[精品論文]旋毛蟲幼蟲侵入胃上皮細(xì)胞后蟲體與細(xì)胞.doc

精品論文旋毛蟲幼蟲侵入胃上皮細(xì)胞后蟲體與細(xì)胞蛋白變化的研究*王蕾，崔晶，田翔宇，陳夢(mèng)歡，范思洋，陳雨，劉莉娜，姜鵬，王中全5（鄭州大學(xué)寄生蟲學(xué)教研室）摘要： 目的 為了觀察旋毛蟲幼蟲對(duì)胃上皮細(xì)胞的侵入及侵入前后蟲體與細(xì)胞蛋白的變化， 篩選幼蟲侵入相關(guān)蛋白。方法 將旋毛蟲感染性幼蟲接種至胃上皮細(xì)胞（sgc-7901）單層，37 5%co2 條件下培養(yǎng)培養(yǎng)不同時(shí)間后在倒置顯微鏡下觀察幼蟲侵入情況；培養(yǎng) 18h 后10分別提取蟲體與細(xì)胞蛋白，進(jìn)行 sds-page 與 western blot 分析。結(jié)果 旋毛蟲幼蟲培養(yǎng) 6 h時(shí)已侵入細(xì)胞單層，18h 在幼蟲尾端與頭端可見鞘的形成。sds-pagd 結(jié)果表明，幼蟲與細(xì) 胞培養(yǎng)后比僅在培養(yǎng)基中培養(yǎng)的幼蟲增加了 3 條蛋白帶，減少了 4 條蛋白帶；而細(xì)胞與幼蟲培養(yǎng)后細(xì)胞蛋白增加了 3 條蛋白帶，減少了 2 條蛋白帶。western blot 分析顯示，幼蟲與細(xì)胞共培養(yǎng)后蟲體蛋白被旋毛蟲感染鼠血清多識(shí)別了 3 條蛋白帶（58、21、18kda），少識(shí)別15了 3 條蛋白帶（98、86、31 kda）；而細(xì)胞與幼蟲培養(yǎng)后細(xì)胞蛋白被旋毛蟲感染鼠血清多識(shí) 別了 6 條蛋白帶（96、62、40、34、29、22 kda），少識(shí)別了 2 條蛋白帶（98、15 kda）。結(jié)論 旋毛蟲幼蟲可侵入體外培養(yǎng)的胃上皮細(xì)胞單層；幼蟲與細(xì)胞共培養(yǎng)后被感染鼠血清多識(shí)別的蟲體與細(xì)胞蛋白可能是幼蟲分泌的侵入相關(guān)蛋白。關(guān)鍵詞： 旋毛蟲；侵入相關(guān)蛋白；胃上皮細(xì)胞；sds-page；western blot20中圖分類號(hào)：r383.15protein changes of larval and cell proteins after invasion of gastric epithelial cells by trichinella spiralis infective larvaewang lei, cui jing, tian xiangyu, chen menghuan, fan siyang, chen yu,25liu lina, jiang peng, wang zhongquan(department of parasitology, basic medical college, zhengzhou university, zhengzhou 450052, henan, china)abstract: objectiveto observe the invasion and protein changes of larval and cell proteins after invasion of gastric epithelial cells by trichinella spiralis infective larvae, and to screen the30invasion-related proteins. methods t. spiralis infective larvae were inoculated on monolayer of gastric epithelial cell (sgc-7901), the larval invasion was observed under an inverted microscopeafter culture at 37 in 5% co2 for different time. the larval and cell proteins after culture for18 h were extracted and analyzed by sds-page and western blot. resultswhen the larvaewere cultured for 6 h, the larvas head invaded cell monolayer. the anterior and posterior sheathe35of larva was observed after culture for 18 h. the results of sds-page showed