中藥質(zhì)量控制方法概況及發(fā)展分析.ppt

1、中藥質(zhì)量控制方法概況及發(fā)展趨勢,甘肅省藥品檢驗所 楊 錫,一、中藥質(zhì)量控制方法的發(fā)展歷史1、新修本草又稱唐本草，是唐朝顯慶四年（公元 659 年）編寫的，為我國第一部藥典，也是世界上最早的一部藥典。比歐洲1542年出版的紐倫堡藥典早880多年。2、太平惠民和劑局方宋代（公元1078年）為宋代“太平惠民和劑局”用的藥方對相關(guān)處方、劑型、制劑工藝、用法、用量和功能主治作了詳細(xì)解釋，具有藥典的性質(zhì)，最早的中藥制劑規(guī)范。,3、中華藥典1930年國民黨政府衛(wèi)生署參照英、美藥典編寫，出版后一直未修訂過。4、中華人民共和國成立后，1950年在衛(wèi)生部成立藥典委，開始組織編制藥典。 1953年版中國藥典為第一部

2、藥典，中藥化藥合為一部，以中藥為主。 1963年版中國藥典1963 年版藥典為突出中藥標(biāo)準(zhǔn)地位，將藥典分為一、二部，一部為中藥，二部為化藥。一部除收載品種大量增加外，為體現(xiàn)中藥特色，增收了炮制、性味、功能與主治、用法與用量等項內(nèi)容。,5、1977年版中國藥典收載藥材品種最多顯微鑒別方法首次進(jìn)入中國藥典，尤其是粉末顯微鑒別，在制劑中初步打破了“丸、散、膏、丹，神仙難辨”的說法。,6、1985、1990、1995、2000年版中國藥典每五年修訂一次，逐步增加收載附錄要求與品種。 2000年版中國藥典二部將以往幾版藥典中的“作用”、“用途”、“用法”、“用量”及“注意”項內(nèi)容移到配套的臨床用藥須知。

3、 2005年版中國藥典 分為一、二、三部一部（中藥）首次單列并增加了植物油脂與提取物，編制了臨床用藥須知（中成卷）收載1400多個品種。 2010年版,7、現(xiàn)代分析方法在各國藥典最初應(yīng)用情況 方法 中國 美國 日本 英國 UV 1953 1947 1953 TLC 1977 1965 1971 1968 GC 1985 1965 1971 1973 HPLC 1985 1975 1981 1980原子吸收 1985 1970 1976 1980熒光光度 1985 1970 1986 1980 MS 2005 1990 1991 2000,8、現(xiàn)代分析方法在中國藥典中藥質(zhì)量控制最初應(yīng)用情況 UV

4、法 TLC法 作為定性方法在中國藥典1985版開始應(yīng)用。TLCS法作為定量方法在中國藥典1985版收載的“六味地黃丸”中應(yīng)用。 HPLC 2005版藥典一部收載品種1146個，其中建立了含量測定的741個，采用液相色譜法的518個，占69.9%。2010版藥典應(yīng)用比例將繼續(xù)提高。 GC法,二、中藥質(zhì)量控制的主要內(nèi)容1、感官指標(biāo)性狀原植物、藥材,2、定性指標(biāo)鑒別 顯微鑒別,2、定性指標(biāo)鑒別化學(xué)反應(yīng)鑒別,2、定性指標(biāo)鑒別光譜鑒別,2、定性指標(biāo)鑒別色譜鑒別 薄層,1：Coptis chinensis Franch（味連） 2:Coptis teeta Wall （云連） 3:Coptis delto

5、idea（雅連） 4:Berberine hydrochloride,2、定性指標(biāo)鑒別色譜鑒別 液相,2、定性指標(biāo)鑒別色譜鑒別 氣相,2、定性指標(biāo)鑒別色譜-質(zhì)譜聯(lián)用 LC-MS GC-MS,3、與質(zhì)量有關(guān)的控制指標(biāo)檢查 雜質(zhì)檢查 水分 灰分 浸出物 酸敗度（酸值、羰基值、過氧化值）,4、與制劑質(zhì)量有關(guān)的控制指標(biāo)檢查 丸劑：溶散時限； 顆粒劑：溶化性、粒度； 貼膏劑：耐熱性、賦形性、含膏量、黏附性； 分散片：分散均勻性、溶出度； 合劑（口服液）：pH值、相對密度； 注射劑 ：相關(guān)物質(zhì)； 氣霧劑：噴射速率：,5、與安全性相關(guān)的控制指標(biāo)檢查 有機溶劑殘留 毒性成分檢查 過敏試驗 刺激試驗 雜質(zhì)檢查

