“檢疫夾道”，在保定后再進(jìn)行測(cè)溫。測(cè)溫時(shí)為5min左右，測(cè)溫后記錄每頭牛的體溫度數(shù)。當(dāng)發(fā)現(xiàn)體溫異常時(shí)應(yīng)做上標(biāo)記，待全群檢查完畢后，再進(jìn)行復(fù)檢。,（3）個(gè)體檢查 牛個(gè)體檢疫時(shí)的著眼點(diǎn)，除精神外貌、姿態(tài)、步樣、皮膚、被毛等處，大群檢疫時(shí)還應(yīng)逐頭看牛鼻鏡是否干燥，服、鼻孔有無(wú)分泌物，嘴角是否流出唾液，被毛是否有光澤.如遇到牛排糞、尿時(shí)，也應(yīng)注意觀察其糞便的性狀等。,3.羊的臨床檢查 （1）群體檢查 1）運(yùn)動(dòng)時(shí)的檢查,2）休息狀態(tài)的檢查,3）攝食飲水時(shí)的檢查,（2）體溫檢查 羊只的疫病常有體溫升高的表現(xiàn)。因此，在羊的臨床檢疫中，進(jìn)行測(cè)溫是很重要的。 凡發(fā)現(xiàn)體溫異常者，應(yīng)及時(shí)剔出進(jìn)行細(xì)致的檢查。,（3）個(gè)體檢查 一般是以大群檢疫中剔出的疑似病羊?yàn)橹攸c(diǎn)。此外，對(duì)可疑被感染的羊只也要做某些病的重點(diǎn)檢疫。 羊個(gè)體檢疫時(shí)，還要特別注意可視黏膜及分泌物、排泄物的檢查，同時(shí)注意皮膚、被毛的檢查。,4.禽的臨床檢查 （1）大群檢疫,1）休息狀態(tài)的檢查,3）飲食時(shí)檢查,2）動(dòng)態(tài)檢查,（2）個(gè)體檢疫 禽只的檢疫以雞新城疫，禽流感、法氏囊病、雞白痢、雞傷寒、雞痘、雞傳染件喉氣管炎、雞白血病、雞馬立克氏病、鴨痘、禽巴氏桿菌病等為主要對(duì)象。,（2）個(gè)體檢疫 禽只檢疫重點(diǎn)項(xiàng)目為精神外貌，行走姿態(tài)，冠、肉髯、鼻孔、耳道、眼、嘴、嗉囊或食道膨大部，頸、體、羽毛、皮膚、泄殖孔部、呼吸及飲食狀態(tài)等。禽類除必要時(shí)測(cè)體溫外，一般不做檢查。,5.兔的臨床檢查 （1）觀察食欲 （2）觀察精神及眼色 （3）觀察耳朵 （4）觀察背毛和營(yíng)養(yǎng)狀況 （5）觀察糞便 （6）觀察體溫、呼吸,任務(wù)三 動(dòng)物病原菌實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn),一、病料的采集 分離病原菌，必須準(zhǔn)確采集含菌最多的病料，必須充分了解各種病原菌在患畜體內(nèi)及其分泌物和排泄物中的分布情況。 采集病料時(shí)應(yīng)盡可能避免雜菌污染。病料應(yīng)作顯微鏡檢查和分離培養(yǎng)。,二、病原菌的分離和培養(yǎng)方法,1.分離方法 （1）病變組織，又是用無(wú)菌方法采集的，可將病料直接涂抹在固體培養(yǎng)基平皿上，或用鉑耳環(huán)鉤取少許組織，劃線接種于瓊脂平皿上或斜面上。如果雜菌太多，可采用平皿法或毛細(xì)吸管法分離出純培養(yǎng)物。,（2）病料是痰、乳、陰道分泌物、糞、尿等材料，污染雜菌較多，則需根據(jù)分離的病原菌特性，采用一些對(duì)病原菌無(wú)害、但對(duì)雜菌有殺死作用的方法，事先處理材料，以除去雜菌，然后接種培養(yǎng)基或在培養(yǎng)基中加入一些不妨礙病原菌生長(zhǎng)，但對(duì)雜菌有抑制作用的抑菌藥物，以得到純的培養(yǎng)物。,（3）如果從腸道內(nèi)容物，或從被不產(chǎn)生 芽孢的雜菌污染的培養(yǎng)物中分離能形成芽孢的細(xì)菌,可將材料或培養(yǎng)物在80加熱15min。 （4）有些污染雜菌的病料和培養(yǎng)物，可 以通過(guò)易感動(dòng)物排除雜菌，而得到病原菌純培養(yǎng)物。,（5）液體病料，含菌太少，先作集菌處理，然后接種，以提高陽(yáng)性檢出率。 （6）有些病原菌能通過(guò)一般隔菌濾板，如鉤端螺旋體能通過(guò)石棉濾板，而其他細(xì)菌則不能隨液體病料過(guò)濾，取濾過(guò)液作培養(yǎng)，可獲得鉤端螺旋體純培養(yǎng)物。,2.培養(yǎng)方法 （1）溫度 絕大多數(shù)病原菌最適宜的生長(zhǎng)溫度是37 （2）厭氣條件 梭菌屬的病原菌 （3）CO2環(huán)境,3.分離病原菌用的培養(yǎng)基 大多數(shù)培養(yǎng)基都以肉或肝浸液為基礎(chǔ)，然后按需要加入各種成分配制成各種各樣的培養(yǎng)基,碳源,病原菌要求的營(yíng)養(yǎng)成分,氮源,無(wú)機(jī)鹽類,生長(zhǎng)因素,三、病原菌的鑒定方法,1.