化學(xué)發(fā)光檢測(cè)

第一章 化學(xué)發(fā)光技術(shù)一、 免疫學(xué)檢測(cè)發(fā)展階段免疫學(xué)檢測(cè)主要是利用抗原和抗體的特異性反應(yīng)進(jìn)行檢測(cè)的一種手段，由于其可以利用同位素、酶、化學(xué)發(fā)光物質(zhì)等對(duì)檢測(cè)信號(hào)進(jìn)行放大和顯示，因此常被用于檢測(cè)蛋白質(zhì)、激素等微量物質(zhì)。我國(guó)免疫學(xué)的檢測(cè)基本歷經(jīng)了以下幾個(gè)過(guò)程，如圖1.1所示?；瘜W(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)（CLIA）酶聯(lián)免疫檢測(cè)（ELISA）放射免疫檢測(cè)（RIA）20世紀(jì) 60年代 70年代 90年代 時(shí)間圖1.1免疫學(xué)檢測(cè)發(fā)展階段盡管免疫診斷在臨床診斷中占據(jù)著非常重要的地位，但是從我國(guó)臨床免疫診斷現(xiàn)狀來(lái)看，無(wú)論是臨床應(yīng)用方面，還是產(chǎn)業(yè)化角度，都處于相對(duì)比較落后的狀態(tài)，亟待改進(jìn)。下表.就此做一比較：表1.1 中國(guó)免疫診斷現(xiàn)狀中國(guó)國(guó)際（歐美為主）放射免疫法（）興起于20世紀(jì)70年代，現(xiàn)仍普遍使用于縣級(jí)以上醫(yī)院；產(chǎn)品處于衰退期；廠(chǎng)商試劑與儀器共同開(kāi)發(fā)，試劑基本系列化。興起于20世紀(jì)60年代，現(xiàn)已基本退出臨床應(yīng)用；產(chǎn)品生命周期已終結(jié)；廠(chǎng)商試劑和儀器共同開(kāi)發(fā)，試劑基本系列化。酶聯(lián)免疫法（）興起于20世紀(jì)80年代，現(xiàn)普遍使用于各級(jí)臨床機(jī)構(gòu)，為我國(guó)臨床免疫診斷的基本方法；產(chǎn)品處于成熟期；廠(chǎng)商試劑與儀器共同開(kāi)發(fā)，試劑尚未系列化。興起于20世紀(jì)70年代，現(xiàn)仍在臨床應(yīng)用；產(chǎn)品處于衰退期；廠(chǎng)商試劑與儀器共同開(kāi)發(fā)，試劑基本系列化?；瘜W(xué)發(fā)光免疫法（）導(dǎo)入于20世紀(jì)90年代，現(xiàn)個(gè)別較大醫(yī)院開(kāi)展個(gè)別項(xiàng)目；產(chǎn)品處于導(dǎo)入期或成長(zhǎng)期；無(wú)廠(chǎng)商開(kāi)發(fā)生產(chǎn)，完全依賴(lài)進(jìn)口。興起于20世紀(jì)80年代，現(xiàn)已被臨床普遍使用，成為臨床免疫診斷的支柱方法；產(chǎn)品處于成熟期；廠(chǎng)商試劑與儀器共同開(kāi)發(fā)，儀器自動(dòng)化程度高，試劑系列化狀態(tài)好。 由以上分析不難看出，化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)是大勢(shì)所趨；而取代進(jìn)口，發(fā)展我國(guó)的化學(xué)發(fā)光檢測(cè)事業(yè)，正是臨床檢驗(yàn)界著手發(fā)展的方向。由此，我公司自1998年立項(xiàng)至今，致利于化學(xué)發(fā)光檢測(cè)方案設(shè)計(jì)，自行開(kāi)發(fā)了具有國(guó)內(nèi)領(lǐng)先水平的化學(xué)發(fā)光底物，與國(guó)外知名檢測(cè)儀器生產(chǎn)商聯(lián)合開(kāi)發(fā)了化學(xué)發(fā)光全自動(dòng)、半自動(dòng)檢測(cè)儀，并自行設(shè)計(jì)開(kāi)發(fā)了化學(xué)發(fā)光管理軟件，而今形成了儀器、試劑、軟件全面配套，為我國(guó)的臨床檢驗(yàn)界提供了一套完善的解決方案。二、 化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)【概述】本世紀(jì)70年代中期Arakawe首次報(bào)道用發(fā)光信號(hào)進(jìn)行酶免疫分析，利用發(fā)光的化學(xué)反應(yīng)分析超微量物質(zhì)，特別是用于臨床免疫分析中檢驗(yàn)超微量活性物質(zhì)。目前，這一技術(shù)已從實(shí)驗(yàn)室的稀有技術(shù)過(guò)渡到臨床醫(yī)學(xué)的常規(guī)檢測(cè)手段?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析（Chemiluminescence Immunoassay，CLIA）是將化學(xué)發(fā)光或生物發(fā)光體系與免疫反應(yīng)相結(jié)合，用于檢測(cè)微量抗原或抗體的一種新型標(biāo)記免疫測(cè)定技術(shù)。其檢測(cè)原理與放射免疫（RIA）和酶免疫（EIA）相似，不同這處是以發(fā)光物質(zhì)代替放射性核素或酶作為標(biāo)記物，并藉助其自身的發(fā)光強(qiáng)度直接進(jìn)行測(cè)定?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析既具有放射免疫的高靈敏度，又具有酶聯(lián)免疫的操作簡(jiǎn)便、快速的特點(diǎn)，易于標(biāo)準(zhǔn)化操作。且測(cè)試中不使用有害的試劑，試劑保持期長(zhǎng)，應(yīng)用于生物學(xué)、醫(yī)學(xué)研究和臨床實(shí)驗(yàn)診斷工作，成為非放射性免疫分析法中最有前途的方法之一。【原理】在化學(xué)發(fā)光免疫分析中包含兩個(gè)部分，即免疫反應(yīng)系統(tǒng)和化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)。免疫反應(yīng)系統(tǒng)，其基本原理同酶聯(lián)免疫技術(shù)（ELISA），常采用雙抗體夾心法、競(jìng)爭(zhēng)法、間接法等反應(yīng)模式，如圖1.2，1.3，1.4所示。如圖1.2雙抗體夾心法反應(yīng)原理示意圖化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)的原理在于免疫反應(yīng)中的酶作用于發(fā)光底物。發(fā)光底物在酶的作用下，底物發(fā)生化學(xué)反應(yīng)并釋放出大量的能量，產(chǎn)生激發(fā)態(tài)的中間體。這種激發(fā)態(tài)中間體，當(dāng)其回到穩(wěn)定的基態(tài)時(shí)，可同時(shí)發(fā)射出光子。利用發(fā)光信號(hào)測(cè)量?jī)x器即可測(cè)量光量子產(chǎn)額，該光量子產(chǎn)額與樣品中的待測(cè)物質(zhì)的量成正比。由此可以建立標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)并計(jì)算樣品中待測(cè)物質(zhì)的含量。具體說(shuō)來(lái)，我們采用的是辣根過(guò)氧化物酶（HRP）催化魯米諾（Luminol）底物發(fā)光系統(tǒng)，如圖1.5所示。我們的核心技術(shù)之一在于自行研制開(kāi)發(fā)的發(fā)光底物系統(tǒng)，該系統(tǒng)與國(guó)外同類(lèi)產(chǎn)品的比較表明，不僅主要性能指標(biāo)達(dá)到了國(guó)外產(chǎn)品水平，并且由于自行生產(chǎn)，因此大大降低了發(fā)光底物的成本。