臨床檢驗基礎(chǔ)實驗指導(dǎo).doc

臨床檢驗基礎(chǔ)學(xué)實驗指導(dǎo)血液常規(guī)檢驗一、微量吸管的使用、毛細血管采血、計數(shù)板的鑒定與使用【實驗?zāi)康摹浚赫莆瘴⒘课艿氖褂?、毛細血管采血、計?shù)板的鑒定、構(gòu)造與使用?！緦嶒炘噭浚杭t細胞稀釋液、75乙醇、消毒藥棉?！緦嶒炂鞑摹浚?一次性采血針、計數(shù)板、蓋玻片、微量吸管、2ml吸管、中號試管、顯微鏡、小玻璃棒?！緦嶒炘怼浚阂淮涡圆裳槾唐泼氀芎螅梦⒘课芪∫欢康难?，稀釋一定的倍數(shù)，沖入計數(shù)池計數(shù)一定體積內(nèi)的細胞的數(shù)量?！緦嶒灧椒ā浚阂?、微量吸管的使用：用抗凝血訓(xùn)練微量吸管的使用。二、毛細血管采血（以紅細胞計數(shù)為例）：準備：取清潔干燥試管一支，加2ml紅細胞稀釋液。 采血部位選擇、按摩75乙醇棉球進行刺針部位皮膚消毒待酒精揮發(fā)干（否則血流不成滴）自指尖腹內(nèi)側(cè)迅速刺針擦去第一滴血準確吸取10ul血液用無菌干棉球壓住傷口止血用無菌干棉球擦去管尖外圍余血后將血液釋放到稀釋液底部回吸上清液2-3次輕輕混勻。三、計數(shù)板構(gòu)造與應(yīng)用1計數(shù)板構(gòu)造外觀構(gòu)造：每塊計數(shù)板由“H”型凹槽分上下兩個計數(shù)室，在計數(shù)室兩側(cè)各有一條支柱，比計數(shù)室高出0.1mm，將一塊平整光滑的血細胞計數(shù)專用蓋玻片（24.0mm20.0mm0.6mm）覆蓋其上時，蓋玻片與計數(shù)室間形成0.1mm的縫隙。格子構(gòu)造：計數(shù)池長、寬各3mm，平均分成9個大格，每個大方格的容積是0.1 mm3四角的四個大方格分別用單線劃分成16個中方格，是白細胞計數(shù)區(qū)域；中央的大方格用雙線條劃分成25個中方格，每個中方格又用單線劃分成16個小方格，其中四角和正中的5個中方格是紅細胞計數(shù)區(qū)域。2計數(shù)板的使用： 用清潔干燥柔軟的紗布擦拭計數(shù)板及蓋玻片用推蓋法從計數(shù)板下緣向前平推蓋玻片將其蓋在計數(shù)室上充分混勻細胞懸液充池靜置觀察細胞分布情況（若嚴重不勻，應(yīng)重新充池。）【注意事項】：1采血部位應(yīng)選擇皮膚完整，不能有燒傷、凍瘡、發(fā)紺、水腫或炎癥。2針刺應(yīng)迅速，深度適宜（約23mm）。待血液自行流出，擦去第一滴血。3微量吸管取血時應(yīng)將微量吸管管尖側(cè)著插入血滴中央。若血流不暢，可以左手自采血部位遠端向指尖稍壓力至血液流出為止。切忌用力擠壓，造成組織液混入，影響結(jié)果準確性。4計數(shù)板在使用中勿讓手指接觸計數(shù)池及蓋玻片表面，以訪油膩污染，致使充液時起泡。二、血涂片的制作,瑞氏染色【實驗?zāi)康摹浚赫莆昭谱鞣椒?，瑞氏染色原理及方法。【實驗試劑】：瑞吉氏?fù)合染液 （液、液）【實驗器材】：顯微鏡、載玻片、推玻片、一次性針頭、消毒棉球、洗耳球【實驗原理】：細胞的著色既有化學(xué)的親和作用，又有物理的吸附作用，不同的細胞由于其所含化學(xué)成分不一樣，化學(xué)性質(zhì)各不相同，所以對染料的親和力也不一樣，因此將細胞染成不同的顏色?！緦嶒灧椒ā浚阂?、瑞一吉氏復(fù)合染液配制液：取瑞特染粉1g，吉姆薩染粉0.3g，置潔凈研缽中，加少量甲醇（分析純），研磨片刻，吸出上層染液，再加少量甲醇，繼續(xù)研磨，再吸出上層染液。如此連續(xù)幾次，共用甲醇500ml。收集于棕色瓶中，每天早晚各振搖3共5天，再存放一周，將染液過濾后即可使用。液：磷酸鹽緩沖液（PH6.56.8），取磷酸二氧鉀（無水）6.64g，磷酸氟二鈉（無水）2.56g，加少量蒸餾水溶解，調(diào)整PH后，加水至1000ml。二、血片制作、瑞氏染色方法準備：取清潔干燥載玻片，邊緣光滑清潔推玻片各一張。1、制備血涂片：取載玻片取血1滴于載玻片右端（邊緣留1.5cm空隙）左手持載玻片，右手持推玻片將推玻片放至血滴前沿逐漸后移至血滴沿推片散開后，推玻片與載玻片成3035的夾角以平穩(wěn)的速度將血液向前推進干燥（手持載玻片末端迅速在空氣中揮動干燥）。2、染色：將干透的血涂片放在水平位置加瑞吉氏復(fù)合染液液數(shù)滴，以染液覆蓋整個血膜為度靜置染0.51min滴加約2倍于液量的液用洗耳球吹氣混勻染色510min平持玻片用流線型水洗干燥鏡檢【注意事項】：1嚴格皮膚消毒。