生物物理學(xué)專業(yè)畢業(yè)論文[精品論文]append融合蛋白的表達(dá)、純化及活性鑒定

1、生物物理學(xué)專業(yè)畢業(yè)論文 精品論文 append融合蛋白的表達(dá)、純化及活性鑒定關(guān)鍵詞：凋亡素 內(nèi)皮抑素 融合基因 append融合蛋白 腫瘤藥物摘要：據(jù)世界衛(wèi)生組織的最新統(tǒng)計(jì)，腫瘤的發(fā)病率和死亡率繼心血管疾病、感染性疾病之后位居第三，是危害人類健康最嚴(yán)重的疾病之一。目前，腫瘤的臨床治療包括：手術(shù)治療、放療和化療。手術(shù)雖然能夠切除腫瘤組織，但治療效果并不樂觀。使用放、化療殺傷腫瘤細(xì)胞時(shí)，正常組織和細(xì)胞也同樣受到損傷，導(dǎo)致出現(xiàn)并發(fā)癥。 所以，尋找特異性的腫瘤細(xì)胞殺傷藥物成為了腫瘤治療領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。 研究表明細(xì)胞的無限制增殖和腫瘤新生血管的形成是腫瘤生長(zhǎng)過程中的兩個(gè)關(guān)鍵因素，如果抗腫瘤藥物能夠同時(shí)瞄

2、準(zhǔn)以上兩個(gè)目標(biāo)，既能抑制腫瘤細(xì)胞增殖又能抑制血管新生，采取“多個(gè)靶點(diǎn)”方式攻擊，就能獲得更好的臨床效果。 凋亡素(apoptin)是一種來源于雞貧血病病毒(chicken anemia virus，cav)的小蛋白質(zhì)(vp3)，由121個(gè)氨基酸組成，分子量為13.6kda，它能夠誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，但對(duì)正常細(xì)胞不造成損傷。一系列的研究結(jié)果表明apoptin有望成為腫瘤特異性治療和診斷試劑。 人內(nèi)皮抑素(endostatin)為膠原蛋白的c末端片段，編碼184個(gè)氨基酸，分子量為18.5kda，是近年來發(fā)現(xiàn)的最有效的血管生成抑制因子之一。作為一種特異性血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)抑制因子，內(nèi)皮抑素可以明顯抑制新

3、生血管的生成、腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。 基于上述考慮，本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建一種新的融合基因，命名為append，其表達(dá)產(chǎn)物為以柔性多肽-甘氨酸接頭(gly4ser)3將apoptin與endostatin連接起來的融合蛋白。希望該融合蛋白兼具apoptin與endostatin的生物功能，為腫瘤治療提供一種新策略。 本研究通過pcr從pllp-ompa-append質(zhì)粒中擴(kuò)增append基因片段，將純化的片段克隆至pgem-t easy載體中，經(jīng)酶切pcr及序列測(cè)定驗(yàn)證，結(jié)果表明獲得了全長(zhǎng)為960bp的append基因片段；將測(cè)序正確的append基因片段亞克隆進(jìn)pet-his表達(dá)載體中，經(jīng)酶切和pcr鑒定

4、正確的載體命名為pet-his-append。 將上述陽(yáng)性克隆質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入ecoli bl21(de3)plyss感受態(tài)細(xì)胞中，挑取重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化出的單菌落進(jìn)行培養(yǎng)，待od600約為0.5加iptg誘導(dǎo)表達(dá)，1.5h后收集菌體進(jìn)行sds-page電泳分析及western blotting驗(yàn)證，結(jié)果表明獲得的目的蛋白大小與預(yù)期相符，約為35kda；經(jīng)表達(dá)條件的優(yōu)化，確定了pet-his-append最適表達(dá)條件為37誘導(dǎo)2.5h，誘導(dǎo)劑iptg的濃度為80g/ml，其中目的蛋白(包涵體)占菌體蛋白的34.9。采用鎳瓊脂糖親和層析法對(duì)表達(dá)的包涵體進(jìn)行純化，通過改變洗脫液(咪唑)濃度來獲得目的蛋白，最終

5、獲得append融合蛋白濃度為1.43mg/l，純度為93.6。 純化后的融合蛋白通過mtt及cam實(shí)驗(yàn)分析其對(duì)新生血管的作用，通過形態(tài)學(xué)觀察、dna片斷化檢測(cè)及流式細(xì)胞儀分析其對(duì)人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的作用，結(jié)果表明append融合蛋白在體內(nèi)可以抑制血管的新生，在體外可以抑制臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的增殖并可誘導(dǎo)人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡。 綜上所述，本研究通過分子生物學(xué)方法成功表達(dá)了append融合蛋白。抑制新生血管及誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)表明該融合蛋白具有良好的生物學(xué)活性，提示該融合基因及其表達(dá)產(chǎn)物在腫瘤治療方面具有廣闊的應(yīng)用前景。正文內(nèi)容 據(jù)世界衛(wèi)生組織的最新統(tǒng)計(jì)，腫瘤的發(fā)病率和死亡率繼心血管疾病、感染性疾病

6、之后位居第三，是危害人類健康最嚴(yán)重的疾病之一。目前，腫瘤的臨床治療包括：手術(shù)治療、放療和化療。手術(shù)雖然能夠切除腫瘤組織，但治療效果并不樂觀。使用放、化療殺傷腫瘤細(xì)胞時(shí)，正常組織和細(xì)胞也同樣受到損傷，導(dǎo)致出現(xiàn)并發(fā)癥。 所以，尋找特異性的腫瘤細(xì)胞殺傷藥物成為了腫瘤治療領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。 研究表明細(xì)胞的無限制增殖和腫瘤新生血管的形成是腫瘤生長(zhǎng)過程中的兩個(gè)關(guān)鍵因素，如果抗腫瘤藥物能夠同時(shí)瞄準(zhǔn)以上兩個(gè)目標(biāo)，既能抑制腫瘤細(xì)胞增殖又能抑制血管新生，采取“多個(gè)靶點(diǎn)”方式攻擊，就能獲得更好的臨床效果。 凋亡素(apoptin)是一種來源于雞貧血病病毒(chicken anemia virus，cav)的小蛋白質(zhì)(

