畢業(yè)設(shè)計開題報告模板.doc

畢業(yè)論文開題報告題 目 學(xué)生姓名 學(xué)號 所在院(系) 專業(yè)班級 指導(dǎo)教師 2012年 2月 22日題 目一、選題的目的及研究意義二、綜述與本課題相關(guān)領(lǐng)域的研究現(xiàn)狀、發(fā)展趨勢、研究方法及應(yīng)用領(lǐng)域等1研究現(xiàn)狀多糖作為一類重要的生活物質(zhì)，到目前為止，雖然只有云芝多糖、豬苓多糖、香菇多糖、裂褶多糖、茯苓多糖等少數(shù)應(yīng)用于臨床,但他們在抗腫瘤、抗凝血、抗突變、調(diào)血脂、抗衰老、抗病毒等方面疑難病癥的治療方面已經(jīng)表現(xiàn)出廣闊的前景。所以，為了提高多糖原有的活性或增加新活性，通過合適的方法對多糖的結(jié)構(gòu)進行修飾是必要的。多糖是一類非特異性免疫增強化合物，能提高機體的免疫功能，增強抗病能力，有防老、防衰、防癌、抗癌以及防治肝炎的作用，受到人們的普遍重視，得到了相應(yīng)的研究和開發(fā)。含硫多糖如硫酸軟骨素，肝素等還有抗凝血、抗病毒等其他生物功能。通過化學(xué)改造能使這些多糖硫酸酯化合物的毒性更低，活性更高用濃硫酸法對黃精多糖進行硫酸酯化，產(chǎn)生硫酸化黃精多糖。然后利用 Fenton 反應(yīng)產(chǎn)生羥自由基OH, 氧化鄰苯三酚在微堿條件下自氧產(chǎn)生O-2, 分光光度法研究硫酸化黃精多糖體外清除活性氧自由基的作用，磷鉬絡(luò)合物法測定了硫酸酯化黃精多糖的總抗氧化活性。 2 研究方法 2.1黃精多糖的硫酸酯化 量取20ml的正丁醇，置于250ml的三頸瓶中，加入磁石后冰浴進行磁力攪拌，之后量取60ml的濃硫酸緩慢加入。再加入1g硫酸銨，等攪拌完全后緩慢加入4g黃精多糖，保持攪拌于0反應(yīng)30min。反應(yīng)液用NaOH中和后用離心機離心（6500rpm，15min），取上清液，用蒸餾水透析24h，期間需換水多次。之后將袋內(nèi)溶液取出，減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至50ml左右，加入5倍量無水乙醇，靜置后離心（5000rpm，10min），取沉淀物，將其溶于水，再用蒸餾水透析24h。取袋內(nèi)溶液進行干燥，得棕黃色的硫酸化黃精多糖。 2.2對羥基的清除 Fenton試劑之所以具有很強的氧化能力，是因為H202被Fe2+催化分解生成羥基自由基(OH)，并引發(fā)產(chǎn)生更多的其它自由基。該反應(yīng)產(chǎn)生的羥自由基可使番紅花紅褪色。針對這一特點來研究訶子中多酚對羥自由基的清除能力。 取0.15 mol/L pH7.4的磷酸緩沖溶液1.0 mL,40g/mL番紅花紅1.0 mL,0.945 mmol/L EDTA-Fe()(新鮮配置)1.0 mL,不同濃度的樣品溶液0.5 mL、3%H2O 21.0 mL(新鮮配置),混合后在37水浴中反應(yīng)30 min后在520 nm處測定吸光度As。空白組以0.5mL蒸餾水代替樣品測定吸光度A0,對照組以1.5 mL蒸餾水代替H2O2和樣品測定吸光度A,用3.5 mL蒸餾水代替番紅花紅、EDTA-Fe()、H2O2、樣品,1.0mL磷酸鹽緩沖溶液,調(diào)零。并按下式計算清除率:清除率(%)=1002.3總抗氧化活性的測定磷鉬絡(luò)合物法磷鉬絡(luò)合物法的測定原理是Mo()被抗氧化物質(zhì)還原生成綠色的Mo(V)絡(luò)合物，其最大吸收波長為695 am。