2.血滴大、血黏度高、推片角度大、速度快則血膜厚，反之則血膜薄。3.染料放置時間越長，美蘭逐漸氧化為天青，染色效果越好。4染液淡，室溫低，細胞多則染色時間長，反之減少染色時間。5水洗方法為平持血涂片流線型水緩緩沖洗干凈，不要先倒掉染液。三、白細胞計數(shù)（WBC）【實驗?zāi)康摹浚赫莆瞻准毎嫈?shù)的原理、操作方法與結(jié)果報告?！緦嶒炘怼浚河冒准毎♂屢簩⑷♂屢欢ǖ谋稊?shù)并破壞紅細胞，充入血細胞計數(shù)池，顯微鏡下計數(shù)一定體積的白細胞數(shù)，經(jīng)換算求出每升血液中的白細胞數(shù)量?！緦嶒炘噭浚喊准毎♂屢?【實驗器材】： 顯微鏡、改良Neubauer計數(shù)板、試管、微量吸管、玻璃棒【實驗方法】：準備：取清潔干燥試管一支，加0.38ml白細胞稀釋液。采血部位按摩75乙醇棉球進行刺針部位皮膚消毒待酒精揮發(fā)干（否則血流不成滴）自指尖腹內(nèi)側(cè)迅速刺針擦去第一滴血準確吸取20ul血液用無菌干棉球壓住傷口止血用無菌干棉球擦去管尖外圍余血后將血液輕輕釋放到稀釋液底部回吸上清液2-3次混勻室溫靜置至液體變?yōu)樽睾稚醇t細胞破壞完全清潔計數(shù)板、蓋玻片充池靜置23min待細胞下沉低倍鏡下計數(shù)四角大方格內(nèi)的白細胞總數(shù)計算報告。計算：WBC=四個大方格內(nèi)的白細胞數(shù)（N）/41020106=N/20109/L【注意事項】：1采血部位應(yīng)選擇皮膚完整，不能有燒傷、凍瘡、發(fā)紺、水腫或炎癥。2針刺應(yīng)迅速，深度適宜（約23mm）。待血液自行流出，擦去第一滴血。3.稀釋液要過濾使用，試管、計數(shù)板均須清潔，以免混入雜質(zhì)被誤認為白細胞。4.加稀釋液、血液量應(yīng)精確，以保證稀釋倍數(shù)。5.計數(shù)池內(nèi)細胞分布要均勻，每個大方格間白細胞數(shù)差異不得超過均值的10，否則要重新充液計數(shù)。6.嚴格掌握計數(shù)原則，以免人為擴大或縮小計數(shù)區(qū)域。 7.白細胞數(shù)量過高時，可加大稀釋倍數(shù)，反之白細胞過低時可計數(shù)8個大方格內(nèi)白細胞數(shù)或加大取血量。四、白細胞分類計數(shù)（DC）【實驗?zāi)康摹浚赫莆诊@微鏡法外周血分類計數(shù)的方法、各種白細胞的鏡下形態(tài)。【實驗原理】：將血液制備成涂片，經(jīng)瑞吉氏染色后顯微鏡下根據(jù)白細胞的形態(tài)特征進行分類計數(shù)。通常分類100個白細胞，計算得出各種白細胞所占百分比?！緦嶒炘噭浚喝鸺蠌?fù)合染液 【實驗器材】：顯微鏡、外周血標本片、香柏油、擦鏡紙、清潔劑【實驗方法】：準備：血涂片制備及瑞吉氏染色待干低倍鏡下選擇細胞分布均勻、著色良好的區(qū)域轉(zhuǎn)油鏡按一定的規(guī)律移動視野，依次進行分類計夠100個白細胞算出各種白細胞的百分比報告【注意事項】：1.涂片制備要厚薄適中、均勻、頭體尾分明。2.分類時要有程序地連續(xù)進行，避免主觀選擇視野。3.分類中如見幼紅細胞，不計入100個白細胞內(nèi)，以分類100個白細胞過程中見到幼紅細胞多少個來報告，并應(yīng)注明其所屬階段，4.分類中應(yīng)注意觀察成熟紅細胞、血小板的形態(tài)染色及其分布情況，注意有無寄生蟲（如瘧原蟲）及其他異常所見。五、白細胞計數(shù)（WBC）及分類計數(shù)(DC)【實驗?zāi)康摹浚赫莆瞻准毎嫈?shù)及分類計數(shù)原理、方法與結(jié)果報告【實驗原理】：白細胞計數(shù)原理：用白細胞稀釋液將全血稀釋一定的倍數(shù)并破壞紅細胞，充入血細胞計數(shù)池，顯微鏡下計數(shù)一定體積的白細胞數(shù)，經(jīng)換算求出每升血液中的白細胞數(shù)量。 白細胞分類計數(shù)原理：將血液制備成涂片，經(jīng)瑞吉氏染色后顯微鏡下根據(jù)白細胞的形態(tài)特征進行分類計數(shù)。通常分類100個白細胞，計算得出各種白細胞所占百分比?！緦嶒炘噭浚喊准毎♂屢?、瑞吉氏復(fù)合染液【實驗器材】：顯微鏡、改良Neubauer計數(shù)板、試管、微量吸管、玻璃棒、載玻片、推玻片、香柏油、擦鏡紙、清潔劑【實驗方法】：準備：1.取清潔干燥試管一支，加0.38ml白細胞稀釋液。