7、vp3)，由121個(gè)氨基酸組成，分子量為13.6kda，它能夠誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，但對(duì)正常細(xì)胞不造成損傷。一系列的研究結(jié)果表明apoptin有望成為腫瘤特異性治療和診斷試劑。 人內(nèi)皮抑素(endostatin)為膠原蛋白的c末端片段，編碼184個(gè)氨基酸，分子量為18.5kda，是近年來發(fā)現(xiàn)的最有效的血管生成抑制因子之一。作為一種特異性血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)抑制因子，內(nèi)皮抑素可以明顯抑制新生血管的生成、腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。 基于上述考慮，本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建一種新的融合基因，命名為append，其表達(dá)產(chǎn)物為以柔性多肽-甘氨酸接頭(gly4ser)3將apoptin與endostatin連接起來的融合蛋白。希望該融

8、合蛋白兼具apoptin與endostatin的生物功能，為腫瘤治療提供一種新策略。 本研究通過pcr從pllp-ompa-append質(zhì)粒中擴(kuò)增append基因片段，將純化的片段克隆至pgem-t easy載體中，經(jīng)酶切pcr及序列測(cè)定驗(yàn)證，結(jié)果表明獲得了全長(zhǎng)為960bp的append基因片段；將測(cè)序正確的append基因片段亞克隆進(jìn)pet-his表達(dá)載體中，經(jīng)酶切和pcr鑒定正確的載體命名為pet-his-append。 將上述陽(yáng)性克隆質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入ecoli bl21(de3)plyss感受態(tài)細(xì)胞中，挑取重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化出的單菌落進(jìn)行培養(yǎng)，待od600約為0.5加iptg誘導(dǎo)表達(dá)，1.5h后收集

9、菌體進(jìn)行sds-page電泳分析及western blotting驗(yàn)證，結(jié)果表明獲得的目的蛋白大小與預(yù)期相符，約為35kda；經(jīng)表達(dá)條件的優(yōu)化，確定了pet-his-append最適表達(dá)條件為37誘導(dǎo)2.5h，誘導(dǎo)劑iptg的濃度為80g/ml，其中目的蛋白(包涵體)占菌體蛋白的34.9。采用鎳瓊脂糖親和層析法對(duì)表達(dá)的包涵體進(jìn)行純化，通過改變洗脫液(咪唑)濃度來獲得目的蛋白，最終獲得append融合蛋白濃度為1.43mg/l，純度為93.6。 純化后的融合蛋白通過mtt及cam實(shí)驗(yàn)分析其對(duì)新生血管的作用，通過形態(tài)學(xué)觀察、dna片斷化檢測(cè)及流式細(xì)胞儀分析其對(duì)人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的作用，結(jié)果表明app

10、end融合蛋白在體內(nèi)可以抑制血管的新生，在體外可以抑制臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的增殖并可誘導(dǎo)人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡。 綜上所述，本研究通過分子生物學(xué)方法成功表達(dá)了append融合蛋白。抑制新生血管及誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)表明該融合蛋白具有良好的生物學(xué)活性，提示該融合基因及其表達(dá)產(chǎn)物在腫瘤治療方面具有廣闊的應(yīng)用前景。據(jù)世界衛(wèi)生組織的最新統(tǒng)計(jì)，腫瘤的發(fā)病率和死亡率繼心血管疾病、感染性疾病之后位居第三，是危害人類健康最嚴(yán)重的疾病之一。目前，腫瘤的臨床治療包括：手術(shù)治療、放療和化療。手術(shù)雖然能夠切除腫瘤組織，但治療效果并不樂觀。使用放、化療殺傷腫瘤細(xì)胞時(shí)，正常組織和細(xì)胞也同樣受到損傷，導(dǎo)致出現(xiàn)并發(fā)癥。 所以，尋找特

11、異性的腫瘤細(xì)胞殺傷藥物成為了腫瘤治療領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。 研究表明細(xì)胞的無限制增殖和腫瘤新生血管的形成是腫瘤生長(zhǎng)過程中的兩個(gè)關(guān)鍵因素，如果抗腫瘤藥物能夠同時(shí)瞄準(zhǔn)以上兩個(gè)目標(biāo)，既能抑制腫瘤細(xì)胞增殖又能抑制血管新生，采取“多個(gè)靶點(diǎn)”方式攻擊，就能獲得更好的臨床效果。 凋亡素(apoptin)是一種來源于雞貧血病病毒(chicken anemia virus，cav)的小蛋白質(zhì)(vp3)，由121個(gè)氨基酸組成，分子量為13.6kda，它能夠誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，但對(duì)正常細(xì)胞不造成損傷。一系列的研究結(jié)果表明apoptin有望成為腫瘤特異性治療和診斷試劑。 人內(nèi)皮抑素(endostatin)為膠原蛋白的c末端片

12、段，編碼184個(gè)氨基酸，分子量為18.5kda，是近年來發(fā)現(xiàn)的最有效的血管生成抑制因子之一。作為一種特異性血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)抑制因子，內(nèi)皮抑素可以明顯抑制新生血管的生成、腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。 基于上述考慮，本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建一種新的融合基因，命名為append，其表達(dá)產(chǎn)物為以柔性多肽-甘氨酸接頭(gly4ser)3將apoptin與endostatin連接起來的融合蛋白。希望該融合蛋白兼具apoptin與endostatin的生物功能，為腫瘤治療提供一種新策略。 本研究通過pcr從pllp-ompa-append質(zhì)粒中擴(kuò)增append基因片段，將純化的片段克隆至pgem-t easy載體中，經(jīng)酶切pcr

