甲氧基乙氧基和羥丙氧基測(cè)定法操作規(guī)程

1、德信誠(chéng)培訓(xùn)網(wǎng)甲氧基乙氧基和羥丙氧基測(cè)定法操作規(guī)程1 目的：建立甲氧基測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)操作程序。2 范圍： 本標(biāo)準(zhǔn)采用氣相色譜法或容量法測(cè)定甲基纖維素、乙基纖維素或羥丙甲纖維素等藥用輔料中所含的甲氧基、乙氧基和羥丙氧基。3職責(zé)：檢驗(yàn)員、qc主任、品質(zhì)保證部經(jīng)理對(duì)本規(guī)程負(fù)責(zé)。4 程序：4.1 氣相色譜法4.1.1 測(cè)定原理：本法系利用供試品中的甲氧基（och3）、乙氧基（och2ch3）或（和）羥丙氧基（och2chohch3）與氫碘酸作用，生成易揮發(fā)的碘甲烷、碘乙烷或（和）2-碘丙烷，以正辛烷為內(nèi)標(biāo)，采用氣相色譜法測(cè)定碘甲烷、碘乙烷或（和）2-碘丙烷的量，根據(jù)測(cè)定生成的碘甲烷、碘乙烷或（和）2-碘丙烷

2、的量來(lái)計(jì)算供試品中甲氧基、乙氧基或（和）羥丙氧基含量?；瘜W(xué)反應(yīng)式如下： roch3(roch2ch3、roch2chohch3)+hi roh+ch3i(ch3ch2i、ch3chich3)、r纖維素基團(tuán)4.1.2 儀器與試藥4.1.2.1 儀器4.1.2.1.1 氣相色譜儀，帶氫火焰離子化檢測(cè)器或熱導(dǎo)檢測(cè)器。4.1.2.1.2 色譜柱 用25%苯基-75甲基聚硅氧烷，涂布濃度為20的填充柱；或以6%氰丙基苯-94二甲基硅氧烷（或極性相近）為固體液的毛細(xì)管柱。4.1.2.1.3 微量注射器 規(guī)格10l和50l。4.1.2.1.4 分析天平 感量0.1和0.01。4.1.2.1.5 加熱器 加熱

3、溫度150，控溫精度1；帶孔：直徑20，深32可振蕩。4.1.2.1.6 反應(yīng)瓶 外徑20，內(nèi)徑13，高50，帶丁基橡膠塞，可密封。4.1.2.2 試藥4.1.2.2.1 碘甲烷、碘乙烷和2-碘丙烷，使用前進(jìn)行標(biāo)化測(cè)定（分析純以上）。 4.1.2.2.2 氫碘酸、已二酸、正辛烷和鄰二甲苯，均為分析純。4.1.3 操作方法4.1.3.1 內(nèi)標(biāo)溶液的制備 稱取正辛烷0.5g ,置于100ml量瓶中，加鄰二甲苯溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。4.1.3.2 對(duì)照品溶液的制備 反應(yīng)瓶中加已二酸80mg，分別精密加入內(nèi)標(biāo)溶液和57%氫碘酸各2ml，密封，精密稱定；根據(jù)各供試品中所含甲氧基、乙氧基或（和）羥

4、丙氧基的量，用注射器穿刺加適量的碘甲烷、碘乙烷或（和）2-碘丙烷，精密稱定。兩次稱重結(jié)果相減即為對(duì)照品加入量；振搖30s，靜置，取上層液體即得。4.1.3.3 供試品溶液的制備 取供試品約65mg，精密稱定，置已稱重的反應(yīng)瓶中，加己二酸80mg，分別精密加入內(nèi)標(biāo)溶液和57%氫碘酸各2ml，密封，稱重，130150振蕩60 min，或在130150加熱30min，手工劇烈振搖5min，繼續(xù)在130150加熱30min，冷卻至室溫，稱重，若失重小于反應(yīng)瓶中內(nèi)容物的0.50%，且無(wú)滲漏，取混合液的上層液體作為供試品溶液；若失重大于反應(yīng)瓶中內(nèi)容物的0.50%，則應(yīng)重新制備供試品溶液（羥丙甲纖維素的加熱