6、重金屬、砷鹽 農(nóng)藥殘留 微生物污染 非法添加 婦科制劑的pH 檢查,毒性成分檢查馬兜鈴酸、銀杏酸、烏頭堿、嗎啡、東莨菪堿、秋水仙堿、雷公藤甲素、華蟾酥毒基及脂蟾毒配基、士的寧、朱砂、雄黃。,馬兜鈴酸,6、含量測定 重量法（地奧心血康） 容量法（礦物藥、總糖、有機酸、總生物堿等） 光譜法（比色法、紫外法） 色譜法（HPLC 、GC),二、中藥質(zhì)量控制的現(xiàn)狀1.成績 水平提高 技術(shù)成熟 成果顯著,二、中藥質(zhì)量控制的現(xiàn)狀 2.問題 參照化學(xué)藥模式，指標(biāo)性成分定性定量測定 化學(xué)藥： 邏輯推理分析法還原論 傳統(tǒng)中藥： 取象類比歸納法整體論 “ 難關(guān)藥效，量而不準(zhǔn)，難控難評” 與中醫(yī)藥的特點與性質(zhì)不相適應(yīng)

7、 “ 以點代面，以局部控制代替整體控制” 中藥材、飲片、中成藥標(biāo)準(zhǔn)研究步調(diào)不一致 “ 中藥材、飲片標(biāo)準(zhǔn)與中成藥標(biāo)準(zhǔn)倒掛”,二、中藥質(zhì)量控制的現(xiàn)狀 3.思考 （七個重要） 中藥材、飲片控制比成品控制重要 “藥材好，藥才好” 生產(chǎn)過程控制比生產(chǎn)結(jié)果控制重要 “做藥就是做良心”,二、中藥質(zhì)量控制的現(xiàn)狀 3.思考 定性控制比定量控制重要 整體控制比局部控制重要,二、中藥質(zhì)量控制的現(xiàn)狀 3.思考 安全性控制比有效性控制重要 評價控制方法比建立控制方法重要 繼承比發(fā)揚重要 “老祖宗認(rèn)可，老中醫(yī)認(rèn)可，老百姓認(rèn)可 ”,二、中藥質(zhì)量控制的現(xiàn)狀 4.對策 （怎么辦？）,中藥的特點 原藥材來源多樣性 藥材生長環(huán)境多

8、樣性 化學(xué)成分多樣性 加工炮制多樣性 復(fù)方配伍多樣性 生產(chǎn)工藝多樣性 在體內(nèi)吸收、代謝多樣性 功效多樣性 中藥的復(fù)雜性復(fù)雜系統(tǒng),世界藥物質(zhì)控模式和方法發(fā)展歷程,提示：中藥質(zhì)量評價體系: 生物測定是不可或缺的,提示： （1）中藥生物藥；中藥化學(xué)藥 （2) 中藥產(chǎn)品可借鑒生物藥質(zhì)控模式 (3）生物測定可提供與安全有效直接相關(guān)的信息,三、中藥質(zhì)量控制發(fā)展趨勢 1.國家科技重大專項“十一五”計劃項目 中藥標(biāo)準(zhǔn)研究平臺,中藥材、飲片、提取物、中成藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究平臺,中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究平臺,種 子 種 苗,系 統(tǒng) 評 價 方 法,標(biāo) 準(zhǔn) 物 質(zhì),生 產(chǎn) 過 程 控 制,有 害 殘 留 物,中藥材、飲片、提取

9、物、 中成藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究平臺,方法、技術(shù)研究規(guī)范 與指導(dǎo)原則、技術(shù)要求,標(biāo)準(zhǔn)制定與 標(biāo)準(zhǔn)化示范研究,信息系統(tǒng),樣 品 與 前 處 理,鑒 別,檢 查,含 量 測 定,檢 測 S O P,標(biāo) 準(zhǔn) 制 定 技 術(shù) 要 求,方 法 應(yīng) 用 指 導(dǎo) 原 則,飲 片,提 取 物,中 藥 材,成 方 制 劑,標(biāo) 準(zhǔn) 信 息,國 際 互 認(rèn),安全、有效、穩(wěn)定、可控,中藥材質(zhì)量控制,中藥飲片質(zhì)量控制,中藥提取物質(zhì)量控制,包裝材料、貯藏環(huán)境、貯藏時間,中成藥質(zhì)量控制,2.國內(nèi)學(xué)者的研究工作 基于生物測定和藥效支撐的中藥質(zhì)量控制方法 解放軍302醫(yī)院，全軍中藥研究所肖小河,研究思路和方法,借鑒生物制劑質(zhì)量控制管理