13、及序列測(cè)定驗(yàn)證，結(jié)果表明獲得了全長(zhǎng)為960bp的append基因片段；將測(cè)序正確的append基因片段亞克隆進(jìn)pet-his表達(dá)載體中，經(jīng)酶切和pcr鑒定正確的載體命名為pet-his-append。 將上述陽(yáng)性克隆質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入ecoli bl21(de3)plyss感受態(tài)細(xì)胞中，挑取重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化出的單菌落進(jìn)行培養(yǎng)，待od600約為0.5加iptg誘導(dǎo)表達(dá)，1.5h后收集菌體進(jìn)行sds-page電泳分析及western blotting驗(yàn)證，結(jié)果表明獲得的目的蛋白大小與預(yù)期相符，約為35kda；經(jīng)表達(dá)條件的優(yōu)化，確定了pet-his-append最適表達(dá)條件為37誘導(dǎo)2.5h，誘導(dǎo)劑iptg的濃

14、度為80g/ml，其中目的蛋白(包涵體)占菌體蛋白的34.9。采用鎳瓊脂糖親和層析法對(duì)表達(dá)的包涵體進(jìn)行純化，通過改變洗脫液(咪唑)濃度來獲得目的蛋白，最終獲得append融合蛋白濃度為1.43mg/l，純度為93.6。 純化后的融合蛋白通過mtt及cam實(shí)驗(yàn)分析其對(duì)新生血管的作用，通過形態(tài)學(xué)觀察、dna片斷化檢測(cè)及流式細(xì)胞儀分析其對(duì)人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的作用，結(jié)果表明append融合蛋白在體內(nèi)可以抑制血管的新生，在體外可以抑制臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的增殖并可誘導(dǎo)人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡。 綜上所述，本研究通過分子生物學(xué)方法成功表達(dá)了append融合蛋白。抑制新生血管及誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)表明該融合蛋白具有良好

15、的生物學(xué)活性，提示該融合基因及其表達(dá)產(chǎn)物在腫瘤治療方面具有廣闊的應(yīng)用前景。據(jù)世界衛(wèi)生組織的最新統(tǒng)計(jì)，腫瘤的發(fā)病率和死亡率繼心血管疾病、感染性疾病之后位居第三，是危害人類健康最嚴(yán)重的疾病之一。目前，腫瘤的臨床治療包括：手術(shù)治療、放療和化療。手術(shù)雖然能夠切除腫瘤組織，但治療效果并不樂觀。使用放、化療殺傷腫瘤細(xì)胞時(shí)，正常組織和細(xì)胞也同樣受到損傷，導(dǎo)致出現(xiàn)并發(fā)癥。 所以，尋找特異性的腫瘤細(xì)胞殺傷藥物成為了腫瘤治療領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。 研究表明細(xì)胞的無限制增殖和腫瘤新生血管的形成是腫瘤生長(zhǎng)過程中的兩個(gè)關(guān)鍵因素，如果抗腫瘤藥物能夠同時(shí)瞄準(zhǔn)以上兩個(gè)目標(biāo)，既能抑制腫瘤細(xì)胞增殖又能抑制血管新生，采取“多個(gè)靶點(diǎn)”方式

16、攻擊，就能獲得更好的臨床效果。 凋亡素(apoptin)是一種來源于雞貧血病病毒(chicken anemia virus，cav)的小蛋白質(zhì)(vp3)，由121個(gè)氨基酸組成，分子量為13.6kda，它能夠誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，但對(duì)正常細(xì)胞不造成損傷。一系列的研究結(jié)果表明apoptin有望成為腫瘤特異性治療和診斷試劑。 人內(nèi)皮抑素(endostatin)為膠原蛋白的c末端片段，編碼184個(gè)氨基酸，分子量為18.5kda，是近年來發(fā)現(xiàn)的最有效的血管生成抑制因子之一。作為一種特異性血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)抑制因子，內(nèi)皮抑素可以明顯抑制新生血管的生成、腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。 基于上述考慮，本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建一種新的融合基

17、因，命名為append，其表達(dá)產(chǎn)物為以柔性多肽-甘氨酸接頭(gly4ser)3將apoptin與endostatin連接起來的融合蛋白。希望該融合蛋白兼具apoptin與endostatin的生物功能，為腫瘤治療提供一種新策略。 本研究通過pcr從pllp-ompa-append質(zhì)粒中擴(kuò)增append基因片段，將純化的片段克隆至pgem-t easy載體中，經(jīng)酶切pcr及序列測(cè)定驗(yàn)證，結(jié)果表明獲得了全長(zhǎng)為960bp的append基因片段；將測(cè)序正確的append基因片段亞克隆進(jìn)pet-his表達(dá)載體中，經(jīng)酶切和pcr鑒定正確的載體命名為pet-his-append。 將上述陽(yáng)性克隆質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入e

18、coli bl21(de3)plyss感受態(tài)細(xì)胞中，挑取重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化出的單菌落進(jìn)行培養(yǎng)，待od600約為0.5加iptg誘導(dǎo)表達(dá)，1.5h后收集菌體進(jìn)行sds-page電泳分析及western blotting驗(yàn)證，結(jié)果表明獲得的目的蛋白大小與預(yù)期相符，約為35kda；經(jīng)表達(dá)條件的優(yōu)化，確定了pet-his-append最適表達(dá)條件為37誘導(dǎo)2.5h，誘導(dǎo)劑iptg的濃度為80g/ml，其中目的蛋白(包涵體)占菌體蛋白的34.9。采用鎳瓊脂糖親和層析法對(duì)表達(dá)的包涵體進(jìn)行純化，通過改變洗脫液(咪唑)濃度來獲得目的蛋白，最終獲得append融合蛋白濃度為1.43mg/l，純度為93.6。 純化后的

