提取香菇多糖的詳細(xì)方案

1、原料：香菇。試劑：蒸餾水，葡萄糖，苯酚，鋁片， 固體，濃硫酸，95%乙醇稀鹽酸，PH試紙，復(fù)合酶（木瓜蛋白酶：纖維素酶=2：1），設(shè)備和儀器：100ml容量瓶，6個50ml容量瓶，玻璃棒，蒸餾裝置（溫度計(jì)、沸石、三口燒瓶、冷凝管），燒杯若干，錐形瓶若干，棕色瓶一個，抽濾瓶，1、2、5、10ml吸液管，電子天平，真空干燥箱，恒溫水浴鍋，紫外分光光度計(jì)，粉碎機(jī)，40、60、80、100目的篩子， DL700-0.551.5超高壓等靜壓機(jī)（上海大隆高壓設(shè)備廠），真空泵，THZ-82A臺式恒溫振蕩器，臺式離心機(jī)。1、標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液的配制精密稱取105干燥至恒重的葡萄糖100.0mg，加蒸餾水溶解并定容

2、于100ml容量瓶中，搖勻，配成濃度為1mg/ml標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液備用。2、5%苯酚試劑的配制。苯酚水浴加熱溶解后稱取100g，加鋁片0.1g(先用1：6的鹽酸除去鋁片表面氧化鋁后，再稱量使用)，加入碳酸氫鈉30g，蒸餾，收集178-182的餾分，取餾出液7.5g，加入蒸餾水150mL，得5.0的苯酚溶液，置于棕色瓶中備用。3、標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制以葡萄糖作為標(biāo)準(zhǔn)品，采用苯酚硫酸比色法，用紫外分光光度計(jì)測定多糖含量。精密吸取已配制的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.5，1，1.5，2，2.5，3ml置于6個50ml容量瓶中，加蒸餾水至刻度線，搖勻。精密吸取2ml，分別加入5%苯酚溶液1ml，搖勻，迅速加入5ml濃硫酸

3、，振搖5min，置沸水浴上加熱15min，然后置冷水浴中冷卻30min，以溶劑蒸餾水為空白作對照，在400600nm內(nèi)掃描，最大吸收波長為490nm。在490nm處，測吸光值，以濃度為縱坐標(biāo)，吸光值為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品濃度Y（ug/ml）與吸光值X的回歸方程：Y=15.336X-0.0298，R2=0.9997。在2.515.0 ug/ml范圍內(nèi)呈線性關(guān)系。預(yù)處理：將新鮮清洗干凈，除去其根部，將剩下的菌傘擠壓，切小塊放入真空干燥箱干燥，待香菇恒質(zhì)量，放入粉碎機(jī)中粉碎，將粉碎后的香菇粉依次通過40，60，80，100目的篩子，得到40目以下、4060目、6080目、80100

4、目、100目粒度以上的樣品，過篩之后把各級香菇粉分別裝到清潔干燥的燒杯中，編號貼上標(biāo)簽，置于真空干燥箱中待用。熱水法提取香菇多糖的方案原料：香菇。試劑：0.5%NaOH，95%乙醇，蒸餾水。設(shè)備和儀器：燒杯（若干），玻璃棒，溫度計(jì)，錐形瓶（若干），漏斗，水浴鍋，稱量天平，THZ-82A臺式恒溫振蕩器,臺式離心機(jī)，紫外線分光光度計(jì)。提取的方法與步驟：1、粉碎度對提取率的影響分別稱取40、60、80、100目的香菇粉5g，放入到250mL的錐形瓶中，加入蒸餾水100ml，混合均勻后置于90水浴鍋中，水浴提取2h，提取兩次，提取結(jié)束，冷卻至室溫，將兩次提取液混合后過濾，取2ml濾液分別加入5%苯酚溶

5、液1ml，搖勻，迅速加入5ml濃硫酸，振搖5min，置沸水浴上加熱15min，然后置冷水浴中冷卻30min，即以溶劑蒸餾水為空白作對照，在490nm處用分光光度計(jì)測吸光值，計(jì)算多糖提取率，得到粉碎度與提取率的關(guān)系。2、料液比對提取率的影響稱取80目的香菇粉5g六份，放入到250mL的錐形瓶中，分別加入蒸餾水75、100、125、150、175、200ml，混合均勻后置于90水浴鍋中，水浴提取2h，提取兩次，提取結(jié)束，冷卻至室溫，將兩次提取液混合后過濾，取2ml濾液分別加入5%苯酚溶液1ml，搖勻，迅速加入5ml濃硫酸，振搖5min，置沸水浴上加熱15min，然后置冷水浴中冷卻30min，即以溶

