《抗體工程藥物》PPT課件.ppt

1、第五章 抗體工程藥物,抗體機體在抗原性物質(zhì)的刺激下所產(chǎn)生的一種免疫球蛋白(主要由淋巴細胞所產(chǎn)生)，因其能與細菌、病毒或毒素等異源性物質(zhì)結(jié)合而發(fā)揮預(yù)防、治療疾病作用。 抗體類藥物以其高特異性、有效性和安全性正在發(fā)展成為國際藥品市場上一大類新型診斷和治療劑。,一、抗體藥物的發(fā)展歷程,第一代抗體藥物 動物多價抗血清。 主要用于一些細菌感染性疾病的早期被動免疫治療。 具有一定的療效，但異源性蛋白引起的較強的人體免疫反應(yīng)限制了這類藥物的應(yīng)用，因而逐漸被抗生素類藥物所代替。 第二代抗體藥物 第三代抗體藥物,1890年白喉抗毒素，多克隆抗體,一、抗體藥物的發(fā)展歷程,第一代抗體藥物 第二代抗體藥物 利用雜交瘤

2、技術(shù)制備的單克隆抗體及其衍生物。 第三代抗體藥物,1.單克隆抗體-雜交瘤技術(shù)宣告誕生,圖1.治療性抗體發(fā)展歷程和事件,2.應(yīng)用抗體治療淋巴瘤取得成功,3. OKT3單抗被美國FDA批準上市,4. 單抗用于腫瘤治療效果不佳,5.抗內(nèi)毒素單抗試用于治療敗血癥性休克失敗,6. 抗17-1A和ReoPro上市,7. FDA批準21個治療性單抗上市,一、抗體藥物的發(fā)展歷程,第一代抗體藥物 第二代抗體藥物 利用雜交瘤技術(shù)制備的單克隆抗體及其衍生物。 第三代抗體藥物 基因工程抗體,基因工程抗體概念,將制備單克隆抗體的細胞工程技術(shù)與生產(chǎn)重組分子的基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)結(jié)合起來，對編碼蛋白質(zhì)的基因按不同需

3、要進行加工改造和重新組裝，轉(zhuǎn)染適當?shù)氖荏w細胞后表達出抗體分子，這種經(jīng)基因重組的抗體稱為基因工程抗體，又稱重組抗體。,基因工程抗體優(yōu)點,通過基因工程技術(shù)的改造，可以降低甚至消除人體對抗體的排斥反應(yīng)； 基因工程抗體的分子量較小，可以部分降低抗體的鼠源性，更有利于穿透血管壁，進入病灶的核心部位； 根據(jù)治療的需要，制備新型抗體； 可以采用原核細胞、真核細胞和植物等多種表達形式，大量表達抗體分子，大大降低了生產(chǎn)成本。,二、抗體藥物的應(yīng)用進展,目前正在進行開發(fā)和已經(jīng)投入市場的抗體藥物主要用途： 器官移植排斥反應(yīng)的逆轉(zhuǎn) 腫瘤免疫診斷 腫瘤免疫顯像 腫瘤導(dǎo)向治療 哮喘、牛皮癬、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、紅斑狼瘡、急性心

4、梗、膿毒癥、多發(fā)性硬化癥及其他自身免疫性疾病 抗獨特型抗體作為分子瘤苗治療腫瘤 多功能抗體（雙特異抗體、三特異抗體、抗體細胞因子融合蛋白、抗體酶等）,（一）抗體診斷試劑,1、血清學(xué)鑒定用的抗體類試劑 鑒定病原菌的抗體試劑 乙型肝炎病毒表面抗原的反向被動血凝診斷試劑 妊娠診斷試劑 抗ABO血型系統(tǒng)血清,鑒定病原菌的抗體試劑 （1）常用診斷血清的品種和用途 沙門氏菌屬診斷血清 志賀氏菌屬診斷血清 病原性大腸埃希氏菌診斷血清 （2）診斷血清的制備步驟 制備細菌抗原 免疫動物和制備抗體血清,2、免疫標記技術(shù)用的抗體類試劑,熒光抗體診斷試劑 （1）熒光抗體的制備 （2）免疫熒光測定方法 免疫酶抗體診斷試

5、劑 （1）免疫酶染色法用抗體診斷試劑 （2）酶免疫測定用抗體診斷試劑 放射免疫用抗體診斷試劑,酶免疫測定用抗體診斷試劑 HBsAg酶標診斷試劑 HBeAg酶標診斷試劑 HAVAg（甲型肝炎病毒抗原）酶標診斷試劑 測定HIV（人免疫缺陷病毒）抗原的酶標抗體診斷試劑 甲胎蛋白（AFP）酶標抗體診斷試劑 癌胚抗原（CEA）的酶標抗體診斷試劑,放射免疫用抗體診斷試劑 放射免疫技術(shù)是將放射性核素分析的高度靈敏性與抗原抗體反應(yīng)的特異性結(jié)合起來建立的檢測技術(shù)。 放射性核素標記抗體的方法： 氯胺-T法 Iodogen氏法,抗原的測定有： 夾心法 間接法 竟爭法 常用標記抗體試劑 HBsAg放射性核素標記抗體診