19、融合蛋白通過mtt及cam實(shí)驗(yàn)分析其對(duì)新生血管的作用，通過形態(tài)學(xué)觀察、dna片斷化檢測(cè)及流式細(xì)胞儀分析其對(duì)人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的作用，結(jié)果表明append融合蛋白在體內(nèi)可以抑制血管的新生，在體外可以抑制臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的增殖并可誘導(dǎo)人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡。 綜上所述，本研究通過分子生物學(xué)方法成功表達(dá)了append融合蛋白。抑制新生血管及誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)表明該融合蛋白具有良好的生物學(xué)活性，提示該融合基因及其表達(dá)產(chǎn)物在腫瘤治療方面具有廣闊的應(yīng)用前景。據(jù)世界衛(wèi)生組織的最新統(tǒng)計(jì)，腫瘤的發(fā)病率和死亡率繼心血管疾病、感染性疾病之后位居第三，是危害人類健康最嚴(yán)重的疾病之一。目前，腫瘤的臨床治療包括：手術(shù)治療、放

20、療和化療。手術(shù)雖然能夠切除腫瘤組織，但治療效果并不樂觀。使用放、化療殺傷腫瘤細(xì)胞時(shí)，正常組織和細(xì)胞也同樣受到損傷，導(dǎo)致出現(xiàn)并發(fā)癥。 所以，尋找特異性的腫瘤細(xì)胞殺傷藥物成為了腫瘤治療領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。 研究表明細(xì)胞的無限制增殖和腫瘤新生血管的形成是腫瘤生長(zhǎng)過程中的兩個(gè)關(guān)鍵因素，如果抗腫瘤藥物能夠同時(shí)瞄準(zhǔn)以上兩個(gè)目標(biāo)，既能抑制腫瘤細(xì)胞增殖又能抑制血管新生，采取“多個(gè)靶點(diǎn)”方式攻擊，就能獲得更好的臨床效果。 凋亡素(apoptin)是一種來源于雞貧血病病毒(chicken anemia virus，cav)的小蛋白質(zhì)(vp3)，由121個(gè)氨基酸組成，分子量為13.6kda，它能夠誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，但對(duì)

21、正常細(xì)胞不造成損傷。一系列的研究結(jié)果表明apoptin有望成為腫瘤特異性治療和診斷試劑。 人內(nèi)皮抑素(endostatin)為膠原蛋白的c末端片段，編碼184個(gè)氨基酸，分子量為18.5kda，是近年來發(fā)現(xiàn)的最有效的血管生成抑制因子之一。作為一種特異性血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)抑制因子，內(nèi)皮抑素可以明顯抑制新生血管的生成、腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。 基于上述考慮，本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建一種新的融合基因，命名為append，其表達(dá)產(chǎn)物為以柔性多肽-甘氨酸接頭(gly4ser)3將apoptin與endostatin連接起來的融合蛋白。希望該融合蛋白兼具apoptin與endostatin的生物功能，為腫瘤治療提供一種新策略。

22、 本研究通過pcr從pllp-ompa-append質(zhì)粒中擴(kuò)增append基因片段，將純化的片段克隆至pgem-t easy載體中，經(jīng)酶切pcr及序列測(cè)定驗(yàn)證，結(jié)果表明獲得了全長(zhǎng)為960bp的append基因片段；將測(cè)序正確的append基因片段亞克隆進(jìn)pet-his表達(dá)載體中，經(jīng)酶切和pcr鑒定正確的載體命名為pet-his-append。 將上述陽(yáng)性克隆質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入ecoli bl21(de3)plyss感受態(tài)細(xì)胞中，挑取重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化出的單菌落進(jìn)行培養(yǎng)，待od600約為0.5加iptg誘導(dǎo)表達(dá)，1.5h后收集菌體進(jìn)行sds-page電泳分析及western blotting驗(yàn)證，結(jié)果表明獲得

23、的目的蛋白大小與預(yù)期相符，約為35kda；經(jīng)表達(dá)條件的優(yōu)化，確定了pet-his-append最適表達(dá)條件為37誘導(dǎo)2.5h，誘導(dǎo)劑iptg的濃度為80g/ml，其中目的蛋白(包涵體)占菌體蛋白的34.9。采用鎳瓊脂糖親和層析法對(duì)表達(dá)的包涵體進(jìn)行純化，通過改變洗脫液(咪唑)濃度來獲得目的蛋白，最終獲得append融合蛋白濃度為1.43mg/l，純度為93.6。 純化后的融合蛋白通過mtt及cam實(shí)驗(yàn)分析其對(duì)新生血管的作用，通過形態(tài)學(xué)觀察、dna片斷化檢測(cè)及流式細(xì)胞儀分析其對(duì)人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的作用，結(jié)果表明append融合蛋白在體內(nèi)可以抑制血管的新生，在體外可以抑制臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的增殖并可誘導(dǎo)人

24、神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡。 綜上所述，本研究通過分子生物學(xué)方法成功表達(dá)了append融合蛋白。抑制新生血管及誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)表明該融合蛋白具有良好的生物學(xué)活性，提示該融合基因及其表達(dá)產(chǎn)物在腫瘤治療方面具有廣闊的應(yīng)用前景。據(jù)世界衛(wèi)生組織的最新統(tǒng)計(jì)，腫瘤的發(fā)病率和死亡率繼心血管疾病、感染性疾病之后位居第三，是危害人類健康最嚴(yán)重的疾病之一。目前，腫瘤的臨床治療包括：手術(shù)治療、放療和化療。手術(shù)雖然能夠切除腫瘤組織，但治療效果并不樂觀。使用放、化療殺傷腫瘤細(xì)胞時(shí)，正常組織和細(xì)胞也同樣受到損傷，導(dǎo)致出現(xiàn)并發(fā)癥。 所以，尋找特異性的腫瘤細(xì)胞殺傷藥物成為了腫瘤治療領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。 研究表明細(xì)胞的無限制增殖和腫瘤

