顯微鏡使用方法.doc

實(shí)驗(yàn)一 光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造和使用方法實(shí)驗(yàn)?zāi)康?. 熟悉光學(xué)顯微鏡各部分的結(jié)構(gòu)和用途，掌握顯微鏡維護(hù)的基本知識。2. 初步掌握低倍鏡、高倍鏡和油鏡的使用方法。實(shí)驗(yàn)用品 1. 材料：羊毛裝片、血涂片、字母裝片、兔脊神經(jīng)節(jié)切片。2. 器材：顯微鏡、擦鏡紙、載玻片、香柏油、二甲苯。 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與方法 一、顯微鏡的構(gòu)造顯微鏡是一種復(fù)雜的光學(xué)儀器。它是醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)常用工具之一，其作用是將觀察的標(biāo)本放大，以便觀察和分析。一般光學(xué)顯微鏡包括機(jī)械裝置和光學(xué)系統(tǒng)兩大部分，如圖1-1所示。（一）機(jī)械裝置1. 鏡座：位于最底部的構(gòu)造，為整個顯微鏡的基座，用以支持著整個鏡體，起穩(wěn)固作用。2. 鏡柱：為垂直于鏡座上的短柱，用以支持鏡臂。3. 鏡臂：為支持鏡筒和鏡臺的呈弓形結(jié)構(gòu)的部分，是取用顯微鏡時握拿的部分。鏡筒直立式光鏡在鏡臂與其下方的鏡柱之間有一傾斜關(guān)節(jié)，可使鏡筒向后傾斜一定角度以方便觀察，但使用時傾斜角度不應(yīng)超過45，否則顯微鏡由于重心偏移容易翻ss倒。4. 調(diào)節(jié)器：也稱調(diào)焦螺旋，為調(diào)節(jié)焦距的裝置，位于鏡臂的上端（鏡筒直立式光鏡）或下端（鏡筒傾斜式光鏡），分粗調(diào)節(jié)器 (大螺旋）和細(xì)調(diào)節(jié)器（小螺旋）兩種。粗調(diào)節(jié)器可使鏡筒或鏡臺作較快或較大幅度的升降，能迅速調(diào)節(jié)好焦距,適于低倍鏡觀 察時調(diào)焦。細(xì)調(diào)節(jié)器可使鏡筒或鏡臺緩慢或較小幅度地升降，使用于在低倍鏡下用粗調(diào)節(jié)器找到物體后，在高倍鏡和油鏡下進(jìn)行焦距的精細(xì)調(diào)節(jié)，藉以對物體不同層次、深度的結(jié)構(gòu)做細(xì)致地觀察。5. 鏡筒：位于鏡臂的前方，它是一個齒狀脊板與調(diào)節(jié)器相接的圓筒狀結(jié)構(gòu)，上端裝載目鏡，下端連接物鏡轉(zhuǎn)換器。根據(jù)鏡筒的數(shù)目,光鏡可分為單筒式和雙筒式。單筒光鏡又分為直立式和傾斜式兩種,鏡筒直立式光鏡的目鏡與物鏡的光軸在同一直線上,而鏡筒傾斜式光鏡的目鏡與物鏡的中心線互成45角,在鏡筒中裝有使光線轉(zhuǎn)折45的棱鏡；雙筒式光鏡的鏡筒均為傾斜式的。6. 物鏡轉(zhuǎn)換器：又稱旋轉(zhuǎn)盤，位于鏡筒下端的一個可旋轉(zhuǎn)的凹形圓盤上，一般裝有24個放大倍數(shù)不同的接物鏡。旋轉(zhuǎn)它就可以轉(zhuǎn)換接物鏡。旋轉(zhuǎn)盤邊緣有一定卡，當(dāng)旋至物鏡和鏡筒成直線時，就發(fā)出“咔”的響聲，這時方可觀察玻片標(biāo)本。7. 鏡臺：也稱載物臺,是位于鏡臂下面的平臺，用以承放玻片標(biāo)本。