重樓組織培養(yǎng)及快速繁殖開題報告

重樓組織培養(yǎng)及快速繁殖,開 題 報 告,報 告 者：楊蘇文年 級： 醫(yī)學(xué)生物技術(shù)2005級實習(xí)單位：貴陽醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)生物技術(shù)教研室指導(dǎo)老師：劉紅美博士,內(nèi)容概括,野生重樓實物圖,重樓的屬性及研究現(xiàn)狀,1、重樓的屬性 重樓屬百合科，是多年生的草本植物。全世界該屬植物約有20種10變種和若干變型，分布于歐亞大陸的熱帶至溫帶地區(qū)。 我國主產(chǎn)于云南、貴州、四川、廣西等地。 本屬植物主要以根莖入藥，它具有清熱解毒、消腫止痛、涼肝定驚、止血、抗腫瘤、抗生育、免疫調(diào)節(jié)等多方面的功效。,重樓形態(tài)葉通常七片,輪生于莖頂,頂端著生一花,故而得名七葉一枝花。分布于海拔700-3200米的地區(qū)，夏秋采挖。野生重樓靠種子和根莖繁殖，種子繁殖需5-7年才能采挖。,2、市場經(jīng)濟分析,長期以來，人們對重樓的利用一直依靠天然野生資源，但是由于本屬植物生長緩慢，每年生長量非常小，由于長期過度的掠奪式的采挖，每年的消耗遠遠超出野生重樓的生長量。,據(jù)云南白藥集團2008年調(diào)查資料顯示，分布于我國境內(nèi)的野生重樓80 已被開采利用，剩下的20按目前國內(nèi)外市場的需求量測算，大約僅可用35年。,常言道：物以稀為貴，黃金有價藥無價。故重樓價格節(jié)節(jié)攀升。,96 01 03 06 08,21,110,38,25,170,（元/公斤）,（年）,1996年2008年重樓市場價格走勢,在國內(nèi)，不少知名企業(yè)所生產(chǎn)的藥品中，主藥都包含有重樓。,云南白藥集團的白藥中，君藥就是重樓四川光大制藥廠“非典”時名聲大震的抗病毒沖劑中也是重用重樓江蘇南通制藥總廠出品的季德勝蛇藥片，其中用的主藥七葉一枝花及為重樓,據(jù)了解，僅國內(nèi)幾家大型中成藥制藥廠對重樓的年需求量就達1500噸左右，醫(yī)院和中藥店配方需求量達1000噸左右，而全國野生重樓年收購量不足1500噸。造成重樓的供求矛盾在逐漸加劇。,近幾年，許多地方雖已開始重樓的人工栽培，但重樓種子萌發(fā)時間長，出苗率低，而采用根莖直接種植或根莖切段種植，也需要用大量的原料藥。因此，會加劇用種與原料藥的矛盾。,為了解決這些問題，人們在尋求新方案時，想到了運用植物組織培養(yǎng)的方法來生產(chǎn)重樓。這一技術(shù)的開發(fā)成功，將會為人工栽培提供大量的種苗，進而解決了資源保護和市場供需的問題。,目前，關(guān)于重樓組織培養(yǎng)的研究報道屈指可數(shù)，并且還沒有一套完整的重樓組織培養(yǎng)至移栽存活的體系。因此，為了解決資源保護和市場需求的問題，對于重樓組織培養(yǎng)及快速繁殖的研究將刻不容緩。,主要參考文獻：,1 李群，葛方蘭，王麗. 重樓屬植物初代培養(yǎng)過程中無菌培養(yǎng)物的建立J. 四川師范大學(xué)學(xué)報：自然科學(xué)版，2003，26（6）：624-626.2 李群，陳麗萍，葛方蘭. 重樓屬植物愈傷組織的誘導(dǎo)和培養(yǎng)J. 四川師范大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2006 ，29（1）。