大黃中蒽醌類成分的提取大黃中蒽醌類成分的提取分離和鑒別

1、大黃中蒽醌類成分的提取、分離和鑒別 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊?、?shí)驗(yàn)?zāi)康?1. 掌握蒽醌苷元的提取方法酸水解法。 2. 掌握緩沖紙色譜的原理及基本操作技術(shù)。 3. 掌握pH梯度萃取法的原理及操作技術(shù)。 4. 通過大黃酚和大黃素甲醚的分離實(shí)驗(yàn)，熟悉柱色 譜的操作技術(shù)。 5. 熟悉蒽醌類化合物的鑒定方法。 二、基本原理二、基本原理 大黃中羥基葸醌類化合物多數(shù)以苷的形式存在，故先 用稀硫酸溶液把蒽醌苷水解成苷元，利用游離葸醌可溶于 熱氯仿的性質(zhì)，用氯仿將它們提取出來。由于各羥基葸醌 結(jié)構(gòu)上的不同所表現(xiàn)的酸性不同，用pH梯度萃取法分離它 們；大黃酚和大黃素甲醚酸性相近，利用其極性的差別， 用柱色譜分離之。 三、操

2、作要點(diǎn)三、操作要點(diǎn) 1.提取、分離流程（如圖一） 2.總蒽醌苷元的提取 大黃粗粉100 g，加20硫酸溶液300 ml潤濕，再加氯 仿500 ml，回流提取2hr，稍冷后過濾，殘?jiān)鼦壢?，氯仿?取液于分液漏斗中，分出酸水層，得氯仿提取液。 圖1.大黃提取分離流程圖 3.蒽醌苷元的分離和精制 （1）蒽醌類成分的緩沖紙色譜試驗(yàn) 為了驗(yàn)證分離所采用的萃取液是否合理，作如下緩沖紙色譜試驗(yàn)：取 層析濾紙3 cm12 cm，距下端2 cm處劃一起始線，向上每隔1.5 cm劃一平 行線，在各條帶上依pH由低至高順次涂布實(shí)際所用的各緩沖液及堿液，涂 布完后，將濕濾紙夾在兩片干濾紙中吸至半干。取樣品總蒽醌苷元氯

3、仿提 取液點(diǎn)在起始線上，用氯仿上行展開，將結(jié)果繪制在下面圖中，并確定選 擇的萃取劑是否合理。 （2）分離與精制 a.大黃酸的分離和精制 將含有總蒽醌的氯仿液450 ml于1000 ml分液漏斗中，加pH 8緩沖液150 ml充分振搖，靜置至徹底分層，分出堿水層置250 ml燒杯中，在攪拌下滴 加20鹽酸至pH 3，待沉淀析出完全后，過濾，并用少量水洗沉淀物至洗 出液呈中性，沉淀干燥后，樣品加冰醋酸10 ml加熱溶解，趁熱過濾，濾液 放置析晶，過濾，用少量冰醋酸淋洗結(jié)晶，得黃色針晶為大黃酸。 b.大黃素的分離和精制 pH 8緩沖液萃取過的氯仿層，用pH 9.9緩沖液300 ml振搖萃取，靜置至

4、徹底分層后，分出堿水層，在攪拌下用20鹽酸酸化至pH 3，析出棕黃色 沉淀，抽濾，水洗沉淀物至洗出液呈中性，沉淀經(jīng)干燥后，用15 ml丙酮熱 溶，趁熱過濾，濾液靜置，析出橙色針晶，過濾后，用少量丙酮淋洗結(jié)晶， 得大黃素。 c.蘆薈大黃素的分離與精制 pH 9.9萃取過的氯仿層再加5碳酸鈉-5氫氧化鈉（9:1）堿水液540 ml萃取，堿水層加鹽酸酸化，析出的沉淀水洗，干燥，用10 ml乙酸乙酯精 制，得黃色針晶的蘆薈大黃素。 d.大黃酚和大黃素甲醚的分離 萃取除去蘆薈大黃素后余下的氯仿層，再用3氫氧化鈉溶液500 m1分 二次萃取，至堿水層無色為止，合并堿水層，加鹽酸酸化至 pH 3，析出黃 色

5、沉淀，過濾，水洗至中性，干燥，為大黃酚和大黃素甲醚混合物，留作 柱色譜分離的樣品。余下氯仿液水洗至中性，蒸餾回收氯仿。 e.硅膠柱色譜法分離大黃酚、大黃素-6-甲醚 裝柱：用石油醚乙酸乙酯（9.8:0.2）浸泡200300目硅膠約20 g，攪 拌均勻，盡量趕出氣泡。一次性倒入1.8 cm X 28 cm 的層析柱中，輕輕敲 打使硅膠均勻下沉，至硅膠界面不再下降為止。 上樣：將離大黃酚和大黃素-6-甲醚的混合物用乙醇加熱溶解，伴入少 量硅膠，水浴60左右烘干，加到已裝好的硅膠柱頂端，最后在樣品帶上 蓋上一層硅膠或棉花，以保護(hù)樣品界面不受干擾。 洗脫：先用100 ml石油醚乙酸乙酯（9.8:0.2

6、）洗脫，至第一條黃色色 帶洗下來，再換用100 ml石油醚乙酸乙酯（9.5:0.5）洗脫下第二條色帶。 4.鑒定 (1)蒽醌類成分化學(xué)鑒定 a.堿液試驗(yàn) 分別取各蒽醌結(jié)晶數(shù)毫克置于小試管中，加 2氫氧化鈉溶 液l ml，觀察顏色變化。凡有互成鄰位或?qū)ξ涣u基的蒽醌呈藍(lán)紫至藍(lán)色， 其它羥基蒽醌呈紅色。 b.醋酸鎂試驗(yàn) 分別取蒽醌結(jié)晶數(shù)毫克，置于小試管中，各加乙醇l ml使 溶解，滴加0.5醋酸鎂乙醇溶液，觀察顏色變化。 (2)色譜鑒識(shí) a.薄層板：硅膠G-CMC-Na板。 b.點(diǎn)樣：提取的大黃酸、大黃素、蘆薈大黃素、大黃酚、大黃素甲醚的 氯仿溶液及各對照品氯仿溶液。 c.展開劑：石油醚乙酸乙酯甲酸（15:5:1）上層溶液。 d.展開方式：上行展開。 e.顯色：在可見光下觀察，記錄黃色斑點(diǎn)出現(xiàn)的位置，然后用濃氨水熏 或噴5%醋酸鎂甲醇溶