在該底物系統(tǒng)中，我們采用特殊的復(fù)合型增強(qiáng)劑，發(fā)光快，強(qiáng)度高，發(fā)光平臺(tái)期長(zhǎng)，可達(dá)3060分鐘，因此完全可以滿(mǎn)足臨床檢測(cè)的需要。其發(fā)光平臺(tái)期測(cè)定結(jié)果如圖1.6所示（1）與放免（RIA）產(chǎn)品比較 與放射免疫試劑（RIA）比較，化學(xué)發(fā)光避免了放射性核素的污染以及對(duì)操作人員的傷害，大大縮短了反應(yīng)時(shí)間，同時(shí)兼具高靈敏度的優(yōu)勢(shì)。 （2）與酶免（ELISA）產(chǎn)品比較 靈敏度與可測(cè)范圍遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于酶免產(chǎn)品，兼具ELISA法簡(jiǎn)便的操作方法與較短的反應(yīng)時(shí)間。 （3）與進(jìn)口全自動(dòng)發(fā)光比較試劑成本遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于進(jìn)口全自動(dòng)發(fā)光試劑，為開(kāi)放體系，也可適用其他發(fā)光檢測(cè)儀器檢測(cè)?！緫?yīng)用】發(fā)光免疫分析作為一種非放射性免疫標(biāo)記技術(shù)，除了具有靈敏、特異、標(biāo)記物穩(wěn)定等特點(diǎn)外，其檢測(cè)程序亦簡(jiǎn)便、快速，只需微量標(biāo)本，近年來(lái)臨床上已應(yīng)用于檢測(cè)各種激素、腫瘤標(biāo)志物、藥物及其他微量生物活性物質(zhì)，亦可用于細(xì)菌和病毒感染的快速診斷。三、 技術(shù)優(yōu)勢(shì)【技術(shù)路線(xiàn)的確定】為適應(yīng)中國(guó)臨床檢驗(yàn)的實(shí)際需要，我公司確定了以下的技術(shù)路線(xiàn)，如下表1.7所示：【技術(shù)鑒定】（1） 化學(xué)發(fā)光試劑的現(xiàn)狀 已通過(guò)河北省科委鑒定： 國(guó)外進(jìn)口發(fā)光劑對(duì)比結(jié)果：符合率為98%，部分技術(shù)指標(biāo)超過(guò)進(jìn)口發(fā)光劑。 甲胎蛋白（AFP）化學(xué)發(fā)光定量檢測(cè)試劑盒：已通過(guò)中國(guó)藥品生物制品檢定所檢定，各項(xiàng)指標(biāo)優(yōu)異。 癌抗原125（CA125）化學(xué)發(fā)光定量檢測(cè)試劑盒：已通過(guò)中國(guó)藥品生物制品檢定所檢定，各項(xiàng)指標(biāo)優(yōu)異。 催乳素（PRL）化學(xué)發(fā)光定量檢測(cè)試劑盒：已通過(guò)中國(guó)藥品生物制品檢定所檢定，各項(xiàng)指標(biāo)優(yōu)異。（2） 化學(xué)發(fā)光儀及軟件 化學(xué)發(fā)光分析管理軟件已開(kāi)發(fā)完成，可實(shí)現(xiàn)程序測(cè)量、快速測(cè)量、單板多項(xiàng)、兩點(diǎn)定標(biāo)、自動(dòng)打印化驗(yàn)單、工作量統(tǒng)計(jì)等功能。 表1.7技術(shù)路線(xiàn)思路確定技術(shù)路線(xiàn)思路標(biāo)準(zhǔn)微孔板為反應(yīng)載體操作簡(jiǎn)便、易于標(biāo)準(zhǔn)化標(biāo)記辣根過(guò)氧化物酶應(yīng)用廣泛、標(biāo)記技術(shù)穩(wěn)定魯米諾底物系統(tǒng)針對(duì)辣根過(guò)氧化物酶，發(fā)光強(qiáng)度大，擴(kuò)展性強(qiáng)全自動(dòng)、半自動(dòng)發(fā)光儀適合不同層次用戶(hù)的需要中文操作軟件方便國(guó)內(nèi)臨床免疫學(xué)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室四、 產(chǎn)品介紹【系列試劑盒】現(xiàn)有試劑盒共有5個(gè)系列，20余種產(chǎn)品。（1） 腫瘤標(biāo)志物系列：甲胎蛋白（AFP）、癌胚抗原（CEA）、血清鐵蛋白（SF）、2微球蛋白（2-MG）、人絨毛膜促性腺激素（HCG）、前列腺特異性抗原（PSA）、游離前列腺特異性抗原（f-PSA）、癌抗原125（CA125）、癌抗原15-3（CA15-3）、癌抗原19-9（CA19-9）（2） 甲狀腺功能系列：甲狀腺素（T4）、游離甲狀腺素（FT4）、三碘甲腺原氨酸（T3）、游離三碘甲腺原氨酸（FT3）、促甲狀腺素（TSH）（3） 生殖內(nèi)分泌激素系列：催乳素（PRL）、黃體生成素（LH）、卵泡刺激激素（FSH）、孕酮（P）、睪酮（T）、雌二醇（E2）（4） 糖尿病系列：胰島素、血清C肽（5） 其他檢測(cè)系列：皮質(zhì)醇、總lgE、生長(zhǎng)激素（GH）【試劑盒評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)】從臨床應(yīng)用角度考核檢驗(yàn)試劑的可靠性，是以其能否區(qū)分健康與疾病的能力作為依據(jù)的。目前還很難找到100%可靠的試驗(yàn)，任何試驗(yàn)都會(huì)出現(xiàn)假陰性或假陽(yáng)性。以下指標(biāo)為評(píng)價(jià)一個(gè)試劑盒的常用指標(biāo)，不同的試劑盒將根據(jù)不同的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)價(jià)。（1） 準(zhǔn)確性準(zhǔn)確性是指測(cè)定所得值與真值的一致性。（2） 精密性精密度是指對(duì)同一份樣品重復(fù)測(cè)定，每次測(cè)定結(jié)果和均值的接近程度。（3） 靈敏度靈敏度是指某種試驗(yàn)檢出極低免疫物質(zhì)的能力。（4） 特異性特異性是指以無(wú)病者試驗(yàn)，其陰性的百分率。（5） 穩(wěn)定性是指試劑盒在有效期內(nèi)保持穩(wěn)定的程度?！驹噭┖胁僮髯⒁馐马?xiàng)】（1） 發(fā)光反應(yīng)最適溫度在2528，為保證試驗(yàn)測(cè)定的準(zhǔn)確性，應(yīng)嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)室溫度在1825。（2） 發(fā)光反應(yīng)靈敏度很高，因此需要嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)要求，控制每步反應(yīng)時(shí)間，操作應(yīng)緊湊。（3） 處理試劑和樣品時(shí)需戴一次性手套，操作后應(yīng)徹底洗手。（4） 所有標(biāo)本應(yīng)視為潛在的傳染性物質(zhì)，廢棄處理時(shí)，請(qǐng)按照當(dāng)?shù)卣陀嘘P(guān)國(guó)家規(guī)定進(jìn)行。（5） 操作前仔細(xì)閱讀使用說(shuō)明書(shū)，不同批號(hào)的試劑不得混用。（6） 包被條打開(kāi)后，應(yīng)將剩余包被條用密封保存，以免受潮。（7） 加樣頭不可混用，以免交叉感染。（8） 為避免邊緣效應(yīng)，建議溫育過(guò)程中將微孔板用封膜覆蓋。（9） 洗滌要徹底，洗液應(yīng)注滿(mǎn)每孔，避免產(chǎn)生氣泡。每次洗滌均應(yīng)甩干孔內(nèi)液體。但不可用水過(guò)猛，最后應(yīng)將孔內(nèi)液體拍干。