載物臺中央有一圓形的通光孔，光線可以通過它由下向上反射。8. 標(biāo)本推進(jìn)器：位于鏡臺的后方或側(cè)面邊緣，連一可動弧形彈簧夾。其上方或下方一側(cè)有兩個旋鈕，轉(zhuǎn)動旋鈕可調(diào)節(jié)推進(jìn)器，使玻片標(biāo)本前后或左右移動。標(biāo)本推進(jìn)器上有縱橫游標(biāo)尺，用以測定標(biāo)本在視野中的方位及其大小。游標(biāo)尺一般由主標(biāo)尺(a)和副標(biāo)尺(b)組成。副標(biāo)尺的分度為主標(biāo)尺的9/10。使用時，首先看副標(biāo)尺的0點(diǎn)位置。然后看主、副標(biāo)尺的一致點(diǎn)。如圖i-2所示，副標(biāo)尺的0點(diǎn)主標(biāo)尺的26與27之間，副標(biāo)尺的6與主標(biāo)尺的32一致，即6與主標(biāo)尺上的一個分度線正對，則此標(biāo)尺所表示的數(shù)值為26.6mm。 圖1-2 游標(biāo)尺的用法 (二)光學(xué)系統(tǒng)1. 反光鏡：是裝在鏡臺下面、鏡柱前方的一面可轉(zhuǎn)動的圓鏡，它有平凹兩面。平面鏡聚光力弱，適合光線較強(qiáng)時使用。凹面鏡聚光力強(qiáng)，適于光線較弱時使用。轉(zhuǎn)動反光鏡，可將光源反射到聚光鏡上，再經(jīng)鏡臺中央圓孔照明標(biāo)本。2. 聚光鏡：在鏡臺下方，是一組透鏡，用以聚集光線增強(qiáng)視野的亮度。鏡臺上方有一調(diào)節(jié)旋鈕，轉(zhuǎn)動它可升降聚光鏡。往上升時增強(qiáng)反射光，下降時減弱反射光。3. 可變光欄：是在聚光鏡底部的一個圓環(huán)狀結(jié)構(gòu)。它裝有多片半月形的薄金屬片，疊合在中央成圓孔形。在圓環(huán)外緣有一突起的小柄，撥動它可使金屬片分開或合攏，用以控制光線的強(qiáng)弱，使物像變得更清晰。4. 目鏡：裝在鏡筒上端，其上一般刻有放大倍數(shù)(如5，10)。目鏡內(nèi)常裝有一指示針，用以指示要觀察的某一部分 。圖1-1 顯微鏡的結(jié)構(gòu)1.目鏡 2.鏡筒 3.物鏡轉(zhuǎn)換器 4.物鏡 5.通光孔 6.聚光器 7.光圈8.反光鏡 9.粗調(diào)節(jié)器 10.細(xì)調(diào)節(jié)器 11.鏡臂 12.推進(jìn)器 13.載物臺14.傾斜關(guān)節(jié) 15.鏡柱 16.鏡座 17. 照明裝置 18.粗調(diào)限位環(huán)凸柄 標(biāo)本推進(jìn)器上有縱橫游標(biāo)尺，用以測定標(biāo)本在視野中的方位及其大小。游標(biāo)尺一般由主標(biāo)尺(a)和副標(biāo)尺(b)組成。副標(biāo)尺的分度為主標(biāo)尺的9/10。使用時，首先看副標(biāo)尺的0點(diǎn)位置。然后看主、副標(biāo)尺的一致點(diǎn)。如圖i-2所示，副標(biāo)尺的0點(diǎn)主標(biāo)尺的26與27之間，副標(biāo)尺的6與主標(biāo)尺的32一致，即6與主標(biāo)尺上的一個分度線正對，則此標(biāo)尺所表示的數(shù)值為26.6mm。5. 物鏡：裝在物鏡轉(zhuǎn)換器上，一般分低倍鏡、高倍鏡和油鏡三種。