抗氧化物質(zhì)活性越強，測定的吸光度值越大。此方法操作簡單，所用試劑低廉、方法重現(xiàn)性好且適合多種溶劑提取試液抗氧化活性的測定。配制不同濃度的樣品溶液。磷鉬試劑是終濃度為0.6 mol/L濃硫酸、28 mmol/L磷酸鈉和4 mmol/L鉬酸銨的溶液。在10 mL比色管中,分別加入4 mL上述磷鉬試劑液、0.4 mL樣品液,95水浴中恒溫90 min,在695 nm波長下測吸光度A。所有測定平行進行三次,取平均值。 2.4超氧陰離子自由基(O2)清除作用鄰苯三酚自氧化一分光光度法被廣泛應(yīng)用于食品和藥品行業(yè)的抗氧化劑初步篩選及各種活性物質(zhì)清除超氧陰離子自由基(O2)的抗氧化功能評價。鄰苯三酚自氧化過程為鏈式反應(yīng)，可產(chǎn)生O2，其自身氧化產(chǎn)物的含量可用分光光度儀檢測。在pH值90時，鄰苯三酚自氧化速率與生成的O2的濃度呈正相關(guān)，故可通過紫外可見光分光光度儀來定量測定抗氧化劑在此體系中對O2的清除作用，間接評價抗氧化劑的抗氧化能力。取PH8.2Tris-Hcl緩沖液9mL于于25恒溫水浴20min后，用微量注射器注入40微升25預(yù)熱過的鄰苯三酚溶液（45mmol/L鄰苯三酚于10mmol/LHcl中）立即倒入比色管中，于溫度25下每隔30秒測定一次吸光度（420nm自氧化速率控制在0.06/min左右），鄰苯三酚自氧化3min后，加一滴Vc立即混勻，室溫下放置5min后測定其在420nm下的吸光度即A0，可表示鄰苯三酚的自氧化速率。在上述Tris-Hcl緩沖液中加入一定量的樣品，再接上述方法測定鄰苯三酚的自氧化速率得到A1，同時做一空白試劑A2，按下式計算：抑制率（%）=（A0-（A1-A2）/A01003.應(yīng)用領(lǐng)域自由基是生物組織代謝的產(chǎn)物，當體內(nèi)自由基產(chǎn)生過多或自身防御系統(tǒng)薄弱時，會導(dǎo)致大量膜內(nèi)多不飽和脂肪酸發(fā)生過氧化作用，最終導(dǎo)致多種炎癥、變態(tài)性疾病、臟器損傷、衰老等一系列病變的發(fā)生。適當引入外源性抗氧化劑，可以減緩或改善自由基引起的疾病。因此，尋找高效、 低毒清除氧自由基的抗氧化劑已成為近年來研究的熱點。目前,有很多報道表明,被修飾后的多糖類具有良好的清除自由基的作用，且被修飾后的多糖能有效的降低毒性及副作用。 有研究表明,自由基的存在能引起生物膜脂質(zhì)的過氧化作用,從而導(dǎo)致脂質(zhì)過氧化作用的積聚;還有研究表明,過量的紫外輻射,特別是UVA/B的輻射,能產(chǎn)生活性氧分子(ROS) ，且硫酸化黃精多糖對這些活性氧分子具有的清除作用，實驗為硫酸化黃精多糖在抗氧化作用方面的應(yīng)用做了鋪墊。三、對本課題將要解決的主要問題及解決問題的思路與方法、擬采用的研究方法（技術(shù)路線）或設(shè)計（實驗）方案進行說明，論文要寫出相應(yīng)的寫作提綱1、 本課題主要解決方法是選用哪幾個指標來判定硫酸化黃精多糖的抗氧化活性及體外清除自由基作用，因為每一種指標都有幾種不同的方法來測定，因此選定指標后要確定選用哪種方法，除此之外必須確定合適的樣品濃度。 2、 制作硫酸化黃精多糖的過程中最大的問題是透析袋及濃硫酸的使用，透析袋使用需要進行前期處理，后期使用也要及其小心，實驗過程中需要帶手套操作。 3、根據(jù)實驗需要及實驗室現(xiàn)有的條件，本次利用 Fenton 反應(yīng)產(chǎn)生羥自由基OH, 氧化鄰苯三酚在微堿條件下自氧產(chǎn)生O-2, 分光光度法研究硫酸化黃精多糖體外清除活性氧自由基的作用，磷鉬絡(luò)合物法測定了硫酸化黃精多糖的總抗氧化活性。