（10） 建議各實(shí)驗(yàn)室根據(jù)自己實(shí)際條件建立臨界值范圍。本試劑盒僅作其他診斷方法的輔助手段之一，供醫(yī)生參考。（11） 試劑請(qǐng)?jiān)谟行趦?nèi)使用。第二章 腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)一、腫瘤標(biāo)志物簡(jiǎn)介近年來(lái)，腫瘤已成為危害人類(lèi)生命健康的常見(jiàn)病、多發(fā)病。腫瘤根據(jù)來(lái)源可分為瘤和癌，按照性質(zhì)可分為良性和惡性。腫瘤的發(fā)生直接影響機(jī)體的代謝，如改變糖的代謝途徑，改變蛋白質(zhì)與核酸的合成，改變代謝過(guò)程中關(guān)鍵酶的活性，以及引起激素代謝異常等。以蛋白質(zhì)為例，腫瘤組織中的蛋白質(zhì)含量要比正常組織高。作為可用于腫瘤標(biāo)志檢測(cè)蛋白質(zhì)來(lái)講，屬于腫瘤組織自身增值中合成的標(biāo)志蛋白質(zhì)或酶均見(jiàn)增高，而屬于腫瘤細(xì)胞分化標(biāo)志的蛋白質(zhì)或酶，其合成往往成減低趨勢(shì)。并且通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)，在哺乳類(lèi)動(dòng)物胚胎期所具有蛋白質(zhì)，隨著年齡增長(zhǎng)其結(jié)構(gòu)有所改變，當(dāng)人體出生后或隨著年齡變化，某些基因被關(guān)閉，不再表達(dá)或很少表達(dá)該基因的活性，當(dāng)癌變時(shí)，某些細(xì)胞退化成為分化較差的、近似于胚胎細(xì)胞時(shí)，使得某些基因失活，某些基因被激活，重新合成一些胚胎蛋白，如甲胎蛋白、癌胚抗原等，這一現(xiàn)象稱(chēng)為返祖現(xiàn)象。這即為腫瘤標(biāo)志物的檢測(cè)建立了科學(xué)基礎(chǔ)。所謂腫瘤標(biāo)志物（tumormarker,TM），是指由腫瘤組織產(chǎn)生的存在于腫瘤組織本身，或分泌至血液或其他體液，或因腫瘤組織刺激，由宿主細(xì)胞產(chǎn)生而含量明顯高于正常參考值的一類(lèi)物質(zhì)。腫瘤標(biāo)志物的檢測(cè)，對(duì)于腫瘤的早期發(fā)現(xiàn)，病情的發(fā)展、治療后的評(píng)價(jià)、監(jiān)測(cè)復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移等方面都具有一定的應(yīng)用價(jià)值，可以為患者爭(zhēng)取治療時(shí)間，延長(zhǎng)患者生命。因而近年來(lái)，世界許多醫(yī)學(xué)科學(xué)工作者致力于對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)各環(huán)節(jié)、代謝與調(diào)控的基本規(guī)律和變化研究，尋求新的特異性或相對(duì)特異性的腫瘤標(biāo)志物。二、瘤標(biāo)志物的分類(lèi)腫瘤胚胎性抗原標(biāo)志物該類(lèi)蛋白質(zhì)即前文所提到的因返祖現(xiàn)象的出現(xiàn)，而產(chǎn)生的腫瘤標(biāo)志物。雖然該類(lèi)標(biāo)志物與腫瘤組織不一定具有特定的相關(guān)性，但與腫瘤的發(fā)生存在著內(nèi)在的聯(lián)系。例：甲胎蛋白（alpha-fetoprotein, AFP）癌胚抗原（carcinoembryonic antigen, CEA）糖類(lèi)抗原標(biāo)志物該類(lèi)物質(zhì)是腫瘤細(xì)胞表面的抗原物質(zhì)，或腫瘤細(xì)胞所分泌的物質(zhì)。這類(lèi)標(biāo)志物的出現(xiàn)為臨床腫瘤的診斷帶來(lái)方便，但其命名無(wú)規(guī)律可言。有些是腫瘤細(xì)胞株編號(hào)，有些是抗體物質(zhì)的編號(hào)。該類(lèi)標(biāo)志物又可分為兩類(lèi)1糖類(lèi)高分子粘蛋白抗原例：癌抗原CA125癌抗原CA15-32血型類(lèi)抗原例：癌抗原CA19-9癌抗原CA50酶類(lèi)標(biāo)志物酶及同工酶是最早出現(xiàn)和使用的腫瘤標(biāo)志物之一。腫瘤狀態(tài)時(shí)，機(jī)體的酶活力就會(huì)發(fā)生較大變化，這主要是因?yàn)槟[瘤細(xì)胞或組織本身誘導(dǎo)其他細(xì)胞和組織產(chǎn)生異常含量的酶；腫瘤細(xì)胞的代謝旺盛，細(xì)胞通透性增加，使得腫瘤細(xì)胞內(nèi)的酶進(jìn)入血液，或因腫瘤使得某些器官功能不良，導(dǎo)致各種酶的滅活和排泄障礙。例：前列腺特異性抗原（prostate specific antigen, PSA）神經(jīng)原特異性烯醇化酶（neuron-specificenolase, NSE）激素類(lèi)標(biāo)志物當(dāng)具有分泌激素功能的細(xì)胞癌變時(shí)，就會(huì)使分泌的激素量發(fā)生異常。這種現(xiàn)象被稱(chēng)為正位激素異常。而正常情況下不能生成激素的那些細(xì)胞，轉(zhuǎn)化為腫瘤細(xì)胞后所產(chǎn)生的激素，或者是那些能產(chǎn)生出激素的細(xì)胞癌變后，分泌出的是其他激素細(xì)胞所產(chǎn)生的激素，這種現(xiàn)象被稱(chēng)為異位激素異常。衡量異位激素異常的條件是：有非內(nèi)分泌腺細(xì)胞合成的激素；某種內(nèi)分泌細(xì)胞卻分泌其他分泌腺細(xì)胞的激素；腫瘤患者同時(shí)伴有分泌異常綜合征；這類(lèi)腫瘤細(xì)胞在體外培養(yǎng)時(shí)也能產(chǎn)生激素；腫瘤切除或經(jīng)治療腫瘤消退時(shí)，此種激素含量下降，內(nèi)分泌綜合征的癥狀改善。例：人絨毛膜促性腺激素（human chorionic gonagotropin,HCG）人胎盤(pán)催乳素（PRL）其它蛋白質(zhì)類(lèi)標(biāo)志物另外還有一些早期發(fā)現(xiàn)的蛋白類(lèi)腫瘤標(biāo)志物，特異性稍差，但檢測(cè)方法相對(duì)比較容易，因而常作為常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目，用以腫瘤普查。例：2-微球蛋白（2-microglobulin,2-MG）血清鐵蛋白（Serum Ferritin,SF）三、肝癌及甲胎蛋白（AFP）原發(fā)性肝癌是指由肝細(xì)胞或肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌變所形成的惡性腫瘤，是我國(guó)常見(jiàn)的惡性腫瘤。近年來(lái)國(guó)內(nèi)外原發(fā)性肝癌的發(fā)病率，均有不斷增高的趨勢(shì)。從世界范圍來(lái)看，各地區(qū)發(fā)病有較大差別，歐美國(guó)家發(fā)病率較低（1.93.4人/10萬(wàn)人），亞非國(guó)家發(fā)病率較高（4.698.2人/10萬(wàn)人）。根據(jù)我國(guó)一些地區(qū)的普查，我國(guó)的發(fā)病率為14.553人/10萬(wàn)人,可見(jiàn)我國(guó)亦屬原發(fā)性肝癌的高發(fā)區(qū)。男性肝癌的死亡率僅次于胃癌和食管癌，占各種惡性腫瘤的第三位，女性則僅次于胃癌、宮頸癌和食管癌，為第四位。肝癌的發(fā)病率呈一定的地區(qū)分布，沿海高于內(nèi)地，東南和東北高于西北、華北和西南部，沿海島嶼和江河?？谟指哂谘睾Ｆ渌貐^(qū)。