2.取清潔干燥載玻片，邊緣光滑清潔推玻片各一張。采血部位按摩75乙醇棉球進行刺針部位皮膚消毒待酒精揮發(fā)干（否則血流不成滴）自指尖腹內(nèi)側(cè)迅速刺針擦去第一滴血準確吸取20ul血液用無菌干棉球擦去管尖外圍余血后將血液輕輕釋放到稀釋液底部回吸上清液2-3次混勻另取血一滴于載玻片的右端立即推制血膜用無菌干棉球壓住傷口止血清潔計數(shù)板、蓋玻片充池（靜置23min待細胞下沉）低倍鏡下計數(shù)四角大方格內(nèi)的白細胞總數(shù)將干透的血膜進行瑞吉氏染色油鏡下分類計數(shù)計算報告。六、紅細胞計數(shù)（RBC）、Hb測定【實驗?zāi)康摹浚赫莆占t細胞計數(shù)，Hb測定原理、操作方法，規(guī)范的報告結(jié)果【實驗原理】：紅細胞計數(shù)原理：用等滲稀釋液將血液稀釋一滴倍數(shù)，充入計數(shù)池，在顯微鏡下計數(shù)一定體積內(nèi)的紅細胞數(shù)，經(jīng)換算求得內(nèi)升血液中的紅細胞數(shù)。Hb測定（HiCN法）原理：血紅蛋白被高鐵氰化鉀氧化為高鐵血紅蛋白，后者再與氰離子結(jié)合形成穩(wěn)定地氰化搞鐵血紅蛋白（HiCN），HiCN在規(guī)定波長（540nm）和液層厚度（1cm）的條件下具有一定的毫摩爾消光系數(shù)。可用標準的高精度分光光度計進行直接定量測定，或用HiCN標準液進行比色法測定，根據(jù)標本的吸光度即可求出血紅蛋白濃度?！緦嶒炘噭浚杭t細胞稀釋液（甲醛枸木緣酸鹽稀釋液）， HiCN轉(zhuǎn)化液【實驗器材】：改良Neubauer計數(shù)板、顯微鏡、分光光度計、玻璃試管、微量吸管、玻璃棒、【實驗方法】：RBC：取清潔干燥試管一支加紅細胞稀釋液1.99ml加未梢血10ul于稀釋液底部吸取上清液嗽洗34次顛倒混勻清潔計數(shù)板，蓋玻片充液靜置23計數(shù)（中央大格中四角及正中5個方各細胞數(shù)）計算RBC=5個中方格細胞數(shù)510200106=5個中方格細胞數(shù)1012/L。Hb測定:1.直接定量測定法：取中號試管一支加HiCN轉(zhuǎn)化液5ml加未梢血20ul混勻靜置5721比色，波長540nm，以轉(zhuǎn)化液為空白對照管測其吸光度“A”計算（“A”367.7）報告2.標準曲線法：將血紅蛋白標準液稀釋成不同的三種濃度（150g/L、100g/L、50g/L）分別測其吸光度“A”，以“A”為縱坐標，血紅蛋白標準液參考值（g/L）為橫坐標，繪制標準曲線。通過標準曲線查出待測樣本的血紅蛋白濃度?！咀⒁馐马棥浚?.取血應(yīng)順利、準確，采血部位不得有燒傷、凍瘡、發(fā)紺、水腫或炎癥，不得過渡擠壓，紅細胞數(shù)量明顯增高者可適當加大稀釋倍數(shù)。2. HiCN轉(zhuǎn)化液應(yīng)置棕色瓶于4冰箱中，不能儲存于白色瓶、塑料瓶及強光下，否則會使CN丟失，結(jié)果偏低。3HiCN轉(zhuǎn)化液中有氧化鉀劇毒，防止污染。測定后的比色液不能與酸性溶液混合，否則可產(chǎn)生劇毒的氫氰酸氣體。4.所用分光光度計的波長、吸光度需要校正，帶寬應(yīng)小于1nm，比色杯光徑1.000cm時，測定溫度為2025。七、血液常規(guī)檢驗【實驗?zāi)康摹浚赫莆昭Ｒ?guī)的連續(xù)操作規(guī)程并規(guī)范的報告結(jié)果?！緦嶒炘怼浚阂妼嶒灦⑷?、四、六【實驗試劑】：紅細胞稀釋液、白細胞稀釋液、瑞吉氏復(fù)合染液、HiCN轉(zhuǎn)化液【實驗器材】：改良Neubauer計數(shù)板、分光光度計、玻璃試管、微量吸管、顯微鏡、玻棒。【實驗方法】：取大、中、小號試管各一支分別加HiCN轉(zhuǎn)化液5ml、紅細胞稀釋液2ml、白細胞稀釋液0.38ml手指消毒針刺分別取未梢血10ul于紅細胞稀釋液中、20ul于白細胞稀釋液中、20ul于HiCN轉(zhuǎn)化液中并及時混勻取清潔干燥玻片粘取1滴血液于玻片一端推制血片待干721比色瑞氏染色白細胞及紅細胞計數(shù)DC計算報告（血常規(guī)結(jié)果報告）正常值： 成人 兒童 新生兒1.WBC:（410）109/L （512）109/L （1520）109/L 成年男性 成年女性 兒童2.RBC:（45.5）1012/L (3.5-5) 1012/L (6-7) 1012/L3.HB: 120-165g/L 110-150 g/L 170-200 g/L4.DC: N: 桿狀15分葉5070L：2040 M：38 E：0.55 B：01【注意事項】：1.