6、劑蒸餾水為空白作對照，在490nm處用分光光度計(jì)測吸光值，計(jì)算多糖提取率，得到粉碎度與提取率的關(guān)系。3、提取溫度對提取率的影響稱取80目的香菇粉5g，放入到250mL的錐形瓶中，加入蒸餾水100ml，混合均勻后置于65、75、80、85、90、95、100水浴鍋中，水浴提取2h，提取兩次，提取結(jié)束，冷卻至室溫，將兩次提取液混合后過濾，取2ml濾液分別加入5%苯酚溶液1ml，搖勻，迅速加入5ml濃硫酸，振搖5min，置沸水浴上加熱15min，然后置冷水浴中冷卻30min，即以溶劑蒸餾水為空白作對照，在490nm處用分光光度計(jì)測吸光值，計(jì)算多糖提取率，得到粉碎度與提取率的關(guān)系。4、提取時間對提取率

7、的影響稱取80目的香菇粉5g五份，放入到250mL的錐形瓶中，加入蒸餾水100ml，混合均勻后置于90水浴鍋中，水浴提取2、3、4、5、6h，提取結(jié)束，冷卻至室溫，將兩次提取液混合后過濾，取2ml濾液分別加入5%苯酚溶液1ml，搖勻，迅速加入5ml濃硫酸，振搖5min，置沸水浴上加熱15min，然后置冷水浴中冷卻30min，即以溶劑蒸餾水為空白作對照，在490nm處用分光光度計(jì)測吸光值，計(jì)算多糖提取率，得到粉碎度與提取率的關(guān)系。5、提取次數(shù)對提取率的影響稱取80目的香菇粉5g四份，放入到250mL的錐形瓶中，加入蒸餾水100ml，混合均勻后置于90水浴鍋中，水浴提取2h，提取1、2、3、4次，

8、提取結(jié)束，冷卻至室溫，將兩次提取液混合后過濾，取2ml濾液分別加入5%苯酚溶液1ml，搖勻，迅速加入5ml濃硫酸，振搖5min，置沸水浴上加熱15min，然后置冷水浴中冷卻30min，即以溶劑蒸餾水為空白作對照，在490nm處用分光光度計(jì)測吸光值，計(jì)算多糖提取率，得到粉碎度與提取率的關(guān)系。復(fù)合酶法提取香菇多糖的方案原料：香菇，試劑：蒸餾水，稀鹽酸，PH試紙，復(fù)合酶（木瓜蛋白酶：纖維素酶=2：1），濾紙?jiān)O(shè)備和儀器：真空干燥箱，粉碎機(jī)，40、60、80、100目的篩子，燒杯（若干），三角瓶（若干），水浴鍋，量筒，漏斗，稱量天平，THZ-82A臺式恒溫振蕩器，臺式離心機(jī)。提取的方法與步驟：單因素實(shí)驗(yàn)

9、條件確定：1、物料粒度對香菇多糖提取率的影響分別稱取40目以下、4060目、6080目、80100目、100目粒度以上的香菇粉各2g，放入到250mL的三角瓶中，標(biāo)號貼上標(biāo)簽，各加入蒸餾水30mL（料液比115），混合均勻后置于50水浴鍋中，水浴1h，調(diào)節(jié)PH至6.5;稱取適量的按一定比例混合的復(fù)合酶（木瓜蛋白酶：纖維素酶=2：1），放入100mL的燒杯中，加入5ml蒸餾水溶解，香菇溶液放在水浴中預(yù)熱至酶解溫度55，將酶液加入到香菇溶液中，在恒溫振蕩器上提取，反應(yīng)結(jié)束，過濾，將三角瓶放到沸水鍋中，10min沸水浴滅酶，滅酶結(jié)束，冷卻至室溫，將酶提取液放入到離心管中，調(diào)至4000r/min離心，

