刻度吸量管的使用

1、臨床生物化學(xué)和生物化學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)操作技能項(xiàng)目與考核標(biāo)準(zhǔn)一、刻度吸量管的使用技能1. 選擇：使用前先根據(jù)需要選擇適當(dāng)?shù)奈抗埽潭任抗艿目側(cè)萘孔詈玫扔诨蛏源笥谧畲?取液量。臨用前要看清總?cè)萘亢涂潭取?. 執(zhí)管：用拇指和中指（輔以無名指） ，拿住吸量管上部，用食指堵住管上口和控制液流。 刻度數(shù)字要朝向自己。3. 取液：另一只手捏壓橡皮球，將吸量管插入液體內(nèi)（不得懸空，以免液體吸入球內(nèi)），用橡皮球?qū)⒁后w吸至最高刻度上端 12cm 處，然后迅速用食指按緊吸量管上口，以免液體從 吸量管下口流出。4. 調(diào)準(zhǔn)刻度：將吸量管提出液面，吸粘性較大的液體時(shí)，先用濾紙擦干管尖外壁；然后用食 指控制液體使之緩慢下降，

2、當(dāng)至所需刻度時(shí)， 立即按緊吸量管上口 （此時(shí)液體凹面、視線和 刻度應(yīng)在同一水平面上） 。5. 放液：放松食指，讓液體自然流入容器內(nèi)，放液時(shí)，管尖最好接觸容器內(nèi)壁，但不要插入 容器內(nèi)原有的液體中，以免污染吸量管和試劑。6. 洗滌： 吸取血液、 血清等粘稠液體及尿液標(biāo)本的吸量管， 使用后要及時(shí)用自來水沖洗干凈； 吸一般試劑的吸量管可不必馬上沖洗，實(shí)驗(yàn)完畢后再?zèng)_洗。沖洗干凈后，晾干，再浸泡于鉻 酸洗液中，數(shù)小時(shí)后取出，再用流水沖凈，最后用蒸餾水沖洗，晾干備用。二、溶液的混勻技術(shù) 混勻的方式大致有以下幾種，可隨使用的器皿和液體容量而選用。1. 旋轉(zhuǎn)混勻法 用手持容器，使溶液作離心旋轉(zhuǎn)，適用于未盛滿液體

3、的試管或小口器皿， 如錐形瓶。旋轉(zhuǎn)試管時(shí)最好用手腕旋轉(zhuǎn)。2. 指彈混勻法 左手持試管上端，用右手指輕輕彈動(dòng)試管下部，使管內(nèi)溶液作旋渦運(yùn)動(dòng)。3. 倒轉(zhuǎn)混勻法 適用于有塞量筒和容量瓶、試管內(nèi)容物的混勻。一般試管內(nèi)容物的混勻可 用聚乙烯等薄膜封口，再用手按住管口倒轉(zhuǎn)混勻。4. 吸管混勻法 用吸量管將溶液反復(fù)吸放數(shù)次，使溶液充分混勻。5. 玻棒攪動(dòng)法 適用于燒杯內(nèi)容物的混勻，如固體試劑的溶解和混勻。6. 甩動(dòng)混勻法 右手持試管上部，輕輕甩動(dòng)振搖，即可混勻。7. 電磁攪拌混勻法 在電磁攪拌機(jī)上放置燒杯，在燒杯內(nèi)放入封閉于玻璃或塑料管中的小 鐵棒，利用磁力使小鐵棒旋轉(zhuǎn)以達(dá)到混勻杯中液體的目的，適用于酸堿自

4、動(dòng)滴定， pH 梯度 滴定等。8. 振蕩器混勻法 利用振蕩器使容器中的內(nèi)容物振蕩，達(dá)到混勻的目的。9. 注意： （1） 混勻時(shí)須防止容器內(nèi)液體濺出或被污染。 （2） 嚴(yán)禁用手指直接堵塞試管口或錐 形瓶口振搖。三、離心機(jī)的使用方法使用離心機(jī)前，應(yīng)檢查離心機(jī)轉(zhuǎn)動(dòng)狀態(tài)是否平穩(wěn)，以確定離心機(jī)的性能；檢查套管與 離心管大小是否相配，套管是否鋪好軟墊（用棉藥或橡皮） ，檢查套管底部應(yīng)無碎玻璃片或 漏縫。檢查合格后，將一對(duì)離心管（待分離管與非分離空白管）放入一對(duì)套管中，然后連套 管一起分置粗天平兩側(cè)， 用滴管向非分離空白管一側(cè)加水， 直至天平兩側(cè)彼此相等為止。 將 各對(duì)平衡的套管連同內(nèi)容物放置于離心機(jī)內(nèi)，