肝癌多見(jiàn)于男性，男女發(fā)病之比為25:1，年齡大多為4049歲。越是肝癌高發(fā)區(qū)，這種性別差異就越明顯，發(fā)病年齡也越早。原發(fā)性肝癌起病隱匿，早期癥狀不明顯，一旦出現(xiàn)臨床病狀和體征，診斷多屬晚期，難以治療。因此臨床上迫切需要一種能夠早期診斷原發(fā)性肝癌的檢查方法。1956年Bergstrand和Czar在人胎兒血清中發(fā)現(xiàn)一種胚胎專(zhuān)一性甲種球蛋白，以后證實(shí)為甲胎蛋白（AFP）；1963年蘇聯(lián)GlAbelev首先在移植肝癌細(xì)胞的小鼠血清中發(fā)現(xiàn)了甲胎蛋白，并發(fā)現(xiàn)甲胎蛋白主要由胎肝合成；1964年Tatarinov證明肝癌病人血清中也存在AFP；其后Uriel 等進(jìn)一步證實(shí)AFP在原發(fā)性肝癌診斷中的價(jià)值。1970年后，通過(guò)廣泛的臨床應(yīng)用，證實(shí)AFP是診斷肝癌的可靠指標(biāo)之一，從而使肝癌的診斷獲得重大突破。大量研究結(jié)果表明，原發(fā)性肝癌者血清AFP含量90%以上超過(guò)500ng/ml,最高可達(dá)每毫升數(shù)毫克，一般正常人血清AFP含量都在20ng/ml以下。世界各國(guó)已先后將AFP檢查作為早期診斷原發(fā)性肝癌的有效方法用于臨床。我國(guó)在十一屆國(guó)際肝瘤會(huì)議上報(bào)告了49430人AFP普查工作，初步肯定了AFP普查對(duì)原發(fā)性肝癌具有早期診斷意義。通過(guò)普查在臨床上發(fā)現(xiàn)了許多無(wú)癥狀、無(wú)體征的“小肝癌”，對(duì)早期治療、提高患者的生存率起到了十分重要的作用。AFP測(cè)定的臨床意義：1 原發(fā)性肝癌的診斷檢測(cè)血清AFP含量是診斷原發(fā)性肝癌的重要手段之一。由于方法學(xué)的不斷改進(jìn)，使原發(fā)性肝癌的陽(yáng)性檢出率達(dá)到了90%以上。正常成人血清AFP含量各家報(bào)告不一致?？赡芘c測(cè)定方法、標(biāo)準(zhǔn)品等不同有關(guān)。中國(guó)肝癌研究協(xié)會(huì)報(bào)導(dǎo)正常人血清AFP20ng/ml。而原發(fā)性肝癌患者血清AFP多數(shù)在500ng/ml左右。目前國(guó)內(nèi)多采用1977年全國(guó)肝癌防治協(xié)作會(huì)議擬定的單項(xiàng)AFP診斷肝癌的標(biāo)準(zhǔn)：定量500ng/ml,持續(xù)一個(gè)月以上，并能排除妊娠，活動(dòng)性肝病，生殖腺胚胎性腫瘤等。通過(guò)觀(guān)察血清AFP的動(dòng)態(tài)變化可了解患者病情進(jìn)展?fàn)顟B(tài)，因?yàn)檠錋FP升高常在患者癥狀和體征出現(xiàn)數(shù)月之久之前，故AFP檢測(cè)對(duì)原發(fā)性肝癌具有早期診斷價(jià)值。Kwata等檢測(cè)一例肝癌患者血清AFP僅31ng/ml,一年后即達(dá)10000ng/ml。Purres報(bào)導(dǎo)一例血清AFP為300ng/ml的患者，經(jīng)尸檢證實(shí)其肝癌結(jié)節(jié)的直徑僅0.5 cm。上海19711976年普查196萬(wàn)人，發(fā)現(xiàn)300例肝癌，其中134例為無(wú)明顯肝癌癥狀和體征的早期病人。普查發(fā)現(xiàn)的臨床前期病人，經(jīng)手術(shù)證實(shí)81.6%為5cm的小肝癌。以上的結(jié)果提示：AFP檢測(cè)用于普查可早期發(fā)現(xiàn)原發(fā)性肝癌。此外檢測(cè)AFP還可作為治療效果的評(píng)價(jià)指標(biāo)。2 急慢性肝炎和肝硬化的鑒別診斷急慢性肝炎、肝硬化患者血清中可檢出AFP一般僅為50200ng/ml，少數(shù)病人可暫時(shí)升高到400ng/ml以上。但急性肝炎患者隨著病情好轉(zhuǎn)，常在短時(shí)間內(nèi)下降至正常水平，此即AFP“一過(guò)性升高”。慢性肝病和肝硬化可呈下降或持續(xù)低水平，肝癌則呈逐漸上升趨勢(shì)。由于肝硬性患者有轉(zhuǎn)化為肝癌的可能，故在AFP原來(lái)正常的肝硬化病人中，出現(xiàn)AFP持續(xù)升高應(yīng)考慮癌變的可能。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)告，我國(guó)某些地區(qū)肝硬化病例中肝癌發(fā)生率可高達(dá)到32.1%。在臨床工作中，應(yīng)進(jìn)行多項(xiàng)動(dòng)態(tài)測(cè)定才能與肝癌進(jìn)行鑒別。3 先天性胎兒畸形診斷胎兒AFP可有少量通過(guò)胎盤(pán)屏障進(jìn)行母體，因此孕婦血清AFP可升高，一般在500ng/ml以下，產(chǎn)后20天內(nèi)降至正常人水平。在無(wú)腦兒脊柱裂畸形妊娠時(shí)，孕婦血清AFP異常升高，高者可達(dá)800ng/ml以上。近年來(lái)，羊水中AFP檢測(cè)的意義又引起人們的注意，如胎兒為無(wú)腦兒、開(kāi)放性脊柱裂時(shí)，羊水中甲胎蛋白含量可顯著增加。因此，羊水中甲胎蛋白的測(cè)定已成為開(kāi)放性神經(jīng)管畸形的特異診斷方法。惡性畸胎瘤的診斷一些胚胎性腫瘤如睪丸和卵巢的惡性畸胎瘤細(xì)胞也可合成AFP，所以惡性畸胎瘤患者血清中可出現(xiàn)較高含量的AFP，所以惡性畸胎瘤患者血清中可出現(xiàn)較高含量的AFP，臨床上應(yīng)注意根據(jù)患者的癥狀、體征等進(jìn)行鑒別。四、前列腺癌及其腫瘤標(biāo)志物前列腺癌的發(fā)病率在全球范圍內(nèi)呈上升趨勢(shì)。據(jù)美國(guó)統(tǒng)計(jì)約占男性癌腫的36%，以及男性癌腫相關(guān)死亡率的13%。在歐美國(guó)家前列腺癌是發(fā)病率最高的惡性腫瘤，死亡率僅次于肺癌位于男性腫瘤的第二位。在我國(guó)，隨著人口的老齡化、膳食結(jié)構(gòu)的改變和診斷技術(shù)的提高，前列腺癌的發(fā)病率和死亡率也在迅速增長(zhǎng)。1992年，美國(guó)白人前列腺癌的發(fā)病率為 404.5/10萬(wàn)男性人口，黑人可達(dá)477.2/10萬(wàn)男性人口。我國(guó)前列腺發(fā)病率約為3.4/10萬(wàn)男性人口，遠(yuǎn)低于西方國(guó)家，但國(guó)人良性前列腺增生（BPH）手術(shù)發(fā)現(xiàn)的偶發(fā)癌和尸檢前列腺標(biāo)本的潛伏癌約為歐美一半左右。由此推斷中國(guó)人前列腺癌從組織學(xué)發(fā)展到臨床要比歐美人需要更長(zhǎng)的時(shí)間，而前列腺癌的早期診斷是決定能否進(jìn)行根治性治療的關(guān)鍵。根據(jù)Stamey前列腺癌臨床分期標(biāo)準(zhǔn)，可將前列腺癌分為4期。A期：直腸指檢不能觸及前列腺癌結(jié)節(jié)；B 期：可觸及節(jié)結(jié)但局限在前列腺內(nèi)；C期：腫瘤侵犯周?chē)M織；D期：前列腺癌有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。其中，A、B期為臨床早期，而前列腺癌根治術(shù)也只限于A、B期的腫瘤。前列腺癌為老年性疾病，50歲以前很少發(fā)生。前列腺癌患者的表現(xiàn)變化多端。其自然發(fā)展規(guī)律無(wú)法預(yù)測(cè)。多數(shù)前列腺癌發(fā)生在腺體周邊，遠(yuǎn)離尿道，故早期患者很少出現(xiàn)癥狀。