10、取上清液，即得到酶提取多糖清液;將濾液稀釋一定的倍數(shù)（3倍），取2ml溶液分別加入5%苯酚溶液1ml，搖勻，迅速加入5ml濃硫酸，振搖5min，置沸水浴上加熱15min，然后置冷水浴中冷卻30min，即以溶劑蒸餾水為空白作對照，在490nm處用分光光度計(jì)測吸光值，計(jì)算多糖提取率，得到物料粒度與提取率的關(guān)系。2、料液比對香菇多糖提取率的影響準(zhǔn)確稱取80100目粒度的香菇粉5份，每份2g，放入到250mL的三角瓶中，標(biāo)號貼上標(biāo)簽，分別加入蒸餾水20mL（料液比為1l0），30mL（料液比為115），40mL（料液比為120），50mL（料液比為125），60mL（料液比為130），混合均勻后置于5

11、0水浴鍋中，水浴1h，調(diào)節(jié)PH至6.5;稱取適量的按一定比例混合的復(fù)合酶（木瓜蛋白酶：纖維素酶=2：1），放入100mL的燒杯中，加入5ml蒸餾水溶解，香菇溶液放在水浴中預(yù)熱至酶解溫度55，將酶液加入到香菇溶液中，在恒溫振蕩器上提取，反應(yīng)結(jié)束，過濾，將三角瓶放到沸水鍋中，10min沸水浴滅酶，滅酶結(jié)束，冷卻至室溫，將酶提取液放入到離心管中，調(diào)至4000r/min離心，取上清液，即得到酶提取多糖清液;將濾液稀釋一定的倍數(shù)（3倍），取2ml溶液分別加入5%苯酚溶液1ml，搖勻，迅速加入5ml濃硫酸，振搖5min，置沸水浴上加熱15min，然后置冷水浴中冷卻30min，即以溶劑蒸餾水為空白作對照，在

12、490nm處用分光光度計(jì)測吸光值，計(jì)算多糖提取率，得到料液比與提取率的關(guān)系。3、復(fù)合酶濃度對香菇多糖提取率的影響準(zhǔn)確稱取80100目粒度的香菇粉6份，每份2g，放入到250mL的三角瓶中，標(biāo)號貼上標(biāo)簽，分別加入蒸餾水40mL（料液比為120），混合均勻后置于50水浴鍋中，水浴1h，調(diào)節(jié)PH至6.5;分別稱取適量的按一定比例混合的復(fù)合酶（木瓜蛋白酶：纖維素酶=2：1）0.002g（為香菇粉干質(zhì)量的0.1%），0.004g（為香菇粉干質(zhì)量的0.2%），0.006g（為香菇粉干質(zhì)量的0.3%），0.008g（為香菇粉干質(zhì)量的0.4%），0.010g（為香菇粉干質(zhì)量的0.5%），0.012g（為香菇粉

13、干質(zhì)量的0.6%），放入100mL的燒杯中，標(biāo)號貼上標(biāo)簽，加入5ml蒸餾水溶解，香菇溶液放在水浴中預(yù)熱至酶解溫度55，分別將酶液加入到香菇溶液中，在恒溫振蕩器上提取，反應(yīng)結(jié)束，過濾，將三角瓶放到沸水鍋中，10min沸水浴滅酶，滅酶結(jié)束，冷卻至室溫，將酶提取液放入到離心管中，調(diào)至4000r/min離心，取上清液，即得到酶提取多糖清液;將濾液稀釋一定的倍數(shù)（3倍），取2ml溶液分別加入5%苯酚溶液1ml，搖勻，迅速加入5ml濃硫酸，振搖5min，置沸水浴上加熱15min，然后置冷水浴中冷卻30min，即以溶劑蒸餾水為空白作對照，在490nm處用分光光度計(jì)測吸光值，計(jì)算多糖提取率，得到復(fù)合酶濃度與提

14、取率的關(guān)系。高壓提取香菇多糖的詳細(xì)方案試劑：蒸餾水，苯酚，鋁片， 固體，濃硫酸，葡萄糖設(shè)備和儀器：100ml容量瓶，玻璃棒，蒸餾裝置（溫度計(jì)、沸石、三口燒瓶、冷凝管），電子天平，紫外分光光度計(jì)， 1、2、5、10ml吸液管，水浴鍋，DL700-0.551.5超高壓等靜壓機(jī)（上海大隆高壓設(shè)備廠），真空泵，抽濾瓶。提取的方法與步驟： 1、溶劑的選擇實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確稱取100目的香菇粉5份，每份1g，放入到200mL的燒杯中，標(biāo)號貼上標(biāo)簽，分別加入40ml蒸餾水、5%乙醇、10%乙醇、95%乙醇、甲醇不同的溶劑，混合均勻，放入塑料袋中并封口，密封，室溫浸泡24h，然后將樣品放入高壓容器內(nèi)，啟動高壓油泵，升高