10、模式 建立基于道地藥材（對照藥材）和生物測定的中藥質(zhì)量評價模式和方法 從常規(guī)、化學(xué)和生物多重角度，共同把關(guān)中藥質(zhì)量 補充和完善現(xiàn)行的中藥質(zhì)量控制和評價方法體系,中藥生物測定：兩大關(guān)鍵問題,中藥生物效價檢測方法的選擇和標(biāo)化？ 中藥生物效價檢測參照物的選擇與標(biāo)化？,中藥生物測定方法的選擇與驗證 生物測定 = 定量藥理學(xué)藥物分析 可供參考的檢測方法 客觀可定量的常規(guī)藥理學(xué)方法 生物制劑活性/效價檢測方法 抗生素生物效價檢測方法 生物熱動力學(xué)方法,仿生色譜技術(shù) 西安交通大學(xué)賀浪沖 熱分析技術(shù) 化學(xué)振蕩反應(yīng)指紋圖譜技術(shù) 標(biāo)準(zhǔn)提取物特征圖譜技術(shù) 血清藥物學(xué), DNA分子標(biāo)記鑒別 DNA分子標(biāo)記鑒別是指通過

11、比較藥材間DNA 分子遺傳多樣性差異來鑒別藥材基源、確定學(xué)名的方法。適用于應(yīng)用性狀、顯微以及理化鑒別等方法難以鑒定的樣品的鑒別，如同屬多基源物種、動物藥等的鑒別。,多指標(biāo)評價色譜指紋圖譜技術(shù) 大黃質(zhì)量控制方法北京大學(xué),制備柱色譜 HSCCC,整體化學(xué)成分控制,唐古特大黃的化學(xué)成分研究,化學(xué)成分研究,大黃中14個成分的含量測定,游離蒽醌類：大黃素、大黃酚、大黃酸、蘆薈大黃素、大黃素甲醚 番瀉苷類：番瀉苷A、番瀉苷B 苯丁酮類：異蓮花掌苷 、4-4-羥基苯基-2-丁酮、蓮花掌苷 、4-羥基苯基-2-丁酮-4-O-D-(2-O-桂皮?；?6-O-沒食子?；?-葡萄糖苷 鞣質(zhì)類：沒食子酸、兒茶素、(-

12、)-表兒茶素-3-沒食子酸酯,色譜條件 色譜柱為Agilent Zorbax SB-C18 (150 4.6 mm I.D., 5 m)，預(yù)柱為Agilent Zorbax Extend C18(10 4.6 mm I.D., 5 m)。進(jìn)樣量 10 l，檢測波長268nm. 流速1.0 ml/min，柱溫40 C，流動相由00.5%的磷酸水(A)和乙腈(B)組成，梯度程序如下： 05 min，210% (B) in； 513 min，1015% (B)； 1326 min，1517% (B)； 2638 min，1722% (B)；3854 min，2236% (B； 5460 min，36

13、60% (B)；6080 min，60% (B)。,混合對照品,樣品,大黃藥材14個成分同時含量測定的HPLC色譜圖,采用一標(biāo)多測(One for M)方法建立大黃中7個主要有效成分的含量,化學(xué)對照品的缺乏 方法學(xué)研究 計算測定化合物與對照品之間的校正因子f 優(yōu)勢：解決對照品缺乏問題；節(jié)省對照品；節(jié)省測定時間 問題：色譜峰的確認(rèn)；不同吸收波長的測定誤差,混合對照品,溶劑,樣品色譜圖,大黃藥材HPLC指紋圖譜分析,三種大黃指紋圖譜的比較,掌葉大黃,唐古特大黃,藥用大黃,Journal of chromatography A , 2006(1132):320-324,36批掌葉大黃的指紋圖譜比較分

14、析,42批唐古特大黃指紋圖譜比較分析,大黃藥材液質(zhì)(HPLC/MS/MS) 指紋圖譜分析,標(biāo)準(zhǔn)品的LC/MS/MS分析 對20個標(biāo)準(zhǔn)品逐一進(jìn)行LC/MS/MS分析。其中蒽醌衍生物類9個、苯丁酮苷類4個、二苯乙烯類4個、單寧類2個、萘類1個。根據(jù)各類化合物的質(zhì)譜碎片特征，歸納總結(jié)它們的質(zhì)譜裂解途徑。,掌葉大黃HPLC/MS/MS指紋圖譜,藥用大黃HPLC/MS/MS指紋圖譜,中藥的質(zhì)量控制要逐步由單一指標(biāo)成分定性定量測定，向多指標(biāo)活性有效成分及生物測定的綜合檢測過渡。,3.安全性評價,（1）.含朱砂、雄黃中藥的質(zhì)量控制 朱砂、雄黃在人體內(nèi)的毒性程度可能與以下因素相關(guān)： 在體內(nèi)產(chǎn)生的可溶性砷、汞量