取血應(yīng)順利、準確，采血部位不得有燒傷、凍瘡、發(fā)紺、水腫或炎癥，不得過度擠壓。2HiCN轉(zhuǎn)化液中有氧化鉀巨毒，防止污染。測定后的比色液不能與酸性溶液混合，否則可產(chǎn)生劇毒的氫氰酸氣體。3細胞計數(shù)混合不易過分震搖。4. 瑞氏染色時加染液與緩沖液的比例為1：1或1：2。 5.采取標本的順序：紅細胞計數(shù)、血紅蛋白測定、白細胞計數(shù)、血片制作八、血小板計數(shù)（BPC或PLT）【實驗?zāi)康摹浚赫莆昭“宓挠嫈?shù)原理、方法、鏡下形態(tài)及結(jié)果報告?！緦嶒炘怼浚河孟♂屢簩⒀合♂屢欢ū稊?shù)后混勻，充入計數(shù)池中，于顯微鏡下計數(shù)一定體積的血小板數(shù)，經(jīng)換算求得每升血液內(nèi)的血小板數(shù)?！緦嶒炘噭浚?0g/L草酸銨液 【實驗器材】：顯微鏡、：改良Neubauer計數(shù)板【實驗方法】：準備：取清潔干燥的小試管一支，加10g/L草酸銨液0.38ml 準確取自然流出的外周血20ul輕輕放入到上述稀釋液底部回吸上清液漱洗吸管23次混勻室溫靜置10 min清潔計數(shù)板、蓋玻片混勻細胞懸液后充池靜置10 min15min于高倍鏡下計數(shù)中央大方格內(nèi)四角和中央5個中方格內(nèi)血小板總數(shù)計算報告 計算：血小板數(shù)/L5個中方格內(nèi)血小板總數(shù)109/L【注意事項】：1. 所用試劑、器材應(yīng)10g/L草酸銨液稀釋液中無塵埃、細菌等污染。2.毛細血管采血時，針刺深度應(yīng)達3mm。采血要快避免血液凝固. 若遇血小板成簇分布時，應(yīng)重采標本計數(shù).3.細胞懸液充入計數(shù)池中靜置時，應(yīng)注意保持濕度，避免水分蒸發(fā)。4.計數(shù)時光線不可太強，注意微有折光性的血小板與塵埃的鑒別。血小板為輕度折光性的園形、橢園形。5血小板計數(shù)應(yīng)在1h內(nèi)完成，否則結(jié)果可降低。九、網(wǎng)織紅細胞計數(shù)（RC）【實驗?zāi)康摹浚赫莆站W(wǎng)織紅細胞計數(shù)原理、測定方法、鏡下形態(tài)、結(jié)果報告?！緦嶒炘怼浚壕W(wǎng)織紅細胞為晚幼紅細胞脫核后，但尙未完全成熟的紅細胞。其胞質(zhì)中尙殘存核糖體、核糖核酸等堿性物質(zhì)，經(jīng)活體染色后于胞質(zhì)中可見藍綠色網(wǎng)點狀或點粒狀結(jié)構(gòu)?！緦嶒炘噭浚?0g/L黃焦油籃生理鹽水溶液【實驗器材】：顯微鏡、試管、載玻片、推玻片【實驗方法】：準備：取清潔干燥小試管一支，加10g/L黃焦油籃生理鹽水溶液23滴 取外周血23滴于上述試管中立即混勻37下染色1520min取試管里的混合血液一滴于載玻片一端推制成薄血膜待干燥油鏡下計數(shù)（于目鏡筒中放一縮小視野的硬紙片）至少1000個紅細胞中的網(wǎng)織紅細胞數(shù)計算報告計算：網(wǎng)織紅細胞百分比計數(shù)的網(wǎng)織紅細胞數(shù)/100【注意事項】：1.網(wǎng)織紅細胞必須在活體染色下才能顯示。2.染色時血液與染料的比例約為1：1，貧血時適當增加血量，室溫較低時適當延長染色時間或置37溫箱.3.涂片應(yīng)厚薄適宜，以紅細胞不重疊為度，涂片后應(yīng)及時計數(shù)，否則網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)消失。4.計數(shù)區(qū)域一般選擇血膜的體部，自體部向尾部迂回檢查。十、嗜酸性粒細胞計數(shù)【實驗?zāi)康摹浚赫莆帐人嵝粤＜毎苯佑嫈?shù)的原理、操作方法、鏡下形態(tài)及結(jié)果報告?！緦嶒炘怼浚河檬人嵝粤＜毎♂屢簩⒀合♂屢欢ǖ谋稊?shù)，破壞紅細胞和其他大部分白細胞并使嗜酸性粒細胞著色，滴入血細胞計數(shù)池，顯微鏡下計數(shù)一定體積內(nèi)的嗜酸性粒細胞，經(jīng)換算得出每升血液中嗜酸性粒細胞數(shù)。【實驗試劑】：2伊紅丙酮嗜酸性粒細胞稀釋液 【實驗器材】：顯微鏡、改良Neubauer計數(shù)板、試管、微量吸管、玻璃棒【實驗方法】：準備：取清潔干燥試管一支，加0.38ml嗜酸性粒細胞稀釋液。 