選修1 3填空教師版

1、 微生物的利用 一。培養(yǎng)基種類 固體培養(yǎng)基， 培養(yǎng)基，配制固體培養(yǎng)基時(shí)，需要添加凝固劑 如 成分：一般都含有水、 、氮源和無機(jī)鹽等最基本的物質(zhì)，有時(shí)還需要加入特殊的 營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。 2無菌技術(shù) 對(duì)實(shí)驗(yàn)空間、操作臺(tái)可用 或酒精消毒，操作者的手用 消毒。 實(shí)驗(yàn)用的培養(yǎng)器皿和培養(yǎng)基一般用 法滅菌，接種環(huán) 方法滅菌。 為避免周圍環(huán)境中微生物的污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在 附近進(jìn)行。 4.不能加熱滅菌的化合物，要用 過濾 固體。瓊脂、碳源、紫外線 酒精 高壓蒸汽滅菌法 酒精燈火焰 G6玻璃砂漏斗 二、大腸桿菌的培養(yǎng)和分離 1大腸桿菌 (1)性質(zhì)：大腸桿菌是革蘭氏 性、 的腸道桿菌。 (2)用途：大腸桿菌是 技術(shù)中被廣

2、泛采用的工具。 2實(shí)驗(yàn)原理 (1)擴(kuò)大培養(yǎng)原理：將大腸桿菌接種在 培養(yǎng)基中，使其快速分裂繁殖。 (2)分離純化原理：將待檢測(cè)微生物樣品通過 或 接種在 培養(yǎng)基上，樣品中的每一個(gè)細(xì)胞或孢子都可以生長(zhǎng)繁殖形成單個(gè)菌落。將單個(gè)菌落接種到 培養(yǎng)基上，經(jīng)培養(yǎng)后，即可得到一個(gè)微生物的純種。 陰性、兼性厭氧 劃線或涂布 LB固體 斜面 3實(shí)驗(yàn)步驟 培養(yǎng)基 固體培養(yǎng)基及培養(yǎng)皿高壓蒸汽滅菌50 mL LB50 mL LB液體培養(yǎng)基和 滅菌 個(gè)滅菌后的培養(yǎng)皿中，水平放置，使之形成平面4將培養(yǎng)基分別倒入 倒平板 12 h在裝有液體培養(yǎng)基的三角瓶中接種大腸桿菌，培養(yǎng) 接種 用接種環(huán)在接種有大腸桿菌的三角瓶中蘸菌液一次

3、，劃線? ?在固體培養(yǎng)基的平板上連續(xù)劃線，蓋好培養(yǎng)皿分離? 后，24 h12?，放在37恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)培養(yǎng)皿倒置?蓋在下面培養(yǎng)? ?可看到劃線的末端出現(xiàn)不連續(xù)的單個(gè)菌落觀察? 用接種環(huán)取出單個(gè)菌落，用劃線法接種在斜面培養(yǎng)基上，保存? ? 冰箱中保存培養(yǎng)24 h后，置于4 37 菌種? (1)稀釋的大試管中，充分1 mL大腸桿菌培養(yǎng)液，加入到盛有9 mL_用1 mL無菌吸管吸取53412、10混勻，稀釋_倍；按照同樣的方法依次進(jìn)行稀釋制成10、1010、106 10系列稀釋度的大腸桿菌稀釋液。 劃線或涂布(2) 劃線分離法右手拿拿皿底，a操作：在_旁，左手 接種環(huán)，挑取大腸桿菌培養(yǎng)液在平板上劃

4、線。平行劃線時(shí)，第一次劃線及每次劃線之間劃線。b劃線方法：_劃線和_c 接種環(huán)，劃線結(jié)束后也要灼燒接種環(huán) 都要 涂布分離法 浸在盛有酒精的燒杯中。_a將 取不超過b0.1 mL的_，滴加到培養(yǎng)基表面。 。10 s8c將蘸有少量酒精的玻璃刮刀在火焰上引燃，待酒精燃盡后，冷卻 d用玻璃刮刀將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面。涂布時(shí)可轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿，使菌液分布均勻。 頁 1 第(3)培養(yǎng)：將接種的平板_于培養(yǎng)箱或溫室中37 培養(yǎng)1224 h。 無菌水 10 (2)a.酒精燈火焰 b平行 連續(xù) 灼燒 a.涂布器 b菌液 (3)倒置 第2課時(shí) 分離以尿素為氮源的微生物 1實(shí)驗(yàn)原理 (1)以尿素為氮源的微生物含有