25、新生血管的形成是腫瘤生長(zhǎng)過程中的兩個(gè)關(guān)鍵因素，如果抗腫瘤藥物能夠同時(shí)瞄準(zhǔn)以上兩個(gè)目標(biāo)，既能抑制腫瘤細(xì)胞增殖又能抑制血管新生，采取“多個(gè)靶點(diǎn)”方式攻擊，就能獲得更好的臨床效果。 凋亡素(apoptin)是一種來源于雞貧血病病毒(chicken anemia virus，cav)的小蛋白質(zhì)(vp3)，由121個(gè)氨基酸組成，分子量為13.6kda，它能夠誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，但對(duì)正常細(xì)胞不造成損傷。一系列的研究結(jié)果表明apoptin有望成為腫瘤特異性治療和診斷試劑。 人內(nèi)皮抑素(endostatin)為膠原蛋白的c末端片段，編碼184個(gè)氨基酸，分子量為18.5kda，是近年來發(fā)現(xiàn)的最有效的血管生成抑制因

26、子之一。作為一種特異性血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)抑制因子，內(nèi)皮抑素可以明顯抑制新生血管的生成、腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。 基于上述考慮，本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建一種新的融合基因，命名為append，其表達(dá)產(chǎn)物為以柔性多肽-甘氨酸接頭(gly4ser)3將apoptin與endostatin連接起來的融合蛋白。希望該融合蛋白兼具apoptin與endostatin的生物功能，為腫瘤治療提供一種新策略。 本研究通過pcr從pllp-ompa-append質(zhì)粒中擴(kuò)增append基因片段，將純化的片段克隆至pgem-t easy載體中，經(jīng)酶切pcr及序列測(cè)定驗(yàn)證，結(jié)果表明獲得了全長(zhǎng)為960bp的append基因片段；將測(cè)序正確的a

27、ppend基因片段亞克隆進(jìn)pet-his表達(dá)載體中，經(jīng)酶切和pcr鑒定正確的載體命名為pet-his-append。 將上述陽(yáng)性克隆質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入ecoli bl21(de3)plyss感受態(tài)細(xì)胞中，挑取重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化出的單菌落進(jìn)行培養(yǎng)，待od600約為0.5加iptg誘導(dǎo)表達(dá)，1.5h后收集菌體進(jìn)行sds-page電泳分析及western blotting驗(yàn)證，結(jié)果表明獲得的目的蛋白大小與預(yù)期相符，約為35kda；經(jīng)表達(dá)條件的優(yōu)化，確定了pet-his-append最適表達(dá)條件為37誘導(dǎo)2.5h，誘導(dǎo)劑iptg的濃度為80g/ml，其中目的蛋白(包涵體)占菌體蛋白的34.9。采用鎳瓊脂糖親和層析法

28、對(duì)表達(dá)的包涵體進(jìn)行純化，通過改變洗脫液(咪唑)濃度來獲得目的蛋白，最終獲得append融合蛋白濃度為1.43mg/l，純度為93.6。 純化后的融合蛋白通過mtt及cam實(shí)驗(yàn)分析其對(duì)新生血管的作用，通過形態(tài)學(xué)觀察、dna片斷化檢測(cè)及流式細(xì)胞儀分析其對(duì)人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的作用，結(jié)果表明append融合蛋白在體內(nèi)可以抑制血管的新生，在體外可以抑制臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的增殖并可誘導(dǎo)人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡。 綜上所述，本研究通過分子生物學(xué)方法成功表達(dá)了append融合蛋白。抑制新生血管及誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)表明該融合蛋白具有良好的生物學(xué)活性，提示該融合基因及其表達(dá)產(chǎn)物在腫瘤治療方面具有廣闊的應(yīng)用前景。據(jù)世界衛(wèi)生

29、組織的最新統(tǒng)計(jì)，腫瘤的發(fā)病率和死亡率繼心血管疾病、感染性疾病之后位居第三，是危害人類健康最嚴(yán)重的疾病之一。目前，腫瘤的臨床治療包括：手術(shù)治療、放療和化療。手術(shù)雖然能夠切除腫瘤組織，但治療效果并不樂觀。使用放、化療殺傷腫瘤細(xì)胞時(shí)，正常組織和細(xì)胞也同樣受到損傷，導(dǎo)致出現(xiàn)并發(fā)癥。 所以，尋找特異性的腫瘤細(xì)胞殺傷藥物成為了腫瘤治療領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。 研究表明細(xì)胞的無限制增殖和腫瘤新生血管的形成是腫瘤生長(zhǎng)過程中的兩個(gè)關(guān)鍵因素，如果抗腫瘤藥物能夠同時(shí)瞄準(zhǔn)以上兩個(gè)目標(biāo)，既能抑制腫瘤細(xì)胞增殖又能抑制血管新生，采取“多個(gè)靶點(diǎn)”方式攻擊，就能獲得更好的臨床效果。 凋亡素(apoptin)是一種來源于雞貧血病病毒(c

30、hicken anemia virus，cav)的小蛋白質(zhì)(vp3)，由121個(gè)氨基酸組成，分子量為13.6kda，它能夠誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，但對(duì)正常細(xì)胞不造成損傷。一系列的研究結(jié)果表明apoptin有望成為腫瘤特異性治療和診斷試劑。 人內(nèi)皮抑素(endostatin)為膠原蛋白的c末端片段，編碼184個(gè)氨基酸，分子量為18.5kda，是近年來發(fā)現(xiàn)的最有效的血管生成抑制因子之一。作為一種特異性血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)抑制因子，內(nèi)皮抑素可以明顯抑制新生血管的生成、腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。 基于上述考慮，本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建一種新的融合基因，命名為append，其表達(dá)產(chǎn)物為以柔性多肽-甘氨酸接頭(gly4ser)3將ap