其診斷主要通過(guò)直腸指檢（DRE）、血清PSA檢測(cè)或直腸B超（TRUS）針刺活檢確定診斷。自1979年Wang等首先從前列腺組織內(nèi)分離和提純出前列腺特異性抗原（prostatic specific antigen，PSA）以來(lái)，PSA在臨床上得到了廣泛的研究和應(yīng)用。PSA是由人前列腺上皮細(xì)胞合成并分泌至精漿中的一種糖蛋白，分子量為3300034000道爾頓。許多體外試驗(yàn)表明，PSA具有糜蛋白酶樣活性，其本質(zhì)是一種絲氨酸蛋白酶，能使精液的凝塊水解，功能與男性性生育力有關(guān)。PSA主要存在于前列腺組織中，女性體內(nèi)不存在，當(dāng)發(fā)生前列腺癌時(shí)，PSA會(huì)大量釋放進(jìn)入血液，因此測(cè)定血PSA對(duì)前列腺癌的診斷有重要價(jià)值。當(dāng)血清PSA10ng/ml時(shí)，應(yīng)高度懷疑前列腺癌；而PSA410ng/ml時(shí)，則為灰色區(qū)。PSA測(cè)定可使前列腺癌的診斷提前4年，在用PSA進(jìn)行篩選的人群中，通過(guò)活檢發(fā)現(xiàn)癌的機(jī)會(huì)，PSA 4ng/ml者為1/50；410ng/ml者為1/5；10ng/ml者為1/3。近年來(lái)采用以檢測(cè)血清PSA為基礎(chǔ)，結(jié)合DRE、直腸B超（TRUS）、針刺活檢來(lái)診斷前列腺癌，其檢出率比未用PSA前提高了70%，對(duì)局限在前列腺內(nèi)的早期前列腺癌提高了一倍。因此建議50歲以上的男性，有條件時(shí)應(yīng)每年作一次直腸指檢（DRE）及血清PSA檢查。但是值得注意的是，血清PSA濃度可受多種因素的影響，特別是PSA的升高和前列腺的創(chuàng)傷有關(guān)。常規(guī)的直腸指檢、前列腺按摩、前列腺活檢、膀胱鏡操作、留置導(dǎo)尿都可以使PSA明顯升高，故血清PSA測(cè)定應(yīng)在前列腺操作前或操作后至少一周才抽血，前列腺活檢后則需等待更長(zhǎng)的時(shí)間。PSA對(duì)前列腺癌組織有特異性，但對(duì)前列腺癌并無(wú)特異性，各種良性前列腺病變?nèi)鏐PH也可表現(xiàn)為PSA增高。為了將前列腺癌和前列腺良性病變區(qū)別開(kāi)來(lái)，近年來(lái)在此基礎(chǔ)上產(chǎn)生了以下指標(biāo)，特別是當(dāng)血清PSA為410ng/ml時(shí)，對(duì)前列腺癌的診斷有較大幫助。血清游離PSA（f-PSA）與總PSA的比值（fPSA/tPSA） 1995年McCrmack發(fā)現(xiàn)正常fPSA僅占tPSA的10%20%，若fPSA/tPSA25%，前列腺癌的可能性極小（10%當(dāng)fPSA/tPSA10%時(shí)，則前列腺癌的可能性極大（80%），必須作前列腺活檢以確診。前列腺特異性抗原速率（PSA velocity,PSAV）回顧性研究表明，連續(xù)觀(guān)察血清PSA濃度的變化，前列腺癌組織PSA速率顯著高于良性前列腺增生組和正常人組，正常值上限為每年 0.75ng/ml。這樣，即使在兩次檢測(cè)中PSA的濃度均在正常范圍，但根據(jù)PSA的速率變化，可進(jìn)一步檢查發(fā)現(xiàn)早期前列腺癌。大量的篩選資料證明，如果PSA速率超過(guò)每年0.75ng/ml，則可發(fā)現(xiàn)47%的患者患前列腺癌。五、卵巢癌及癌抗原CA125據(jù)統(tǒng)計(jì)，每年都約有20，000名婦女被診斷為新的卵巢癌病人。每年死于卵巢癌的婦女超過(guò)12，000人。卵巢癌是僅次于宮頸癌、宮體癌的第三位婦科腫瘤，居女性惡性腫瘤的第六位，但其死亡率卻明顯高于宮頸癌和宮體癌，是惡性程度最高的婦科癌癥，且由于大多數(shù)卵巢癌均發(fā)現(xiàn)于晚期，故其五年生存率僅為20%30%。世界上卵巢癌發(fā)病率最高的是瑞典（21/10萬(wàn)）。上海1988年統(tǒng)計(jì)，卵巢惡性腫瘤發(fā)病率為5.37/10萬(wàn)。卵巢癌的高發(fā)年齡在4070歲。卵巢癌的組織病理類(lèi)型復(fù)雜，一般而言，卵巢實(shí)性腫瘤多屬惡性，而囊性腫瘤多屬良性。1981年，Bast等從人卵巢漿液囊胞腺癌抗原可被單克隆抗體OC125識(shí)別，因而被稱(chēng)為CA125，是一種卵巢癌相關(guān)抗原。為一種糖蛋白，MW大于200000。CA125是研究最多的卵巢癌標(biāo)記物，在早期篩查、診斷、治療及預(yù)后的應(yīng)用研究均有報(bào)道。在早期篩查方面，雖然血清CA125在、期卵巢癌的敏感性只有60%左右，仍被認(rèn)為是一項(xiàng)經(jīng)濟(jì)、方便的早期檢查手段。有研究表明，還未被診斷為卵巢癌者血清中即可檢測(cè)到CA125升高，比臨床診斷提前至少1年的時(shí)間。在一項(xiàng)用挪威的血清庫(kù)進(jìn)行的更大規(guī)模的研究中，發(fā)現(xiàn)CA125升高早在臨床檢查前18個(gè)月即可出現(xiàn)。更早的CA125變化可出現(xiàn)在臨床確診前5年，那時(shí)即有25%的病人高于30U/ml，同年齡段的對(duì)照組只有7%的升高。這表明通過(guò)檢測(cè)血清CA125，上皮性卵巢癌能被提前相當(dāng)一段時(shí)間發(fā)現(xiàn)。CA125在早期篩查方面的敏感性低于陰道超聲檢查（TVU），連續(xù)檢測(cè)CA125或與陰道超聲（TVU）聯(lián)合應(yīng)用可提高診斷的特異性和敏感性。在一個(gè)5500人的健康女性人群中，175人被查到CA125升高，連同另外175個(gè)健康對(duì)照隨訪(fǎng)者，每三個(gè)月做一次CA125，每半年做一次陰道超聲和盆腔檢查。用這種方式查到6個(gè)病人，其中4人是早期。在連續(xù)檢測(cè)中，CA125的初始濃度和上升斜率應(yīng)考慮在內(nèi)，以鑒別腫瘤是良性生長(zhǎng)還是惡性生長(zhǎng)。在一次8688份血清樣品的回顧性研究中，發(fā)現(xiàn)用這種方式來(lái)計(jì)算卵巢癌的危險(xiǎn)性，其敏感性83%，特異性99.1%，陽(yáng)性預(yù)見(jiàn)率16%，認(rèn)為這種方式是篩查早期卵巢癌的較好技術(shù)。CA125用于卵巢癌篩查假陽(yáng)性主要出現(xiàn)在妊娠、月經(jīng)期及婦科炎癥等情況。在妊娠頭3個(gè)月和月經(jīng)期CA125假陽(yáng)性分別可達(dá)57%和16%。也有認(rèn)為CA125與月經(jīng)周期無(wú)關(guān)，但子宮內(nèi)膜炎患者CA125升高。CA125的升高與臨床分期及病理類(lèi)型相關(guān)，漿液性卵巢上皮癌CA125陽(yáng)性率89%，粘液性癌16%，卵巢內(nèi)胚竇瘤CA125不升高。、期卵巢癌CA125的陽(yáng)性率在60%左右，、期患者陽(yáng)性率在85%以上，甚至接近100%。卵巢癌經(jīng)過(guò)手術(shù)治療或綜合治療后，因腫瘤負(fù)荷的減少，腫瘤標(biāo)志物的水平亦有明顯變化。通過(guò)連續(xù)檢測(cè)腫瘤標(biāo)志物的變化，可對(duì)治療效果進(jìn)行評(píng)價(jià)。CA125在評(píng)價(jià)療效方面很有價(jià)值。Crombach等報(bào)道CA125水平的變化與治療后病情變化的符合率達(dá)89%。Hilila報(bào)道治療后病情進(jìn)展者中88%升高，在病情好轉(zhuǎn)者中87%降低，總符合率88%。