after the larvae were cultured with cells, three additional protein bands were observed, and 3 protein bands was disappeared, compared with larvae cultured only in medium. after the cells were cultured with larvae, three new protein bands were observed, and two protein bands were disappeared. western blot analysis showed after the larvae were cultured with cells, three additional protein bands (58,4021, 18 kda) were recognized by sera from infected mice and three protein bands (98, 86, 13 kda) were not recognized by infection sera compared with proteins from larvae incubated in medium only. after the cells were cultured with larvae, six additional protein bands (96, 62, 40, 34, 29, 22 kda) were recognized by infection sera and two protein bands (98, 15 kda) were not recognized by infection sera. conclusions t. spiralis infective larvae invade the monolayer of gastric45epithelial cells cultured in vitro. after the larvae were cultured with cells, additional proteins of基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（no.30972579；81271860）；高校博士點(diǎn)專項(xiàng)科研基金項(xiàng)目（no.20124101110005）；國(guó)家大學(xué)生創(chuàng)新計(jì)劃項(xiàng)目（no.1210459108） 作者簡(jiǎn)介：王蕾（1988-），女，碩士研究生，旋毛蟲侵入機(jī)制 通信聯(lián)系人：王中全（1959-），男，教授，旋毛蟲侵入機(jī)制. e-mail: - 7 -larvae and cells may be the invasion-related proteins secreted by the larvae.key words: trichinella spiralis; invasion-related proteins; gastric epithelial cells; sds-page; western blot引言50旋毛形線蟲trichinella spiralis (owen,1835) railliet,1895,簡(jiǎn)稱旋毛蟲，其成蟲和幼蟲分 別寄生在同一宿主的小腸和骨骼肌細(xì)胞內(nèi)。旋毛蟲具有十分廣闊的易感宿主（哺乳動(dòng)物、鳥 類和爬行動(dòng)物），人體感染旋毛蟲是因生食或者半生食含旋毛蟲幼蟲包囊的豬肉或其他動(dòng)物 肉類而引起的。在生食或半生食感染旋毛蟲的肉類后，幼蟲在宿主胃液的作用下脫囊而出，0.9 h 內(nèi)進(jìn)入腸道發(fā)育為腸道感染性第 1 期幼蟲，然后侵入腸道柱狀上皮細(xì)胞內(nèi)，經(jīng) 30h48h55完成 4 次蛻皮后發(fā)育為成蟲，雌雄交配后產(chǎn)新生幼蟲，新生幼蟲經(jīng)淋巴或血液循環(huán)移行到肌 肉組織，幼蟲在肌肉中可以存活數(shù)年而保持其感染性1。因此，脫囊幼蟲（腸道感染性第 1期幼蟲）侵入腸粘膜內(nèi)繼續(xù)發(fā)育或是被宿主從腸道排出，是旋毛蟲能否導(dǎo)致感染與致病的關(guān)鍵步驟。由于不能在體外觀察旋毛蟲幼蟲侵入腸粘膜或腸道排蟲反應(yīng)（worm expulsion）的 詳細(xì)過(guò)程，目前關(guān)于幼蟲對(duì)腸上皮細(xì)胞的識(shí)別、侵入或排出機(jī)制均不完全清楚。