5、溫度為150）。4.1.3.4 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 將色譜柱接入氣相色譜儀，選擇適宜檢測(cè)器，柱溫采用程序升溫：100，維持8min，然后以每分鐘50的速率升溫至230，維持2min，進(jìn)樣口溫度為200；檢測(cè)器溫度為250。照氣相色譜法測(cè)定，理論板數(shù)按正辛烷峰計(jì)算不低于1500（填充柱）或10000（毛細(xì)管柱），各對(duì)照品峰及內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合要求。取對(duì)照品溶液連續(xù)進(jìn)樣5次，校正因子相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于3.0%4.1.3.5 校正因子測(cè)定 取對(duì)照品溶液1ul注入氣相色譜儀，計(jì)算甲氧基、乙氧基或（和）羥丙氧基的校正因子。4.1.3.6 含量測(cè)定 取供試品溶液1ul進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算生成的碘甲烷、碘乙烷

6、或（和）2-碘丙烷的量，折算成供試品中甲氧基、乙氧基和羥丙氧基的含量。4.1.4 注意事項(xiàng)4.1.4.1 碘甲烷、碘乙烷和2-碘丙烷均應(yīng)避光保存，放置過(guò)程中釋放出碘，使溶液顏色逐漸加深，含量降低，故每次測(cè)定前應(yīng)進(jìn)行標(biāo)化測(cè)定，含量計(jì)算時(shí)應(yīng)進(jìn)行折算。4.1.4.2 碘甲烷、碘乙烷和2-碘丙烷均為極易揮發(fā)性物質(zhì)，應(yīng)在進(jìn)樣前打開(kāi)反應(yīng)瓶密封蓋，取上層液立即測(cè)定。4.1.4.3 氫碘酸應(yīng)為無(wú)色至微黃色液體，濃度應(yīng)為57，可直接從市場(chǎng)購(gòu)買。如果氫碘酸顏色加深或濃度偏低，可取氫碘酸試劑置于全玻璃儀器中，加適量次亞磷酸，使氫碘酸的顏色由棕色變?yōu)闊o(wú)色，加熱同時(shí)緩緩?fù)ㄈ氲獨(dú)?，收?26127的餾分，純化后的氫碘酸貯

7、存于有良好密封性的棕色玻璃瓶中，充氮保存，濃度約為57。4.1.4.4 反應(yīng)條件對(duì)反應(yīng)瓶的密封性要求苛刻，既要反應(yīng)安全，又要防止?jié)B漏，加熱時(shí)間以60分鐘為宜。4.1.4.5 羥丙甲纖維素因分子結(jié)構(gòu)位阻較大，加熱溫度需在150才能與氫碘酸反應(yīng)完全，其余物質(zhì)可控制加熱溫度為130150。4.1.4.6 碘甲烷、碘乙烷、2-丙烷和氫碘酸均為強(qiáng)刺激性物質(zhì)，操作過(guò)程中應(yīng)注意安全。4.1.5 記錄與計(jì)算4.1.5.1 記錄天平型號(hào)及室溫和相對(duì)濕度，氣相色譜儀型號(hào)、色譜條件，色譜柱型號(hào)和規(guī)格，振蕩加熱器型號(hào)、加熱溫度和時(shí)間，供試品與對(duì)照品的名稱、批號(hào)、含量及取用量，系統(tǒng)適用性試驗(yàn)和含量充氮的色譜圖。4.1.

8、5.2 計(jì)算4.1.5.2.1 碘甲烷、碘乙烷和2-丙烷與甲氧基、乙氧基和羥丙氧基的轉(zhuǎn)換系數(shù)，見(jiàn)表1。 表1 碘甲烷、碘乙烷和2-丙烷與甲氧基、乙氧基和羥丙氧基的轉(zhuǎn)換系數(shù)對(duì)照品 對(duì)應(yīng)被測(cè)定物質(zhì) 轉(zhuǎn)換系數(shù)碘甲烷 甲氧基 0.2186碘乙烷 乙氧基 0.28892-點(diǎn)丙烷 羥丙氧基 0.44174.1.5.2.2 計(jì)算 甲氧基=（qt/qs）（wsw）0.2186100乙氧基=qtqswsw0.2889100 羥丙氧基=qtqswsw0.4417100式中 qt和qs分別為供試品和對(duì)照品的峰面積與其對(duì)應(yīng)的內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰面積之比; ws為對(duì)照品的取樣量，mg. w為供試品的重量（按干燥品計(jì)），mg4.1