5、酶，可以通過降解尿素作為其生長(zhǎng)的氮源。 (2)尿素固體培養(yǎng)基的唯一氮源為 ，只有能合成 的微生物才能分解尿素 (3)脲酶可使尿素分解產(chǎn)生氨，從而可使加入 的尿素固體培養(yǎng)基變 。其利用尿素的反應(yīng)式為： 脲酶CO 2NHOCOH 酚紅指示劑 紅 ：(NH)脲酶 尿素 脲酶23222 2實(shí)驗(yàn)步驟 (1)倒平板 在60 左右時(shí)，將兩只三角瓶中已滅菌的 培養(yǎng)基和 培養(yǎng)基，在 旁分別倒入兩個(gè)培養(yǎng)皿中，在水平的超凈臺(tái)上 ，平放至 。 (2)制備細(xì)菌懸液 2土壤1010 min，即成 的三角瓶中，振蕩在無菌條件下，將1 g土樣加到有99 mL 345土壤稀釋液。取樣時(shí)，盡量只取 稀釋液。依此法制備10 、10

6、 和10。搖勻， 放在試管架上。 (3)用 法分離細(xì)菌 45的土壤稀釋液各 10 和10 mL，分別加到有LB培養(yǎng)基和尿素培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿取 中，再將保存在 中的玻璃刮刀(或涂布器)放在酒精燈火焰上，待刮刀(或涂布器) 上火焰熄滅，在 旁打開培養(yǎng)皿，將菌液涂布到整個(gè)平面上。 (4)培養(yǎng) 將培養(yǎng)皿 ，在37 中培養(yǎng)2448 h。 (5)觀察 3實(shí)驗(yàn)結(jié)果 (3)在尿素培養(yǎng)基上的菌落周圍會(huì)出現(xiàn) 的環(huán)帶。 LB固體培養(yǎng)基和尿素固體 酒精燈 搖勻， 凝固 無菌水 懸液 涂布分離法 0.1 70%酒精 酒精燈火焰 倒置 恒溫箱 紅色 第3課時(shí) 果汁中的果膠和果膠酶 1果膠 (1)組成：果膠是植物 的主要成分

7、，由 和 組成。 的果實(shí)中果膠含量最多。 (2)作用：起著將植物細(xì)胞 的作用，去掉果膠，植物組織將變得 。 (3)性質(zhì)：果膠不溶于 ，這是鑒別果膠的一種簡(jiǎn)易方法。 2.果膠酶 (1)來源：黑曲霉、 等。 (2)組成：果膠酶并不是特指某一種酶，而是分解果膠的一類酶的總稱，主要包括果膠酶和 。 細(xì)胞壁 半乳糖醛酸 半乳糖醛酸甲酯 山楂 粘合在一起 松散 乙醇 蘋果青霉 果膠甲酯酶 第4課時(shí) -淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的檢測(cè) 2固定化酶：將 的酶用 或 方法 上，使之成為 而又有 。 3將酶改造成固定化酶的原因是 由于酶 ，且不利于 ，所以要將酶改造成固定化酶。 4酶固定化的方法有 法、 法、

8、法和 法等。本實(shí)驗(yàn)用的是 法。 5固定化酶作用的機(jī)理 將固定化酶 ，當(dāng) 時(shí)，在 的作用下 。 水溶性 物理或化學(xué) 某種介質(zhì) 不溶于水 酶活性的制劑 在水溶液中很不穩(wěn)定 工 頁 2 第業(yè)化使用 吸附法、共價(jià)偶聯(lián)法、交聯(lián)法和包埋法 吸附法 裝柱 底物經(jīng)過該柱 酶 轉(zhuǎn)變?yōu)楫a(chǎn)物 二、-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用檢測(cè)的實(shí)驗(yàn) 1實(shí)驗(yàn)原理 將 固定在 上，一定濃度的淀粉溶液經(jīng)過 后，可使淀粉水 解成 。用 測(cè)試，若流出物呈 色，表明有 生成。 2實(shí)驗(yàn)材料 (1)-淀粉酶的固定化 在燒杯中將5 mg-淀粉酶溶于4 mL 中 再加入5 g ，不時(shí)攪拌 30 min后將上述溶液加入1支注射器中 用10倍體積的

9、洗滌此注射器 (除去 游離淀粉酶，流速為1 mL/min) (2)可溶性淀粉溶液 取50 mg可溶性淀粉溶于100 mL 中，攪拌均勻。 -淀粉酶 石英砂固定化酶柱 糊精 淀粉指示劑 紅色 糊精 蒸餾水 石英砂 蒸餾 水 未吸附 熱水 3實(shí)驗(yàn)步驟 將灌注了固定化-淀粉酶的注射器放在注射器架上，用滴管加 溶液，使該溶液以 mL/min的流速過柱。 (2)接取流出物 待從固定化酶柱中流出 mL的溶液后，接收0.5mL流出液。 (3)流出物鑒定 在流出物中加入 溶液，觀察顏色。用水稀釋 倍后再觀察顏色。 (4)洗滌、保存固定化酶柱 實(shí)驗(yàn)后，用 倍柱體積的蒸餾水洗滌此柱。放置在 冰箱中保存。 (5)幾