精確吸取外周血20ul輕輕放入到上述稀釋液底部回吸上清液漱洗吸管23次混勻室溫靜置清潔計數(shù)板、蓋玻片混勻細胞懸液后充池靜置3 min5min于低倍鏡下計數(shù)兩側(cè)計數(shù)池中10大方格（每側(cè)計數(shù)池的四角和中央大方格）內(nèi)的嗜酸性粒細胞數(shù)計算報告 計算：嗜酸性粒細胞數(shù)/L10個大方格內(nèi)嗜酸性粒細胞數(shù)20106/L【注意事項】：1.計數(shù)應(yīng)在30min內(nèi)完成，因時間過長嗜酸性粒細胞可被溶解，結(jié)果偏低。 2.血液加入稀釋液后應(yīng)及時混勻，否則易致血液凝固和細胞聚集，但不易用力振搖以免嗜酸性粒細胞破碎。3.震搖與殘留的中性粒細胞區(qū)別，中性粒細胞一般不受色或受色極淺，且其顆粒較小。4.做嗜酸性粒細胞計數(shù)最好固定時間，以免受日間生理變化影響十一、血細胞分析儀使用、LEC、血沉【實驗?zāi)康摹浚菏煜ぱ毎治鰞x的檢測原理及方法；掌握LEC的鏡下形態(tài)、血沉檢測方法及結(jié)果觀察報告?！緦嶒炘怼浚阂妰x器說明書【實驗試劑】：溶血素、清洗液【實驗器材】：血細胞分析儀、顯微鏡、血沉架、血沉管【實驗方法】：紅細胞沉降率（ESR）:取抗凝血約2ml灌制血沉管“0”刻度垂直豎立在血沉架上室溫靜置1小時觀察紅細胞沉降毫米數(shù)報告（紅細胞沉降率：mm/h）十二、凝血酶原時間測定（PT）【實驗?zāi)康摹浚耗康恼莆誔T測定方法、原理及結(jié)果觀察報告【實驗原理】：在受檢血漿中加入足量的凝血活酶和鈣離子，測定血漿凝固所需的時間，即為血漿凝血酶原時間。本試驗是外原性凝血系統(tǒng)常用的篩檢試驗。【實驗試劑】：1.血漿2.組織凝血活酶3.氯化鈣溶液【實驗器材】：恒溫水浴箱、離心機、試管、微量加樣器、秒表【實驗方法】：準備：將1.2.3.試劑分別置37水溶預(yù)熱，小試管預(yù)熱。取已預(yù)熱清潔干燥小試管加血漿0.1ml，同時加組織凝血活酶液0.1ml、cacl20.1ml混勻、開動秒表計時在37水溶中不斷輕輕搖動小試管8取出觀察，來回傾斜試管，混合物不再流動時(出現(xiàn)膠凍狀)立即停表，讀取時間即為凝血酶原時間，作3次取均值報告?！咀⒁馐马棥浚?.采血應(yīng)“一針見血”，抗凝劑與血液比例（1：9）應(yīng)準確。取血后4h內(nèi)完成測定。2.試劑在用前先預(yù)溫到測定溫度，且不能超過30分鐘。3.標本測定前應(yīng)先測定正常人混合血漿，其PT值在允許范圍內(nèi)才能測定樣本。4.必須在36.537.5溫度下操作。輸血技術(shù)一、ABO血型鑒定（正、反定型）【實驗?zāi)康摹浚赫莆昭丸b定（正定、反定）原理、測定方法及結(jié)果觀察、分析、報告?！緦嶒炘怼浚焊鶕?jù)紅細胞表面A、B抗原與相應(yīng)的抗體特異性結(jié)合，可使紅細胞出現(xiàn)凝集反應(yīng)這一原理，通過正、反定型來判斷型別。正定型：用已知抗A、抗B型血清來測定紅細胞上有無相應(yīng)的A、B抗原；反定型：用已知A抗原和B抗原紅細胞來測定血清中有無相應(yīng)的抗A、抗B抗體?！緦嶒炘噭浚簶藴士笰、抗B血清；5A、B 型標準紅細胞生理鹽水懸液；生理鹽水【實驗器材】：試管、離心機、記號筆、滴管、顯微鏡【實驗方法】：準備：1、分離血清，并做好標記。2、洗滌紅細胞，制備5紅細胞懸液，做好標記。一、正定（用已知標準血清鑒定血型）。取試管2支分別標明抗A、抗B字樣加5方紅C晨液各1滴離離心（1000轉(zhuǎn)/min 1分鐘）觀察結(jié)果。二、反定（已知標準紅細胞鑒定血型）取標準紅細胞A、B型各1-2滴分別裝在大小相等并表明A、B字樣的兩支試管中分別加被檢者血清1-2滴混勻離心觀察結(jié)果結(jié)果判斷【注：（）示凝集（）示不凝集】正定反定抗A（B型）抗B（A型）被檢者血型B型標準紅細胞A 型標準紅細胞【注意事項】：1.格查對，切不可將姓名、標本、血型等搞錯，要求正、反定型結(jié)果一致。2.觀察結(jié)果、登記、出報告均應(yīng)仔細查對3.滴管、試管應(yīng)清潔干燥，各吸管不能混用，避免溶血及相互污染二、交叉配血實驗（同型、異型配血）【實驗?zāi)康摹浚赫莆整}水介質(zhì)配血法的原理、操作方法及結(jié)果觀察、分析、報告。