體外實(shí)驗(yàn)證60實(shí)，旋毛蟲幼蟲在體外可侵入人與大鼠的大腸、小腸上皮細(xì)胞及犬腎臟上皮細(xì)胞等2, 3，但 是否能侵入胃癌細(xì)胞則不清楚。為了研究旋毛蟲能否侵入胃癌細(xì)胞及其侵入機(jī)制，本文對(duì)旋毛蟲感染性幼蟲與人胃癌細(xì)胞株（human gastric cancer sgc-7901 cells，sgc-7901）在體外 共培養(yǎng)后，應(yīng)用 sds-page 和 western blot 分析了幼蟲侵入細(xì)胞前后蟲體蛋白和細(xì)胞蛋白的變化，為尋找旋毛蟲侵入相關(guān)因子奠定基礎(chǔ)。651 材料與方法1.1旋毛蟲、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和細(xì)胞株本實(shí)驗(yàn)所用的旋毛蟲（trichinella spiralis）為河南省南陽(yáng)豬源旋毛蟲，由本室昆明小鼠 傳代保種。20 只雄性 6 周齡昆明小鼠（清潔級(jí)），體重 20g25g，均購(gòu)自鄭州大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。人胃癌細(xì)胞株 sgc-7901 購(gòu)于中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院細(xì)胞資源中心。70sgc-7901 細(xì)胞接種于 1640 完全培養(yǎng)基中含 10%胎人血清（fbs，上海尚寶公司）、100 u/ml青霉素，100 g/ml 鏈霉素中，37 5% co2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。當(dāng)細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)至 80%90%匯 合時(shí)，用 0.25% 胰蛋白酶（trypsin，北京索來(lái)寶公司）-0.02%乙二胺四乙酸鈉（edta）消化后傳代培養(yǎng)4。1.2 主要儀器和試劑75攪拌器（珠海飛利浦家庭電器有限公司），6孔培養(yǎng)板（美國(guó)costar公司產(chǎn)品），倒置顯 微鏡（olympus ix71，日本），人工消化液（含1%胃蛋白酶、0.7%鹽酸和0.85%氯化鈉），人血清白蛋白（bsa）寶信生物科技有限公司進(jìn)口分裝,1640完全培養(yǎng)基含10%胎牛血清（fetalbovine serum，fbs，上海尚寶公司）、100 u/ml青霉素，100 g/ml鏈霉素，硝酸纖維素膜（ nc膜）amersham公司 ，hrp標(biāo)記的羊抗小鼠igg (北京購(gòu)自鼎國(guó)生物技術(shù)產(chǎn)品), dab（二氨80基聯(lián)苯胺，sigma公司），synthesis 超純水系統(tǒng)（美國(guó)millipore公司），totallab tl100分 析軟件（美國(guó)syngene公司產(chǎn)品）。1.3旋毛蟲肌幼蟲的收集與激活將300條旋毛蟲肌幼蟲經(jīng)口感染昆明小鼠，感染后42 d 拉頸處死。膈肌壓片鏡檢證實(shí)感染成功后，剝皮、除內(nèi)臟和脂肪，用攪拌器攪碎數(shù)次，5s/次，至肌肉完全攪碎。將肌肉與85人工消化液按1 g10 ml混合后置于42 震蕩消化4 h，按貝氏法收集肌幼蟲，生理鹽水反復(fù) 洗滌后鏡下計(jì)數(shù)5。將肌幼蟲用含5%牛膽汁的pbs在37 5% co2條件下孵育2-3 h，用pbs 洗滌3次后，加入含抗生素的pbs（100u/ml青霉素，100g/ml鏈霉素）中37孵育1 h備用6。1.4細(xì)胞培養(yǎng)將 sgc-7901 細(xì)胞接種在 rpmi-1640 完全培養(yǎng)基均含 10% fbs（上海尚寶公司）、90100u/ml 青霉素，100g/ml 中，在 37 5% co2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)，23 d 即可形成致密的單細(xì)胞 層，用于幼蟲接種。1.5蟲體與細(xì)胞蛋白的制備將激活的幼蟲與 sgc-7901 細(xì)胞在 rpmi-1640 培養(yǎng)基培養(yǎng) 18 h 后，分別收集蟲體與95100105110115120sgc-7901 細(xì)胞，制備蟲體與細(xì)胞蛋白6，bca 法7測(cè)得幼蟲與細(xì)胞培養(yǎng)前后的蟲體蛋白濃 度分別為 1.21 mg/ml 與 2.24 mg/ml；細(xì)胞與幼蟲培養(yǎng)前后的細(xì)胞蛋白濃度分別為 3.52 mg/ml 與 2.69 mg/ml，80凍存?zhèn)溆谩?.6sds-page 與 western blot 分析采用 bio-rad 公司電泳系統(tǒng)進(jìn)行 sds-page，積層膠濃度為 5%，分離膠濃度為 12%。 