CA125治療后的下降幅度和下降后的穩(wěn)定期長(zhǎng)短是評(píng)價(jià)治療效果的良好指標(biāo)。對(duì)治療后隨訪(fǎng)的患者，CA125是較佳的復(fù)查指標(biāo)，其變化比客觀(guān)證據(jù)早16個(gè)月，但二次手術(shù)探查中CA125的陽(yáng)性率僅有35%40%，復(fù)發(fā)灶直徑大于2cm者陽(yáng)性率較高。但有臨床表現(xiàn)的復(fù)發(fā)患者CA125的陽(yáng)性率可達(dá)90%以上。連續(xù)動(dòng)態(tài)測(cè)定可以提高在復(fù)發(fā)診斷方面的陽(yáng)性率，發(fā)現(xiàn)CA125升高應(yīng)考慮復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移，CA125升高的斜度和幅度可預(yù)示局部復(fù)發(fā)或是遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。在無(wú)癥狀的絕經(jīng)后婦女中CA125水平升高也是一個(gè)重要的危險(xiǎn)因素。Jeyarajah等隨訪(fǎng)了從22000名絕經(jīng)后婦女中篩選出的血清CA125高于30U/ml的女性771人，另外隨機(jī)選擇了同等數(shù)量的血清CA125低于30U/ml女性一起隨訪(fǎng)1614+897天，結(jié)果共有84人死亡，其中CA125升高組占62人，而CA125正常者僅22人，血清CA125升高者死亡危險(xiǎn)性顯著高于正常者。六、乳腺癌及癌抗原CA15-3乳腺癌的發(fā)病率居常見(jiàn)癌癥的第三位，是婦女中最常見(jiàn)的惡性腫瘤，在我國(guó)位于婦女惡性腫瘤的第二位。乳腺癌的發(fā)病率在世界各個(gè)國(guó)家和地區(qū)判別很大，北美、北歐最高，亞洲、非洲最低，南歐及拉丁美洲居中。我國(guó)的津、京、滬及沿海城市為高發(fā)地區(qū)，上海最高。乳腺癌好發(fā)于女性，發(fā)病率是男性的100倍。30歲后，發(fā)病逐年增多，7075歲達(dá)高峰。乳腺癌常在確診時(shí)已經(jīng)有轉(zhuǎn)移或在治療后發(fā)生轉(zhuǎn)移，而腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移是引起患者死亡的主要原因之一。因此乳腺癌從發(fā)病開(kāi)始就是一種全身性疾病，在體內(nèi)可能隱藏著一些微小轉(zhuǎn)移灶。手術(shù)、放化療及內(nèi)分泌治療有助于控制乳腺癌的發(fā)展。早期檢測(cè)乳腺癌轉(zhuǎn)移和治療后的復(fù)發(fā)對(duì)控制乳腺癌的發(fā)展，改善患者的生存質(zhì)量，養(yǎng)活轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)和死亡率有重要的意義。1984年，Hikens等人及Kufe等人分別用人乳脂球膜上分離的糖蛋白MAM-16和肝轉(zhuǎn)移的乳腺癌細(xì)胞免疫小鼠，制成針對(duì)相應(yīng)抗原的單克隆抗體：115-D8和DF-3。這兩株抗體所識(shí)別的抗原是上皮細(xì)胞上的一種粘蛋白MUC-1的唾液酸糖抗原，該抗原被命名為CA15-3。這兩株抗體分別與CA15-3抗原上的兩個(gè)主要決定簇相結(jié)合。CA15-3分子結(jié)構(gòu)還不清楚。該種糖蛋白含有脫輔基蛋白一個(gè)跨膜區(qū)，一個(gè)胞內(nèi)區(qū)和由20個(gè)氨基酸縱向排列的胞外區(qū)。CA15-3分子量約為400KD這種粘液性糖蛋白（MUC-1）位于乳腺細(xì)胞和肺上皮細(xì)胞上，也大量表達(dá)于乳腺癌，卵巢癌，胰腺癌，胃癌和肝癌上，是一種腫瘤相關(guān)抗原。CA15-3的血清半衰期不到兩周。乳腺良性腫瘤患者術(shù)前、術(shù)后CA15-3水平均正常；乳腺癌患者術(shù)前CA15-3水平期處于正常水平，、期升高，并以期升高最為明顯。、期乳腺癌根治術(shù)后CA15-3水平降至正常，而姑息性切除術(shù)后仍高于正常。術(shù)前乳腺癌患者CA15-3水平較低與較好的預(yù)后呈正相關(guān)。血清CA15-3在治療后持續(xù)較高或又出現(xiàn)持續(xù)性升高，提示體內(nèi)殘留有腫瘤或乳腺腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移或復(fù)發(fā)。血清CA15-3水平持續(xù)性升高較臨床診斷乳腺癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移灶要早幾個(gè)月。因此一些臨床腫瘤專(zhuān)家認(rèn)為，在乳腺癌術(shù)后最初四年中應(yīng)該每三個(gè)月復(fù)查一次血清CA15-3水平，而五年以上的患者應(yīng)每六個(gè)月復(fù)查一次。在正常人群及乳腺良性腫瘤患者中，CA15-3有一定比例的陽(yáng)性檢出率，在少數(shù)良性疾患中，如慢性肝炎，結(jié)核，自身免疫疾病中也會(huì)有所升高。七、消化道腫瘤及癌抗原CA19-9消化道腫瘤，尤其是胃癌在中國(guó)占各種惡性腫瘤發(fā)病率及死亡率的第一位，且未見(jiàn)明顯下降趨勢(shì)。據(jù)調(diào)查，雖然城市人口胃癌死亡率稍有下降，但在農(nóng)村中則有所升高。統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明在中國(guó)胃癌的死亡率由1973-1974年的19.8萬(wàn)增至1990-1992年的21.8/10萬(wàn)。男性的胃癌發(fā)病率高于女性，男女發(fā)病率之比為2-3：1。發(fā)病的高峰年齡為40-59歲，且有年輕化的趨勢(shì)。結(jié)腸癌，胰腺癌發(fā)病率也有所升高。結(jié)腸癌的發(fā)病率，以上海市為例，在這期間以每年10%的速度增加。在20年間增加2.25倍。1979年Koprowski用結(jié)腸癌細(xì)胞系SW1116免疫小鼠，與骨髓瘤雜交制備出被命名為116NS19-9的單克隆抗體。該株抗體能識(shí)別腫瘤細(xì)胞膜上如糖脂和粘蛋白成分中所表達(dá)的唾液酸化的Lewis血型抗原（Sialosy-fucosyl-lactotetraose）的表位。這種血型抗原是一種異質(zhì)性的高分子量粘糖蛋白，分子量范圍從200-1000Kd。在胚胎上皮組織中有較高表達(dá)，但在正常人中表達(dá)量很低，該株抗體所識(shí)別的腫瘤相關(guān)抗原被命名為CA19-9。CA19-9在消化道腺癌病人血清中濃度可明顯升高，因而又稱(chēng)作胃腸癌抗原。CA19-9是一種與胃腸道惡性腫瘤有關(guān)的腫瘤相關(guān)抗原。在胰腺癌，膽管細(xì)胞癌，肝細(xì)胞癌，胃癌，結(jié)腸癌以及食管癌，甚至在非胃腸道惡性腫瘤患者，血清CA19-9循環(huán)抗原含量都有不同程度的升高。隨著治療和病情的不同轉(zhuǎn)歸，血清中CA19-9含量會(huì)有所變化，因而能較好的反映患者的病變狀態(tài)。血清CA19-9的測(cè)定是一種高特異性，高預(yù)見(jiàn)性和無(wú)害的測(cè)定方法，可用于胃腸道惡性腫瘤的早期診斷，及時(shí)監(jiān)測(cè)病情的進(jìn)展、復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，有助于臨床腫瘤醫(yī)師研究和確定對(duì)胃腸道惡性腫瘤患者的治療方案。