【實驗原理】：天然抗體IgM因其分子鏈較長，在鹽水介質(zhì)中，可以克服紅細胞表面電荷的排斥力，與含有相對應(yīng)抗原的紅細胞結(jié)合并出現(xiàn)肉眼可見的凝集?！緦嶒炘噭浚荷睇}水【實驗器材】：試管、滴管、離心機、記號筆【實驗方法】：準備：1、分離血清，并做好標記。2、洗滌紅細胞，制備2紅細胞懸液，做好標記一、同型交叉（1）取試管2支分別注明主側(cè)、次側(cè)： 主側(cè)：受血得血清1滴+獻血者2紅細胞懸液1滴。 次側(cè)：受血者2紅細胞懸液1滴+獻血者血清1滴。（2）充分混勻離心1分鐘（1000轉(zhuǎn)/min）觀察結(jié)果。（3）結(jié)果觀察：在白色背景下，先觀察上清液呈正常血清狀即無溶血現(xiàn)象，再輕搖試管，試管內(nèi)血球呈現(xiàn)均勻混濁也無凝集。為叉配血試驗相合，若有溶血或凝集均不可輸。二、異型交叉：“O”型作為獻血者獻給“A”或“B”或“AB”型，其結(jié)果是：主側(cè)不凝，次側(cè)凝?！咀⒁馐马棥浚?.嚴格查對，切不可將受血者、獻血者姓名、標本、血型等搞錯。2.觀察結(jié)果、登記、出報告均應(yīng)仔細查對。3.吸管、試管應(yīng)清潔干燥，各吸管不能混用，避免溶血及相互污染。4.交叉配血時主側(cè)、次側(cè)一定要分清。尿液檢驗一、尿液理學(xué)及化學(xué)檢驗（尿液外觀、SG、PRO、GLU、KET、URO）【實驗?zāi)康摹浚赫莆漳蛞旱囊话憷韺W(xué)檢驗及常用化學(xué)檢驗原理、操作方法及結(jié)果觀察、報告?！緦嶒炘怼浚?.PRO原理：磺基水楊酸發(fā)：在酸性條件下，磺基水楊酸的磺酸根陰離子與蛋白質(zhì)氨基酸陽離子結(jié)合，形成不溶性蛋白鹽沉淀。加熱醋酸法：加熱煮沸使蛋白質(zhì)變性凝固，加乙酸使尿pH接近等電點（pH5左右）而加速蛋白質(zhì)沉淀。2.GLU（班氏法）原理：葡萄糖在堿性溶液中加熱后，由環(huán)狀結(jié)構(gòu)變?yōu)閹┗逆湢罱Y(jié)構(gòu)而具有還原性，可將硫酸銅還原為黃或紅色的氧化亞銅（Cu2O）而沉淀。3.KET（朗格氏環(huán)狀法）原理：尿中的酮體（丙酮和已酰乙酸）與亞硝基鐵氰化鈉和硫酸銨作用，可生成異硝基、異硝基胺，后者與（CN）53生成紫紅色復(fù)合物。4.URO原理：在酸性溶液中，尿膽原與對二氨基本甲醛反應(yīng)，生成櫻紅色化合物。【實驗試劑】：5冰乙酸液、200g/L磺基水楊酸液、班氏試劑、亞硝基鐵氰化鈉、氨水、Ehrlich試劑【實驗器材】：試管、PH試紙、滴管、酒精燈、試管夾、尿比重計【實驗方法】：1、尿色，透明度：正常人黃色透明，若遇混濁尿，采取加熱加酸法鑒別；深黃色（黃膽病人）。2、尿PH值：正常尿液一般為弱酸必（PH6.5 ）。3、尿比重(SG)：成人為1.0151.025（多積尿），若受飲水、出汗影響比重波動于1.0031.030之間（隨機尿）。尿比重測定方法：斜持比重筒（量筒），將尿液沿管壁緩慢倒入量筒中以將比重計浮起為度，避免激起泡沫，如有泡沫，可用濾紙吸去，將比重計輕輕放入并加以捻轉(zhuǎn)，使其懸浮在尿液中，待比重計稍停穩(wěn)后，讀取液面的比重測度。4、尿蛋白定性試驗(PRO)（兩種方法）（1）加熱醋酸法（參考方法）：取試管加尿至試管2/3處用試管夾夾持試管下1/3處加熱上1/3處的尿液（注意：不斷轉(zhuǎn)動試管均勻加熱，防止尿液沸濺）加冰醋酸23滴再加熱煮沸觀察結(jié)果報告。（2）200g/L磺基水楊酸法（首選方法）：取試管加尿約1ml于試管內(nèi)加磺柳酸數(shù)滴觀察結(jié)果報告。5、尿糖定性試驗(GLU)（班氏法）：取試管加班氏試劑1ml于試管內(nèi)加熱煮沸試劑仍呈清亮藍色滴加尿液23滴再次煮沸2min冷卻觀察結(jié)果報告。6、尿酮體檢驗(KET)（即格氏環(huán)狀法）：取試管一支加尿液約2ml加冰乙酸數(shù)滴混勻加亞硝基鐵氰化鈉（粉少許）震蕩混勻沿管壁輕輕加入氨水作環(huán)狀試驗報告。 7、尿膽原檢驗（URO）（歐氏法）：取試管加新鮮尿1ml加歐立區(qū)試劑0.1ml混勻靜置10分鐘在白色背景下，從管口向管底觀察結(jié)果報告。【注意事項】：1、認真觀察尿色、量、測PH。 2、加熱煮沸時，切忌管口對人，應(yīng)不時振動試管，以防止溢出。