5、兩個(gè)等重的離心管必須放于對(duì)稱位置。 放妥后， 接通電源開關(guān)， 逐步扭動(dòng)轉(zhuǎn)速旋鈕， 緩慢增加離心機(jī)轉(zhuǎn)速， 直到所需的轉(zhuǎn)速。 達(dá)規(guī)定時(shí)間后， 將轉(zhuǎn)速旋鈕逐步調(diào)回零，待離心機(jī)停穩(wěn)后，取出離心管。四、721 型分光光度計(jì)使用方法如下：1. 接通電源（指示燈亮），預(yù)熱1520分鐘。2. 靈敏度選擇鈕放在“ 1 ”檔（如調(diào)不到“ OD=0” 時(shí)選用較高的檔次） 。3. 轉(zhuǎn)動(dòng)波長選擇鈕，選用所需的波長。4. 揭開比色杯暗箱蓋，轉(zhuǎn)動(dòng)“ 0電位器”使電表指針對(duì)準(zhǔn) T=0處。5. 將比色杯放入比色杯架，使空白管對(duì)向光路，蓋好比色杯暗箱蓋。轉(zhuǎn)動(dòng)“100電位器” ，調(diào)準(zhǔn)電表指針使之指向 OD=0（T=100）處。6.

6、 拉動(dòng)比色杯座的拉桿，使測(cè)定杯進(jìn)入光路，迅速從電表上讀出光密度值，并記錄。測(cè)讀過程中，隨機(jī)拉回拉桿到原位，使空白杯進(jìn)入光路，隨時(shí)調(diào)整OD=0。7. 比色完畢后，關(guān)上電源開關(guān)，取出比色杯，將比色杯暗箱蓋好，清洗比色杯并晾干。五、恒溫水浴箱的使用1、加水到適當(dāng)高度。2、接通電源，打開開關(guān)。3、調(diào)節(jié)溫度，使之恒溫。4、如長時(shí)間不用，應(yīng)關(guān)上開關(guān)拔掉電源。六、氨基酸的薄層層析技術(shù)操作步驟：（一）薄板的制備1稱取硅膠 G 0.5g 放入研缽中，加 1.5ml0.2% 羧甲基纖維素鈉，研磨成均勻的稀糊狀。2. 將上述糊狀物傾倒在 4X 10cm的玻璃片（圖11）上，使之均勻地布滿于玻片，將玻片輕 輕地晃動(dòng)，

7、使硅膠 G均勻分布，表面平坦，光滑，無水層及氣泡，然后水平放置在空氣中使 其自然干燥。3. 薄板上硅膠干后，放入 105 C的恒溫干燥箱內(nèi)活化，半小時(shí)后取出，晾涼備用。（二）點(diǎn)樣1. 在距離薄板一端約 2cm 處用細(xì)線向下壓硅膠，壓成一條點(diǎn)樣線。2. 用直徑約1mm的玻璃毛細(xì)管分別吸取甘氨酸、精氨酸、酪氨酸及混合氨基酸溶液，在點(diǎn)樣線上點(diǎn)樣，每隔0.8cm處點(diǎn)一種樣品（約 5ul ），點(diǎn)樣直徑約23mm待點(diǎn)樣處干后，再將 樣品在原點(diǎn)樣處重復(fù)點(diǎn)一次。（三）展層1. 硅膠板的點(diǎn)樣端向下，傾斜地放入層析缸內(nèi)，使其與缸底平面呈約30。角。2 用長頸漏斗加入展開劑使展開劑離點(diǎn)樣處12cm處為止。3. 蓋上