3 楊麗云，陳翠，呂麗芬，袁理春. 云南重樓的組織培養(yǎng)與植株再生J. 植物生理學(xué)通訊.2008，44（5）。4 劉旭，陳玉菡，吳中應(yīng)，羅川. 重樓市場需求與價格分析.中國現(xiàn)代中藥.2007，9（6）5侯玉平，胡曉立等. 滇重樓切塊繁殖不定芽發(fā)生的組織學(xué)研究.云南大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版）.2004，26（6）.,1、內(nèi)容簡要,1.1本實驗以重樓的頂芽、葉、莖、根莖、根為主要外植體，通過調(diào)控不同的激素配比來篩選出最佳培養(yǎng)基類型（愈傷組織誘導(dǎo)、不定芽的誘導(dǎo)、增值及生根培養(yǎng)基）。1.2將瓶內(nèi)生根的再生植株，通過馴化，移栽到自然條件下的栽培基質(zhì)中，獲得優(yōu)質(zhì)健壯的種苗。,2、研究方法,主要是依托植物組織培養(yǎng)技術(shù)，利用植物細胞的全能性，對野生重樓的無性繁殖，獲得大量的優(yōu)良種苗。,3、研究步驟,3.1 無菌體系的建立; 3.2 誘導(dǎo)愈傷組織培養(yǎng)基的篩選;3.3 增殖培養(yǎng)基的篩選;3.4 生根培養(yǎng)基的篩選;3.5 馴化移栽;,4、技術(shù)路線,外植體,滅菌,無菌外植體,愈傷組織,誘導(dǎo),增殖,不定芽,誘導(dǎo),生根,馴化,移栽,成熟種苗,5、可能出現(xiàn)的技術(shù)問題及解決方案,（1）外植體滅菌困難。解決方法： 可先用200mg/L羧芐西林鈉和頭胞唑林鈉進行抑菌，再拿到超凈工作臺中進行滅菌處理。,（2）愈傷組織難誘導(dǎo)，易出現(xiàn)褐化現(xiàn)象。解決方法：通過多種激素不同搭配地方法進行篩選，從而選擇出最佳的培養(yǎng)基。對于褐化現(xiàn)象，我們可以加入活性炭等方法，降低褐化現(xiàn)象。（3）生根后，移栽不易存活。解決方法：通過組織培養(yǎng)的種苗要經(jīng)過從異養(yǎng)到自養(yǎng)的過渡階段，如在此階段注意種苗的保濕以及防止其感染微生物而腐爛，就能夠成活。,6 預(yù)期結(jié)果：6.1獲得重樓誘導(dǎo)愈傷組織、分化不定芽、誘導(dǎo)生根的最適培養(yǎng)基。6.2記錄誘導(dǎo)愈傷組織的誘導(dǎo)率，增值倍數(shù)，誘導(dǎo)生根的時間、數(shù)量、直徑和長度。6.3獲得馴化、移栽的存活率。6.4建立重樓無性快速繁殖體系。,預(yù)期結(jié)果：6.1 獲得重樓誘導(dǎo)愈傷組織、分化不定芽、誘導(dǎo)生根的最適培養(yǎng)基。6.2 記錄誘導(dǎo)愈傷組織的誘導(dǎo)率，增值倍數(shù)，誘導(dǎo)生根的時間、數(shù)量、直徑和長度。6.3 獲得馴化、移栽的存活率。6.4 建立重樓無性快速繁殖體系。,進度安排2009年3月份2009年4月份：查閱相關(guān)文獻， 2009年5月份：選擇及采集外植體，建立無菌體系2009年6月份2009年7月份：誘導(dǎo)愈傷組織培養(yǎng)基的篩選2009年8月份2010年2月份：增殖和生根培養(yǎng)基的篩選2010年3月份：馴化、移栽2010年4月結(jié)題、準(zhǔn)備畢業(yè)論文。,運用組織培養(yǎng)和快速繁殖技術(shù)對重樓