HIV核酸檢測技術(shù)應(yīng)用現(xiàn)狀（word版）

1、 精編范文 HIV核酸檢測技術(shù)應(yīng)用現(xiàn)狀溫馨提示：本文是筆者精心整理編制而成，有很強的的實用性和參考性，下載完成后可以直接編輯，并根據(jù)自己的需求進行修改套用。HIV核酸檢測技術(shù)應(yīng)用現(xiàn)狀 本文關(guān)鍵詞：核酸, 檢測技術(shù), 現(xiàn)狀, HIVHIV核酸檢測技術(shù)應(yīng)用現(xiàn)狀 本文簡介：摘要：艾滋病的廣泛傳播給社會造成了極大負擔。目前艾滋病的防治工作主要是控制和切斷艾滋病病毒（）的傳播, 這就要求普及艾滋病的檢測, 以盡早地發(fā)現(xiàn)感染者。相較于其他的檢測方法, 核酸檢測的窗口期短, 靈敏度、特異性高, 在臨床上可用于艾滋病的早期診斷, 通過測定血漿病毒載量預(yù)測疾病進程, 評價抗反HIV核酸檢測技術(shù)應(yīng)用現(xiàn)狀 本文內(nèi)容

2、：摘要：艾滋病的廣泛傳播給社會造成了極大負擔。目前艾滋病的防治工作主要是控制和切斷艾滋病病毒（）的傳播, 這就要求普及艾滋病的檢測, 以盡早地發(fā)現(xiàn)感染者。相較于其他的檢測方法, 核酸檢測的窗口期短, 靈敏度、特異性高, 在臨床上可用于艾滋病的早期診斷, 通過測定血漿病毒載量預(yù)測疾病進程, 評價抗反轉(zhuǎn)錄病毒治療效果。根據(jù)資源特點和患者需求等因素, 可將核酸檢測的應(yīng)用場景劃分為大型醫(yī)院、基層醫(yī)療機構(gòu)及家庭檢測。本文綜述了核酸檢測的不同應(yīng)用場景及對應(yīng)檢測方法, 并對核酸檢測的應(yīng)用前景做了展望。關(guān)鍵詞：艾滋病病毒；核酸檢測；應(yīng)用場景；應(yīng)用進展自年在美國被發(fā)現(xiàn)以來, 艾滋?。ǎ┚统什粩嗦拥内厔荨Ｄ耆?/p>

3、共報告新發(fā)感染萬（萬萬）, 感染者達萬人（萬萬）。年（年月日零時至月日時）全國（不含港澳臺）共報告法定傳染病發(fā)病例, 死亡人, 其中艾滋病死亡例（）。目前艾滋病尚未有根治的方法和有效的疫苗, 因此艾滋病的防治工作主要是控制艾滋病的傳播, 以預(yù)防為主, 普及艾滋病的檢測, 盡早地發(fā)現(xiàn)感染者。而實驗室檢測技術(shù)則是開展艾滋病各項預(yù)防、治療以及干預(yù)措施的基本手段之一。的實驗室檢測主要包括血清學檢測、淋巴細胞檢測和核酸檢測。血清學檢測一般用于艾滋病常規(guī)篩查和確證實驗, 檢測血清中抗原或（和）抗體, 易于自動化且成本較低, 但是不能應(yīng)用于感染者的治療及用藥監(jiān)測。淋巴細胞檢測主要用于了解機體的免疫狀態(tài)、確定

4、用藥治療時機及疾病分期、判斷治療效果和臨床并發(fā)癥等, 但是這種方法的特異性較低, 僅作為艾滋病患者確證后的檢測手段, 不能用于艾滋病的早期診斷。而核酸檢測由于靈敏度和特異性高, 窗口期短（感染者血漿中出現(xiàn)時間早, 病毒感染后約天, 在血漿中病毒載量即達到核酸擴增技術(shù)可檢測出的水平）, 因此可以用于艾滋病的早期診斷, 并且其在臨床治療效果、耐藥性的監(jiān)測及病程的監(jiān)控、預(yù)測等方面均有廣泛的應(yīng)用。根據(jù)不同的應(yīng)用場景, 核酸檢測可以分為：大型醫(yī)院、基層衛(wèi)生服務(wù)機構(gòu)（社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心、鄉(xiāng)鎮(zhèn)衛(wèi)生院等）以及家庭檢測。大型醫(yī)院的核酸檢測目前臨床上很多大型醫(yī)院如三級醫(yī)院等都有分子生物學實驗室, 能夠滿足核酸檢測的

