結核分枝桿菌的生物危害評估報告.doc

.結核分枝桿菌的生物危害評估報告結核病是由結核分枝桿菌(偶爾可由牛型或非洲型分枝桿菌)引起的一種細菌性疾病。結核病可累及全身各個器官，但以肺結核最為常見。該病具有傳染性強，散播面廣，不分地域均可發(fā)生。結核病可由呼吸道、消化道、皮膚等途徑感染，但其主要傳播途徑是以空氣為傳播因子的呼吸道傳染，而排菌的肺結核病人傳染性更大，是傳播感染的主要傳染源。 1. 傳播途徑 呼吸道感染(respirator tract infection)是肺結核的主要傳染途徑(routes of infection)，飛沬傳染(droplet infection)為最常見的方式。傳染源主要是排菌的肺結核患者(尤其是痰涂片陽性未經治療者)。飛沬核(droplet nuclei), 10m時可被吸人呼吸道，健康人可因吸入患者咳嗽、打噴嚏時噴出的帶菌飛沫而受感染。 2. 危害程度分級 微生物按其是否致病、致病力強弱、危害人體的嚴重性、傳染性的大小、臨近人群的抵抗力、有無免疫制劑和特效治療藥物等綜合評價，可分為四個不同的危害等級。結核分枝桿菌屬于3級危險。 3級危險(對個體具有極大危害，對群體具有較大的危害性):指有特殊危險的致病菌。感染后癥狀較重，并可能危及生命，或者缺乏有效的預防方法、發(fā)病后不易治療的微生物。 3. 實驗室感染的原因及預防 (一)技術操作可能導致的感染及其預防措施。 1. 接種:應使用無彈力的鉑絲接種環(huán)，結核菌接種后接種環(huán)火焰滅菌易崩散，酒精燈燒灼時要特別注意。 2. 混勻:吸管吸吹菌液時不要產生氣泡，應沿容器壁排出。 3. 研磨:最好使用組織研磨器，乳缽易產生氣溶膠。 4. 移液:吸管上端的棉花松緊要適度，吸液時要從管底吸取，吹出時要輕緩，不要全部吹凈，以免產生氣泡，形成氣溶膠。 5. 開封:要避免壓力和氣流的急劇變化。 6. 離心:離心管套底墊要完好，使用匹配的管、套、離心頭，加蓋。 7. 注射:做好個人防護，正確使用注射器。 8. 搬運:室內移動要避免滑落，移出室外要有堅實密閉的外包裝。 (二)技術保障 1. 雙人原則，不允許單人操作1、2類病原。 2. 入口處應有危險警示標識，并標明所操作的微生物的種類。 3. 培訓考核上崗，掌握相關技術操作要領，熟悉規(guī)章制度，適應工作環(huán)境。 4. 完備的管理措施，技術操作規(guī)范。 5. 良好的工作行為可降低生物危害風險。 4. 實驗室中的分枝桿菌及分枝桿菌氣溶膠 結核病實驗室工作人員，在分枝桿菌檢驗過程中，會接觸到各種潛在感染源標本和各種危險物，特別是許多操作易產生分枝桿菌氣溶膠。含有結核分枝桿菌的微滴核(1-5微米)通過呼吸進入人體肺泡，可以黏附在肺泡內生長繁殖。因此，首先要對實驗室中生物危險物產生的途徑和存在的地點有充分的認識，以便明確生物安全防護的環(huán)節(jié)。 (一) 分枝桿菌存在的地點 1、各種臨床標本，通常是痰，胃或支氣管灌洗液、腦脊液、尿液等。 2、被污染的操作臺、器械、儀器、試劑等。 3、收集的結核分枝桿菌、非結核分枝桿菌菌株等。 4、細菌學實驗室的部分區(qū)域。 (二) 產生分枝桿菌氣溶膠 1、實驗室內可疑肺結核患者痰標本的采集。 2、樣本的制備和涂片的火焰固定。 3、分離培養(yǎng)或接種培養(yǎng)物。 4、用火焰燒灼接種環(huán)。 5、使用移液器混合培養(yǎng)物。 6、培養(yǎng)管或培養(yǎng)瓶中含有培養(yǎng)物的滴落物。 