PCR實(shí)驗(yàn)室管理制度

1、.PCR實(shí)驗(yàn)室管理制度1.0 目的建立PCR實(shí)驗(yàn)室的工作規(guī)范，確保分子診斷室正常工作。2.0 范圍PCR實(shí)驗(yàn)室，包括試劑準(zhǔn)備間、標(biāo)本制備間、擴(kuò)增間的使用及管理。3.0 職責(zé)PCR實(shí)驗(yàn)室的工作人員必須遵守本文件的規(guī)定。4.0 內(nèi)容4.1 在進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室前，在隔離臺(tái)戴好頭套口罩，穿上鞋套與實(shí)驗(yàn)服。4.2 試劑準(zhǔn)備間4.2.1 配電房先打開風(fēng)機(jī)（先開送風(fēng)機(jī)，再開排風(fēng)機(jī)），再把空調(diào)系統(tǒng)打開。關(guān)閉時(shí)的順序相反。4.2.2 其它室的用品不得帶入本室。4.2.3 從PCR實(shí)驗(yàn)室1號(hào)入口門進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室，到達(dá)試劑準(zhǔn)備間的緩沖間，脫下白色工作服，掛在緩沖間的左側(cè)，在緩沖間的右側(cè)更換試劑準(zhǔn)備間的專用工作服（藍(lán)色），進(jìn)入

2、試劑準(zhǔn)備間，實(shí)驗(yàn)中須戴一次性手套，手套常更換。4.2.4 打開已滅菌的超凈臺(tái)，通風(fēng)一段時(shí)間，排走臭氧。取出當(dāng)次實(shí)驗(yàn)需配制和使用的試劑，其余試劑要立即收好放回冰箱內(nèi)。4.2.5 操作應(yīng)在冰上進(jìn)行。Taq酶盡量在配液的最后一步加入。應(yīng)減少dNTP反復(fù)凍融的次數(shù)。每次實(shí)驗(yàn)后將槍調(diào)至最大量程。加模板前打開廢液缸蓋，加完模板后務(wù)必蓋上廢液缸的蓋子。4.2.6 實(shí)驗(yàn)作業(yè)完成時(shí)，應(yīng)及時(shí)清理工作臺(tái)，做好實(shí)驗(yàn)登記，應(yīng)使用本室專用的記錄本和筆，打開超凈臺(tái)的紫外燈旋鈕到20分鐘處。使用過的離心管、吸頭須置于3%的HCl溶液中浸泡、消毒后方可棄之。4.2.7 打開傳遞窗門，墊上一次性手套，將配好的試劑放到傳遞窗里，關(guān)

3、上傳遞窗門。4.2.8 在試劑緩沖間脫下工作服，穿上白色工作服。4.3 標(biāo)本制備間4.3.1 在標(biāo)本制備間的緩沖間，脫下白色工作服，換上標(biāo)本制備間專用的工作服（粉紅色），進(jìn)入標(biāo)本制備間。4.3.2 打開傳遞窗的門，取出配好的試劑，使用本區(qū)專用的加樣器和帶濾芯槍頭。4.3.3 實(shí)驗(yàn)作業(yè)完成時(shí)，應(yīng)及時(shí)清理工作臺(tái)，使用過的離心管、帶濾芯槍頭須置于3%的HCl溶液中浸泡、消毒后方可棄之。4.3.4 做好實(shí)驗(yàn)登記，應(yīng)使用本室專用的記錄本和筆，打開超凈臺(tái)的紫外燈旋鈕到20分鐘處。4.3.5 打開傳遞窗門，墊上一次性手套，將配好的試劑放到傳遞窗里，關(guān)上傳遞窗門。4.3.6 提取基因組模板，提取過程中丟棄的槍

4、頭、離心管和廢液請(qǐng)丟棄在此垃圾袋并于實(shí)驗(yàn)結(jié)束后立即將垃圾袋扎口丟棄。提取質(zhì)?？上忍崛∫吧唾|(zhì)粒再提取突變型質(zhì)粒。每次提取工作完成后擦拭臺(tái)面。4.3.7 在試劑緩沖間脫下工作服，穿上白色工作服。4.4 擴(kuò)增間4.4.1 在擴(kuò)增間的緩沖間，脫下白色工作服，換上擴(kuò)增間專用工作服（綠色）。4.4.2 打開傳遞窗門，取出配好的試劑，關(guān)上傳遞窗門。4.4.3 打開PCR儀預(yù)熱20min。4.4.4 將反應(yīng)管放入PCR儀中，關(guān)好門。4.4.5 脫掉手套，設(shè)定程序，并命名。4.4.6 結(jié)束后需待儀器冷卻后方可取出PCR儀里的試劑，取出時(shí)用鑷子將試劑條夾出，注意勿要使管蓋打開，用三個(gè)PE手套包好方可棄之。機(jī)器上