樣品的濃度的確定先做預(yù)實驗，根據(jù)與實驗的結(jié)果設(shè)定不同的樣品濃度梯度，在選取最合適的樣品濃度梯度進行試驗。4、論文主要包括摘要、關(guān)鍵字、引言、實驗材料和儀器、實驗方法與過程、實驗結(jié)果、討論與分析幾部分。四、檢索與本課題有關(guān)參考文獻資料的簡要說明1田庚元,李壽桐,宋麥麗等.牛膝多糖硫酸酯的合成及其抗病毒活性J,藥學(xué)學(xué)報.1995,30(2):107-111.2Guiseley KB.Some novel methods and results in the sulfation of polysaccharides.In:Schweiger RG,ed.Carbohydrate Sulfates.ACS Symp.Ser.1978,77:148-162.3Wdfrom ML,Juliano BO.Chondroitin sulfate modifications .Sulfated and N-deacetylated preparations.J Am Chem Svc,1960,82:2588.4徐向榮,王文華,李華斌.比色法測定Fenton反應(yīng)產(chǎn)生的羥自由基及其應(yīng)用J.科技期刊.1999(1):1-5.5王巨存,邢國勝,胡文鐸,等.有機鍺Ge- 132對氧自由基和由羥自由基誘導(dǎo)的脂質(zhì)過氧化的影響J.中國藥學(xué)雜志.1994,29(1):23- 24.6韓少華,朱靖博,王妍妍.鄰苯三酚自氧化法測定抗氧化活性的方法研究J.中國釀造.2009(6):155-157.7袁建鋒,蔡恒,單咸旸,等.一株芽孢桿菌胞外多糖的分離純化及其抗氧化性測定N.微生物學(xué)通報.2009,36(10):1466-1470.8黃海蘭,趙祖亮,王斌貴. 磷鉬絡(luò)合物法與-胡蘿卜素-亞油酸法測定海藻脂類成分抗氧化活性的比較A.中國油脂.2005,30(3):32-34.9李榮,姜子濤,馬麗.月桂精油抗氧化性能及清除自由基能力的研究B.中國調(diào)味品.2009,34(11):58-62.10張澤慶,張靜,張宏艷等.硫酸酯化防風(fēng)多糖的制備及抗氧化作用研究J.中草藥,2009,40(8):1208-1211侯雙菊;黃精多糖的提取工藝及提取液樹脂法脫色的研究D;合肥工業(yè)大學(xué);2006年11Xing R,Liu S,Yu HH,et al.Preparation ofhigh-molecular weight and high-sulfate content chitosansand their potential antioxidant activity in vitro.Carbohy-drate Polymers,2005,61:148-154.12Dissett DL,Chatterjee R,Hannon DP.Photoprotective ef-fect of superoxide-scavenging antioxidants against ultra-violet radiation-induced chronic skin damage in the hair-less mouse.Photodermatology ,Photoimmunology&Photomedicine,1990,7:56-62.五、畢業(yè)論文進程安排20