6、斷試劑 HBeAg放射性核素標記抗體診斷試劑 HAV抗原放射性核素標記抗體診斷試劑 AFP放射性核素標記抗體診斷試劑 CEA放射性核素標記抗體診斷試劑,放射免疫顯像定位技術(shù) 將抗腫瘤單克隆抗體（Ab）與二乙基三胺五乙酸（DTPA）在體外偶聯(lián)成Ab-DTPA，再注入體內(nèi)后，就能與體內(nèi)組織相結(jié)合。由于抗體分子量大，需3d完成。 3d后注入放射性核素In-113M（半衰期100m），因DTPA是重金屬離子絡(luò)合劑，所以In-113M可以結(jié)合到DTPA分子上，使腫瘤組織顯像。這一過程在2小時內(nèi)可完成。,3、導(dǎo)向診斷藥物,放射免疫顯像優(yōu)點： 在體內(nèi)確切腫瘤定位作用，準確性達90%，靈敏度達100%。 在體

7、內(nèi)可檢出0.5cm大小的病灶，并可檢出肺腦的轉(zhuǎn)移灶。 小分子抗體易到達腫瘤部位，可顯著提高N/NT值。 抗體在腫瘤部位可保留6-9日。 能觀擦抗體在血中的半衰期和可能出現(xiàn)的不良反應(yīng)。,建立預(yù)定位技術(shù)需解決3個問題： 抗體在腫瘤組織滯留要7d以上。 Ab-DTPA偶聯(lián)物比較穩(wěn)定； 內(nèi)源性金屬離子對DTPA的封閉作用要小。,（二）抗體治療藥物,以抗體為載體的導(dǎo)向治療藥物，還不成熟。 1、放射性核素標記的抗體治療藥物 抗體作為放射性核素的導(dǎo)向載體，標記操作簡便用量小。 放射性核素標記的抗體對腫瘤細胞殺傷較大。,2、抗癌藥物偶聯(lián)的抗體藥物 常用的抗癌藥物 氨甲喋呤（MTX）、阿霉素（ADM）、絲裂霉素

8、（MMC）等。 以人血漿白蛋白作為中間載體，可明顯提高每分子抗體所攜帶的MTX量，使體外細胞毒性體高二倍。,3、毒素偶聯(lián)的抗體藥物 1）免疫毒素及其換代制品 在導(dǎo)向藥物中，毒素和抗體的交聯(lián)物稱為免疫毒素。,第一代免疫毒素是包含有A、B鏈完整毒素和抗體的交聯(lián)物，其中B鏈非特異性結(jié)合，使其僅在體外應(yīng)用。 第二代免疫毒素是利用抗體或抗體片段與毒素的A鏈或與A鏈相似的單鏈核糖體失活蛋白的結(jié)合物。因此避免了第一代免疫毒素的非特異性，故能在體內(nèi)有一定的抗腫瘤作用。 第三代免疫毒素：重組免疫毒素用基因克隆方法改造毒素基因和小分子抗體基因重組表達。特異性好、穩(wěn)定性強、滲透性佳、免疫源性低、可大量制備。,2）免

9、疫毒素的制備方法 毒素的來源 細菌毒素 植物毒素 載體的種類 小分子抗體FV或SCFV 細胞生長因子 激素 CD4,制備方法 先克隆毒素基因，再利用基因重組技術(shù)去除毒素中非特異性細胞結(jié)合部位基因。經(jīng)改造的毒素基因，再與載體基因重組，轉(zhuǎn)入受體菌中表達，形成融合蛋白，再經(jīng)過純化就得到重組免疫毒素。,3）免疫毒素的臨床應(yīng)用 治療腫瘤、自身免疫病 并能克復(fù)組織移植排斥反應(yīng)，可單獨給藥也可包裹在脂質(zhì)體及其它微粒中給藥。,三、國際抗體藥物的研究和產(chǎn)業(yè)化現(xiàn)狀,2004年已有22個抗體藥物上市，以人源化和嵌合抗體為主。 轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物生產(chǎn)抗體，其價格低廉，發(fā)展前景可喜。,全球有超過225家公司正在研發(fā)臨床治療用

10、單克隆抗體，預(yù)估有335個產(chǎn)品正在研發(fā)中，其中64%進入臨床前研究。 臨床應(yīng)用：癌癥占50%，自體免疫疾病占18%，感染占13%，心血管疾病占6%，器官移植排斥占5%，其他疾病占8%。,圖2 抗體藥物的銷售趨勢,2000年銷售額已達29億美元，2002年接近40億美元，平均年增長率為30%，2008年預(yù)估市場銷售將達140億美元。,四、我國抗體藥物的研究和產(chǎn)業(yè)化現(xiàn)狀,截止目前已經(jīng)獲得了一大批針對各種抗原的鼠源性單克隆抗體 。 (1)細胞表面抗原，如血型抗原、白細胞分化抗原、組織相容性抗原、膜受體等。 (2)腫瘤相關(guān)抗原，如胃癌、肝癌、大腸癌、結(jié)腸癌、肺癌、卵巢癌、腦膠質(zhì)瘤、乳腺癌等。 (3)病原微生物，如流感病毒、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒等病毒抗原；痢疾桿菌脂多糖，沙門氏菌等細菌抗原；惡性瘧原蟲、血吸蟲等寄生蟲抗原；大腸桿菌內(nèi)毒素、破傷風(fēng)類毒素等微生物毒原抗原。 (4)其它抗原，如細胞因子、酶、血漿