梅毒血清學檢測的操作規(guī)范

梅毒血清學檢測的操作規(guī)范,主要內容,梅毒概述梅毒血清學檢測方法梅毒檢測技術規(guī)范,梅毒是一種幾乎可以侵犯全身所有器官，而產生多種癥狀和體征的慢性傳染性疾病。十六世紀初由歐洲傳入亞洲，后蔓延我國。梅毒又稱為楊梅瘡、廣東瘡、疳瘡、下疳、霉瘡等。,梅毒概述,梅毒螺旋體生物學特征,病原體為蒼白密螺旋體蒼白亞種,不易著色直徑 0.100.15m，有814個致密而規(guī)則的 小螺旋，兩端尖直，運動活躍，運動方式多樣抵抗力極弱，對溫度和干燥特別敏感對青抗生素敏感,梅毒傳播途徑性傳播,性接觸是主要傳染途徑未經治療的患者在感染后1年內具有傳染性隨著病期的延長，傳染性越來越小感染后2年，通過性接觸一般無傳染性,梅毒傳播途徑母嬰傳播,妊娠7周時，梅毒螺旋體即可通過胎盤傳播未經治療者，雖已無性傳播（病期2年），但妊娠時仍可傳染胎兒，病期越長，傳染性越小,梅毒傳播途徑其他途徑,輸血傳播接觸傳播 接觸部位附有梅毒螺旋體日常用品、接吻、哺乳、醫(yī)療器械等途徑,梅毒的分期,一期梅毒硬下疳和/或腹股溝淋巴結腫大二期梅毒病期在2年內有多形性皮疹等三期梅毒病期在2年以上，可有皮膚黏膜損害等隱性（潛伏）梅毒胎傳（先天）梅毒,梅毒的診斷,病史癥狀實驗室檢查梅毒的實驗室檢查對診斷有重要意義,梅毒實驗室檢測技術,病原學檢測血清學檢測,梅毒實驗室檢測的特點,臨床表現 取材部位 檢查方法一期梅毒 潰瘍 淋巴結 病原學檢查 血液 血清學檢查二期梅毒 皮損 淋巴結 病原學檢查 血液 血清學檢查 潛伏梅毒 血液 血清學檢查三期梅毒 血液 血清學檢查 神經梅毒 血液 血清學檢查 腦脊液 細胞、蛋白量檢查VDRL等,梅毒的病原學檢測-顯微鏡檢測法,暗視野顯微鏡檢查鍍銀染色檢查,暗視野顯微鏡檢查,標本類型：梅毒硬下疳、扁平濕疣、黏膜斑等皮損的滲出液、淋巴結穿刺液,鍍銀染色檢查,基本原理：梅毒螺旋體具有親銀性，可被銀溶液染色，從而可以在鏡下觀察到梅毒螺旋體結果：棕褐色的梅毒螺旋體,非梅毒螺旋體抗原血清學檢測（非特異性梅毒抗體）梅毒螺旋體抗原血清學檢測（特異性梅毒抗體）,梅毒血清學檢測分類,非梅毒螺旋體抗原血清學檢測,原理人感染梅毒螺旋體后，組織受到破壞釋放一種類脂成分，與梅毒螺旋體結合形成完全抗原，刺激機體在34周時產生類脂質抗體（反應素）?？贵w的作用治療監(jiān)測和療效監(jiān)測無保護作用,VDRL(性病研究實驗室試驗)USR（不加熱血清反應素試驗）RPR(加速血漿反應素環(huán)狀卡片試驗)TRUST(甲苯胺紅不加熱血清試驗),非梅毒螺旋體抗原血清學檢測方法,抗原基本成分為心磷脂、卵磷脂和膽固醇抗原抗體集合形成復合物，凝集成網狀肉眼可見的沉淀顆粒試驗方法敏感性和特異性基本相似操作簡單，價格便宜可定量檢測,非梅毒螺旋體抗原血清學試驗,四種非特異性試驗方法比較,非梅毒螺旋體抗原血清試驗,RPR/TRUST基本原理：在心磷脂、卵磷脂和膽固醇等組成的抗原中加入活性炭/甲苯胺紅，與待檢血清中的反應素結合，形成肉眼可見的紅色絮狀物。,試驗所需儀器,測速要求：1002轉/分鐘,試驗操作定性檢測,(1)加樣：吸取50L血清/漿放在卡片圈中，并均勻地涂布在整個圈中 (2)加抗原：將抗原輕輕搖勻，用9號針頭加1滴抗原（16.7ul） (3)反應：將卡片置水平旋轉儀旋轉8分鐘，立即在亮光下觀察結果,結果判讀,RPR,TRUST,TRUST凝集反應強度分級,+：抗原顆粒呈粗大團塊，凝結+：抗原顆粒中等團塊、凝結+：顆粒凝結，與清亮液體呈明顯反差+：抗原顆粒凝結、均勻肉眼可見：抗原顆粒細小凝結，肉眼可辨：圓圈內僅見紅色集中于中央一點或均勻分散。,試驗操作定量檢測,（1）稀釋液準備：在圈內加入50L生理鹽水（根據需要確定稀釋度），勿將鹽水涂開。 （2）加樣：吸取50L血清與各圈中生理鹽水做系列稀釋，并涂布整個圈內。 （3）余同定性試驗中。,孔 號 1 2 3 4 5 6 7 8 稀釋倍數 原倍 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 陽性K 陰性K生理鹽水(ul) - 50.0 50.0 50.0 50.0 50.0 - -樣 品(ul) 50.0 50.0 50.0 50.0 50.0 50.0棄50.0 - -陽性血清(ul) - - - - - - 50.0 -陰性血清(ul) - - - - - - - 50.0抗原懸液(ul) 16.7 16.7 16.7 16.7 16.7 16.7 16.7 16.7,定量檢測操作步驟,非梅毒螺旋體抗原檢測意義,早期梅毒硬下疳出現12周后，血清學可呈陽性梅毒患者經治療后血清滴度可下降并轉陰性，故可作為療效觀察、判愈、復發(fā)或再感染的指征為什么要做定量檢測？滴度常與病情活動相關，滴度改變4倍具有臨床意義,技術性標本的污染溶血操作失誤生物學假陽性患者有其他疾病，使梅毒血清試驗出現陽性生理機能發(fā)生變化：少數孕婦也可發(fā)生生物學假陽性,梅毒血清試驗假陽性因素：,急性生物學假陽性反應的疾病,麻疹、風疹、水痘、牛痘疹傳染性單核細胞增多癥傳染性肝炎上呼吸道感染、猩紅熱肺炎鏈球菌肺炎、病毒性肺炎其他，如亞急性心內膜炎、斑疹傷寒等,急性生物學假陽性的特點,滴度低，一般低于1:8持續(xù)時間短，多在疾病消退后6日內轉陰用梅毒螺旋體抗原血清試驗檢測陰性,慢性生物學假陽性反應的疾病,系統(tǒng)性紅斑狼瘡、盤狀紅斑狼瘡干燥綜合征、類風濕性關節(jié)炎自身免疫學溶血性貧血、橋本氏甲狀腺炎風濕性心臟病、慢性腎炎、肝硬化系統(tǒng)性硬化癥、毒品癮者孕婦、老年人,慢性生物學假陽性特點,可持續(xù)6個月以上，甚至終身滴度低，一般低于1:8用梅毒螺旋體抗原血清試驗檢測呈陰性,梅毒血清反應假陰性,前帶現象：在非梅毒螺旋體抗原血清試驗中，二期梅毒患者血清中存在高濃度的抗體時出現的弱陽性或陰性反應的結果。若將血清稀釋后再進行試驗即可出現陽性結果合并HIV感染的梅毒患者，梅毒血清試驗可呈陰性技術操作,血清固定（耐血清性）,指經抗梅毒治療后，非梅毒螺旋體抗原血清試驗在一定時期內不陰轉早期的血清固定常與治療量不足或不規(guī)則治療、復發(fā)、再感染或有神經系統(tǒng)性梅毒有一定的關系,FTA-ABSTPPA/ TPHATP-ELISA發(fā)光法膠體金法,梅毒螺旋體抗原血清學檢測,TPPA基本原理,TPPA稱為梅毒螺旋體明膠凝集實驗用超聲裂解梅毒螺旋體制備抗原，致敏明膠顆粒致敏粒子與待檢血清中的抗梅毒螺旋體特異性抗體結合產生肉眼可見的凝集。,TPPA操作步驟,試劑準備：恢復室溫加稀釋液：每份樣本做4孔，加標本稀釋液加至微量反應板孔內，第1孔100L，第24孔各25L樣本稀釋：取血清25L加至第1孔，混勻后取25L至第2孔，混勻后取25L至第3孔，混勻后取25L至第4孔，混勻后棄去25L加對照液：第3孔加未致敏顆粒25L，第4孔加致敏 顆粒25L混合：將反應板置振蕩器振蕩30秒反應：孵育2h觀察結果,TPPA結果判讀,觀察第3孔，不出現凝集為有效試驗,TPPA結果判斷,觀察凝集反應強度：分級如下 4+3+：顆粒光滑覆蓋整個孔底，有時邊緣有折疊 2+：顆粒光滑集聚覆蓋孔底，周圍有一顆粒環(huán) 1+：顆粒光滑集聚覆蓋孔底，周圍有一明顯顆粒環(huán) ：顆粒模糊覆蓋，邊緣有明顯的小環(huán) 一：顆粒緊密沉積孔底中央或形成一小點,梅毒螺旋體抗原檢測意義,優(yōu)點敏感性高，特異性強對非特異性試驗進行證實缺點通常終身持續(xù)陽性不能區(qū)分現癥感染和既往感染不能作為療效觀察指標,梅毒血清學試驗結果解釋,先天梅毒的實驗室診斷,暗視