9、.5.3 供試品應(yīng)測(cè)定兩份，相對(duì)偏差不得過(guò)2.0。【附注】碘甲烷、碘乙烷和2-碘丙烷的標(biāo)化（1 ） 純度測(cè)定（氣相色譜法）避光操作。用6%氰丙基苯基-94%二甲基硅氧烷（或極性相近）為固定液的毛細(xì)管柱；起始溫度為60，維持8min,再以每分鐘10的速率升溫至150，維持10min；進(jìn)樣口溫度為200；檢測(cè)器氫火焰離子化檢測(cè)（fid）或熱導(dǎo)檢測(cè)（tcd）溫度為250。取本品1l,注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，按不加校正因子的峰面積歸一化法計(jì)算主峰相對(duì)百分含量，應(yīng)不得低于99.5。（2 ） 含量測(cè)定（容量法）避光操作取乙醇10ml，置100ml量瓶中，精密稱定，加碘甲烷（或碘乙烷，或2-碘丙烷）1.

10、0ml，精密稱定，用乙醇稀釋至刻度，搖勻；精密量取20ml，置100ml量瓶中，精密加硝酸銀滴定液（0.1moll）50ml與硝酸2ml，時(shí)時(shí)振搖2h,避光，放置過(guò)夜，繼續(xù)時(shí)時(shí)振搖2h,用水稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，棄去初濾液20ml，精密量取續(xù)濾液50ml，加硫酸鐵銨指示液2ml，用硫氰酸銨滴定液（0.1moll）滴定，并將滴定結(jié)果用空白試驗(yàn)校編號(hào)：sop-jy-7-051-02 頁(yè)碼：第5頁(yè)共10頁(yè)正。每1ml硝酸銀滴定液（0.1moll）相當(dāng)于14.19mg的碘甲烷（ch3）15.60mg 的碘乙烷（c2h5i）或17.00mg的2-碘丙烷（c3h7i），含碘甲烷（或碘乙烷，或2-碘丙烷）

11、不得低于98.04.2 容量法4.2.1 羥丙氧基測(cè)定：本法系利用供試品中的羥丙氧基（och2chohch3）在下述裝置的蒸餾瓶d中與三氧化鉻反應(yīng)生成醋酸，籍蒸汽發(fā)生器b產(chǎn)生的水蒸氣餾入錐形瓶g中，用氫氧化鈉滴定液滴定含量；由于在反應(yīng)過(guò)程中會(huì)帶出少量鉻酸進(jìn)入餾出液，也要消耗氫氧化鈉滴定液，因此再采用碘量法測(cè)定鉻酸的含量，并從計(jì)算中扣除后，得出羥丙氧基的含量?；瘜W(xué)反應(yīng)式如下： 3roch2chohch3+8cro33ch3cooh+3h2o+4cr2o3+3co2+3roh ch3cooh+naohch3coona+h2o cro3+h2oh2cro4 h2cro4+2naohna2cro4+2

12、h2o 2na2cro4+8h2so4+6kicr2(so4)3+2na2so4+3k2so4+3i2+8h2o i2+2na2s2o32nai+na2s4o64.2.1.1 儀器與試藥4.2.1.1.1 儀器 裝置如圖d：25ml雙頸蒸餾瓶,側(cè)頸與外裹鋁箔的長(zhǎng)度為95mm的分餾柱e相連接；c：接流管，末端內(nèi)徑為0.251.25mm，插入蒸餾瓶?jī)?nèi)；b：蒸汽發(fā)生管(25mm150mm)，亦具末端內(nèi)徑為0.251.25mm的氣體導(dǎo)入管，并與 c相通；f：冷凝管，外管長(zhǎng)100mm，與e連接。g：125ml具刻度的帶玻塞錐形瓶，供收集餾液用。d與b均浸入可控溫的電熱油浴a中，維持溫度為155。4.2.