八、人絨毛膜促性腺激素（HCG）檢測(cè)及癌癥診斷人絨毛膜促性腺激素（HCG）是由胎盤(pán)的滋養(yǎng)層細(xì)胞分泌的一種糖蛋白激素，由100個(gè)氨基酸和一些單糖組成，分子量約為30000，有和兩個(gè)亞單位，主要具有刺激黃體發(fā)育的功能，從而維持妊娠的繼續(xù)。HCG的檢測(cè)除了可診斷正常妊娠外，還可對(duì)異位妊娠、絨毛膜癌、滋養(yǎng)層腫瘤等進(jìn)行診斷，并可用于正確指導(dǎo)人工流產(chǎn)。1正常妊娠檢測(cè)一般孕婦在停經(jīng)后30-60天才知道受孕，而且妊娠癥狀在頭一月往往不是很明顯。胚胎極易受到X線(xiàn)、放療、手術(shù)麻醉以及藥物的損傷，另外煙酒及不良飲食也會(huì)影響的發(fā)育，為減少由于胚治的損傷，而導(dǎo)致嬰兒先天缺陷和避免不必要的人工流產(chǎn)，盡早使醫(yī)生和孕婦掌握受孕與否就顯得非常必要，對(duì)落實(shí)優(yōu)生優(yōu)育尤為重要。2 測(cè)異位妊娠和正常指導(dǎo)人工流產(chǎn)HCG在受精卵植入子宮后24至48小時(shí)就可以出現(xiàn)在血、尿及體液中，可以被檢測(cè)出來(lái)。不同個(gè)體及時(shí)期HCG含量有極大變化。但總的變化趨勢(shì)大致相同，一般都在第8-10周達(dá)到最高峰，平均上升速度為2.10.4增加一倍，然后逐漸降低，到18周時(shí)降至同第4周水平相近時(shí)即維持無(wú)較大的波動(dòng)。但是異位妊娠、先兆流產(chǎn)的HCG水平或增長(zhǎng)速度低于正常妊娠時(shí)的情況。當(dāng)受精卵在子宮外植入后，胚胎的發(fā)育可受到嚴(yán)重的限制，所以HCG的水平與同期正常妊娠相比就顯得很低。往往人工流產(chǎn)數(shù)天，HCG就會(huì)消失。如果HCG繼續(xù)存在，就說(shuō)明仍有絨毛組織殘存，需進(jìn)一步清宮。3 檢測(cè)亞臨床自然流產(chǎn)自然流產(chǎn)多為孕卵和發(fā)育異常，機(jī)體孕激素分泌不足，與著床不同步或脫膜發(fā)育不良。HCG水平也大大低于正常妊娠，一般在流產(chǎn)前HCG的水平在20mlU/ml左右，所以自然流產(chǎn)的診斷就需采用高靈敏度的試劑。滋養(yǎng)層細(xì)胞腫瘤的診斷滋養(yǎng)層細(xì)胞腫瘤系由絨毛膜的滋養(yǎng)層細(xì)胞和合體滋養(yǎng)細(xì)胞過(guò)度增生而來(lái)，根據(jù)滋養(yǎng)層細(xì)胞增生的程度，有無(wú)絨毛，侵蝕能力及其它生物學(xué)特性，分為良性葡萄胎、惡性葡萄胎，HCG水平持續(xù)升高，可提示這類(lèi)疾病的存在。 CG與腫瘤近年來(lái)的研究調(diào)查提示，HCG不僅是滋養(yǎng)層細(xì)胞腫瘤標(biāo)志，而且還可為許多其它腫瘤的重要標(biāo)志。如胃癌、胰腺癌、肝癌、多發(fā)性骨髓癌、卵巢癌、乳癌等。九、腫瘤普查腫瘤發(fā)生常常無(wú)明顯癥狀，因而無(wú)法早期治療，常常因此延誤了最佳治療時(shí)機(jī)目前一些地區(qū)已將甲胎蛋白（AFP）癌胚抗原（CEA）、2-微球蛋白（2-MG）、血清鐵蛋白（SF）作為體檢的檢查項(xiàng)目，用以腫瘤普查，從而提高了癌癥的早期診斷率。以上腫瘤標(biāo)志物多屬于非組織特異性腫瘤相關(guān)標(biāo)志物，但是聯(lián)合檢測(cè)可彌補(bǔ)非特異性的不足，提高腫瘤的檢出率。以下就這幾種腫瘤標(biāo)志物進(jìn)行分別介紹。甲胎蛋白（AFP）：見(jiàn)前文所述。癌胚抗原（CEA）是1965年Gold和Freedman首先從胎兒及結(jié)腸癌組織中發(fā)現(xiàn)的，CEA是一種分子量為22000道爾頓的多糖蛋白復(fù)合物，45%為蛋白質(zhì)。一般情況下，CEA是由胎兒胃腸道上皮組織、胰和肝的細(xì)胞所合成，通常在妊娠前6個(gè)月內(nèi)CEA含量增高，出生后血清含量降至很低。CEA屬于非器官特異性腫瘤相關(guān)抗原，分泌CEA的腫瘤大多位于空腔臟器，如胃腸道、呼吸道、泌尿道等。正常情況下，CEA經(jīng)胃腸道代謝，而腫瘤狀態(tài)時(shí)的CEA則進(jìn)入血液和淋巴循環(huán)，引起血清CEA異常增高，使上述各種腫瘤患者的血清CEA均增高。如肺癌、乳腺癌、膀胱癌和卵巢癌患者血清CEA量會(huì)明顯升高，大多顯示為腫瘤浸潤(rùn)，其中約有70%為轉(zhuǎn)移性癌。一般來(lái)說(shuō)，手術(shù)切除后6周，CEA水平恢復(fù)正常，否則提示有殘存腫瘤，若CEA濃度持續(xù)不斷增高，或其數(shù)值超過(guò)正常56倍者均提示預(yù)后不良。連續(xù)隨訪(fǎng)定量檢測(cè)血清CEA含量，對(duì)腫瘤病情判斷更具有意義。2-微球蛋白（2-MG）由Berggard和Besrn于1996年從腎臟患者尿中分離出的一種蛋白質(zhì)，由于它的分子量?jī)H為1.2KU,電泳是顯于2-MG區(qū)帶，故被命名為2-微球蛋白。2-微球蛋白是人體有核細(xì)胞產(chǎn)生的一種由100個(gè)氨基酸殘基組成的單鏈多肽地分子蛋白。2-微球蛋白是惡性腫瘤的輔助標(biāo)志物，也是一些腫瘤細(xì)胞上的腫瘤相關(guān)抗原。2-微球蛋白是人類(lèi)白細(xì)胞抗原（HLA）的輕鏈部分，鏈內(nèi)含有一對(duì)二硫鍵，2-MG與HLA-A、B、C抗原的重鏈非共價(jià)的相結(jié)合而存在于細(xì)胞膜上。一般認(rèn)為除成熟紅細(xì)胞和胎盤(pán)滋養(yǎng)層細(xì)胞外，其它細(xì)胞均含有2-MG。它可從有核細(xì)胞中脫落進(jìn)入血循環(huán)，使血液中的2-MG升高。血清2-MG不但可以在腎功能衰竭、多種血液系統(tǒng)疾病及炎癥時(shí)升高，而且在多種疾病中均可增高，故應(yīng)排除由于某些炎癥性疾病或腎小球?yàn)V過(guò)功能減低所致的血清2-MG增高。腫瘤患者2-MG含量異常增高，在淋巴系統(tǒng)中如慢性淋巴細(xì)胞白血病、淋巴細(xì)胞肉瘤、多發(fā)性骨髓瘤等尤為明顯，在肺癌、乳腺癌、胃腸道癌及子宮頸癌等也可見(jiàn)增高。由于在腫瘤早期，血清2-MG可明顯高于正常值，故有助于鑒別良、惡性腫瘤。腦脊液中的2-MG的檢測(cè)對(duì)膜白血病的診斷有特別的意義。鐵蛋白（ferritin）是Laufberger于1937年從馬脾中發(fā)現(xiàn)的一種儲(chǔ)鐵蛋白質(zhì)，分子量約450KD，每個(gè)鐵蛋白分子由24個(gè)亞基組成，亞基分L（light, liver, basic）和H（heavy, heart, acidic）2種，儲(chǔ)鐵組織（如肝、脾）中的鐵蛋白主要由L亞基組成，等電點(diǎn)較高；而心臟、胎盤(pán)中的鐵蛋白含H亞基較多，等電點(diǎn)較低。1965年Richter的報(bào)道引起了人們對(duì)腫瘤細(xì)胞鐵蛋白的極大興趣，與肝、脾鐵蛋白不同，腫瘤細(xì)胞的鐵蛋白含H亞基較多，習(xí)慣上稱(chēng)之為酸性鐵蛋白（acidic isoferrtins）。免疫學(xué)研究確立了鐵蛋白為一種腫瘤相關(guān)蛋白質(zhì)，多數(shù)腫瘤病人血清中鐵蛋白濃度升高，而組織鐵儲(chǔ)量并未發(fā)生相應(yīng)的增加，血清鐵蛋白濃度升高通常說(shuō)明病人預(yù)后不良。