10、天后取出冰箱中該固定化酶柱，重復(fù)實(shí)驗(yàn)，觀察結(jié)果。 淀粉 0.3 5 KI-I1 10 4 2 第5課時(shí) 果酒及果醋的制作 一、用葡萄制作葡萄酒 原理 酵母菌在 條件下進(jìn)行 發(fā)酵，將葡萄糖氧化成乙醇。反應(yīng)式為： 4步驟 (1)沖洗取2.55 kg的 葡萄用 洗凈在鮮紅紫色的 溶液中浸泡約5 min用 洗凈瀝去水分，待用。 (2)榨汁 用多功能榨汁機(jī)以 速將葡萄打成漿狀(也可以用杵和研缽搗爛)。 (3)制作酵母懸液 加少量溫水適量干酵母(2.5 kg葡萄約用1 g干酵母)放在一小燒杯中干酵母成糊狀加少40 許 ，混勻，放置片刻待酵母懸液中出現(xiàn) 即可。 裝入發(fā)酵瓶(4) 。 裝量不要超過 的，否則效

11、果不好。 瓶上所加的玻璃管最好是 (5)酒精發(fā)酵 ；若 _。若溫度偏低，則發(fā)酵時(shí)間 發(fā)酵溫度： 。 溫度高于30 ，要采取降溫措施，否則 天。 發(fā)酵時(shí)間： 。 鑒別發(fā)酵完畢的依據(jù)：發(fā)酵瓶中 (6)過濾、分裝、保存的細(xì)口2 L仍然渾濁)(分裝到1(過濾， 用 除去葡萄皮和籽)濾液)(發(fā)酵液渾濁 )。清澈即為葡萄酒 瓶中，加蓋密封，靜置) ( 頁 3 第延30_ 彎曲 25 低速 蔗糖 氣泡 2/3 無氧 酒精 成熟 水 高錳酸鉀 清水 上清液 停止出現(xiàn)氣泡 兩層紗布 酒的風(fēng)味不佳 23 長(zhǎng) 二、用果汁制作果酒 )、梨、柑橘或其他水果。 (最好原料 (1)制取果汁： 層紗布過濾即成果汁。 多功能榨

12、汁機(jī)打碎 蘋果 ) 1 L為例(2)配料(以 倒入果汁轉(zhuǎn)動(dòng)發(fā)酵瓶使 倒入 發(fā)酵瓶中加入向2 L200 g )，混勻、加蓋。(約1 g干酵母 (3)發(fā)酵 天后劇烈發(fā)酵停止取出果酒過濾和分類。 3天后可見到氣泡 注意事項(xiàng)：天 ，該情況不能持續(xù) 會(huì)使瓶?jī)?nèi)出現(xiàn) 發(fā)酵開始時(shí)，由于微生物的 以上。 ，使發(fā)酵作用盡快發(fā)生。 天后還看不到氣泡，必須加入更多的 若 即為果酒。 個(gè)月，用6 法取出 (4)靜置5 負(fù)壓酵母懸液 10 微生物的需氧呼吸 切成大塊 雙層 蔗糖 蔗糖完全溶解 蘋果 上清液 3 酵母 虹吸法3 三、用果酒制作果醋 。 1菌種 條件下，醋桿菌將乙醇氧化為 2原理在 醋酸。反應(yīng)式為： 果酒。3

13、原料 步驟4瓶 酒水混合物倒入甲瓶中發(fā)酵在 把800 mL 200 將適量醋化醋桿菌的培養(yǎng)物或醋曲懸液加在中( 后倒入乙瓶中， 調(diào)pH至 mL酒一水混合物中混勻， 箱將水簇通氣泵由 使鋸末均勻濕透) pH用通氣，通氣不必太快48 h后，(中選) 則進(jìn)行 性，若呈試紙檢查 瓶中流出液的pH， 乙與丙處的螺下一步調(diào)節(jié)甲與乙間的雙通活塞、檢測(cè)流出滴/5min每天用pH絲夾，使流出液量為 不再減少pH至流出液?液 停止實(shí)驗(yàn)? 或甲瓶液體全部流入乙瓶? 1 乙 酸性醋化醋桿菌 有氧 泡菜的腌制和亞硝酸鹽的測(cè)定第6課時(shí) 一、泡菜腌制 。 和 1菌種 主要是 發(fā)酵產(chǎn)物 和其他營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)進(jìn)行發(fā)酵， 的條件下，微

14、生物利用菜中的 2原理在 。 和醇類物質(zhì)等，其中也有 有 步驟3 周左右腌至菜洗泡菜壇洗凈，并菜、鹽水、糖及調(diào)壇口用水封可開壇食用次防空氣入內(nèi)并切塊味品入壇混勻熱水洗內(nèi)壁2 亞硝酸 無氧 有機(jī)酸 假絲酵母和乳酸菌 二、亞硝酸鹽的定量測(cè)定 1原理 萘基乙二胺偶聯(lián)，其產(chǎn)物與 發(fā)生重氮化反應(yīng)后，N1形成 亞硝酸鹽與 產(chǎn)物。亞硝酸鹽溶液的濃度不同，呈現(xiàn)的顏色深淺不一：溶液濃度高，顏色深些，濃度低， 法予以定量。 顏色淺些，可用 2步驟 頁 4 第(1)樣品處理 腌制的泡菜25 g及少量泡菜湯打成勻漿，過濾、清洗制取濾液，用 溶液調(diào)pH至 8.0，再加入25 mL 溶液，產(chǎn)生 。 (2)測(cè)定 10 mL