8、層析缸蓋進(jìn)行層析。4. 當(dāng)展開劑前沿到達(dá)玻璃板全長的3/4 處停止層析，取出玻片，記下展開劑前沿位置，將 硅膠板置干燥箱烘干。（四）顯色1. 用 0.5%茚三酮丙酮溶液均勻地噴灑于硅膠板上。2將玻板置105 C干燥箱內(nèi)烘干，約 2分鐘左右即可顯出粉紅色斑點(diǎn)。（五）測(cè)量101分別測(cè)量甘氨酸、精氨酸、酪氨酸的Rf值，作為標(biāo)準(zhǔn)。2. 再測(cè)出混合液中分離出的各種氨基酸的Rf值與標(biāo)準(zhǔn)值對(duì)照，以確定為何種氨基酸。（六）結(jié)果計(jì)算計(jì)算Rf值:R值=氨基酸移動(dòng)的距離（cm） 溶劑移動(dòng)的距離（cm）樣品至色斑中心的距離（cm）樣品至溶劑前沿的距離（cm）七、血清蛋白質(zhì)醋酸纖維素薄膜電泳操作步驟1準(zhǔn)備與點(diǎn)樣： 取8

9、cm 2cm醋酸纖維素薄膜，將其浸泡在pH8.6緩沖溶液中，待薄膜完全 浸透后，取出輕輕夾于濾紙中，吸去多余的液體。 然后用點(diǎn)樣器蘸新鮮血清， 在無光澤面距 一端約2cm處點(diǎn)樣。待血清全部滲入膜內(nèi) ,移開點(diǎn)樣器。2電泳：取已點(diǎn)樣的薄膜，點(diǎn)樣面向下兩端緊貼在四層濾紙橋上，注意點(diǎn)樣端放陰極。蓋好電泳槽蓋，平衡10分鐘，打開電源開關(guān)，調(diào)節(jié)電壓至110130V,電流0.40.6mA/cm,通電4560分鐘。3染色與漂洗：電泳結(jié)束后，關(guān)閉電源。 將薄膜從電泳槽中取出，浸入氨基黑10B染色液中510分鐘。待充分染色后，取出薄膜，浸入漂洗液中漂洗34遍，直至背景無色為止。用濾紙吸干薄膜。4定量：取試管6支，

10、編號(hào)，將電泳薄膜按蛋白質(zhì)區(qū)帶剪開，分別置于試管中，另于薄膜的空白部分剪一平均大小的薄膜條放入空白管中。各管中加入0.4mol/L NaOH 5ml，反復(fù)振搖，使其顏色充分洗脫。用721分光光度計(jì)進(jìn)行比色，波長650nm,以空白管調(diào)零，讀取各管的吸光度。各種蛋白質(zhì)占總蛋白百分含量的計(jì)算：吸光度總和（T）=ODa+OD什OD2+OD+OD清蛋白（A）% = ODa /T 100-球蛋白 % = OD：1/T 100:-2-球蛋白 % = OD：2/T 100-球蛋白 % = OD 7T 100-球蛋白 % = OD /T 1005. 結(jié)果識(shí)別與計(jì)算點(diǎn)樣線-2 清蛋白臨床生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)操作技能項(xiàng)目與考

11、核標(biāo)準(zhǔn)一、刻度吸量管的使用技能1. 選擇：使用前先根據(jù)需要選擇適當(dāng)?shù)奈抗埽潭任抗艿目側(cè)萘孔詈玫扔诨蛏源笥谧畲?取液量。臨用前要看清總?cè)萘亢涂潭取?. 執(zhí)管：用拇指和中指（輔以無名指） ，拿住吸量管上部，用食指堵住管上口和控制液流。 刻度數(shù)字要朝向自己。3. 取液：另一只手捏壓橡皮球，將吸量管插入液體內(nèi)（不得懸空，以免液體吸入球內(nèi)），用橡皮球?qū)⒁后w吸至最高刻度上端 12cm 處，然后迅速用食指按緊吸量管上口，以免液體從 吸量管下口流出。4. 調(diào)準(zhǔn)刻度：將吸量管提出液面，吸粘性較大的液體時(shí)，先用濾紙擦干管尖外壁；然后用食 指控制液體使之緩慢下降，當(dāng)至所需刻度時(shí)， 立即按緊吸量管上口 （此時(shí)液