將蟲體蛋白和細(xì)胞蛋白分別加入 5sds 上樣緩沖液，100水浴煮沸 10min 后離心，上樣濃度為 15 g/孔。 電泳時(shí)積層膠電壓為 80v，分離膠電壓為 120v，電泳時(shí)間 2.5 h。電泳結(jié)束 后將凝膠用 0.25%考馬斯亮藍(lán) r-250 染色 4 6h，用洗脫液（100ml 醋酸、50ml 乙酸、850mldh2o）脫色，用蛋白圖譜掃描儀（分辨率為 300 bpi，像素為 8 bits）掃描后用 gene genius凝膠圖像分析軟件分析。將凝膠用半干式電轉(zhuǎn)儀轉(zhuǎn)印至硝酸纖維素膜（nc 膜）上，電壓 20v，轉(zhuǎn)印 25 min。轉(zhuǎn) 印后將 nc 膜置于麗春紅染液中染色 5s，觀察到蛋白帶后用蒸餾水洗滌 3 次，再用 tbst 洗 滌以除去麗春紅，加封閉液（tbst+5%脫脂奶粉）4過(guò)夜，將 nc 膜用 tbst 洗滌 3 次后 加入 1：100 稀釋的一抗（旋毛蟲感染小鼠血清）培養(yǎng) 1 h；洗滌 3 次后加 1：5000 稀釋的二 抗（辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的羊抗小鼠 igg 抗體），培養(yǎng) 1h 后加入 dab 顯色 35min 后，置 蒸餾水中終止反應(yīng)。2 結(jié)果2.1旋毛蟲幼蟲對(duì) sgc-7901 細(xì)胞侵入情況的觀察 將旋毛蟲幼蟲加入培養(yǎng)細(xì)胞的單層后，發(fā)現(xiàn)經(jīng)膽汁激活的幼蟲在細(xì)胞單層上作蛇形移動(dòng)，并能侵入細(xì)胞單層；而未經(jīng)膽汁激活的幼蟲在細(xì)胞單層上仍呈盤旋狀，不能侵入細(xì)胞單 層，仍留在培養(yǎng)基中（圖 1）。激活幼蟲培養(yǎng) 6 h 時(shí)幼蟲頭部已侵入細(xì)胞單層；12h 絕大部分 蟲體全部伸展開并侵入細(xì)胞，頭尾端未見脫鞘；18 h 可見蟲體兩端帶鞘，但蟲體不能從鞘中 脫出，細(xì)胞損傷較為嚴(yán)重（圖 2）。圖 1 膽汁激活后旋毛蟲幼蟲在 sgc-7901 細(xì)胞單層上形態(tài)的變化a：經(jīng)膽汁激活后旋毛蟲在細(xì)胞單層呈蛇樣移行（200），b:未經(jīng)膽汁激活的幼蟲在細(xì)胞單層上呈盤旋狀（200）fig.1 morphological change of activated t. spiralis larvae with bile on sgc-7901 cell monolayer.a：the activated serpentine larva by bile migrated on the sgc-7901 cell monolayer（200）.b：the non-activated spiral larva without bile migrated on the sgc-7901 cell monolayer（200）125130135140145.圖 2 旋毛蟲幼蟲對(duì) sgc-7901 細(xì)胞單層的侵入情況a：培養(yǎng) 6 h 的幼蟲頭部侵入細(xì)胞單層（200，箭頭所示），b：培養(yǎng) 12h 的幼蟲侵入細(xì)胞單層（200），c： 培養(yǎng) 18 h 的幼蟲頭尾兩端可見鞘的形成（200），d：培養(yǎng) 18 h 后細(xì)胞損傷較嚴(yán)重fig. 2 invasion of sgc-7901 cell monolayer by t. spiralis larvaea： the larvas head invade cell monolayer cultured for 6 h（200）， b：invasion of cell monolayer by larvacultured for 12 h（200），c： the anterior and posterior sheathe of larva cultured for 18 h（200）， d：serious cell damage cultured for 18 h（200）2.2 幼蟲與 sgc-7901 細(xì)胞孵育后蟲體蛋白的 sds-page 與 western blot 結(jié)果在無(wú) sgc-7901 細(xì)胞的培養(yǎng)基中孵育 18h 后，幼蟲蛋白有 36 條蛋白帶，分子量為130kda12 kda。