15、樣品溶液4.5 mL 緩沖液2.5 mL60% 溶液 5 mL 定容于25 mL容 量瓶中，靜置后用光程為 cm的比色杯 在 _nm處測(cè)定光密度值(OD值)，以10 mL水為 對(duì)照。 (3)標(biāo)準(zhǔn)曲線 取0、0.5、1.0、3.0和5.0 mL亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液處理后測(cè)光密度值，以 為橫坐標(biāo)， 以 為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 (4)計(jì)算 X(mV)/(mV)，式中X為樣品中亞硝酸鹽含量，單位mg/kg；m為 ，單1122111 位g；m為通過標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的亞硝酸鹽質(zhì)量，單位g；V為樣品處理液總體積，V212 為 。 對(duì)氨基苯磺酸 紫紅色 光電比色法 氫氧化鈉 硫酸鋅 白色沉淀 氯化銨 乙酸 顯色液

16、1_cm 550_nm 空白對(duì)照 亞硝酸鈉質(zhì)量 光密度值 樣品質(zhì)量 測(cè)定用 樣品液體積 第7課時(shí) 植物的組織培養(yǎng) 一、植物組織培養(yǎng)1含義 取一部分植物組織，如葉、芽、莖、根、花瓣或花粉等，在 的條件下接種在三角瓶 中的瓊脂培養(yǎng)基上，給予一定的 和 ，使之產(chǎn)生 ，或進(jìn)而 生根發(fā)芽。 2原理 。 4激素在植物組織培養(yǎng)過程中的作用 (1)培養(yǎng)基中加入的植物激素是 和 。 (2)兩者的 決定組織是生根還是生芽。細(xì)胞分裂素與生長(zhǎng)素的比例高時(shí)，誘 導(dǎo)芽的生成；細(xì)胞分裂素與生長(zhǎng)素的比例 時(shí)，愈傷組織繼續(xù)生長(zhǎng)而不分化；細(xì)胞 分裂素與生長(zhǎng)素的比例 時(shí)，會(huì)趨于生根。 無菌 溫度和光照 愈傷組織 植物細(xì)胞的全能性

17、生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素摩爾濃度比 大 致相等 低 二、菊花的組織培養(yǎng) 1材料 MS培養(yǎng)基、 培養(yǎng)基、 培養(yǎng)基、 (NAA)、芐基腺 嘌呤(BA)、菊花幼苗。 2步驟 (1)制備外植體 在 中，取出一瓶已進(jìn)行過 的菊花培養(yǎng)，在無菌培養(yǎng)皿上用無菌鑷子和 無菌解剖刀切成幾段，每段上至少有 張葉片。 (若是自然生長(zhǎng)的莖進(jìn)行組織培養(yǎng)，則可取一段莖在 中浸泡10 min，再放入 溶液中浸泡5 min，然后用另一 溶液浸泡5 min，最后在超凈臺(tái)中用 清洗，切段 ) (2)接種 在 旁，將每段放入1瓶 培養(yǎng)基中，使 插入培養(yǎng)基內(nèi)，蓋 上 。每瓶也可放入23段幼莖切段。 (3)生芽培養(yǎng) 在 下保持 的溫度培養(yǎng)，每

18、天的光照不少于14.5 h。23周后長(zhǎng)成 健壯的叢狀苗。 (4)生根培養(yǎng) 將健壯的 在無菌條件下一個(gè)個(gè)轉(zhuǎn)入 培養(yǎng)基中，在上述條件下繼續(xù)培養(yǎng)。 (5)移栽鍛煉 將生根的苗移至草 或 中，用玻璃罩或塑料布保持 以上的濕度，2 3天后打開玻璃罩逐漸降低 進(jìn)行鍛煉，直到將罩全部打開處于自然濕度下為止。 頁 5 第(6)定植栽培 轉(zhuǎn)移至土中培養(yǎng)，即可長(zhǎng)成植株并開花。 發(fā)芽 生根 萘乙酸 超凈臺(tái) 無菌培養(yǎng) 1 70%乙醇 5%次氯酸鈉 5%次氯酸鈉 無菌水 酒精燈 生芽 莖的一部分 封口膜 日光燈 1825 叢狀苗 生根 草炭土或蛭 石 80%以上 降低溫度 第1課時(shí) 工具酶的發(fā)現(xiàn)和基因工程的誕生 1基因