12、體凹面、視線和 刻度應(yīng)在同一水平面上） 。5. 放液：放松食指，讓液體自然流入容器內(nèi)，放液時(shí)，管尖最好接觸容器內(nèi)壁，但不要插入 容器內(nèi)原有的液體中，以免污染吸量管和試劑。6. 洗滌： 吸取血液、 血清等粘稠液體及尿液標(biāo)本的吸量管， 使用后要及時(shí)用自來水沖洗干凈； 吸一般試劑的吸量管可不必馬上沖洗，實(shí)驗(yàn)完畢后再?zèng)_洗。沖洗干凈后，晾干，再浸泡于鉻 酸洗液中，數(shù)小時(shí)后取出，再用流水沖凈，最后用蒸餾水沖洗，晾干備用。二、溶液的混勻技術(shù) 混勻的方式大致有以下幾種，可隨使用的器皿和液體容量而選用。1. 旋轉(zhuǎn)混勻法 用手持容器，使溶液作離心旋轉(zhuǎn)，適用于未盛滿液體的試管或小口器皿， 如錐形瓶。旋轉(zhuǎn)試管時(shí)最好用

13、手腕旋轉(zhuǎn)。2. 指彈混勻法 左手持試管上端，用右手指輕輕彈動(dòng)試管下部，使管內(nèi)溶液作旋渦運(yùn)動(dòng)。3. 倒轉(zhuǎn)混勻法 適用于有塞量筒和容量瓶、試管內(nèi)容物的混勻。一般試管內(nèi)容物的混勻可 用聚乙烯等薄膜封口，再用手按住管口倒轉(zhuǎn)混勻。4. 吸管混勻法 用吸量管將溶液反復(fù)吸放數(shù)次，使溶液充分混勻。5. 玻棒攪動(dòng)法 適用于燒杯內(nèi)容物的混勻，如固體試劑的溶解和混勻。6. 甩動(dòng)混勻法 右手持試管上部，輕輕甩動(dòng)振搖，即可混勻。7. 電磁攪拌混勻法 在電磁攪拌機(jī)上放置燒杯，在燒杯內(nèi)放入封閉于玻璃或塑料管中的小 鐵棒，利用磁力使小鐵棒旋轉(zhuǎn)以達(dá)到混勻杯中液體的目的，適用于酸堿自動(dòng)滴定， pH 梯度 滴定等。8. 振蕩器混勻

14、法 利用振蕩器使容器中的內(nèi)容物振蕩，達(dá)到混勻的目的。9. 注意： （1） 混勻時(shí)須防止容器內(nèi)液體濺出或被污染。 （2） 嚴(yán)禁用手指直接堵塞試管口或錐 形瓶口振搖。三、離心機(jī)的使用方法使用離心機(jī)前，應(yīng)檢查離心機(jī)轉(zhuǎn)動(dòng)狀態(tài)是否平穩(wěn)，以確定離心機(jī)的性能；檢查套管與 離心管大小是否相配，套管是否鋪好軟墊（用棉藥或橡皮） ，檢查套管底部應(yīng)無碎玻璃片或 漏縫。檢查合格后，將一對(duì)離心管（待分離管與非分離空白管）放入一對(duì)套管中，然后連套 管一起分置粗天平兩側(cè)， 用滴管向非分離空白管一側(cè)加水， 直至天平兩側(cè)彼此相等為止。 將 各對(duì)平衡的套管連同內(nèi)容物放置于離心機(jī)內(nèi)， 兩個(gè)等重的離心管必須放于對(duì)稱位置。 放妥后，

15、接通電源開關(guān)， 逐步扭動(dòng)轉(zhuǎn)速旋鈕， 緩慢增加離心機(jī)轉(zhuǎn)速， 直到所需的轉(zhuǎn)速。 達(dá)規(guī)定時(shí)間后， 將轉(zhuǎn)速旋鈕逐步調(diào)回零，待離心機(jī)停穩(wěn)后，取出離心管。四、721 型分光光度計(jì)使用方法如下：1. 接通電源（指示燈亮），預(yù)熱1520分鐘。2. 靈敏度選擇鈕放在“ 1 ”檔（如調(diào)不到“ OD=0” 時(shí)選用較高的檔次） 。3. 轉(zhuǎn)動(dòng)波長選擇鈕，選用所需的波長。4. 揭開比色杯暗箱蓋，轉(zhuǎn)動(dòng)“ 0電位器”使電表指針對(duì)準(zhǔn) T=0處。5. 將比色杯放入比色杯架，使空白管對(duì)向光路，蓋好比色杯暗箱蓋。轉(zhuǎn)動(dòng)“100電位器” ，調(diào)準(zhǔn)電表指針使之指向 OD=0（T=100）處。6. 拉動(dòng)比色杯座的拉桿，使測(cè)定杯進(jìn)入光路，迅速從