31、optin與endostatin連接起來的融合蛋白。希望該融合蛋白兼具apoptin與endostatin的生物功能，為腫瘤治療提供一種新策略。 本研究通過pcr從pllp-ompa-append質(zhì)粒中擴(kuò)增append基因片段，將純化的片段克隆至pgem-t easy載體中，經(jīng)酶切pcr及序列測(cè)定驗(yàn)證，結(jié)果表明獲得了全長(zhǎng)為960bp的append基因片段；將測(cè)序正確的append基因片段亞克隆進(jìn)pet-his表達(dá)載體中，經(jīng)酶切和pcr鑒定正確的載體命名為pet-his-append。 將上述陽(yáng)性克隆質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入ecoli bl21(de3)plyss感受態(tài)細(xì)胞中，挑取重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化出的單菌落進(jìn)行培

32、養(yǎng)，待od600約為0.5加iptg誘導(dǎo)表達(dá)，1.5h后收集菌體進(jìn)行sds-page電泳分析及western blotting驗(yàn)證，結(jié)果表明獲得的目的蛋白大小與預(yù)期相符，約為35kda；經(jīng)表達(dá)條件的優(yōu)化，確定了pet-his-append最適表達(dá)條件為37誘導(dǎo)2.5h，誘導(dǎo)劑iptg的濃度為80g/ml，其中目的蛋白(包涵體)占菌體蛋白的34.9。采用鎳瓊脂糖親和層析法對(duì)表達(dá)的包涵體進(jìn)行純化，通過改變洗脫液(咪唑)濃度來獲得目的蛋白，最終獲得append融合蛋白濃度為1.43mg/l，純度為93.6。 純化后的融合蛋白通過mtt及cam實(shí)驗(yàn)分析其對(duì)新生血管的作用，通過形態(tài)學(xué)觀察、dna片斷化檢

33、測(cè)及流式細(xì)胞儀分析其對(duì)人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的作用，結(jié)果表明append融合蛋白在體內(nèi)可以抑制血管的新生，在體外可以抑制臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的增殖并可誘導(dǎo)人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡。 綜上所述，本研究通過分子生物學(xué)方法成功表達(dá)了append融合蛋白。抑制新生血管及誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)表明該融合蛋白具有良好的生物學(xué)活性，提示該融合基因及其表達(dá)產(chǎn)物在腫瘤治療方面具有廣闊的應(yīng)用前景。據(jù)世界衛(wèi)生組織的最新統(tǒng)計(jì)，腫瘤的發(fā)病率和死亡率繼心血管疾病、感染性疾病之后位居第三，是危害人類健康最嚴(yán)重的疾病之一。目前，腫瘤的臨床治療包括：手術(shù)治療、放療和化療。手術(shù)雖然能夠切除腫瘤組織，但治療效果并不樂觀。使用放、化療殺傷腫瘤細(xì)胞時(shí)，

34、正常組織和細(xì)胞也同樣受到損傷，導(dǎo)致出現(xiàn)并發(fā)癥。 所以，尋找特異性的腫瘤細(xì)胞殺傷藥物成為了腫瘤治療領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。 研究表明細(xì)胞的無限制增殖和腫瘤新生血管的形成是腫瘤生長(zhǎng)過程中的兩個(gè)關(guān)鍵因素，如果抗腫瘤藥物能夠同時(shí)瞄準(zhǔn)以上兩個(gè)目標(biāo)，既能抑制腫瘤細(xì)胞增殖又能抑制血管新生，采取“多個(gè)靶點(diǎn)”方式攻擊，就能獲得更好的臨床效果。 凋亡素(apoptin)是一種來源于雞貧血病病毒(chicken anemia virus，cav)的小蛋白質(zhì)(vp3)，由121個(gè)氨基酸組成，分子量為13.6kda，它能夠誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，但對(duì)正常細(xì)胞不造成損傷。一系列的研究結(jié)果表明apoptin有望成為腫瘤特異性治療和診斷試

35、劑。 人內(nèi)皮抑素(endostatin)為膠原蛋白的c末端片段，編碼184個(gè)氨基酸，分子量為18.5kda，是近年來發(fā)現(xiàn)的最有效的血管生成抑制因子之一。作為一種特異性血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)抑制因子，內(nèi)皮抑素可以明顯抑制新生血管的生成、腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。 基于上述考慮，本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建一種新的融合基因，命名為append，其表達(dá)產(chǎn)物為以柔性多肽-甘氨酸接頭(gly4ser)3將apoptin與endostatin連接起來的融合蛋白。希望該融合蛋白兼具apoptin與endostatin的生物功能，為腫瘤治療提供一種新策略。 本研究通過pcr從pllp-ompa-append質(zhì)粒中擴(kuò)增append基因片段，

36、將純化的片段克隆至pgem-t easy載體中，經(jīng)酶切pcr及序列測(cè)定驗(yàn)證，結(jié)果表明獲得了全長(zhǎng)為960bp的append基因片段；將測(cè)序正確的append基因片段亞克隆進(jìn)pet-his表達(dá)載體中，經(jīng)酶切和pcr鑒定正確的載體命名為pet-his-append。 將上述陽(yáng)性克隆質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入ecoli bl21(de3)plyss感受態(tài)細(xì)胞中，挑取重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化出的單菌落進(jìn)行培養(yǎng)，待od600約為0.5加iptg誘導(dǎo)表達(dá)，1.5h后收集菌體進(jìn)行sds-page電泳分析及western blotting驗(yàn)證，結(jié)果表明獲得的目的蛋白大小與預(yù)期相符，約為35kda；經(jīng)表達(dá)條件的優(yōu)化，確定了pet-his-a