19、工程的概念 基因工程是狹義的 。廣義的遺傳工程泛指把一種生物的遺傳物質(zhì)(細(xì)胞核、染 色體脫氧核糖核酸等)移到另一種生物的 中去，并使這種遺傳物質(zhì)所帶的遺傳信息在 中表達(dá)。其核心是構(gòu)建 分子。 3基因工程的技術(shù)保障 限制性核酸內(nèi)切酶、 和 的發(fā)現(xiàn)與應(yīng)用，為基因工程的創(chuàng)建提 供了技術(shù)上的保障。 遺傳工程 遺傳物質(zhì) 細(xì)胞 受體細(xì)胞 重組DNA 二、限制性核酸內(nèi)切酶 限制性核酸內(nèi)切酶是能夠 和 DNA分子內(nèi)一小段特殊核苷酸序列的酶。 2來源 主要從 生物中分離，如細(xì)菌。 3作用 能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，并使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的 斷開。如：某種限制性核酸內(nèi)切酶能識(shí)別G

20、AATTC序列，并在G和A之 間切斷DNA， 4作用特點(diǎn) 具有專一性，一般每種限制性核酸內(nèi)切酶只識(shí)別 種特定的核苷酸序列。 5結(jié)果 形成 末端。 識(shí)別和切割 原核 磷酸二酯鍵 一 粘性 三、DNA連接酶 1概念 形成 個(gè)DNA片段連接在一起，分子的酶。 的2DNA連接酶是將具有末端 2功能 縫合DNA片段。在基因工程中，可以將 和 DNA連接在一起。 3作用特點(diǎn) 兩種來源不同的DNA用 的限制性核酸內(nèi)切酶切割，形成 的粘性末端。 DNA連接酶能催化磷酸與脫氧核糖之間 的形成，將兩DNA末端的縫隙“縫 合”起來。如圖： 堿基互補(bǔ) 重組DNA 外源基因 載體 相同 相同 磷酸二酯鍵 四、質(zhì) 粒 (

21、1)概念：質(zhì)粒是能夠 的雙鏈環(huán)狀 分子，它在細(xì)菌中以獨(dú)立于 之外的方式存在，是一種特殊的遺傳物質(zhì)。 (2)作用：質(zhì)粒是基因工程中最常用的載體，可將 基因送入 細(xì)胞。 自主復(fù)制 DNA 擬核 外源基因 宿主細(xì)胞 第2課時(shí) 基因工程的原理和技術(shù) 1基本原理 讓人們感興趣的基因(即 基因)在宿主細(xì)胞中穩(wěn)定和高效地表達(dá)。 2變異類型 。 1獲得目的基因 如果目的基因的序列是已知的，可用 合成目的基因， 或者用 (PCR)擴(kuò)增目的基因。 頁 6 第如果目的基因的核苷酸序列是未知的，可以從 中獲取。 2形成重組DNA分子 (1)一般用 限制性核酸內(nèi)切酶分別切割目的基因和載體DNA(如質(zhì)粒)，形 成 。 (

22、2)用 將目的基因和載體DNA連接在一起，形成重組DNA分子， 目的基因) 基因重組 化學(xué)方法 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) 基因文庫 同一種 相同的粘性末端 DNA連接酶 3將重組DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞 (1)常用受體細(xì)胞： 、枯草桿菌、 和動(dòng)植物細(xì)胞等。 (2)導(dǎo)入方法舉例：用質(zhì)粒作為載體，宿主細(xì)胞應(yīng)該選擇 ， 用 處理大腸桿菌，增加其細(xì)胞壁的 ，使含有目的基因的重組質(zhì)粒進(jìn)入 大腸桿菌宿主細(xì)胞。 4.篩選含有目的基因的受體細(xì)胞 (1)篩選原因：不是所有細(xì)胞都接納了 。 (2)篩選方法舉例：若質(zhì)粒上有四環(huán)素的抗性基因，含有這種重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞就能夠在有 的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，否則不能生長(zhǎng)，這樣就篩選到含有重組

23、DNA分子的受體細(xì)胞。具體如下圖： 5目的基因的表達(dá) 目的基因在 細(xì)胞中表達(dá)，產(chǎn)生人們需要的功能物質(zhì)，如人胰島素原。 1轉(zhuǎn)基因植物 (1)傳統(tǒng)育種方法的不足：培育新品種所需時(shí)間 ，而且 親本難以雜交。 (3)培育成功的轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物：抗除草劑的 ，抗植物病毒的 ，抗 害蟲的 ，耐貯存的 等。 2基因治療 (1)概念：基因治療是向 中引入正常功能的 ，以糾正或補(bǔ)償基因的缺 陷，達(dá)到治療的目的。 三、基因工程與生態(tài)環(huán)境保護(hù) 1利用基因工程技術(shù)開發(fā)具有生物可 的新型塑料，以替代不可降解的化學(xué)合成塑 料。 2利用基因工程技術(shù)，對(duì)能夠分解石油的 進(jìn)行了改造，大大提高了其分解石油的能力。 3利用轉(zhuǎn)基因微生物