3、尿膽原檢驗時尿液應(yīng)新鮮，否則尿膽原在空氣中氧化為尿膽素而致假陰性結(jié)果。4、在測尿比重時應(yīng)注意校正溫度及尿量不足時的校正方法。二、尿液沉渣鏡檢【實驗?zāi)康摹浚赫莆漳虺猎鼧吮局谱鞣椒澳虺猎@微鏡下檢查的內(nèi)容?！緦嶒炘怼浚河蔑@微鏡檢查方法，依據(jù)尿液細胞、管型等有形成分的形態(tài)特征，識別并記錄其在一定顯微鏡視野內(nèi)的數(shù)目?！緦嶒炂鞑摹浚翰Ｆ㈦x心機、試管、顯微鏡【實驗方法】：取中號試管一支加混合均勻尿液約至試管2/3處離心（5500轉(zhuǎn)/分鐘）5分鐘一次性傾去上清液留取尿沉渣液約0.2ml混勻在載玻片上涂成薄片鏡檢報告報告方式：“少許”少數(shù)視野可見（14個）“+”占視野面積1/4或每個視野都有少量敬在（514個）“+”占視野面積的一半（1529）“+”占視野面積的3/4（3050）“+”滿視野（50個以上）注：低倍鏡下計數(shù)20個視野所見管型數(shù)，高倍鏡下計數(shù)至少10個視野各類細胞數(shù)。【注意事項】：1尿在離心前和涂片前必須混勻2棄去上清液應(yīng)一次性傾去勿來回顛倒。3報告方式規(guī)范。三、1小時細胞排泄率測定【實驗?zāi)康摹浚赫莆漳蛞?小時細胞排泄率檢驗原理、方法及結(jié)果觀察、報告?！緦嶒炘怼浚涸谌粘Ｉ畈皇芟拗频那闆r下，準確留取3小時的全部尿液。取混勻后的部分尿液離心，留沉淀液，混勻充入細胞計數(shù)池，計數(shù)一定體積沉淀液中的紅細胞、白細胞和管型，然后換算成1小時尿中相應(yīng)的數(shù)量。【實驗器材】：量筒、細胞計數(shù)板、刻度離心管、離心機【實驗方法】：1.準確測量尿量,并記錄.2.將尿液充分混勻取10ml尿于刻度離心內(nèi)離心1500r/min5分鐘準確吸取上清液9ml輕輕混勻管底沉淀取1滴充入計數(shù)板兩側(cè)的計數(shù)池中低倍鏡下計數(shù)18個大方格里的管型數(shù),高倍鏡下計數(shù)10個大方格里的紅細胞.白細胞包括腎小管上皮細胞計算報告計算:N=C10/D1000V/(103)式中：N為1小時尿中細胞或管型數(shù)D為計數(shù)的大格數(shù)C為計數(shù)D個大格所見的細胞或管型數(shù)V為3小時尿量毫升數(shù)【注意事項】：1.尿液標本留取時可不限制飲食，但勿過量飲水。2尿在離心前和充池前必須混勻3尿液應(yīng)新鮮檢查，PH應(yīng)在6以下，若為堿性尿，則細胞和管型易溶解。四、尿液分析儀的使用、HCG檢測【實驗?zāi)康摹浚赫莆漳蛞悍治鰞x的使用方法及 HCG檢測原理、操作方法及結(jié)果觀察、報告?！緦嶒炘怼浚篐CG檢測（膠乳凝集抑制試驗）原理：將尿液與抗HCG 血清混合，待反應(yīng)后加入被HCG致敏的膠乳懸液，若尿中含有HCG，則先于膠乳與血清結(jié)合，故膠乳仍呈均勻狀，不出現(xiàn)凝集，反之，非孕婦尿液因不含HCG，抗血清中的抗體則膠乳抗原發(fā)生反應(yīng)，出現(xiàn)凝集?！緦嶒炘噭浚喝焉镌\斷血清、妊娠診斷抗原【實驗器材】：尿液分析儀、顯微鏡、玻片、試管、尿液試紙條【實驗方法】：1、尿液分析儀結(jié)構(gòu)、原理見教材；尿液分析儀的使用：每2個實驗臺為一小組；由老師示教操作方法，注意事項，然后每組抽人操作，認真操作，熟練操作程序，為以后的臨床工作打下堅實基礎(chǔ)，并學(xué)會在使用儀器過程中愛護儀器，保養(yǎng)儀器。2. HCG檢測：取玻片一張于玻片的一端加被檢尿液另一端加生理鹽水(陰性對照)各一滴兩端同時加HCG抗血清各一滴混勻1分鐘再同時加膠乳抗原各一滴充分混勻放置5分鐘后觀察結(jié)果報告陽性:不凝集陰性:凝集【注意事項】：1. 尿液、抗血清和膠乳抗原必須按規(guī)定順序滴加，滴量大小應(yīng)一致。2. 不同批號的試劑不能互相搭配使用。3. 室溫低于20，反應(yīng)緩慢，應(yīng)適當加溫或延長反應(yīng)時間。4. 標本渾濁有沉淀時，應(yīng)離心取上清液測定。5.試劑在28冰箱保存，特別注意不能冰凍，否則膠乳上HCG抗原釋放，不能再凝集。五、尿常規(guī)（RT）檢驗【實驗?zāi)康摹浚赫莆漳虺Ｒ?guī)檢驗規(guī)程，熟悉使用尿液分析儀?！緦嶒炘怼浚阂妼嶒炇?、十四【實驗試劑】：200g/L磺基本楊酸、5%冰乙?！