低倍鏡鏡體較短，放大倍數(shù)?。桓弑剁R鏡體較長，放大倍數(shù)較大；油鏡鏡體最長，放大倍數(shù)最大（在鏡體上刻有數(shù)字，低倍鏡一般有4、10，高倍鏡一般有40、45，油鏡一般是90、100，表示放大倍數(shù)）。 顯微鏡放大倍數(shù)的計(jì)算：目鏡放大倍數(shù)物鏡放大倍數(shù)=顯微鏡對實(shí)物的放大倍數(shù)。二、顯微鏡的使用方法(一)低倍鏡的使用1. 把顯微鏡放在桌面的左側(cè)，鏡臂對向胸前，坐下進(jìn)行操作。用手轉(zhuǎn)動粗調(diào)螺旋，使鏡筒上升，然后轉(zhuǎn)動物鏡轉(zhuǎn)換器，使低倍鏡對準(zhǔn)鏡臺中央圓孔（當(dāng)轉(zhuǎn)動到聽見“咔”聲響，或同時亦感到有阻力時立即停止轉(zhuǎn)動，說明物鏡已與鏡筒成一直線）。2. 對光：撥動聚光鏡底部圓環(huán)的小柄，使光欄完全打開。旋轉(zhuǎn)聚光鏡升降螺旋，使聚光鏡上升到和鏡臺相平。用左眼（兩個眼睛都要睜開）在目鏡上觀察，同時用手調(diào)整反光鏡，對好光源。要求視野達(dá)到完全均勻明亮。3. 放置玻片標(biāo)本：取蛙血玻片標(biāo)本放在鏡臺上，有蓋玻片的一面朝上。玻片兩端用移動器夾住，然后轉(zhuǎn)動螺旋，使玻片上要觀察的標(biāo)本對準(zhǔn)鏡中央圓孔。注意，鏡臺上的刻度可以標(biāo)示玻片的坐標(biāo)位置。4. 調(diào)節(jié)物距：轉(zhuǎn)動粗調(diào)螺旋，使低倍鏡距玻片標(biāo)本0.5mm左右。注意：必須從顯微鏡側(cè)面觀察物鏡與玻片的距離。切勿用眼在目鏡上觀察的同時轉(zhuǎn)動粗調(diào)螺旋，以防鏡頭碰撞玻片造成損壞。用左眼從目鏡上觀察，用手慢慢轉(zhuǎn)動粗調(diào)螺旋下降鏡臺，當(dāng)視野中出現(xiàn)物像時，再調(diào)節(jié)細(xì)調(diào)螺旋，直至視野中出現(xiàn)清晰的物像（許多橢圓形的紅細(xì)胞）為止。如果物像不在視野中央，可稍微移動玻片位置（注意：移動玻片的方向與觀察物像移動的方向恰好是相反的）。 反復(fù)練習(xí)上述各操作步驟，做到迅速熟練地找到標(biāo)本，以及取光合適（即較熟練的應(yīng)用反光鏡、光欄和聚光鏡）。(二)高倍鏡的使用1. 一定要先在低倍鏡下找到要觀察的標(biāo)本物像后，并把要放大的部分移至視野正中，同時調(diào)節(jié)到最清晰程度，才能進(jìn)行高倍鏡的觀察。2. 轉(zhuǎn)動物鏡轉(zhuǎn)換器，使高倍鏡轉(zhuǎn)到鏡臺中央圓孔處。轉(zhuǎn)換高倍鏡時速度要慢，要細(xì)心，并從側(cè)面進(jìn)行觀察（防止高倍鏡碰撞玻片）。如果高倍鏡碰到玻片，說明低倍鏡的物距沒有調(diào)節(jié)好，應(yīng)重新進(jìn)行操作。3. 調(diào)節(jié)物距：轉(zhuǎn)換好高倍鏡后，用左眼在目鏡上觀察。這時物像往往不清楚、或者要觀察的部分不在視野當(dāng)中，可用細(xì)調(diào)螺旋慢慢向上或向下轉(zhuǎn)動（切勿用粗調(diào)螺旋）即能清楚看到物像。一般只需轉(zhuǎn)動半圈或一圈就能達(dá)到要求。在高倍鏡下，可見蛙血紅細(xì)胞呈橢圓形，外被細(xì)胞膜，膜內(nèi)為淺紅色細(xì)胞質(zhì)，中央有一圓形呈藍(lán)紫色的細(xì)胞核。