幼蟲與細(xì)胞共培養(yǎng)后，蟲體蛋白增加了 3 條蛋白帶（83、42、39 kda），減 少了 4 條蛋白帶（127、60、32、31 kda）（圖 3）。western blot 結(jié)果顯示，幼蟲僅在培養(yǎng)基中孵育 18h 后，能夠被旋毛蟲感染鼠血清識(shí)別的有 21 條帶，分子量為 131 kda 12 kda（圖4）；幼蟲與細(xì)胞孵育后蟲體蛋白能夠被旋毛蟲感染鼠血清識(shí)別的也有 21 條帶，分子量為 131 kda 12 kda。旋毛蟲幼蟲和細(xì)胞培養(yǎng)后與僅在培養(yǎng)基中培養(yǎng)的幼蟲相比，被感染鼠血清多識(shí)別了 3 條蛋白帶（58、21、18 kda），少識(shí)別了 3 條蛋白帶（98、86、31 kda）。圖 3 旋毛蟲幼蟲與 sgc-7901 細(xì)胞孵育后 18h 蟲體蛋白的 sds-page 分析m：蛋白 marker，1：幼蟲與細(xì)胞孵育后的蟲體蛋白 2：僅在培養(yǎng)基中孵育后的蟲體蛋白fig. 3 sds-page analysis of proteins of t. spiralis larvae incubated with sgc-7901 cells for 18 hm：protein marker，1：proteins of larvae incubated with cells, 2：proteins of larvae incubated only in medium150155圖 4 旋毛蟲幼蟲與 sgc-7901 細(xì)胞培養(yǎng)后蟲體蛋白的 western blot 結(jié)果m：蛋白 marker，1：與細(xì)胞孵育后的蟲體蛋白+感染鼠血清，2：培養(yǎng)基中孵育后的蟲體蛋白+感染鼠血清，3：與細(xì)胞孵育后的蟲體蛋白+正常鼠血清，4：培養(yǎng)基中孵育后的蟲體蛋白+正常鼠血清fig. 4 western blot analysis of proteins of t. spiralis larvae incubated with sgc-7901m：protein markers，1：proteins of the larvae incubated with cells + sera of the infected mice，2：proteins of thelarvae incubated only in medium + sera of the infected mice，3：proteins of the larvae incubated with cells + sera of normal mice，4：proteins of larvae incubated only in medium + sera of normal mice16016517017518023sgc-7901 細(xì)胞與幼蟲孵育后細(xì)胞蛋白的 sds-page 與 western blot 結(jié)果sds-page 結(jié)果表明，在不含幼蟲的培養(yǎng)基將 sgc-7901 細(xì)胞的培養(yǎng)孵育 18h 后， sgc-7901 細(xì)胞有 32 條蛋白帶，分子量為 134 kda 11 kda。細(xì)胞與幼蟲共培養(yǎng)后的細(xì)胞蛋 白增加了 3 條蛋白帶（96、35、25 kda），減少了 2 條蛋白帶（84、15 kda）（圖 5）。western blot 結(jié)果顯示，僅在培養(yǎng)基中孵育的 sgc-7901 細(xì)胞蛋白能夠被旋毛蟲感染鼠血清識(shí)別的有13 條帶（98 kda 11 kda）；與幼蟲孵育后的細(xì)胞蛋白能夠被旋毛蟲感染鼠血清識(shí)別的有 17條帶（96 kda 11 kda）（圖 6）。與幼蟲孵育后的細(xì)胞蛋白與僅在培養(yǎng)基孵育的細(xì)胞相比， 被旋毛蟲感染鼠血清多識(shí)別了 6 條蛋白帶（96、62、40、34、29、22 kda），少識(shí)別了 2 條蛋白帶（98、15 kda）。此外，與幼蟲孵育后的細(xì)胞蛋白能被正常鼠血清識(shí)別 1 條 46 kda 條 蛋白帶，而僅在培養(yǎng)基孵育的細(xì)胞則有 2 條蛋白帶（89、46 kda）被正常鼠血清識(shí)別。圖 5 sgc-7901 細(xì)胞與旋毛蟲幼蟲孵育后細(xì)胞蛋白的 sds-page 結(jié)果m 蛋白 marker， 1：與幼蟲孵育后的細(xì)胞蛋白，2：僅在培養(yǎng)基中孵育后的細(xì)胞蛋白fig. 