緦嶒炂鞑摹浚耗蛞悍治鰞x、顯微鏡、玻片、試管、PH試紙、離心機、酒精燈【實驗方法】：一、理學(xué)檢驗?zāi)蛏?尿量 透明度 PH二、尿蛋白定性（兩種方法任選一種）1法：取試管加尿約1ml于試管內(nèi)加磺柳酸數(shù)滴觀察結(jié)果報告。2.5%冰乙酰法：取試管加尿至試管2/3處用試管夾夾持試管下1/3處加熱上1/3處的尿液（注意：不斷轉(zhuǎn)動試管均勻加熱，防止尿液沸濺）加冰醋酸23滴再加熱煮沸觀察結(jié)果報告。三、尿液沉渣鏡檢取中號試管一支加混合均勻尿液約至試管2/3處離心（5500轉(zhuǎn)/分鐘）5分鐘一次性傾去上清液留取尿沉渣液約0.2ml混勻在載玻片上涂成薄片鏡檢報告細胞成分：用最低值最高值/HPF(或平均值/HPF)報報告方式 管型成分：用最低值最高值/LPF(或平均值/LPF)報告。結(jié)晶成分：用高倍視野觀察，占視野1/4為+，占視野1/2為+，占視野3/4為+，滿視野為+。四、尿液分析儀使用 每2個實驗臺為一小組；由老師示教操作方法，注意事項，然后每組抽人操作，認真操作，熟練操作程序，為以后的臨床工作打下堅實基礎(chǔ)，并學(xué)會在使用儀器過程中愛護儀器，保養(yǎng)儀器。排泄物及分泌物檢驗一、糞常規(guī)（Rt）檢驗及糞隱血（OB）【實驗?zāi)康摹浚赫莆占S便外觀、顯微鏡檢查的方法及糞便隱血試驗的方法，熟悉鏡檢時糞便中各物質(zhì)的形態(tài)和估計方式?！緦嶒炘怼浚杭S隱血（OB）試驗原理：血紅蛋白中的亞鐵血紅素有類似過氧化物酶的活性，能催化過氧化氫分解釋放新生態(tài)氧，將受體鄰聯(lián)甲苯胺氧化成鄰甲偶氮苯而顯藍色?！緦嶒炘噭浚荷睇}水、10g/L鄰聯(lián)甲苯胺冰乙酸溶液、3過氧化氫【實驗器材】：顯微鏡、竹簽、載玻片、濾紙【實驗方法】：一、糞便外觀檢查1顏色 2.粘稠度二、顯微鏡檢驗取玻片加生理鹽水12滴用竹簽自糞便多處取材（特別是膿、血、粘液等異常部分）與鹽水混合涂成薄片（以能透過字跡為度）低倍鏡觀察有無蟲卵、原蟲轉(zhuǎn)高倍鏡檢驗細胞情況并對其數(shù)量進行估計報告報告方式：細胞數(shù)報告1020個視野的最低值至最高值或報告平均值。低倍鏡直接報告見到XX蟲卵及食物殘渣的多或少。三、糞便潛血試驗（OB試驗）用竹簽挑取少許糞便于濾紙片上，滴加鄰聯(lián)甲苯胺冰乙酸液23滴，再加H2O2（1mol/L）23滴，于標本上立即觀察結(jié)果，報告。（-）2后仍不顯色（+）10S后由淺蘭漸變深蘭結(jié)果觀察 （+）初顯淺蘭褐色漸變成明顯蘭褐色（+）立即呈現(xiàn)蘭褐色 （+）立即呈現(xiàn)黑蘭色【注意事項】：1.鏡檢時至少每張涂片觀察10個視野。2.因3過氧化氫不穩(wěn)定，長時間放置可使反應(yīng)減弱，所以試驗前應(yīng)檢查試劑是否有效，可將過氧化氫滴于未染色的血片上，如產(chǎn)生泡沫表示過氧化氫有效。二、陰道分泌物檢驗【實驗?zāi)康摹浚赫莆贞幍狼鍧嵍鹊膬?nèi)容、判定標準及常見陰道菌的形態(tài)?！緦嶒炂鞑摹浚宏幍婪置谖飿吮酒?、顯微鏡、擦鏡紙、清潔液、鏡油【實驗方法】：一.陰道分泌物清潔度檢查：先用低倍鏡觀察，再用高倍鏡檢查，根據(jù)上皮細胞、白細胞（或膿細胞）、桿菌、球菌的多少分度。(清潔度,)陰道清潔度的分級判斷清潔度陰道桿菌雜菌（球菌）上皮細胞白細胞（或膿細胞）+-+-0-5/HPF5-15/HPF15-30/HPF30/HPF二.展片:陰道桿菌、霉菌、淋病雙球菌、陰道線索細胞等。（要求繪出鏡下形態(tài)）【注意事項】：看展片時不可動粗調(diào)更不要移動視野,看不清只可動微調(diào)體液檢驗一、潘氏試驗、李凡他試驗、精子鏡檢【實驗?zāi)康摹浚赫莆张耸显囼灐⒗罘菜囼灥臋z測原理、操作方法及結(jié)果觀察、報告，熟悉鏡下異常及正常的精子形態(tài)?！緦嶒炘怼浚号耸显囼炘恚耗X積液中球蛋白與苯酚結(jié)合，形成不溶性蛋白鹽而產(chǎn)生白色混濁或沉淀。李凡他試驗原理：漿膜上皮細胞在炎癥反應(yīng)的刺激下分泌粘蛋白量增加。粘蛋白是一種酸性糖蛋白，等電點為PH35，因此在稀乙酸中出現(xiàn)白色沉淀?！緦嶒炘噭浚猴柡捅椒尤芤?、冰乙酸【實驗器材】：試管、吸管、量筒、滴管【實驗方法】：一、潘氏法或潘迪試驗取飽和石碳酸（苯酚）約2ml于試管中，用滴管加入標本1滴，置黑色背景處觀察，如顯白色混濁即為陽性，結(jié)果可根據(jù)白色渾濁程度分別判斷為：（-）