高效液相流動(dòng)相緩沖鹽選擇;

1、下面內(nèi)容綜合了agilent和網(wǎng)上查到的一些資料：一般來(lái)說(shuō)，反相hplc的流動(dòng)相包括有機(jī)相和水相，有機(jī)相常用的為色譜甲醇和乙腈，不太常用的還有四氫呋喃和異丙醇。甲醇有其性?xún)r(jià)比的優(yōu)勢(shì)，但是甲醇活性高，可能與某些樣品發(fā)生反應(yīng)，而且甲醇在低波長(zhǎng)下有紫外吸收，會(huì)降低分析方法的靈敏度；乙腈雖然價(jià)格很高，毒性比甲醇大，但是洗脫能力比甲醇強(qiáng)，很少與樣品發(fā)生反應(yīng)，用作流動(dòng)相系統(tǒng)壓力要比甲醇低很多，且截止波長(zhǎng)比甲醇低20nm，增加了檢測(cè)出在低波長(zhǎng)下才有吸收的雜質(zhì)的可能性，所以我們一般傾向于多用乙腈，少用甲醇。但是當(dāng)樣品峰形不好或者分離不好時(shí)，更換溶劑是一個(gè)很好的選擇，因?yàn)椴煌娜軇┛商峁┎煌倪x擇性。在反相色譜

2、中，流動(dòng)相中水相的ph和離子強(qiáng)度在開(kāi)發(fā)對(duì)條件微小變化不敏感的耐用方法中非常重要。對(duì)于離子型化合物，典型樣品的保留隨ph改變而明顯變化，因此控制ph對(duì)于保留和選擇性的穩(wěn)定非常重要，通常在ph24的條件下，保留時(shí)間對(duì)ph的微小改變穩(wěn)定性最高，因此建議將這一ph范圍作為大多數(shù)樣品方法開(kāi)發(fā)的起始ph，包括堿性化合物和一般的弱酸?？紤]到重現(xiàn)性，所用的ph應(yīng)高于或低于待分析物pka或pkb上下一個(gè)ph單位。當(dāng)待分析物pka或pkb未知時(shí)，應(yīng)測(cè)試一種以上流動(dòng)相ph（如ph2.0和ph6.5緩沖鹽溶液），可提供最好結(jié)果。對(duì)流動(dòng)相的優(yōu)化主要體現(xiàn)在水相上。流動(dòng)相ph值對(duì)色譜分離的影響有多鐘方式，根據(jù)待分析物的結(jié)構(gòu)

3、性質(zhì)，ph可能影響選擇性、峰形和保留。如果是非極性較強(qiáng)或中性的化合物，ph對(duì)分離度和保留的影響一般不明顯。如果是可離子化的化合物，如酸或堿，保留因子和選擇性隨ph改變非常明顯。（1） 酸性分析物，應(yīng)選擇低ph緩沖液流動(dòng)相，以防止分析物離子化。了解分析物的pka，才能有效的選擇流動(dòng)相ph。緩沖范圍應(yīng)在其緩沖液離子pk值1 ph單位，使流動(dòng)相的優(yōu)化具有一定的靈活性。例如，醋酸鹽的pka為4.8，緩沖范圍為ph3.85.8。（2） 堿性化合物，在高ph條件下才能得到其非離子形態(tài)，但這對(duì)色譜柱不利。通常許多堿性化合物在低ph條件的保留就已經(jīng)滿(mǎn)足要求了，所以可選擇低ph條件。如果選擇高ph條件，則注意需

4、選擇耐強(qiáng)堿的色譜柱。水里可以加酸、加堿、加鹽，從而改變ph值、改善峰形、提高分離度。常用的酸有磷酸、三氟乙酸、甲酸、乙酸、高氯酸、甲基磺酸等。單純做液相時(shí)，低波長(zhǎng)下磷酸最合適；而做液質(zhì)時(shí)首選三氟乙酸，或甲酸、乙酸。開(kāi)發(fā)液相分析方法時(shí)流動(dòng)相可首選0.1%的磷酸水溶液，然后再以此為基礎(chǔ)做優(yōu)化。在單獨(dú)用酸不行的時(shí)候再考慮使用緩沖鹽，緩沖鹽的選擇原則是：簡(jiǎn)單、穩(wěn)定、緩沖能力強(qiáng)、配制簡(jiǎn)單，需要調(diào)ph值時(shí)要有相應(yīng)的酸或堿。常用的緩沖鹽是磷酸鹽，主要是鉀鹽和鈉鹽，還有醋酸鹽，常用的鹽濃度在1020mm左右（根據(jù)實(shí)際情況，有時(shí)可以選擇更低或更高濃度，建議最高濃度不超過(guò)50mm）。下表是waters提供的一個(gè)資

5、料，常規(guī)實(shí)驗(yàn)室建議使用的緩沖鹽體系。緩沖鹽/流動(dòng)相改性劑pka緩沖范圍揮發(fā)性？(1 ph)是否ms兼容？備注tfa0.3-是是離子對(duì)試劑，能夠抑制ms信號(hào)，通常使用的濃度范圍0.020.1%乙酸4.76-是是同乙酸銨一起使用具有最大的緩沖能力，通常使用的濃度范圍0.11.0%甲酸3.75-是是同甲酸銨一起使用具有最大的緩沖能力，通常使用的濃度范圍0.11.0%乙酸鹽（銨鹽）4.763.765.76是是通常使用110mm濃度，注意鉀鹽和鈉鹽是非揮發(fā)性的甲酸鹽（銨鹽）3.752.754.75是是通常使用110mm濃度，注意鉀鹽和鈉鹽是非揮發(fā)性的磷酸鹽12.151.153.15否否傳統(tǒng)的低ph緩沖體

6、系，uv透光度很好磷酸鹽27.26.28.2否否當(dāng)ph超過(guò)7時(shí)，降低操作溫度/緩沖鹽濃度以及使用保護(hù)柱可以延長(zhǎng)色譜柱壽命磷酸鹽312.311.313.3否否當(dāng)ph超過(guò)8時(shí)，降低操作溫度/緩沖鹽濃度以及使用保護(hù)柱可以延長(zhǎng)色譜柱壽命4-甲基嗎啡啉8.47.49.4是是通常使用濃度為10mm或更少氨水碳酸氫銨9.210.3(hco3-)9.2(nh4+)8.210.28.211.3是是通常使用濃度為510mm（用于ms工作時(shí)保持離子源溫度超過(guò)150）。用氨水或乙酸調(diào)節(jié)ph值，在ph10時(shí)具有很好的緩沖能力。乙酸銨9.28.210.2是是通常使用濃度為110mm甲酸銨9.28.210.2是是通常使用濃度為110mm硼酸9.28.210.2否否降低溫度，減少濃度并使用色譜柱來(lái)延長(zhǎng)柱壽命c(diǎn)apso（3-環(huán)己胺基-2-羥基丙磺酸9.78.710.7否否兩性離子緩沖液，同乙腈互溶，通常使用濃度為110mm，氣味小glycine甘氨酸2.4,9.88.810.8否否兩性離子緩沖液，比使用硼酸鹽對(duì)柱子的損傷更小些1-甲基哌啶10.29.311.3是是通常使用濃度為110mmcaps10.49.511.5否否兩性離子緩沖液，同乙腈互溶，通常使用濃度為110mm，氣味小三乙胺（乙酸鹽）10.79.