15、到所需的壓力，并在此壓力下保持一定時間(壓力:500MPa；保壓時間:5min)；然后快速打開控制高壓油路的閥門，在2秒鐘之內(nèi)卸除壓力，取出高壓加工后的樣品，去除包裝后，抽濾去除濾渣，得到香菇多糖的提取液，將濾液稀釋一定的倍數(shù)（3倍），取2ml溶液分別加入5%苯酚溶液1ml，搖勻，迅速加入5ml濃硫酸，振搖5min，置沸水浴上加熱15min，然后置冷水浴中冷卻30min，即以溶劑蒸餾水為空白作對照，在490nm處用分光光度計(jì)測吸光值，計(jì)算多糖提取率，得到選擇的溶劑與提取率的關(guān)系。2、浸泡時間的選擇實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確稱取100目的香菇粉9份，每份1g放入到200mL的燒杯中，標(biāo)號貼上標(biāo)簽，分別加入50ml

16、蒸餾水，混合均勻，放入塑料袋中并封口，密封，室溫浸泡時間分別為0，1，2，3，4，6，8，12，24h，然后分別將樣品放入高壓容器內(nèi)，啟動高壓油泵，升高到所需的壓力，并在此壓力下保持一定時間(壓力:200MPa；保壓時間:2min)；然后快速打開控制高壓油路的閥門，在2秒鐘之內(nèi)卸除壓力，分別取出高壓加工后的樣品，去除包裝后，抽濾去除濾渣，得到香菇多糖的提取液，將濾液稀釋一定的倍數(shù)（3倍），取2ml溶液分別加入5%苯酚溶液1ml，搖勻，迅速加入5ml濃硫酸，振搖5min，置沸水浴上加熱15min，然后置冷水浴中冷卻30min，即以溶劑蒸餾水為空白作對照，在490nm處用分光光度計(jì)測吸光值，計(jì)算多

17、糖提取率，得到浸泡時間與提取率的關(guān)系。3、壓力的選擇實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確稱取100目的香菇粉8份，每份1g放入到200mL的燒杯中，標(biāo)號貼上標(biāo)簽，分別加入50ml蒸餾水，混合均勻，放入塑料袋中并封口，密封，室溫浸泡4h，然后分別將樣品放入高壓容器內(nèi)，啟動高壓油泵，升高到所需的壓力，壓力分別為0，50，100，200，300，400，500，600Mpa，保壓時間為2min，然后快速打開控制高壓油路的閥門，在2秒鐘之內(nèi)卸除壓力，分別取出高壓加工后的樣品，去除包裝后，抽濾去除濾渣，得到香菇多糖的提取液，將濾液稀釋一定的倍數(shù)（3倍），取2ml溶液分別加入5%苯酚溶液1ml，搖勻，迅速加入5ml濃硫酸，振搖5mi

18、n，置沸水浴上加熱15min，然后置冷水浴中冷卻30min，即以溶劑蒸餾水為空白作對照，在490nm處用分光光度計(jì)測吸光值，計(jì)算多糖提取率，得到壓力與提取率的關(guān)系。4、料液比例的選擇實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確稱取100目的香菇粉5份，每份1g放入到200mL的燒杯中，標(biāo)號貼上標(biāo)簽，分別加入10，30，50，70，100ml蒸餾水，混合均勻，放入塑料袋中并封口，密封，室溫浸泡4h，然后分別將樣品放入高壓容器內(nèi)，啟動高壓油泵，升高到所需的壓力，并在此壓力下保持一定時間(壓力:200MPa；保壓時間:2min)；然后快速打開控制高壓油路的閥門，在2秒鐘之內(nèi)卸除壓力，分別取出高壓加工后的樣品，去除包裝后，抽濾去除濾渣，得到香菇多糖的提取液，將濾液稀釋一定的倍數(shù)（3倍），取2ml溶液分別加入5%苯酚溶液1ml，搖勻，迅速加入5ml濃硫酸，振搖5min，置沸水浴上加熱15min，然后置冷水浴中冷卻30min，即以溶劑蒸餾水為空白作對照，在490nm處用分光光度計(jì)測吸光值，計(jì)算多糖提取率，得到料液比與提取率的關(guān)系。5、保壓時間選擇實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確稱取100目的香菇粉5份，每份1g放入到200mL的燒杯中，標(biāo)號貼上標(biāo)簽，分別加入50ml蒸餾水，混合均勻，放入塑料