形態(tài)學(xué)觀察 （1）肉眼觀察要點(diǎn) 1）菌落形態(tài) 2）在半固體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)情況 3）在特殊培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)情況,（2）顯微鏡觀察要點(diǎn) 1）注意菌體的形狀、大小和排列規(guī)律 2）注意是否產(chǎn)生芽孢和芽孢的位置 3）能不能運(yùn)動(dòng) 4）有無(wú)莢膜 5）染色反應(yīng)如何,（3）細(xì)菌染色方法 常用的酸性染料有伊紅、酸性復(fù)紅、胭脂紅等。復(fù)合染料亦稱為中性染料，是堿性染料和酸性染料的結(jié)合物，如瑞氏染料中的伊紅化美藍(lán)，姬姆薩氏染料中的伊紅化天青等。,（3）細(xì)菌染色方法 最常用的染色法有革蘭氏染色、堿性美藍(lán)染色、石炭酸復(fù)紅染色、芽孢染色、莢膜染色、鞭毛染色、印度墨汁染色法、抗酸染色、改良抗酸染色、瑞特氏染色法、姬姆薩氏染色法。,2.生化特性試驗(yàn) 糖發(fā)酵試驗(yàn) 靛基質(zhì)（吲哚）試驗(yàn) VP試驗(yàn) 甲基紅（MR）試驗(yàn) 檸檬酸鹽利用試驗(yàn) 硝酸鹽還原試驗(yàn) 產(chǎn)生硫化氫試驗(yàn) 明膠液化試驗(yàn) 尿素酶試驗(yàn) 牛乳試驗(yàn) 3.血清學(xué)試驗(yàn),任務(wù)四 動(dòng)物病毒性傳染病實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn),1.待檢標(biāo)本的采集和保存 （1）拭子標(biāo)本 應(yīng)用滅菌的棉拭子采集鼻腔、咽喉、結(jié)膜、陰道或直腸內(nèi)的分泌物。蘸取分泌物后立即將拭子浸入保存液中，密封低溫保存。,一、病毒的分離和鑒定,（2）血液標(biāo)本 無(wú)菌采血后加入1/1 000（約相當(dāng)100 UL/mL）肝素做抗凝劑，也可將血液放入裝有玻璃珠的滅菌瓶?jī)?nèi)，振蕩脫纖維蛋白。需要時(shí)也可不加肝素，自然凝血后取血清做待檢標(biāo)本。,（3）組織標(biāo)本 無(wú)菌采取待檢組織35g，立即浸入保存液中，密封低溫保存。 （4）滲出物標(biāo)本 在痘皰病灶破潰前，用無(wú)菌手術(shù)吸取滲出液，混入等量保存液（可用組織標(biāo)本保存液），封閉低溫保存。也可應(yīng)用滅菌玻璃毛細(xì)吸管，無(wú)菌操作吸取皰液、膿汁或滲出液，然后在火焰下迅速熔封兩端開(kāi)口，置低溫保存。,2.待檢標(biāo)本的運(yùn)送 絕大多數(shù)病毒均對(duì)熱不穩(wěn)定，故均應(yīng)低溫保存、運(yùn)送。標(biāo)本最好在48h內(nèi)接種，在4左右保存、運(yùn)送。如48h內(nèi)不能接種時(shí)，需在-15以下保存、運(yùn)送。保持溫度恒定，溫度波動(dòng)往往對(duì)病毒有一定的滅活作用。,3.接種前待檢標(biāo)本的處理 無(wú)論采用何種分離手段，都要求接種材料盡可能無(wú)菌，并盡可能地使標(biāo)本中的病毒游離出來(lái)。,4.待檢標(biāo)本的接種 由于病毒只能在活的動(dòng)物或組織細(xì)胞內(nèi)寄生和復(fù)制，所以病毒的分離培養(yǎng)技術(shù)較細(xì)菌的分離培養(yǎng)要復(fù)雜一些。通常分離培養(yǎng)病毒的方式有動(dòng)物接種、胚胎卵接種和組織培養(yǎng)接種等。,.病毒的鑒定程序 病原鑒定的原則是在不斷觀察的基礎(chǔ)上逐漸縮小搜索范圍，以期最后的確診。 首先要詳細(xì)地進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查，口岸檢疫要了解動(dòng)物來(lái)源地的疫病流行情況。 在初步鑒定的基礎(chǔ)上，最后鑒定主要靠血清學(xué)方法，最常用的血清學(xué)方法有中和試驗(yàn)、交叉保護(hù)試驗(yàn)、補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)、血細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn)、間接血凝試驗(yàn)、免疫擴(kuò)散、免疫熒光抗體