37、ppend最適表達(dá)條件為37誘導(dǎo)2.5h，誘導(dǎo)劑iptg的濃度為80g/ml，其中目的蛋白(包涵體)占菌體蛋白的34.9。采用鎳瓊脂糖親和層析法對(duì)表達(dá)的包涵體進(jìn)行純化，通過改變洗脫液(咪唑)濃度來獲得目的蛋白，最終獲得append融合蛋白濃度為1.43mg/l，純度為93.6。 純化后的融合蛋白通過mtt及cam實(shí)驗(yàn)分析其對(duì)新生血管的作用，通過形態(tài)學(xué)觀察、dna片斷化檢測(cè)及流式細(xì)胞儀分析其對(duì)人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的作用，結(jié)果表明append融合蛋白在體內(nèi)可以抑制血管的新生，在體外可以抑制臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的增殖并可誘導(dǎo)人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡。 綜上所述，本研究通過分子生物學(xué)方法成功表達(dá)了append融合蛋

38、白。抑制新生血管及誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)表明該融合蛋白具有良好的生物學(xué)活性，提示該融合基因及其表達(dá)產(chǎn)物在腫瘤治療方面具有廣闊的應(yīng)用前景。據(jù)世界衛(wèi)生組織的最新統(tǒng)計(jì)，腫瘤的發(fā)病率和死亡率繼心血管疾病、感染性疾病之后位居第三，是危害人類健康最嚴(yán)重的疾病之一。目前，腫瘤的臨床治療包括：手術(shù)治療、放療和化療。手術(shù)雖然能夠切除腫瘤組織，但治療效果并不樂觀。使用放、化療殺傷腫瘤細(xì)胞時(shí)，正常組織和細(xì)胞也同樣受到損傷，導(dǎo)致出現(xiàn)并發(fā)癥。 所以，尋找特異性的腫瘤細(xì)胞殺傷藥物成為了腫瘤治療領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。 研究表明細(xì)胞的無限制增殖和腫瘤新生血管的形成是腫瘤生長(zhǎng)過程中的兩個(gè)關(guān)鍵因素，如果抗腫瘤藥物能夠同時(shí)瞄準(zhǔn)以上兩個(gè)目標(biāo)

39、，既能抑制腫瘤細(xì)胞增殖又能抑制血管新生，采取“多個(gè)靶點(diǎn)”方式攻擊，就能獲得更好的臨床效果。 凋亡素(apoptin)是一種來源于雞貧血病病毒(chicken anemia virus，cav)的小蛋白質(zhì)(vp3)，由121個(gè)氨基酸組成，分子量為13.6kda，它能夠誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，但對(duì)正常細(xì)胞不造成損傷。一系列的研究結(jié)果表明apoptin有望成為腫瘤特異性治療和診斷試劑。 人內(nèi)皮抑素(endostatin)為膠原蛋白的c末端片段，編碼184個(gè)氨基酸，分子量為18.5kda，是近年來發(fā)現(xiàn)的最有效的血管生成抑制因子之一。作為一種特異性血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)抑制因子，內(nèi)皮抑素可以明顯抑制新生血管的生成、

40、腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。 基于上述考慮，本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建一種新的融合基因，命名為append，其表達(dá)產(chǎn)物為以柔性多肽-甘氨酸接頭(gly4ser)3將apoptin與endostatin連接起來的融合蛋白。希望該融合蛋白兼具apoptin與endostatin的生物功能，為腫瘤治療提供一種新策略。 本研究通過pcr從pllp-ompa-append質(zhì)粒中擴(kuò)增append基因片段，將純化的片段克隆至pgem-t easy載體中，經(jīng)酶切pcr及序列測(cè)定驗(yàn)證，結(jié)果表明獲得了全長(zhǎng)為960bp的append基因片段；將測(cè)序正確的append基因片段亞克隆進(jìn)pet-his表達(dá)載體中，經(jīng)酶切和pcr鑒定正確的載體命名

41、為pet-his-append。 將上述陽(yáng)性克隆質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入ecoli bl21(de3)plyss感受態(tài)細(xì)胞中，挑取重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化出的單菌落進(jìn)行培養(yǎng)，待od600約為0.5加iptg誘導(dǎo)表達(dá)，1.5h后收集菌體進(jìn)行sds-page電泳分析及western blotting驗(yàn)證，結(jié)果表明獲得的目的蛋白大小與預(yù)期相符，約為35kda；經(jīng)表達(dá)條件的優(yōu)化，確定了pet-his-append最適表達(dá)條件為37誘導(dǎo)2.5h，誘導(dǎo)劑iptg的濃度為80g/ml，其中目的蛋白(包涵體)占菌體蛋白的34.9。采用鎳瓊脂糖親和層析法對(duì)表達(dá)的包涵體進(jìn)行純化，通過改變洗脫液(咪唑)濃度來獲得目的蛋白，最終獲得appen

42、d融合蛋白濃度為1.43mg/l，純度為93.6。 純化后的融合蛋白通過mtt及cam實(shí)驗(yàn)分析其對(duì)新生血管的作用，通過形態(tài)學(xué)觀察、dna片斷化檢測(cè)及流式細(xì)胞儀分析其對(duì)人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的作用，結(jié)果表明append融合蛋白在體內(nèi)可以抑制血管的新生，在體外可以抑制臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的增殖并可誘導(dǎo)人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡。 綜上所述，本研究通過分子生物學(xué)方法成功表達(dá)了append融合蛋白。抑制新生血管及誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)表明該融合蛋白具有良好的生物學(xué)活性，提示該融合基因及其表達(dá)產(chǎn)物在腫瘤治療方面具有廣闊的應(yīng)用前景。據(jù)世界衛(wèi)生組織的最新統(tǒng)計(jì)，腫瘤的發(fā)病率和死亡率繼心血管疾病、感染性疾病之后位居第三，是危害人類