5、不允許存放PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，每次實(shí)驗(yàn)后請(qǐng)自行及時(shí)清理PCR擴(kuò)增產(chǎn)物。4.4.7 結(jié)束實(shí)驗(yàn)后，到配電房先把空調(diào)系統(tǒng)關(guān)掉，再關(guān)掉排風(fēng)機(jī)，之后關(guān)掉送風(fēng)機(jī)。4.4.8 文件的處理：當(dāng)天所做的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，當(dāng)天拷到部門電腦上處理，復(fù)制一份將文件名改為記錄本上的命名?？蓪⒃囼?yàn)結(jié)果導(dǎo)到PPT上，并標(biāo)記。4.5 傳遞窗的使用4.5.1 傳遞窗每天早上滅菌20分鐘一次。當(dāng)天使用可不用再次滅菌。將試劑放到傳遞窗時(shí)，在底下墊上一層手套。4.6 壓力監(jiān)控4.6.1 每天早上空調(diào)運(yùn)行半小時(shí)后，記錄各PCR實(shí)驗(yàn)室的壓力差：試劑準(zhǔn)備間：510；標(biāo)本制備間： -5-10；擴(kuò)增間：-10。 各緩沖間的壓力為+5.4.7 超凈臺(tái)的擺放

6、移液槍架常用的實(shí)驗(yàn)試劑消毒液廢液缸放置標(biāo)本的離心管槍頭盒槍頭盒4.8 實(shí)驗(yàn)室衛(wèi)生管理4.8.1 禁止非工作人員進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室；參觀實(shí)驗(yàn)室等特殊情況須在實(shí)驗(yàn)室管理員協(xié)助下進(jìn)行。4.8.2 實(shí)驗(yàn)室內(nèi)各工作人員應(yīng)有個(gè)人防護(hù)意識(shí)，進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室時(shí)應(yīng)更換工作服和鞋子，穿著整潔，不留長(zhǎng)指甲，不佩戴首飾，長(zhǎng)發(fā)應(yīng)束于腦后；禁止在工作區(qū)飲食、吸煙、處理隱形眼鏡、化妝及儲(chǔ)存食物；禁止將個(gè)人物品帶入實(shí)驗(yàn)室；實(shí)驗(yàn)室內(nèi)應(yīng)避免手口，手眼，手鼻接觸，以防止間接感染。4.8.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后仍需保留使用的物質(zhì)，應(yīng)移入具塞的容器中，并做好標(biāo)識(shí)標(biāo)簽，并寫清楚名稱、濃度、配制日期、儲(chǔ)存溫度、有效期和配制人，并放置于相應(yīng)保存條件下；勿置室溫過

7、夜。4.8.4 每天配制使用濃度的消毒液，放于固定地點(diǎn)，用于污染時(shí)消毒用，應(yīng)定期更換消毒液品種。4.8.5 每天上班8點(diǎn)45分先關(guān)實(shí)驗(yàn)室紫外燈，然后開啟風(fēng)扇，打開實(shí)驗(yàn)室走廊窗戶。每天9點(diǎn)前每間負(fù)責(zé)人填寫冰箱溫濕度記錄表。4.8.6 下午4點(diǎn)45分每間負(fù)責(zé)人填寫實(shí)驗(yàn)室及冰箱溫濕度記錄表，清理實(shí)驗(yàn)室衛(wèi)生，檢查實(shí)驗(yàn)室垃圾及廢液缸槍尖，生物垃圾放置于生物安全垃圾桶內(nèi)，通知專門的垃圾轉(zhuǎn)運(yùn)車進(jìn)行清除。在生物安全垃圾桶周邊噴灑84消毒液（按1:9或者1:10比例配制）。4.8.7 每日衛(wèi)生打掃完后，在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)噴灑84消毒液，噴灑完，待20分鐘過后，對(duì)實(shí)驗(yàn)室儀器表面及實(shí)驗(yàn)臺(tái)面要用干布擦拭一遍，再用清水清洗一遍

8、，防止儀器被腐蝕。MX3000P儀器反應(yīng)孔用75%酒精棉球擦拭，擦拭完后用清水擦拭。4.8.8 關(guān)閉風(fēng)扇，開啟紫外燈，過夜。關(guān)閉實(shí)驗(yàn)室走廊窗戶，噴灑84消毒液。4.8.9 第一、二間實(shí)驗(yàn)室的3%鹽酸在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)配制，由當(dāng)周值日人員負(fù)責(zé)。4.8.10 實(shí)驗(yàn)服的清洗時(shí)間為每月的1、2、3、15、16、17日，1、15日洗第一間實(shí)驗(yàn)服，2、16日洗第二間實(shí)驗(yàn)服，3、17日洗第三間實(shí)驗(yàn)服，遇節(jié)假日順延。4.8.11 每周對(duì)回風(fēng)口過濾網(wǎng)進(jìn)行清洗，由當(dāng)周值日人員負(fù)責(zé)。4.8.12 如遇加班，以上由加班人員負(fù)責(zé)；若有請(qǐng)假，請(qǐng)假人員需與其他人員協(xié)商調(diào)整，否則視為未執(zhí)行。4.8.13 以上執(zhí)行情況每天都應(yīng)填寫記錄表，并由專人檢查確認(rèn)簽字。5.0 注意事項(xiàng)5.1.1 PCR實(shí)驗(yàn)室各室使用、進(jìn)入及單一流向制度，請(qǐng)各位技術(shù)員不要貪方便，嚴(yán)格按照規(guī)程操作，以免造成嚴(yán)重后果。5.1.2 d