7、溢出的分枝桿菌懸浮液。 8、高速混合含有分枝桿菌的液體。 9、轉移液態(tài)培養(yǎng)物和上清液，或培養(yǎng)液、上清液的傾倒。 10、離心過程中離心管的破碎。 11、用做原代培養(yǎng)所需的組織勻漿。 5. 安全防護 (一) 嚴格遵守實驗室安全操作規(guī)程，任何時侯都要警惕分枝桿菌氣溶膠的產生。實驗室的技術人員必須經過生物安全培訓后方可上崗。 (二) 實驗室應嚴格限制非實驗人員進入，減少實驗室內外交叉生物污染。完成實驗工作離開實驗室，要關好門窗。 (三) 進入實驗室應避免攜帶非必需物品。 (四) 進入實驗室，工作人員應穿著工作服，操作時應穿戴防護隔離衣、口罩、帽子和手套，長發(fā)者應將頭發(fā)裝束在帽子內。 (五) 實驗過程中絕對禁止吸煙、飲食等，不要以手撫頭面部等。 (六) 試驗前須開啟紫外線燈對實驗室和操作區(qū)域進行照射消毒1小時以上;試驗結束后，立即開啟紫外燈進行照射消毒2小時以上。 (七) 任何試驗的開始和結束后，操作人員要用70%酒精浸泡雙手或仔細擦后，用清潔劑或清水洗凈。 (八) 每次試驗結束后，必須清理好實驗臺，并用70%酒精液或3-5%石炭酸擦洗實驗臺面。 (九) 實驗室中的生物危險品要根據(jù)檢查項目和性質不同，局限在相應的試驗區(qū)間，不得隨意將其帶到其它的實驗室。 (十) 實驗室內任何微生物的樣本，廢棄物都必須經高溫高壓滅菌后，方可按一般垃圾處理。 綜合實驗室質量管理體系文件 6. 安全保障 (一) 首先各級實驗室應按等級要求完善實驗設施，如簡易安全柜內的抽氣排風功能、紫外燈消毒功能，生物安全柜維護與除菌濾膜定期更換等。 (二) 實驗室采集病人痰標本時應在戶外進行，避免因病人咳漱造成室內氣溶膠污染。 (三) 普通實驗室應注意氣流方向，實驗過程中盡量避免強氣流變化而產生氣溶膠(如:涂片、染色過程中)。 (四) 細菌的分離培養(yǎng)、菌種開封、轉種、研磨、稀釋等操作，各級實驗室均應在簡易安全柜或生物安全柜中進行。 (五) 使用接種環(huán)進行操作時，接種環(huán)應在工作燈的內焰中燃燒，以避免菌液或菌塊飛濺。 (六) 稀釋菌液時，吸管、針管要緩慢插入試管或燒瓶底部，小心操作避免產生氣泡或氣溶膠。 (七) 使用注射器加樣時，用過的針頭切勿再重新入套或拔開注射器與針頭，應直接放入銳器收集器，以免劃破皮膚造成接種感染。 (八) 菌株庫要設專人管理，并按照國家微生物菌毒種管理辦法執(zhí)行。 (九) 進行毒菌操作過程中，不要穿戴巳經污染的防護性手套觸摸門柄、儀器或毒菌區(qū)以外區(qū)域，避免由于粗心擴大污染范圍。 (十) 試驗結束后，操作過程中所有可能與生物危險物接觸或被污染的試驗器械和物品，能夠高壓消毒的必須高壓消毒，不能進行高壓消毒的設備、儀器，應使用有效的消毒劑擦洗后再以紫外燈近距離長時間消毒。 (十一) 實驗中發(fā)生意外污染情況，應立即通知主管人員并做好處理污染物和相應區(qū)域的準備，不得擅自采用其它禁止的方法進行消毒處理。 (十二) 實驗室主任應制定規(guī)章和程序，只有告知潛在風險并符合進入實驗室特殊要求(如，經過免疫接種)的人，才能進入實驗室。 (十三) 操作致病性微生物時，實驗室入口處應貼有生物危險標志，并顯示以下信息:有關病原、生物安全級別、免疫接種要求、研究人員姓名、電話號碼、在實驗室中必須佩帶的個人防護設施、出實驗室所要求的程序。 (十四) 實驗室主任為實驗室人員特別制定的標準操作程序或生物安全手冊中，應包括生物安全程序。