13、1.1.2 試藥4.2.1.1.2.1 試劑均為分析純。4.2.1.1.2.2 滴定液的配制與標(biāo)定 應(yīng)符合中國(guó)藥典2010年版二部附錄的規(guī)定；氫氧化鈉滴定液（0.02mol/l）、硫代硫酸鈉滴定液（0.02mol/l）,均可取氫氧化鈉滴定液（0.1moll）、硫代硫酸鈉滴定液（0.1mol/l）定量稀釋制成。4.2.1.1.2.3 試液、指示液的配制 均應(yīng)符合中國(guó)藥典2010年版二部附錄的規(guī)定。4.2.1.2 操作步驟4.2.1.2.1 取各藥品項(xiàng)下規(guī)定量的供試品，精密稱定，置蒸餾瓶d中，加入30（gg）三氧化鉻溶液10 ml。4.2.1.2.2 于蒸汽發(fā)生管b中裝水近接頭處，連接蒸餾裝置。4

14、.2.1.2.3 將b與d浸入油浴中，油浴面應(yīng)與d瓶中液面相一致。開(kāi)啟冷凝水，通入氮?dú)饬?，并控制流速為每秒鐘約1個(gè)氣泡。于30min內(nèi)將油浴升溫至155，并維持此反應(yīng)溫度至收集餾液約50ml，將冷凝管自分餾柱上取下，用水沖洗，洗液并入收集液中。4.2.1.2.4 在上述收集液中，用氫氧化鈉滴定液(0.02mol/l)滴定至ph為6.97.1(用酸度計(jì))，記錄消耗的容積v1(ml)；然后加碳酸氫鈉0.5g與稀硫酸10ml，靜置至不再產(chǎn)生二氧化碳為止，加碘化鉀1.0g，密塞，搖勻，暗處放置5min，加淀粉指示液1ml，用硫代硫酸鈉滴定液(0.02mol/l)滴定至終點(diǎn)，記下消耗的容積v2(ml)。

15、4.2.1.2.5 另作空白試驗(yàn),分別記錄消耗的氫氧化鈉滴定液(0.02mol/l)的容積va(ml)與消耗硫代硫酸鈉滴定液(0.02mol/l)的容積vb(ml)。4.2.1.3.1 整個(gè)裝置連接應(yīng)緊密。4.2.1.3.2 稱樣后，應(yīng)小心移入蒸餾瓶中，供試品不應(yīng)黏附在瓶頸壁上，避免供試品未參加反應(yīng)，使含量偏低。4.2.1.3.3 反應(yīng)過(guò)程中，升溫速度不宜過(guò)快，油浴溫度宜控制在30min內(nèi)升溫至155160左右，并一直控制在160以下。通入氮?dú)獾乃俣炔荒苓^(guò)快，避免生成的醋酸來(lái)不及冷卻而揮發(fā)，影響測(cè)定效果。4.2.1.3.4 第一步用氫氧化鈉滴定液滴定時(shí)，一定要嚴(yán)格控制終點(diǎn)，否則影響測(cè)定值。4.

16、2.1.4 記錄與計(jì)算4.2.1.4.1 記錄天平型號(hào)及室溫和相對(duì)濕度，供試品與試藥的名稱、規(guī)格及取用量，滴定液的名稱、濃度（moll）及其消耗量（ml）。4.2.1.4.2 計(jì)算式中 k為空白校正系數(shù)，m1vam2vb； v1、va分別為供試品與空白試驗(yàn)消耗氫氧化鈉滴定液的體積，ml； v2、vb分別為供試品與空白試驗(yàn)消耗硫代硫酸鈉滴定液的體積，ml； w為供試品的重量，g； m1為氫氧化鈉滴定液的濃度，moll； m2為硫代硫酸鈉滴定液的濃度，moll； 0.0751為羥丙氧基（och2chohch3）的毫摩爾質(zhì)量。4.2.1.4.3 供試品應(yīng)測(cè)定兩份，相對(duì)偏差不得過(guò)0.5。4.2.2 甲

17、氧基測(cè)定：本法系利用含有甲氧基的供試品在下述裝置的圓底燒瓶a中，與氫碘酸加熱反應(yīng)生成揮發(fā)性的碘甲烷（沸點(diǎn)42.5），經(jīng)洗滌管b導(dǎo)入吸收管c和d中與溴作用產(chǎn)生溴化碘，并氧化成碘酸，經(jīng)轉(zhuǎn)移至碘瓶中，加入甲酸除去過(guò)量的溴后，加入碘化鉀和稀硫酸，用硫代硫酸鈉滴定液（0.1moll）滴定析出的碘，即可計(jì)算出甲氧基的含量?；瘜W(xué)反應(yīng)式如下： roch3+hiroh+ch3i ch3i+br2ch3br+ibr ibr+2br+3h2ohio3+5hbr br2+hcooh2hbr+co2 hio3+5i+5h+3i2+3h2o i2+2na2s2o3na2s4o6+2nai4.2.2.1 儀器與試藥4.2.