16、電表上讀出光密度值，并記錄。測(cè)讀過程中，隨機(jī)拉回拉桿到原位，使空白杯進(jìn)入光路，隨時(shí)調(diào)整OD=0。7. 比色完畢后，關(guān)上電源開關(guān)，取出比色杯，將比色杯暗箱蓋好，清洗比色杯并晾干。五、722型分光光度計(jì)使用方法如下：1. 接通電源（指示燈亮），預(yù)熱1520分鐘。2. 靈敏度選擇鈕放在“ 1”檔（如調(diào)不到“ OD=0 時(shí)選用較高的檔次）。3. 轉(zhuǎn)動(dòng)波長選擇鈕，選用所需的波長；調(diào)節(jié)“TAC旋鈕”至“ T”刻度。4. 揭開比色杯暗箱蓋，轉(zhuǎn)動(dòng)“ 0電位器”使顯示器顯示為“ 0”。5. 將比色杯放入比色杯架，使空白管對(duì)向光路，蓋好比色杯暗箱蓋。轉(zhuǎn)動(dòng)“100電位器”，使顯示器顯示為“ 100”。6. 調(diào)節(jié)“

17、TAC旋鈕”至“ A”刻度，觀察顯示器顯示是否為“0”；若不為“ 0”，調(diào)節(jié)“ Abs0旋鈕”使顯示器顯示為“ 0 ”。7. 拉動(dòng)比色杯座的拉桿，使測(cè)定杯進(jìn)入光路，迅速從電表上讀出光密度值，并記錄。測(cè)讀過程中，隨機(jī)拉回拉桿到原位，使空白杯進(jìn)入光路，隨時(shí)調(diào)整OD/A=O8比色完畢后，關(guān)上電源開關(guān)，取出比色杯，將比色杯暗箱蓋好，清洗比色杯并晾干。六、恒溫水浴箱的使用5、加水到適當(dāng)高度。6、接通電源，打開開關(guān)。7、調(diào)節(jié)溫度，使之恒溫。8、如長時(shí)間不用，應(yīng)關(guān)上開關(guān)拔掉電源。七、血清蛋白質(zhì)醋酸纖維素薄膜電泳操作步驟1.準(zhǔn)備與點(diǎn)樣：取8cm 2cm醋酸纖維素薄膜，將其浸泡在pH8.6緩沖溶液中，待薄膜完全

18、浸透后，取出輕輕夾于濾紙中，吸去多余的液體。 然后用點(diǎn)樣器蘸新鮮血清，在無光澤面距一端約2cm處點(diǎn)樣。待血清全部滲入膜內(nèi),移開點(diǎn)樣器。2電泳：取已點(diǎn)樣的薄膜，點(diǎn)樣面向下兩端緊貼在四層濾紙橋上，注意點(diǎn)樣端放陰極。蓋好電泳槽蓋，平衡10分鐘，打開電源開關(guān)，調(diào)節(jié)電壓至110130V,電流0.40.6mA/cm,通電4560分鐘。3染色與漂洗：電泳結(jié)束后，關(guān)閉電源。 將薄膜從電泳槽中取出，浸入氨基黑10B染色液中510分鐘。待充分染色后，取出薄膜，浸入漂洗液中漂洗34遍，直至背景無色為止。用濾紙吸干薄膜。4定量：取試管6支，編號(hào)，將電泳薄膜按蛋白質(zhì)區(qū)帶剪開，分別置于試管中，另于薄膜的空白部分剪一平均大小的薄膜條放入空白管中。各管中加入O.4mol/L NaOH 5ml，反復(fù)振搖，使其顏色充分洗脫。用 721分光光度計(jì)進(jìn)行比色，波長650nm,以空白管調(diào)零，讀取各管的吸光度。各種蛋白質(zhì)占總蛋白百分含量的計(jì)算：吸光度總和（T）=ODa+ODi+OD_2+OD+OD清蛋白（A）% = ODa /T 100：i-球蛋白 % = OD1/T 100：2-球蛋白 % = OD-2/T 100-球蛋白 % = OD /T 100-球蛋白 % = OD