5、環(huán)境及人員要求。在大型醫(yī)院, 的核酸檢測主要依賴于自動化或半自動化的大型儀器, 能夠?qū)崿F(xiàn)較高通量的核酸檢測, 滿足大樣本量的需求, 可分為定性和定量檢測。截至目前, 通過我國藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械注冊且仍在有效期內(nèi)的核酸檢測試劑有種（表）, 其中進口產(chǎn)品項, 國產(chǎn)項。定性檢測主要用于艾滋病的早期診斷, 常用的檢測試劑盒有歐盟批準生產(chǎn)的定性檢測試劑, 使用探針法進行檢測；美國食品與藥品監(jiān)督管理局（, ）批準的公司生產(chǎn)的核酸定性檢測試劑在臨床中也有應(yīng)用, 其檢測原理為轉(zhuǎn)錄介導(dǎo)的等溫擴增系統(tǒng)（, ）結(jié)合化學發(fā)光標記的探針雜交檢測, 檢測的靶基因為和多聚酶基因。定量檢測可用于艾滋病的早期診斷、監(jiān)測抗病

6、毒治療效果及疾病進展。臨床上常用的定量檢測試劑包括美國羅氏分子診斷公司研發(fā)的和美國公司生產(chǎn)的檢測試劑盒。其技術(shù)主要基于實時熒光定量（）的方法對血清中核糖核酸脫氧核糖核酸（）進行定量分析, 上述兩種試劑盒主要應(yīng)用了水解探針法, 自年美國公司發(fā)明技術(shù)以來, 該技術(shù)如今已經(jīng)被廣泛應(yīng)用到基因檢測。法國公司生產(chǎn)的應(yīng)用了分子信標技術(shù), 這種基于非水解探針的分子信標技術(shù)也是較常用的一種核酸檢測方法, 在檢測病毒載量時與探針法具有較好的相關(guān)性和一致性, 但分子信標探針設(shè)計較為復(fù)雜且成本較高。實時熒光定量技術(shù)與常規(guī)的技術(shù)相比, 特異性更高, 不僅能夠有效地解決過程的污染問題, 而且具有自動化程度高等特點。目前實

7、時熒光定量在市場上應(yīng)用廣泛, 我國常用國內(nèi)外的實時熒光定量試劑進行檢測。深圳凱杰公司、廣州達安公司等均已研發(fā)出核酸診斷試劑投入市場。美國公司基于分支鏈信號放大技術(shù)（, ）研發(fā)了檢測試劑盒。技術(shù)于年由美國公司研發(fā), 基于特殊的分支鏈信號放大系統(tǒng), 靶標被捕獲探針捕獲后, 與各級探針雜交, 最后用與放大序列互補的堿性磷酸酶（）標記的寡核苷酸通過雜交與分子結(jié)合。通過對化學發(fā)光的強度的測定對靶標進行定量檢測。由于反應(yīng)過程不依賴于核酸擴增, 因此不存在擴增產(chǎn)物的污染問題, 這是該技術(shù)的一大優(yōu)勢, 但如何提高檢測的靈敏度是該技術(shù)的難點。同時該技術(shù)的缺陷在于信號放大探針在制備上難度較大且操作步驟過于繁瑣,

8、限制了其在臨床檢測中的應(yīng)用。上述試劑所需的配套儀器成本高、體積大, 對操作人員的專業(yè)要求較高, 適用于樣本量較大的大型中心醫(yī)院的檢測。根據(jù)國內(nèi)外的相關(guān)數(shù)據(jù)及文獻報道, 考慮到檢測的特殊性, 避免誤診, 全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范（年修訂版）中建議用拷貝作為判斷結(jié)果的閾值, 兩次定量檢測更有助于準確判斷結(jié)果。對于評估抗病毒藥物療效和病程進展, 同一病人宜使用相同試劑, 有助于合理解讀病毒載量的變化?；鶎有l(wèi)生服務(wù)機構(gòu)的核酸檢測由于艾滋病復(fù)雜的病程及其難治性, 艾滋病患者到大醫(yī)院診治的時間相對來說較為短暫, 其大部分的時間是在家庭、社區(qū)中度過的, 的檢測也應(yīng)當盡可能地拓展到整個社會中去, 以基層衛(wèi)生服務(wù)

9、機構(gòu)為核心開展感染者的社區(qū)檢測, 已成為迫在眉睫的社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)任務(wù)。基層醫(yī)療衛(wèi)生服務(wù)機構(gòu)由于經(jīng)費投入不足、醫(yī)務(wù)人員水平有限, 適合使用價格低廉、操作簡便的一體化檢測設(shè)備, 從而降低核酸檢測對實驗室及操作人員的要求。設(shè)備的各個樣本檢測模塊相互獨立, 可以實現(xiàn)樣本的即到即檢?！笆甠大多不能進行常規(guī)的核酸檢測, 而近年來全自動及集成化的核酸即時檢測（, ）設(shè)備的發(fā)展, 使得社區(qū)醫(yī)院及資源匱乏地區(qū)的核酸檢測成為可能。傳統(tǒng)的實驗一般都要進行樣本的裂解、核酸提取、純化及濃縮等繁雜的樣品制備過程, 耗費時間久。近幾年市場上興起的微流控芯片技術(shù)為實現(xiàn)核酸的即時檢測提供了很好的發(fā)展方向。微流控芯片又稱芯片實驗室