5 sds-page analysis of proteins of sgc-7901 cells incubated with t. spiralis muscle larvaem：protein marker， 1：proteins of cells incubated with larvae，2：proteins of cells incubated only in medium圖 6 sgc-7901 細(xì)胞與旋毛蟲幼蟲孵育后細(xì)胞蛋白的 western blot 結(jié)果m：蛋白 marker，1：與幼蟲孵育后的細(xì)胞蛋白+感染鼠血清，2：僅在培養(yǎng)基中孵育后的細(xì)胞蛋白+感染鼠 血清，3：與幼蟲孵育后的細(xì)胞蛋白+正常鼠血清，4：僅在培養(yǎng)基中孵育后的細(xì)胞蛋白+正常鼠血清fig. 6 western blot analysis of proteins of sgc-7901 cells incubated with t. spiralis larvae m：protein markers，1：proteins of cells incubated with larvae + sera of the infected mice，2：proteins of cells incubated only in medium + sera of the infected mice，3：proteins of cells incubated with larvae + sera of normal mice，4：proteins of cells incubated only in medium + sera from normal mice3 討論人胃癌細(xì)胞株 sgc-7901 來(lái)自胃腺癌，具有胃粘膜上皮細(xì)胞的形態(tài)且能分泌粘液8，國(guó) 內(nèi)外主要用于抗腫瘤藥效、胃癌耐藥機(jī)制等研究。旋毛蟲幼蟲囊包經(jīng)口食入后，在胃內(nèi)消化185190195200205210215液的作用下，幼蟲自囊包內(nèi)逸出，鉆入十二指腸及空腸上段的腸粘膜。但對(duì)于幼蟲是否能侵 入胃粘膜則尚未見報(bào)道。本文結(jié)果表明，旋毛蟲幼蟲可侵入體外培養(yǎng)的胃腺癌 sgc-7901 細(xì)胞單層，該細(xì)胞株可作為體外研究旋毛蟲侵入機(jī)制的細(xì)胞模型。對(duì)于幼蟲是否能侵入宿主胃 粘膜，有待動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)。由于旋毛蟲缺乏侵入性的解剖結(jié)構(gòu)（如口孔無(wú)齒狀和矛狀結(jié)構(gòu)等）9，推測(cè)幼蟲對(duì)腸上 皮細(xì)胞的侵入不是簡(jiǎn)單的機(jī)械性損傷。我們的前期研究發(fā)現(xiàn)，幼蟲侵入腸上皮細(xì)胞時(shí)將幼蟲分泌的蛋白沉積在細(xì)胞內(nèi)3,6，故推測(cè)幼蟲對(duì)腸上皮細(xì)胞的侵入可能是通過(guò)幼蟲分泌的某種 蛋白或宿主細(xì)胞釋放的某些化學(xué)信號(hào)介導(dǎo)的10，11。 旋毛蟲穿透細(xì)胞膜和誘導(dǎo)的細(xì)胞膜的損傷并不一定能導(dǎo)致幼蟲的侵入，表明幼蟲的成功侵入還需要一些宿主和寄生蟲之間的信號(hào)傳導(dǎo)。膽汁對(duì)肌幼蟲的激活對(duì)幼蟲侵入腸粘膜不必可少的，可能與膽汁激活了宿主-寄生的信 號(hào)通路有關(guān)12，13。本文應(yīng)用 sds-page 對(duì) sgc-7901 細(xì)胞與激活幼蟲培養(yǎng) 18h 后的蟲體蛋 白和細(xì)胞蛋白組分進(jìn)行了分析，發(fā)現(xiàn)幼蟲與細(xì)胞共培養(yǎng)后，蟲體蛋白增加了 3 條蛋白帶（83、42、39 kda），減少了 4 條蛋白帶（127、60、32、31 kda）。western blot 結(jié)果顯示，旋毛蟲 幼蟲和細(xì)胞共培養(yǎng)后的蟲體蛋白與僅在培養(yǎng)基中培養(yǎng)的幼蟲相比，被感染鼠血清多識(shí)別了 3 條蛋白帶（58、21、18 kda），少識(shí)別了 3 條蛋白帶（98、86、31 kda）。sgc-7901 細(xì)胞與 幼蟲孵育后的細(xì)胞蛋白與僅在培養(yǎng)基孵育的細(xì)胞相比，被旋毛蟲感染鼠血清多識(shí)別了 6 條蛋 白帶（96、62、40、34、29、22 kda），少識(shí)別了 2 條蛋白帶（98、15 kda）。