43、健康最嚴(yán)重的疾病之一。目前，腫瘤的臨床治療包括：手術(shù)治療、放療和化療。手術(shù)雖然能夠切除腫瘤組織，但治療效果并不樂觀。使用放、化療殺傷腫瘤細(xì)胞時(shí)，正常組織和細(xì)胞也同樣受到損傷，導(dǎo)致出現(xiàn)并發(fā)癥。 所以，尋找特異性的腫瘤細(xì)胞殺傷藥物成為了腫瘤治療領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。 研究表明細(xì)胞的無限制增殖和腫瘤新生血管的形成是腫瘤生長(zhǎng)過程中的兩個(gè)關(guān)鍵因素，如果抗腫瘤藥物能夠同時(shí)瞄準(zhǔn)以上兩個(gè)目標(biāo)，既能抑制腫瘤細(xì)胞增殖又能抑制血管新生，采取“多個(gè)靶點(diǎn)”方式攻擊，就能獲得更好的臨床效果。 凋亡素(apoptin)是一種來源于雞貧血病病毒(chicken anemia virus，cav)的小蛋白質(zhì)(vp3)，由121個(gè)氨基

44、酸組成，分子量為13.6kda，它能夠誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，但對(duì)正常細(xì)胞不造成損傷。一系列的研究結(jié)果表明apoptin有望成為腫瘤特異性治療和診斷試劑。 人內(nèi)皮抑素(endostatin)為膠原蛋白的c末端片段，編碼184個(gè)氨基酸，分子量為18.5kda，是近年來發(fā)現(xiàn)的最有效的血管生成抑制因子之一。作為一種特異性血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)抑制因子，內(nèi)皮抑素可以明顯抑制新生血管的生成、腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。 基于上述考慮，本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建一種新的融合基因，命名為append，其表達(dá)產(chǎn)物為以柔性多肽-甘氨酸接頭(gly4ser)3將apoptin與endostatin連接起來的融合蛋白。希望該融合蛋白兼具apoptin

45、與endostatin的生物功能，為腫瘤治療提供一種新策略。 本研究通過pcr從pllp-ompa-append質(zhì)粒中擴(kuò)增append基因片段，將純化的片段克隆至pgem-t easy載體中，經(jīng)酶切pcr及序列測(cè)定驗(yàn)證，結(jié)果表明獲得了全長(zhǎng)為960bp的append基因片段；將測(cè)序正確的append基因片段亞克隆進(jìn)pet-his表達(dá)載體中，經(jīng)酶切和pcr鑒定正確的載體命名為pet-his-append。 將上述陽(yáng)性克隆質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入ecoli bl21(de3)plyss感受態(tài)細(xì)胞中，挑取重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化出的單菌落進(jìn)行培養(yǎng)，待od600約為0.5加iptg誘導(dǎo)表達(dá)，1.5h后收集菌體進(jìn)行sds-page

46、電泳分析及western blotting驗(yàn)證，結(jié)果表明獲得的目的蛋白大小與預(yù)期相符，約為35kda；經(jīng)表達(dá)條件的優(yōu)化，確定了pet-his-append最適表達(dá)條件為37誘導(dǎo)2.5h，誘導(dǎo)劑iptg的濃度為80g/ml，其中目的蛋白(包涵體)占菌體蛋白的34.9。采用鎳瓊脂糖親和層析法對(duì)表達(dá)的包涵體進(jìn)行純化，通過改變洗脫液(咪唑)濃度來獲得目的蛋白，最終獲得append融合蛋白濃度為1.43mg/l，純度為93.6。 純化后的融合蛋白通過mtt及cam實(shí)驗(yàn)分析其對(duì)新生血管的作用，通過形態(tài)學(xué)觀察、dna片斷化檢測(cè)及流式細(xì)胞儀分析其對(duì)人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的作用，結(jié)果表明append融合蛋白在體內(nèi)可以

47、抑制血管的新生，在體外可以抑制臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的增殖并可誘導(dǎo)人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡。 綜上所述，本研究通過分子生物學(xué)方法成功表達(dá)了append融合蛋白。抑制新生血管及誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)表明該融合蛋白具有良好的生物學(xué)活性，提示該融合基因及其表達(dá)產(chǎn)物在腫瘤治療方面具有廣闊的應(yīng)用前景。據(jù)世界衛(wèi)生組織的最新統(tǒng)計(jì)，腫瘤的發(fā)病率和死亡率繼心血管疾病、感染性疾病之后位居第三，是危害人類健康最嚴(yán)重的疾病之一。目前，腫瘤的臨床治療包括：手術(shù)治療、放療和化療。手術(shù)雖然能夠切除腫瘤組織，但治療效果并不樂觀。使用放、化療殺傷腫瘤細(xì)胞時(shí)，正常組織和細(xì)胞也同樣受到損傷，導(dǎo)致出現(xiàn)并發(fā)癥。 所以，尋找特異性的腫瘤細(xì)胞殺傷藥物成為了腫瘤治療領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。 研究表明細(xì)胞的無限制增殖和腫瘤新生血管的形成是腫瘤生長(zhǎng)過程中的兩個(gè)關(guān)鍵因素，如果抗腫瘤藥物能夠同時(shí)瞄準(zhǔn)以上兩個(gè)目標(biāo)，既能抑制腫瘤細(xì)胞增殖又能抑制血管新生，采取“多個(gè)靶點(diǎn)”方式攻擊，就能獲得更好的臨床效果。 凋亡素(apoptin)是一種來源于雞貧血病病毒(chicken a