(三)油鏡的使用1. 首先在高倍鏡下找到所要觀察的標(biāo)本后，把所要觀察的部分移至視野中央。2. 轉(zhuǎn)動物鏡轉(zhuǎn)換器，移開高倍鏡，在標(biāo)本上所要觀察的位置加一滴鏡油（香柏油）。3. 轉(zhuǎn)動物鏡轉(zhuǎn)換器，轉(zhuǎn)換油鏡，使之對準(zhǔn)鏡臺中央圓孔處，浸在油滴中。4. 轉(zhuǎn)換好油鏡后，用左眼在目鏡上觀察。物像如不清楚，可用細(xì)調(diào)螺旋慢慢向上或向下轉(zhuǎn)動，即能清楚地看到物像。如仍看不清標(biāo)本，需重新用低倍鏡、高倍鏡觀察，然后再轉(zhuǎn)換油鏡。5. 觀察完標(biāo)本后，用滴加上二甲苯的擦鏡紙擦拭干凈油鏡鏡頭，再用另一張清潔的擦鏡紙蓋在玻片標(biāo)本上，滴上12滴二甲苯，輕拉擦鏡紙，將玻片上的鏡油擦去。注意，勿擦壞標(biāo)本。三、使用顯微鏡注意事項(xiàng)1. 持鏡時要一手緊握鏡臂，一手托住鏡座，絕不能一把提起顯微鏡便走，以防目鏡從鏡筒滑出或反光鏡脫落。2. 輕拿輕放，不要把顯微鏡放在實(shí)驗(yàn)臺邊緣，防止碰翻落地。3. 顯微鏡光學(xué)系統(tǒng)部件要用清潔的擦鏡紙輕輕揩擦，切勿口吹、手抹或用粗布揩擦。4. 使用時先用低倍鏡調(diào)整光線。觀察活體標(biāo)本或染色較淺的標(biāo)本時，要適當(dāng)關(guān)小可變光欄便視野變暗，方能看得清楚。5. 放置玻片標(biāo)本時要對準(zhǔn)鏡臺孔正中央，并且不能反放玻片，如標(biāo)本玻片反放時高倍鏡下看不到物像，并容易壓壞玻片或物鏡。6. 觀察時要雙目睜開，切勿閉上一只眼睛。左眼觀察視野，右眼用以繪圖。低倍鏡用粗調(diào)螺旋調(diào)節(jié)物距，高倍鏡要用細(xì)調(diào)螺旋，粗、細(xì)調(diào)節(jié)螺旋都不能單方向過度地旋轉(zhuǎn)。單向上升粗調(diào)螺旋會壓碎鏡片和損壞物鏡。7. 不要隨便取出目鏡，以防塵土落人物鏡上。也不要任意拆卸任何零件，以防損壞。8. 使用完畢后，轉(zhuǎn)動粗調(diào)螺旋使鏡臺下降，取下玻片，轉(zhuǎn)動物鏡轉(zhuǎn)換器，使物鏡離開聚光孔。再上升鏡臺使物鏡接近鏡臺（不要對著鏡臺孔）。然后以右手握鏡臂，左手托鏡座輕輕放人鏡箱中。9. 每次使用顯微鏡之前，先按顯微鏡登記卡片逐項(xiàng)檢查顯微鏡各部分有無損壞。如發(fā)現(xiàn)損壞，應(yīng)及時向教師報(bào)告。使用之后，認(rèn)真填寫顯微鏡使用登記卡片。四、操作練習(xí)（一）低倍鏡、高倍鏡的使用練習(xí)1. 觀察文字或字母裝片：取一片字母裝片，用低倍鏡觀察，反復(fù)練習(xí)對光、調(diào)光、標(biāo)本放置和調(diào)節(jié)焦距等。如將玻片前后左右移動時，注意物像與玻片移動方向是否一致，玻片上的字母是正像還是反像，為什么?2. 觀察羊毛片（或頭發(fā)）交叉裝片：取一張毛（發(fā)）交叉裝片，先用低倍鏡觀察，找到兩根毛（發(fā)）后，再將毛（發(fā)）交叉點(diǎn)移到視野中央，然后換高倍鏡觀察，再輕微轉(zhuǎn)動細(xì)調(diào)節(jié)器，觀察不同層次，判定哪條毛（發(fā)）在上方，哪條位于下方。 （二）油鏡的使用練習(xí)1. 