18、2.1.1 儀器 裝置如圖a為50ml圓底燒瓶，側(cè)部具一內(nèi)徑為1mm的支管供導(dǎo)入二氧化碳或氮?dú)饬饔茫黄款i垂直裝有長(zhǎng)約25cm、內(nèi)徑為9mm的直形空氣冷凝管e，其上端彎曲成出口向下、并縮為內(nèi)徑2mm的玻璃毛細(xì)管,浸入內(nèi)盛水約2ml的洗滌管b中；洗滌管具出口為內(nèi)徑約7mm的玻璃管，其末端為內(nèi)徑4mm可拆卸的玻璃管，可浸入兩個(gè)相連接的吸收管c、d中的第一個(gè)容器c內(nèi)液面之下。4.2.2.1.2 試藥4.2.2.1.2.1 試劑 均為分析純。4.2.2.1.2.2 滴定液的配制與標(biāo)定 應(yīng)符合中國(guó)藥典2010年版二部附錄的規(guī)定。4.2.2.1.2.3 試液的配制 應(yīng)符合中國(guó)藥典2010年版二部附錄的規(guī)定。

19、4.2.2.2 操作步驟4.2.2.2.1 取規(guī)定量的供試品（相當(dāng)于甲氧基約10mg），精密稱定，置圓底燒瓶a中。4.2.2.2.2 在燒瓶中加入熔融的苯酚2.5ml、氫碘酸5ml，另在兩個(gè)吸收管內(nèi)，分別加入含10醋酸鉀的冰醋酸溶液6 ml與4ml，再各加溴0.2ml；連接裝置，并將圓底燒瓶a置于可控溫的電熱油浴中。4.2.2.2.3 通過(guò)支管將co2或n2流緩慢而均衡地以每秒鐘12個(gè)氣泡通入燒瓶，并緩緩加熱使溫度控制在恰使沸騰液體的蒸氣上升至冷凝管的半高度(控制升溫30min使油浴溫度上升至135140)，保持此溫度約45min完成反應(yīng)。4.2.2.2.4 拆卸裝置,將吸收管c和d中的內(nèi)容物

20、傾入250ml碘瓶(內(nèi)盛25醋酸鈉溶液5ml)中，用水淋洗吸收管及其可拆卸的玻璃管，并入碘瓶中使總體積約為125ml。4.2.2.2.5 加入甲酸0.3ml，轉(zhuǎn)動(dòng)碘瓶至溴的顏色消失，再加入甲酸0.6ml，密塞振搖，使過(guò)量的溴完全消失，放置12min。4.2.2.2.6 加入碘化鉀1.0g與稀硫酸5ml，用硫代硫酸鈉滴定液(0.1mol/l)滴定（以淀粉指示液指示滴定終點(diǎn)）,并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1ml的硫代硫酸鈉滴定液（0.1mol/l）相當(dāng)于0.5172mg的甲氧基。4.2.2.3 注意事項(xiàng)4.2.2.3.1 整個(gè)裝置連接應(yīng)緊密。4.2.2.3.2 稱取的供試品應(yīng)小心置于反應(yīng)燒瓶a的底部中心，保證供試品能全部溶入苯酚2.5ml中。4.2.2.3.3 加熱反應(yīng)后生成的碘甲烷籍通入的co2或n2流一起自反應(yīng)液中蒸餾出來(lái)，經(jīng)過(guò)洗滌管，去除干擾物質(zhì)（碘化氫和碘）。4.2.2.3.4 反應(yīng)過(guò)程中，注意溫度的控制，一般控制油浴溫度不宜超過(guò)140，升溫速度不宜太快（約30min），在到達(dá)溫度后，45min可完成反應(yīng)；如果供試品的分子中有2各以上甲氧基時(shí)，加熱時(shí)間應(yīng)延長(zhǎng)為13。