24、吸收環(huán)境中的 、降解有毒化合物和處理工業(yè)廢水。 大腸桿菌 酵母菌 大腸桿菌 氯化鈣 通透性 重組DNA 四環(huán)素 宿主細(xì)胞 較長(zhǎng) 遠(yuǎn)緣 轉(zhuǎn)基因煙草 轉(zhuǎn)基因番茄 轉(zhuǎn)基因棉 轉(zhuǎn) 基因番茄 目標(biāo)細(xì)胞 基因 降解 細(xì)菌 重金屬 第4課時(shí) 植物的克隆 1植物細(xì)胞的全能性 (2)原理：生物體的每一個(gè)細(xì)胞都包含有該物種所特有的全套 ，都有發(fā)育成 為完整個(gè)體所需的全部基因。 (3)在生物體內(nèi)細(xì)胞沒有表現(xiàn)出全能性，而是分化為不同的組織或器官，這是基因在特定的時(shí)間和空間條件下 的結(jié)果。 2植物組織培養(yǎng) (1)一般程序：配制 培養(yǎng)基獲取 的植物組織組織培養(yǎng)，獲得 誘導(dǎo)新植株形成。 脫分化再分化(2)過程：離體的植物器

25、官、組織或細(xì)胞愈傷組織胚狀體(或根、芽)幼苗 移入大田成熟植株。 遺傳物質(zhì) 選擇性表達(dá) 半固體 消毒 愈傷組織 二、植物克隆的成就 1細(xì)胞培養(yǎng) (1)過程：?jiǎn)蝹€(gè)植物細(xì)胞經(jīng)過培養(yǎng)基中成分的誘導(dǎo)，依次發(fā)育成細(xì)胞團(tuán)、 、心形胚 頁 7 第和 ，最后再生出完整的植株。 (2)細(xì)胞培養(yǎng)的誘導(dǎo)方法：主要通過平衡的植物激素配比進(jìn)行調(diào)控。例如，適量的激動(dòng)素和細(xì)胞分裂素配比可以誘導(dǎo) 的分化；適量的吲哚乙酸(IAA)及適當(dāng)減除其他植物激素，則 可以誘導(dǎo) 。 2器官培養(yǎng) 在植物器官培養(yǎng)方面，雌性 的培養(yǎng)成果顯著，例如子房的培養(yǎng)、胚囊的培養(yǎng)均已取 得進(jìn)展。 3原生質(zhì)體培養(yǎng)和植物細(xì)胞工程 (1)植物原生質(zhì)體的獲得方法：

26、在0.50.6 mol/L的 溶液環(huán)境(較高滲透壓)下用 混合液處理根尖、葉片愈傷組織或懸浮培養(yǎng)細(xì)胞，將 消化除去。獲得球形的 原生質(zhì)體。 (2)植物細(xì)胞工程的概念和操作過程：培養(yǎng)植物細(xì)胞(包括原生質(zhì)體)，借助基因工程方法，將 外源遺傳物質(zhì)(DNA)導(dǎo)入受體細(xì)胞(包括原生質(zhì)體)中，或通過細(xì)胞 融合、 等將不同來源的遺傳物質(zhì)重新組合，再通過對(duì)這些轉(zhuǎn)基因細(xì)胞或重組 細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，獲得具有特定性狀的新植株。 4多途徑的植物克隆實(shí)踐 植物克隆技術(shù) 應(yīng)用 大量培養(yǎng)特定細(xì)胞系 能產(chǎn)生重要 (如某些中藥)的細(xì)胞的大量克隆和產(chǎn)物的工業(yè)化生產(chǎn) 花藥(花粉)培養(yǎng)，進(jìn)行 克隆 選擇細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)生的表現(xiàn)出遺傳變異的新植

27、株 在培養(yǎng)基中加入不同濃度NaCl或病原體的毒蛋白 在培養(yǎng)基中加入不同濃度的賴氨酸類似物 對(duì)煙草、大麥等育種 選擇具備 性狀的作物新類型 誘發(fā)和篩選 突變體 產(chǎn)生 突變體，其中賴氨酸、蛋氨酸、亮氨酸和異亮氨酸的水平會(huì)升高 球形胚 胚狀體 芽 生根 花器官 甘露醇 纖維素酶和果膠酶 細(xì)胞壁 顯微注射 次生代謝產(chǎn)物 單倍體 有益性狀 抗鹽或抗病 抗賴氨酸類似物 第5課時(shí) 動(dòng)物的克隆 1動(dòng)物克隆的技術(shù)基礎(chǔ) 動(dòng)物克隆的技術(shù)基礎(chǔ)是 。 2動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng) (2)原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng) 將動(dòng)物組織通過 或 方法分散成 細(xì)胞后進(jìn)行的初次培養(yǎng)，稱為原 代培養(yǎng)。初次培養(yǎng)的細(xì)胞生長(zhǎng)、繁殖一定時(shí)間后，由于空間不足或細(xì)胞密度