對于有特殊風險的人員，要求閱讀并在工作及程序上遵照執(zhí)行。 (十五) 實驗室主任保證實驗及其輔助人員接受適當?shù)呐嘤?，包括和工作有關的可能存在的風險、防止暴露的必要措施和暴露評估程序。 (十六) 實驗室所用任何個人防護裝備應符合國家有關標準的要求。實驗室應確保具備足夠的有適當防護水平的清潔防護服供使用。還應穿戴其它的個人防護裝備，如手套、防護鏡、面具、頭部面部保護罩等。 (十七) 處理樣本的過程中易產生高危害氣溶膠時，要求同時使用適當?shù)膫€人防護裝備、生物安全柜和/或其它物理防護設備。如可產生含生物因子的氣溶膠，應在適當?shù)纳锇踩裰胁僮鳌?(十八) 實驗用鞋應舒適，鞋底防滑。應用皮制或合成材料的不滲液體的鞋類。在從事可能出現(xiàn)漏出的工作時可穿一次性防水鞋套。在實驗室的特殊區(qū)域(例如有防靜電要求的區(qū)域)或BSL-3和BSL-4實驗室要求使用專用鞋(例如一次性或橡膠靴子)。 7. 結核病實驗室廢物處理 一、實驗室廢棄物處理的目的: (一) 將操作、收集、運輸、處理及處置廢棄物的危險減至最小; (二) 將實驗室廢棄物對環(huán)境的有害作用減至最小。 二、實驗室污物處理及消毒 (一) 實驗室含有生物危險物的臨床標本及被污染的一次性用品，試驗完成后，應在操作臺或實驗區(qū)域內以紫外燈近距離照射消毒 2小時以上，再經高壓消毒后方可丟棄或焚燒。 (二) 可重復使用的實驗用品及器材，完成實驗后，應在操作臺或實驗區(qū)域內經紫外燈近距離照射消毒2小時以上后，再交有關人員進行高壓消毒和煮沸洗刷。 (三) 實驗用的試管、吸管、注射器，須裝在加蓋不漏的容器內，經高壓滅菌后取出。 (四) 培養(yǎng)物或實驗室垃圾，在丟棄前必須經高壓消毒和紫外燈近距離長時間照射處理。不允許積存垃圾和實驗室廢棄物。已裝滿的容器應定期運走。在去污染或最終處置之前，應存放在指定的安全地方，通常在實驗室區(qū)內。 (五) 實驗室廢棄物應置于適當?shù)拿芊馇曳缆┤萜髦邪踩\出實驗室。有害氣體、氣溶膠、污水、廢液應經適當?shù)臒o害化處理后排放，應符合國家相關的要求。 (六)實驗過程中，如標本或含標本的前消化處理液被打翻污染了操作臺或地面，應以吸滿70%酒精的衛(wèi)生紙覆蓋污染區(qū)，15分鐘以后衛(wèi)生紙方可移去。 (七) 實驗室內未經消毒的污水，禁止直接排入公共排水系統(tǒng)，更不允許混入居民生活垃圾。 8. 意外事故的處理 (一) 如果發(fā)生意外，必須立即通知實驗室主管人員，并在有關人員的指導監(jiān)督下對出事現(xiàn)場進行處理，絕對禁止未經報告而私自對出事現(xiàn)場給予非規(guī)范的處理。 (二) 實驗過程中，如污染物濺落到身體表面，或有割傷、刺傷、燒傷、燙傷等情況發(fā)生，應立即停止實驗工作進行緊急處理，更換被污染的實驗服，皮膚表面用消毒液清洗，傷口以碘酒或酒精消毒，眼睛用無菌生理鹽水沖洗。 (三) 如果發(fā)生菌液溢出，含菌種的培養(yǎng)管破碎等，造成中 、小面積污染，可用比污染面積大25%以上的紗布覆蓋污染區(qū)域，邊緣用脫脂棉圍住，向紗布傾倒5%苯酚溶液或70%的酒精，浸泡2小時以上(其間適量加溶液防止干燥)，再經紫外燈近距離(1米內)照射2小時以上;被污染的器械、容器等立即浸泡于70%酒精中2小時以上，實驗完成后再進行高壓消毒處理。 (四) 如果發(fā)生氣溶膠污染或大面積污染，應立即停止實驗并關閉實驗室，