上述結(jié)果提示， 幼蟲與細(xì)胞培養(yǎng)后被感染鼠血清多識(shí)別的蟲體蛋白可能是細(xì)胞激活了蟲體某些基因表達(dá)的侵入相關(guān)蛋白；減少的蛋白可能是幼蟲與細(xì)胞接觸后表達(dá)這些蛋白的基因下調(diào)，也可能與蟲 體或細(xì)胞分泌的酶類水解有關(guān)10。細(xì)胞與幼蟲培養(yǎng)后被旋毛蟲感染鼠血清多識(shí)別的細(xì)胞， 可能是細(xì)胞與幼蟲接觸過(guò)程中幼蟲的 es 抗原進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)所致，而減少的蛋白可能是細(xì)胞與 幼蟲接觸后細(xì)胞釋放出了特異性的化學(xué)介質(zhì)有關(guān)。但目前關(guān)于細(xì)胞特異性化學(xué)介質(zhì)及旋毛蟲 對(duì)化學(xué)介質(zhì)的識(shí)別過(guò)程了解甚少。旋毛蟲幼蟲并不能侵入所有的細(xì)胞，如幼蟲可侵入旋毛蟲易感的人小腸與結(jié)腸上皮細(xì) 胞、鼠小腸上皮細(xì)胞及犬腎上皮細(xì)胞等，但不能侵入人肺成纖維細(xì)胞、小鼠橫紋肌成肌細(xì)胞及大鼠空腸隱窩細(xì)胞 iec-6 等2。將幼蟲與旋毛蟲易感或不易感的細(xì)胞共培養(yǎng)后，均可引起非致死性的細(xì)胞膜損傷，雖然這些損傷不一定能導(dǎo)致幼蟲的侵入，但均可使幼蟲的 es 抗原 進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。butcher 等10將旋毛蟲幼蟲與不敏感的 iec-6 細(xì)胞培養(yǎng)后，雖然幼蟲不能侵入細(xì)胞內(nèi)，但可在細(xì)胞漿與胞核內(nèi)發(fā)現(xiàn) es 抗原；若將 es 抗原加入含細(xì)胞的培養(yǎng)基中，則細(xì) 胞不能攝入 es 抗原，提示 es 抗原可能不是通過(guò)胞飲進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的，而可能是通過(guò)細(xì)胞膜的損傷幼蟲直接將 es 抗原注入細(xì)胞內(nèi)的。對(duì)于旋毛蟲不易感的細(xì)胞，幼蟲引起的單獨(dú)的細(xì) 胞膜損傷或單獨(dú)的 es 抗原進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)均不足以導(dǎo)致幼蟲侵入細(xì)胞，提示幼蟲對(duì)細(xì)胞的侵入還需要來(lái)自細(xì)胞的特異性信號(hào)。參考文獻(xiàn) (references)2202252302351 吳觀陵. 人體寄生蟲學(xué)第 3 版m. 北京：人民衛(wèi)生出版社，2005:603-618.2 manwarren t，gagliardo l，geyer j，et al. invasion of intestinal epithelia in vitro by the parasitic nematodetrichinella spiralisj. infect immun,1997,65(11):4806-4812.3 wang sw, wang zq, cui j. protein change of intestinal epithelial cells induced in vitro by trichinella spiralis infective larvaej. parasitol res, 2011, 108:593-5994 ren hj, cui j, wang zq, liu rd. normal mouse intestinal epithelial cells as a model for the in vitro invasionof trichinella spiralis infective larvaej. plos one, 2011, 6(10):e27010.5 li f, cui j，wang zq, et al. factors affecting the sensitivity of artificial digestion and its optimization forinspection of trichinella spiralis in meat j. foodborne pathog dis, 2010,7(8):879-885.6 wang zq, wang l, cui j. proteomic analysis of trichinella spira