28、過大導(dǎo)致營(yíng)養(yǎng)枯 竭，影響細(xì)胞的生長(zhǎng)，因此需要重新用 等處理，進(jìn)行分瓶擴(kuò)大培養(yǎng)，稱為傳代培 養(yǎng)。 動(dòng)物的細(xì)胞和組織培養(yǎng)。酶或機(jī)械方法 單個(gè) 胰蛋白酶 生長(zhǎng) 細(xì)胞培養(yǎng) 原基 整個(gè) 分化 3動(dòng)物組織培養(yǎng) (1)概念：動(dòng)物組織在體外及人工條件下維持生活狀態(tài)或 特性。 (2)結(jié)果：由于細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)、變化和培養(yǎng)物的組織成分發(fā)生變化，長(zhǎng)期的培養(yǎng)結(jié)果最終成了簡(jiǎn)單的 。 (3)在廣義的組培中還包括器官培養(yǎng)，即器官的 、器官的一部分或 器官在體外 和人工控制的條件下得以保存、生長(zhǎng)，在此過程中保持器官的結(jié)構(gòu)、功能及 能力。 4細(xì)胞系和細(xì)胞株 (1)細(xì)胞系：可 的細(xì)胞。原代培養(yǎng)物在首次傳代時(shí)就成為細(xì)胞系，能連續(xù)培養(yǎng)下

29、去的細(xì)胞系稱為 細(xì)胞系，不能連續(xù)培養(yǎng)下去的細(xì)胞系 稱為 細(xì)胞系。二倍體細(xì)胞通常為有限細(xì)胞系。連續(xù)細(xì)胞系被認(rèn)為是發(fā)生轉(zhuǎn)化了的細(xì) 胞系，大多數(shù)具有 。有的連續(xù)細(xì)胞系是 ，具有異體致瘤性；有 頁 8 第的連續(xù)細(xì)胞系獲得了不死性，但保留 現(xiàn)象，不致癌。 (2)細(xì)胞株：通過一定的選擇或純化方法，從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得的 具有 的細(xì)胞稱為細(xì)胞株。細(xì)胞株一般具有恒定的 、同功酶類型、 病毒敏感性和生化特性等?？梢赃B續(xù)多次傳代的細(xì)胞株稱為連續(xù)細(xì)胞株，可傳代次數(shù)有限的 細(xì)胞株稱為 細(xì)胞株。 5克隆培養(yǎng)法(或細(xì)胞克隆) (1)概念：把一個(gè) 從群體中分離出來單獨(dú)培養(yǎng)，使之繁衍成一個(gè)新的細(xì)胞群體的 技術(shù)。 (2)

30、結(jié)果：由于來源于一個(gè)共同的祖細(xì)胞，所以稱為 ，也就是克隆。 (3)提高細(xì)胞克隆形成率的措施：選擇適宜的培養(yǎng)基、添加 (胎牛血清最好)、以 細(xì)胞支持生長(zhǎng)、 (胰島素等)刺激、使用CO培養(yǎng)箱、調(diào)節(jié) 等。 2 連續(xù)傳代 連續(xù) 有限 異倍體核型 惡性細(xì)胞系 接觸抑制 特殊性質(zhì) 染色體組型 有限 單細(xì)胞 純系 血清 滋養(yǎng)細(xì)胞 激素 pH 二、動(dòng)物的細(xì)胞融合技術(shù)及其應(yīng)用 1細(xì)胞融合與細(xì)胞雜交 原理： 。 誘導(dǎo)融合的方法 a物理方法和化學(xué)方法：電激法、 等。 b生物方法： (如仙臺(tái)病毒)。 (2)細(xì)胞雜交 概念： 的細(xì)胞間的融合就是細(xì)胞雜交。 過程 應(yīng)用：由于細(xì)胞雜交中染色體容易丟失，利用雜交細(xì)胞檢測(cè)特定染

31、色體丟失與特定基因產(chǎn)物(蛋白質(zhì))減少的對(duì)應(yīng)關(guān)系可以進(jìn)行 。 2雜交瘤技術(shù)和單克隆抗體的制備 用外界 刺激動(dòng)物，使其發(fā)生免疫反應(yīng)，使 產(chǎn)生抗體。 利用 或聚乙二醇等作介導(dǎo)，使經(jīng)免疫的動(dòng)物的脾細(xì)胞與可以無限傳代的 融合。 經(jīng)過篩選、克隆培養(yǎng)，獲得來自單一細(xì)胞的既能產(chǎn)生 、又能 增殖的雜交瘤 細(xì)胞克隆。 (2)雜交瘤技術(shù)制備單克隆抗體的最大優(yōu)點(diǎn)：可以從特異抗原成分 的抗原混合物中 提取單抗。 (3)單抗的運(yùn)用：可作為 ，研究相應(yīng)抗原蛋白的 、細(xì)胞學(xué)分布及其功能。 細(xì)胞膜的流動(dòng)性 聚乙二醇 滅活的病毒 基因型不同 基因定位 抗原 B淋巴細(xì)胞 仙臺(tái)病毒 骨髓瘤細(xì)胞 特異抗體 無限增殖 比例極少 特異探針