取一張血涂片或取血一小滴，滴于清潔的載玻片一端，另取一張邊緣平整的載玻片，按照圖1-3所示做成血涂片。先用低倍鏡再用高倍鏡進(jìn)行觀察。 圖1-4 蛙血涂片圖 1-5 運(yùn)動神經(jīng)細(xì)胞2. 用油鏡觀察，并分辨紅細(xì)胞、白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞，比較三種物鏡的放大倍數(shù)和分辨率。3. 觀察兔脊神經(jīng)節(jié)切片（示固定染色的細(xì)胞）取兔脊神經(jīng)節(jié)切片標(biāo)本先在調(diào)好光線的低倍鏡下觀察（固定染色的標(biāo)本需調(diào)較亮光線），低倍鏡下找到要觀察的標(biāo)本，為淡紫色的神經(jīng)節(jié)切面，在其外圍包有被膜，且向內(nèi)伸入，形成神經(jīng)節(jié)的結(jié)締組織支架，節(jié)內(nèi)有許多大小不等的神經(jīng)細(xì)胞，呈散在分布。然后轉(zhuǎn)換高倍鏡，選擇完整而清晰的圓形 圖 1-6感覺神經(jīng)細(xì)胞神經(jīng)細(xì)胞仔細(xì)觀察其內(nèi)部結(jié)構(gòu)?？梢姷皆诩?xì)胞中央有一圓形核，核內(nèi)有著色為深紫紅色的圓形核仁及染色質(zhì)顆粒，核與細(xì)胞膜之間是均勻淺紫色的細(xì)胞質(zhì)，在細(xì)胞的外面圍有若干個被囊細(xì)胞，它起保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞的作用。在神經(jīng)細(xì)胞之間還可看到有軸索橫斷面和許多神經(jīng)纖維，多呈交錯排列。s圖1-3血涂片的制備方法4. 觀察完畢，務(wù)必將油鏡按正確方法擦凈。五、其它幾種顯微鏡簡介 目前在生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究中，常用的顯微鏡，還有以下幾種：1. 雙筒解剖顯微鏡：解剖較小標(biāo)本或觀察玻片標(biāo)本的全貌時，需使用解剖顯微鏡，以觀察自然狀態(tài)下較小的實(shí)體（正像）和較大的玻片標(biāo)本，或解剖細(xì)小生物。2. 暗視野顯微鏡：是一種具有暗視集中器或中央遮光板的顯微鏡。即在聚光鏡上加一特殊裝置，使光線從集光器透鏡的邊緣衍射或反射到標(biāo)本上，經(jīng)標(biāo)本反射投入物鏡內(nèi)，使整個視野變暗，故能在視野中見到被檢物體衍射之圖像。這種顯微鏡可觀察運(yùn)動著的有機(jī)體。3. 熒光顯微鏡：其特點(diǎn)是以紫外光為光源，利用紫外光照射，使標(biāo)本內(nèi)的熒光物質(zhì)激發(fā)出不同顏色的熒光，以研究標(biāo)本內(nèi)某些物質(zhì)的特征和位置。有些物質(zhì)本身能發(fā)出熒光，有些物質(zhì)需經(jīng)熒光染料染色后才能發(fā)出熒光。4. 相差顯微鏡：活細(xì)胞在普通光鏡下，一般不能分辨其細(xì)微結(jié)構(gòu)。這是由于各細(xì)微結(jié)構(gòu)的折光性很近似或?qū)Ρ炔粔蝻@著的緣故。相差顯微鏡則是在聚光器下裝一個環(huán)狀光欄，其物鏡是安有相板的相差物鏡。環(huán)狀光欄的作用是造成空心的光線錐，使直射光和衍射光分離。相板的作用是使直射光和衍射光發(fā)生干涉