在荷有移植性人腫瘤的裸鼠血清中可檢測(cè)到人鐵蛋白的存在，而腫瘤摘除后人鐵蛋白從血清中迅速消失，這說(shuō)明腫瘤細(xì)胞可分泌胞外鐵蛋白，腫瘤病人血清中鐵蛋白水平的升高可能是腫瘤組織泄漏所致。十、腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)圖譜腫瘤標(biāo)志物的檢測(cè)可依照表2.1進(jìn)行選擇表2.1腫瘤標(biāo)志物的選擇癌腫部分腫瘤標(biāo)志物選擇順序肝AFP SF CEA 結(jié)直腸CEA CA19-9 CA50胰腺CA19-9 CEA CA50胃MGAg CA724 CEA CA19-9食道SCC肺CA50 CEA CA19-9 SCC SYFRA211 NSE乳房CA15-3 CA125 CEA卵巢CA125 AFP -HCG CEA子宮SCC SF -HCG前列腺fPSA PSA PAP甲狀腺HTG CEA CA19-9血液病SF -HCG項(xiàng)目名稱(chēng)主診陽(yáng)性順序CA50廣譜胰、肝、卵巢、腸、胃、肺CA125卵巢卵巢、胰、肺、乳、腸CA15-3乳房乳房CA19-9消化道胰、膽、胃、腸MGAg/CA724胃胃、腸、肺、乳SCC/SYFRA211鱗癌肺、食道、上鄂、宮頸、皮膚 注：以上表格摘自中國(guó)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)用品2001年第一期，僅供參考。第三章 甲狀腺激素檢測(cè)人體生理功能的調(diào)節(jié)系統(tǒng)包括神經(jīng)系統(tǒng)和內(nèi)分泌系統(tǒng)，神經(jīng)系統(tǒng)通過(guò)神經(jīng)纖維傳導(dǎo)信息實(shí)現(xiàn)調(diào)節(jié)功能，內(nèi)分泌通過(guò)血液和組織液運(yùn)輸激素，作用于某些靶細(xì)胞而達(dá)到調(diào)節(jié)功能，二者關(guān)系密切。所有的內(nèi)分泌腺都直接或間接受神經(jīng)系統(tǒng)的影響，激素也可以影響神經(jīng)功能，如甲狀激素能明顯影響腦的發(fā)育和正常功能。甲狀腺是一個(gè)內(nèi)分泌腺體，它分泌具有生物活性的甲狀腺激素。甲狀腺激素對(duì)機(jī)體的代謝、生長(zhǎng)發(fā)育、神經(jīng)系統(tǒng)、心血管及消化系統(tǒng)等具有重要作用；甲腺激素分泌量增加或減少均可導(dǎo)致甲狀腺功能失調(diào)，內(nèi)分泌代謝紊亂。因此，正確檢測(cè)甲狀腺相關(guān)激素，對(duì)于診斷治療甲狀腺疾病具有重要意義。一、甲狀腺基本知識(shí)甲狀腺分泌有生理活性的甲狀腺素（T4）和三碘甲腺原氨酸（T3）及無(wú)生理活性的反T3等。血漿中T4來(lái)自甲狀腺，而80-90%的T3和反T3是T4在外周組織經(jīng)脫碘作用，脫去一個(gè)碘原子而生成的。血液中的T3和T4，以結(jié)合和游離兩種形式存在。絕大部分的甲狀腺激素（T4 99.97%,T3 99.7%）可逆性的結(jié)合于血漿蛋白上；游離的甲狀腺激素在血中含量甚微，與蛋白結(jié)合的激素和微量游離激素處于動(dòng)態(tài)平衡中，然而正是這些微量的游離激素才能進(jìn)入靶組織細(xì)胞，與細(xì)胞中受體結(jié)合，發(fā)揮其生物學(xué)作用，它還在垂體部分反饋地調(diào)節(jié)促甲狀腺激素（TSH）的分泌。結(jié)合型的甲狀腺激素是沒(méi)有生物學(xué)作用的，它對(duì)穩(wěn)定血中游離激素含量起著貯存與緩沖作用。與甲狀腺功能密切相關(guān)的另一激素為垂體所分泌的TSH。TSH是由垂體前葉嗜堿細(xì)胞所分泌，它是一種糖蛋白，分子量為25000-28000，糖類(lèi)分子占總分子量的15%，包括巖藻糖、甘露糖、半乳糖、氨基葡萄糖和氨基半乳糖等。TSH的分子是由兩條肽鏈組成，一條是鏈，由89個(gè)氨基酸組成；另一條是鏈，由112個(gè)氨基酸組成，兩條肽鏈靠非共價(jià)鍵結(jié)合在一起。激素的生物學(xué)活性由肽鏈決定。兩個(gè)亞基必須結(jié)合才具生物活性，分開(kāi)則無(wú)活性。TSH分泌受神經(jīng)和體液的調(diào)節(jié)，包括：下丘腦促甲狀腺素釋放素（TRH）的促進(jìn)與靶腺激素（T3、T4）反饋抑制的影響，二者互相拮抗，構(gòu)成下丘腦腺垂體甲狀腺軸；神經(jīng)系統(tǒng)對(duì)TSH分泌控制，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的控制下，生長(zhǎng)介素可降低TSH分泌，多巴胺可抑TSH釋放，雌激素可升高TSH基礎(chǔ)分泌，糖皮質(zhì)激素可通過(guò)抑制TSH的釋放，使垂體分泌TSH減少；TSH分泌受機(jī)體反應(yīng)調(diào)節(jié)；TSH分泌有晝夜節(jié)律性變化，高峰于午夜23：00-24：00，上午11：00時(shí)最低；冷刺激TSH分泌增加，再促進(jìn)T3、T4分泌以適應(yīng)冷環(huán)境。（一）甲狀腺功能的調(diào)節(jié)生理情況下，甲狀腺功能有兩種調(diào)節(jié)方式。即下丘腦垂體甲狀腺之間的反饋性調(diào)節(jié)和甲狀腺的自身調(diào)節(jié)。第一種調(diào)節(jié)是最主要的調(diào)節(jié)方式（見(jiàn)圖3.1）下丘腦 TRH垂體TSH甲狀腺T3、T4圖3.1 下丘腦垂體甲狀腺軸的調(diào)節(jié)腦的神經(jīng)分泌細(xì)胞產(chǎn)生促甲狀腺激素釋放激素（TRH）。TRH到達(dá)垂體前葉，促進(jìn)合成和釋放TSH。TSH在血液中濃度小于10IU/ml。TSH有興奮甲狀腺的功能：能使甲狀腺激素的合成增加；促進(jìn)甲狀腺激素分泌；使甲狀腺上皮細(xì)胞增生肥大。血液中甲狀腺激素濃度，對(duì)下丘腦和垂體功能也具有負(fù)反饋調(diào)節(jié)作用。血液中甲狀腺激素尤其是T4濃度升高，可反饋性抑制TSH分泌，反之，甲狀腺激素濃度降低時(shí)，則TSH分泌增強(qiáng)，從而興奮甲狀腺，使之分泌更多的甲狀腺激素。3血中TSH和甲狀腺激素水平可以反饋性的影響TRH的釋放。TSH增加，可以使TRH分泌減少。當(dāng)血液中游離甲狀腺激素，主要是游離T3（fT3）的濃度升高，可刺激TRH合成增加，并貯存于下丘腦，待FT3、FT4降低時(shí)，可興奮TRH的釋放，從而增加TSH的分泌，以提高血中甲狀腺激素的濃度。因此，機(jī)體通過(guò)這一調(diào)節(jié)系統(tǒng)，以滿(mǎn)足周?chē)M織對(duì)甲狀腺激素的需要；并使血中甲狀腺激素濃度保持在正常范圍之內(nèi)。（二）甲狀腺激素的生理作用1代謝的影響產(chǎn)熱效應(yīng)：甲狀腺激素能使細(xì)胞內(nèi)氧化速度提高，耗氧量增加，產(chǎn)熱增加，使人體能量代謝維持在一定水平，調(diào)節(jié)體溫恒定。糖、脂肪、蛋白質(zhì)代謝糖代謝：生理劑量甲狀腺激素能促進(jìn)腸道對(duì)葡萄和半乳糖的吸收，促進(jìn)肝糖原的合成。超生理劑量能促進(jìn)肝糖原分解。脂肪代謝：甲狀腺激素具有刺激脂肪合成和促進(jìn)脂肪分解的雙重功能，但總的作用是減少脂肪儲(chǔ)存，降低血脂濃度。故甲亢時(shí)血膽固醇低于正常，機(jī)能低下時(shí)則高于正常。蛋白質(zhì)代謝：甲狀腺激素能促進(jìn)蛋白質(zhì)及各種酶的生成，T3或T4分泌不足時(shí)，蛋白質(zhì)合成減少，但細(xì)胞間的粘蛋白增多，引起浮腫，稱(chēng)為粘液性水腫。T3或T4分泌