15、 可溶性的砷、汞在體內(nèi)的存在價態(tài) 朱砂、雄黃通過體內(nèi)后排出的砷、汞的量,朱砂、雄黃及其制劑的研究思路,總砷、汞的含量測定,模擬人體胃腸道環(huán)境的可溶性砷、汞的檢測,可溶性成分中不同價態(tài)砷、汞的分析,朱砂雄黃的體內(nèi)代謝研究,擬訂安全限量，指導(dǎo)用藥安全,1.總As、總Hg的研究結(jié)果： 方法：王水微波消解，ICP-MS檢測 結(jié)果：朱砂、雄黃及其制劑中總As、總Hg含量高 2.酸可溶性砷、汞的研究結(jié)果： 方法：模擬胃液萃取、 1鹽酸萃取， ICP-MS檢測 結(jié)果：模擬胃液24小時萃取可溶的Hg, As含量很小，僅 占總As、總Hg的0.023 1%HCl對可溶As、Hg的萃取率略高于模擬胃液,朱砂、雄黃

16、及其制劑中總砷、汞與酸可溶性砷、汞的研究,朱砂、雄黃及其制劑中總汞、砷和酸可溶性汞、砷的量與WHO限量的比較,根據(jù)各制劑的用法用量，計算每人每天的最高攝入量，與WHO和FAO下屬的食品添加劑專業(yè)委員會（JECFA）提供的安全限量比較： 1.除個別中藥中可溶Hg略高外，含朱砂制劑中的可溶性的Hg均在WHO的安全限量以下; 個別中藥的可溶Hg偏高，可能與其采用的朱砂質(zhì)量有關(guān)，或與復(fù)方的特性有關(guān)，提示需要更多研究，確定安全限量。,2.含雄黃制劑中可溶性As的含量超過WHO 規(guī)定的安全限量 含雄黃制劑中可溶性As的含量大大超過WHO 規(guī)定的安全限量 含雄黃制劑中可溶性As的含量占總砷的量很低，含量范圍

17、很窄， 含雄黃制劑中可溶性As的含量與其總砷的含量沒有相關(guān)性， 提示：雄黃在中藥復(fù)雜基質(zhì)中有自我平衡調(diào)控作用,中藥復(fù)方制劑中其它動、植物成分的存在可增加或減少砷、汞可溶性的可能性，需要進(jìn)一步研究。,朱砂、雄黃及其制劑中可溶性砷、汞中不同價態(tài)砷、汞的研究,已知砷的不同價態(tài)及其毒性： 砷化氫（AsH3）亞砷酸(As)和砷酸(As) 甲基砷酸()和二甲基砷酸() 砷甜菜堿()和砷膽堿() 基本無毒 已知汞的不同價態(tài)及其毒性 ： 甲基汞乙基汞Hg2+Hg,HPLC-ICP-MS 分析As形態(tài),6種As標(biāo)準(zhǔn)形態(tài),：砷膽堿 ：砷甜菜堿 As：三價砷（亞砷酸） ：二甲基砷酸 As：五價砷（砷酸） MMA:甲

18、基砷酸,1%HCl萃取含雄黃樣品的價態(tài)分析: 主要以As(III) 和As(V)形式存在,As（）,As（V）,雄黃中不同價態(tài)分析的色譜圖,不同價態(tài)砷對照品色譜圖,雄黃樣品色譜圖,結(jié)果：雄黃的萃取溶液中僅檢測到三價砷和五價砷，未檢測到其他價態(tài)砷 （檢測限0.1ppb),RP-HPLC-ICP-MS分析Hg形態(tài),C18柱分離4種汞的價態(tài),Hg,Hg2,乙基汞,甲基汞,1HCl萃取液經(jīng)C18柱分離，均未檢出上述各形態(tài)Hg,1.人工胃液或1%HCl萃取朱砂、雄黃及其制劑中的As和Hg，其可溶解的量遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于與其總金屬含量。 2.朱砂及其制劑中可萃取的Hg含量大部分在WHO安全限量以下。 3.朱砂的酸可溶性