32、結(jié)構(gòu) 三、動(dòng)物的克隆繁殖 1動(dòng)物細(xì)胞全能性的表現(xiàn)程度 (1)在動(dòng)物發(fā)育過程中，細(xì)胞的發(fā)育潛能逐漸 。 3動(dòng)物體細(xì)胞克隆 原理和主要技術(shù)：利用 的全能性進(jìn)行 ，將動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞核移入一個(gè) 已經(jīng)去掉細(xì)胞核的 中，使其重組并發(fā)育成為一個(gè)新的胚胎，這個(gè)新的胚胎最終發(fā) 育為動(dòng)物個(gè)體(克隆動(dòng)物)。 變窄 細(xì)胞核 核移植 卵母細(xì)胞 第6課時(shí) 從受精卵談起 1含義：成熟的精卵融合成為 的過程。 2過程： 精子附著于卵膜精卵質(zhì)膜融合。 3同種動(dòng)物精卵結(jié)合的原因之一：同種動(dòng)物精子、卵細(xì)胞表面有 相互識(shí)別 的 。 受精卵 精卵識(shí)別 特異性 蛋白 二、胚胎發(fā)育的過程 1胚胎發(fā)育的概念 頁 9 第受精卵發(fā)育為 的過程。

33、2胚胎發(fā)育的過程 原腸胚期組織、器官的形成幼體。 即卵裂，卵裂產(chǎn)生的細(xì)胞團(tuán)叫卵裂球，隨著卵裂球 (1)卵裂期：受精卵不斷進(jìn)行 個(gè)細(xì)胞時(shí)，其中的每一個(gè)細(xì)胞都具82 。當(dāng)卵裂球含有 數(shù)目的增多，細(xì)胞逐漸 。 有 。如圖)(2)囊胚期：具有囊胚腔、滋養(yǎng)層、內(nèi)細(xì)胞團(tuán)( 囊胚腔：囊胚中間的空腔，是由于卵裂球的細(xì)胞繼續(xù)分裂，細(xì)胞間出現(xiàn)的間隙。 滋養(yǎng)層 外表的一層扁平細(xì)胞。 a存在部位： ，如胚盤。 b作用：進(jìn)一步發(fā)育為 內(nèi)細(xì)胞團(tuán) 內(nèi)部的細(xì)胞團(tuán)。 a存在部位： 作用：不斷增殖分化，將發(fā)育成完整的胚胎。b，能分化出成 的細(xì)胞，具有 細(xì)胞，是一種 c特點(diǎn)：是 體動(dòng)物的所有組織和器官。 (3)原腸胚期 、胚孔的胚

34、胎時(shí)期。 原腸胚期是囊胚進(jìn)一步發(fā)育形成的具有原腸腔、 胚胎的附屬結(jié)構(gòu)或胚外結(jié)構(gòu) 囊胚 有絲分裂 變小 全能性幼體 囊胚期 三胚層 發(fā)育全能性 胚胎干 未分化 囊胚內(nèi)部 胚胎工程第7課時(shí) 胚胎工程1 操作技術(shù)。 (1)含義：通常指各種 動(dòng)物，特別是哺乳動(dòng)物。 (2)研究對(duì)象：主要限定于 、胚胎干細(xì)胞培 、胚胎移植、 (3)研究的重點(diǎn)內(nèi)容：體外受精、 養(yǎng)等。 體外受精2 中受精。 ，使其在 和雄性動(dòng)物的 (1)含義：采集雌性動(dòng)物的 過程(2)狀 從 中取出成熟的精子，放入培養(yǎng)液中培養(yǎng)，使其達(dá)到精子的采集及獲能： 態(tài)。 處理后，用 卵細(xì)胞的采集：最常用的方法是卵巢經(jīng) 。 取出，然后在體外進(jìn)行人工培養(yǎng)，促其 (吸取卵泡液連同卵母細(xì)胞) 在體外合適的環(huán)境下共同培養(yǎng)一段時(shí)間，便可受 的精子和成熟后的受精： 精。 胚胎體外培養(yǎng)3 進(jìn)行體外培養(yǎng)。 (1)含義：指應(yīng)用人工創(chuàng)造的環(huán)境，對(duì)獲取的 的培養(yǎng)液，用于培養(yǎng)不同發(fā)育時(shí)期的胚胎。 (2)條件：必須配制一系列含有 獲能 試管 附睪 胚胎體外培養(yǎng) 胚胎分割 卵細(xì)胞 精子 高等脊椎動(dòng)物胚胎操作 不同成分 卵細(xì)胞 早期胚胎 穿刺針 成熟 獲能 超數(shù)排卵 二、胚胎移植和胚胎分割 胚胎移植1 處理， (1)含義：指將經(jīng)濟(jì)價(jià)值較高、遺傳性狀優(yōu)良的母畜、經(jīng)過 的代孕母的子宮 后受精，然后將發(fā)育的早期胚胎分別移植到 使其