10、（, ）, 是指在幾平方厘米大小的芯片上構(gòu)建生物或化學實驗室。微流控技術(shù)具有所需樣品體積小、檢測效率高、使用成本低且具有良好的兼容性、有望實現(xiàn)便攜式檢測裝置等特點。美國公司開發(fā)了一款從樣品中核酸的提取到完成檢測完全實現(xiàn)自動化的微流控核酸檢測系統(tǒng), 反應(yīng)中大多數(shù)液體是以凍干的形式預(yù)先填充的, 大大減少了樣品混淆和操作錯誤的機會。從樣本的制備到完成測試出檢測結(jié)果僅需要半小時, 減輕了操作者的工作強度。其研發(fā)的定性檢測試劑靶基因為區(qū), 可以對患者全血或者干血斑進行檢測, 其檢測結(jié)果與檢測試劑盒有較好的一致性。公司的檢測平臺只需要外周血或血漿內(nèi)完成多重實時反應(yīng)來檢測（）亞型, （）亞型和型病毒。羅氏公

11、司生產(chǎn)的使用微流控芯片技術(shù), 通過擠壓反應(yīng)試劑在三個擁有不同溫區(qū)的腔室內(nèi)來回移動來實現(xiàn)反應(yīng)所需要的溫度循環(huán), 這種以空間上的溫度循環(huán)來取代時間上的溫度循環(huán)的方式極大了縮減了所需的反應(yīng)時間, 可應(yīng)用于艾滋病的快速檢測, 但空間域需要更多樣化的以及更大的微流控平臺。另外, 年劍橋大學研發(fā)的全自動檢測平臺可用于全血或血漿樣本的核酸的快速檢測, 其基于等溫擴增的原理, 與檢測試劑盒的檢測一致性可達。上述幾種可用于即時檢測的微流控核酸檢測設(shè)備產(chǎn)品比較情況, 詳見表。這幾種微流控核酸檢測可以解決基層衛(wèi)生服務(wù)機構(gòu)或資源匱乏地區(qū)的現(xiàn)場檢測環(huán)境及人員限制的問題, 使基層醫(yī)療單位具備開展核酸檢測的能力。但是其儀器

12、與試劑成本均較高（以為例, 一臺儀器價格約在萬萬左右）, 且產(chǎn)品缺乏市場規(guī)范和標準, 因此目前沒有大范圍推廣.家庭檢測家庭檢測的私密性高, 產(chǎn)品便攜且便于使用, 在說明書的指導(dǎo)下即可完成操作, 采樣過程簡單, 檢測過程需要很少或不需要試劑、設(shè)備, 結(jié)果判讀簡單, 將是未來檢測主要的發(fā)展方向之一。紙條檢測是最易于家庭使用的檢測方式, 抗原抗體檢測膠體金法已廣泛應(yīng)用于艾滋病篩查實驗, 但是市場上核酸檢測紙條檢測的相關(guān)應(yīng)用較少。年, 美國休斯敦萊斯大學的團隊描述了一種紙條測定方法, 該方法使用金納米顆粒探針和金增強溶液定量檢測擴增的, 檢測時間只需分鐘, 每個試劑盒成本約為美元。核酸紙條檢測在即時檢

13、測方面有巨大的潛力, 其優(yōu)勢在于制備簡單、成本低廉、操作易行、對環(huán)境友好, 檢測時間短及結(jié)果可視化等, 但在靈敏度方面還有很大的提高空間。由于分析物通過紙條傳送, 局部分析物濃度可能因溶液擴散而減少, 而在多重檢測中有些信號分子可能會擴散到鄰近通道, 因此還存在交叉污染的可能性, 且目前核酸紙條的制備方法仍不成熟, 這些因素限制了核酸紙條檢測在市場的應(yīng)用。小結(jié)與展望艾滋病的早發(fā)現(xiàn)早治療依賴于實驗室檢測技術(shù), 而在眾多實驗室檢測方法中核酸檢測窗口期短, 靈敏度高, 對艾滋病的早期診斷、病程檢測、抗病毒治療效果評價和耐藥性檢測等非常重要, 但由于基因存在多樣性, 且高度變異, 很難設(shè)計一套引物能夠覆蓋所有的序列, 因此檢測的靈敏度受到限制, 現(xiàn)有的檢測方法或是操作復(fù)雜、對實驗人員要求較高或是儀器及試劑較為昂貴, 檢測成本較高, 既難以在一般的實驗室推廣, 也不適合對大量病人的現(xiàn)場快速檢測, 難以實現(xiàn)廣泛的臨床應(yīng)用。通過對當前核酸檢測的現(xiàn)狀分析可以發(fā)現(xiàn), 未來核酸檢測的發(fā)展目標是進一步縮短檢測窗口期, 提高檢測靈敏度、特異性, 降低漏檢率, 開發(fā)出檢測速度快, 操作簡單方便的檢測方法、試劑或儀器, 且能夠降低檢測成本, 使其能夠滿足基層醫(yī)療單位及欠發(fā)達地區(qū)艾滋病檢測實際工作的需要。微流